ABSTRACT: In this study, we present a method for isolation and propagation of Phytophthora infestans, a challenging-to-isolate phytopathogenic oomycete. The procedure initiated with naturally infected potato leaves, which underwent a 30-minute sanitization under running water. Subsequently, healthy potato tubers were meticulously washed with a neutral detergent, sterilized using alcohol, and then flamed. Slices 4 mm thick were carefully cut out of the potato tubers. Slices were used to cover 2 x 4 mm sterilized leaf pieces cut from the border of two-day old young P. infestans lesions, within sterilized empty Petri dishes. The sealed plates were then transferred to BOD growth chambers set at 18 ºC in complete darkness for 5 days. At the end of this incubation period, the development of a sparse, white mycelium was observed on top of the potato slices. Using a Drigalski loop, the visible mycelium was carefully transferred to rye agar medium in Petri dishes. To avoid contamination, care was taken not no touch potato slices. After mycelium reaching the Petri dish border, and with aid of a Neubauer chamber, the inoculum density per plate was of 1.79 x 104 sporangia mL-1. Sporangia germination rate ranged from 69 to 78%. This isolation technique simplify in vitro production of P. infestans, enhancing the possibility for research with this important pathogen. ABSTRACT study challengingtoisolate challenging isolate oomycete leaves 30minute minute 30 water Subsequently detergent alcohol flamed twoday two day P lesions dishes 1 days period sparse slices loop contamination chamber 179 79 1.7 10 mL1. mL1 mL 1. mL-1 6 78 78% pathogen 3 17 7 mL-
RESUMO: Neste estudo, apresentamos técnica de isolamento e multiplicação de Phytophthora infestans, oomiceto fitopatogênico de isolamento desafiador. O procedimento teve início com folhas de batata naturalmente infectadas, as quais foram higienizadas em água corrente por 30 minutos. Posteriormente, tubérculos de batata saudáveis foram lavados com detergente neutro, esterilizados em álcool e flambados. Em seguida, foram cortadas rodelas de 4 mm do tubérculo. As rodelas foram usadas para cobrir pedaços de 2 x 4 mm da borda de lesões foliares de P. infestans com dois dias, em placas de Petri vazias e esterilizadas. As placas foram seladas e transferidas para câmaras de crescimento do tipo BOD, mantidas a 18 ºC no escuro por cinco dias. Após esse período, observou-se o crescimento de micélio ralo de cor branca sobre as rodