RESUMO Objetivos: Este estudo visa determinar a origem do retinoblastoma em um número de casos e correlacionar essos achados com fatores prognósticos e histopatológicos conhecidos. Métodos: Trinta e nove casos de retinoblastoma foram diagnosticados e analisados com imuno-histoquímica usando marcadores de anticorpos monoclonais contra as células de retina imaturas (SOX-2: SRY-box containing gene 2), contra as células da retina maturas (MAP2: microtubule -associated protein 2) e contra as células gliais maturas (GFAP: glial fibrillar acidic protein). Foram avaliadas características microscópicas dos casos (grau de diferenciação, presença de semeadura vítrea, invasão de coroide/esclera, nervo óptico e câmara anterior). Duas linhas celulares de retinoblastoma (WERI-1 e Y79) também foram testadas, utilizando os três marcadores. Resultados: A expressão de SOX-2 foi positiva em 97,4% dos casos de retinoblastoma, enquanto MAP2 foi positivo em 59% dos casos. GFAP foi apenas positivo no estroma (astrócitos reativos). Não houve correlação entre preditores histopatológicos e marcadores imunohistoquímicos avaliados. As linhagens celulares mostraram positividade para SOX-2 (90% em WERI-1 e 70% das células Y79). Ambas as linhagens celulares se mostraram fortemente positivas con MAP2 (90%), enquanto não houve expressão de GFAP em nenhuma das linhas celulares estudadas. Conclusões: A maioria das células de retinoblastoma desta série de casos expressa marcadores de células retinianas imaturas, além de marcadores de células maduras. As linhas celulares Y79 e WERI-1 apresentaram imunomarcação para ambos os marcadores neurais em percentagens semelhantes a dos casos avaliados. Portanto, estes resultados confirmam a origem neural do tumor em particular. Alem disso, a ausência de células positivas para GFAP no tumor descarta diferenciação de astrócitos em retinoblastoma.

ABSTRACT Purpose: The cellular origin of retinoblastoma is uncertain as constituent tumor cells heterogeneously express markers of both immature and mature retinal cells. An immunohistochemical analysis of cellular origin may yield valuable insights into disease progression and treatment options. This study aimed to determine the cellular origin of retinoblastoma in a large case series and correlate these findings with histopathological prognostic factors. Methods: Thirty-nine retinoblastoma cases were histopathologically diagnosed and analyzed by immunohistochemistry using monoclonal antibodies against the immature neural cell marker SRY-box containing gene 2 (SOX-2), the mature neuronal cell marker microtubule-associated protein 2 (MAP2), and the mature glial cell marker glial fibrillary acidic protein (GFAP). Histopathological features were also evaluated, including patterns of growth, differentiation, vitreous seeding, and choroidal/scleral, optic nerve, and anterior chamber invasion. Two retinoblastoma cell lines, WERI-1 and Y79, were studied by immunocytochemistry using the same antibodies. Results: Expression of SOX-2 was strong in 97.4% of retinoblastoma cases, while MAP-2 was expressed in 59% of cases. Immunostaining for GFAP was positive only in reactive stromal astrocytes interspersed amongst tumor cells and in peritumoral tissue. There was no correlation between histopathological prognostic factors and immunohistochemical markers. Retinoblastoma cell lines showed strong positivity for SOX2 (90% of WERI-1 cells and 70% of Y79 cells) and MAP2 (90% of cells in both lines). GFAP was completely negative in both cell lines. Conclusion: The majority of retinoblastomas and both RB cell lines expressed an immature neural and/or a mature neuronal cell marker, but not a glial marker. These results indicate a typical neuroblast or neuronal origin and eliminate astrocyte differentiation from neural stem cells as the source of retinoblastoma.

Amiloidose familiar do tipo finlandes (FAF) é uma forma de amiloidose sistêmica autossômica dominante com grande concentração geográfica na Finlândia. É causada por uma mutação, 654G-A, no gene gelsolin. O subtipo dinamarquês da FAF foi previamente descrito em três famílias, com achados clínicos similares mas com a mutação 654G-T no gene gelsolin. Três membros de duas gerações da mesma família, com diagnóstico de amiloidose familiar, foram submetidos a screening de mutações no gene gelsolin. O DNA genômico foi extraído de linfócitos do sangue periférico, sendo realizada reação em cadeia de polimerase (PCR) em condições padronizadas. A análise do sequenciamento revelou uma transição de G para T no nucleotidio 654 do gene gelsolin. Este é o primeiro relato de uma amiloidose familiar relacionada ao gene gelsolin em uma família brasileira, que apresenta uma forma rara de mutação, descrita previamente em três famílias, sem ancestrais finlandeses (tipo dinamarquês).

Familial amyloidosis of the Finnish type (FAF) is an autosomal dominant form of systemic amyloidosis showing marked geographic clustering in Finland. The disease is caused by a point mutation, 654G-A, in the gelsolin gene. The Danish-subtype of FAF has been previously described in three families, the patients present clinical findings similar to FAF, and the mutation 654G-T in the gelsolin gene. Three members from two generations of the same family, with familial amyloidosis, were screened for mutations in the GSN gene. Genomic DNA was extracted from peripheral blood lymphocytes and the polymerase chain reaction (PCR) was carried out under standard conditions, using appropriate primers. Sequence analysis showed the presence of a G to T transition at nucleotide 654 of the gelsolin gene. This is the first report of gelsolin-related familial amyloidosis in a Brazilian family, and the result is particularly significant as this pedigree presents an unusual mutation, described previously in three families, with no known Finnish ancestors (Danish type).

OBJETIVO: Comparar dois métodos de preservação de esclera humana, liofilização e álcool 95%, em diferentes períodos de tempo. MÉTODOS: Foram avaliados 96 fragmentos de seis escleras humanas. Metade das amostras foi submetida ao processo de liofilização e metade conservada em álcool 95%. Dois fragmentos de cada grupo foram avaliados pelas colorações de hematoxilina-eosina e tricrômio de Masson e submetidos a técnica de imuno-histoquímica para os anticorpos fibronectina e colágeno 1, após 18, 45, 90 e 174 dias de preservação. Os espécimens foram classificados de acordo com o paralelismo (PF:0-2) e integridade (IF:0-1) das fibras de colágeno e expressão imuno-histoquímica para os anticorpos fibronectina (FIB:0-3) e colágeno 1 (COL-1:0-3). A análise estatística foi realizada por meio dos testes de Friedman e Wilcoxon e o valor de p menor que 0,05 foi considerado estatisticamente significante. RESULTADOS: Verificaram-se diferenças significantes em três situações: (i) maior integridade das fibras de colágeno das escleras liofilizadas após 174 dias quando comparado aos 90 dias; (ii) maior expressão imuno-histoquímica para o anticorpo COL-1 nas amostras de escleras liofilizadas após os 18 dias iniciais de preservação; (iii) maior integridade das fibras de colágeno das escleras liofilizadas após 18 e 174 dias quando comparado às escleras preservadas em álcool. CONCLUSÕES: A preservação de tecido escleral por liofilização mostrou-se técnica tão eficaz quanto a preservação em álcool, apresentado vantagem quando considerada a integridade das fibras de colágeno. A liofilização mostra-se benéfica por permitir a estocagem do tecido em temperatura ambiente e com prazo de validade estendido.

PURPOSE: To compare the effect of preserving sclera samples in either 95% ethanol or freeze-dried. METHODS: Ninety-six samples of human sclera were studied. Half of them were freeze-dried and half preserved in 95% ethanol. Preservation periods of 18, 45, 90 or 174 days were studied. Automated immunostaining was carried out in the Ventana BenchMarkR LT platform using collagen 1 and fibronectin antibodies. Histological staining was also performed with hematoxilin-eosin and Masson trichrome. Samples were classified according to the degree of collagen fiber parallelism (0-2), intensity of Masson staining (0-2), and the expression of both antibodies (0-3). Friedman and Wilcoxon tests were applied to compare preservation methods and p-values below 0.05 were considered to ensure statistical significance. RESULTS: Relevant results were found in three situations: (i) Friedman's test showed better collagen fiber integrity in the freeze-dried group rehydrated after 174-days as compared to the 90-day group; (ii) Wilcoxon's test showed better collagen fiber integrity in the freeze-dried group after 18 and 174 days as compared to the ethanol group; (iii) the freeze-dried group disclosed higher immunohistochemical expression for COL-1 antibody in the sclera samples rehydrated after 45, 90 and 174 days as compared to the ones rehydrated after 18 days. CONCLUSION: Histological and immunohistochemical analysis showed freeze-drying to be a superior method for sclera preservation as compared to 95% ethanol. This technique provides an easy method to manipulate tissue, with longer shelf life, and storage at room temperature.

OBJETIVO: Avaliar a possibilidade de identificação de células malignas circulantes nas amostras de sangue periférico de pacientes brasileiros com melanoma maligno de coróide enviadas para análise no exterior. MÉTODOS: Os marcadores melan-A e tirosinase foram usados para detectar a presença de células malignas circulantes, pela transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase e análise seqüencial de DNA (RT-nested-PCR), em seis pacientes com melanoma maligno de coróide, diagnosticados no Brasil. RESULTADOS: Cinco pacientes deste grupo (83,33%) foram considerados positivos. A reação de RT-nested-PCR foi positiva para melan-A em quatro (66,7%) e positiva para tirosinase em quatro (66,7%) dos seis pacientes testados. Três (50%) pacientes foram positivos para os dois marcadores. Um (16,7%) paciente foi negativo para ambos marcadores. CONCLUSÃO: A pesquisa de células malignas circulantes usando RT-nested-PCR, foi positiva na maioria dos pacientes estudados. A qualidade das amostras de sangue periférico dos pacientes brasileiros foi mantida no material preservado mesmo após ter sido enviado ao exterior.

PURPOSE: The purpose of our study was to detect circulating malignant cells (CMCs) in oversea-shipped blood samples of patients with uveal melanoma diagnosed in Brazil. METHODOS: Melan-A and tyrosinase were the two markers used for the detection of CMCs, using reverse transcriptase nested polymerase chain reaction (RT-nested-PCR) in 6 patients with uveal melanoma. The expression of beta-actin and GAPDH were used to assess the quality of the material. RESULTS: Five patients (83.33%) tested positive for the presence of CMCs. The RT-nested-PCR was positive for melan-A in 4 patients (66.7%) and positive for tyrosinase in 4 (66.7%) of the 6 patients. Three (50%) patients were positive for both markers. One (16.7%) patient was negative for both markers. All negative controls were negative. CONCLUSION: The quality of the blood samples shipped overseas, from patients with uveal melanoma, was preserved. The detection of CMCs using RT-nested-PCR was positive in the majority of the patients.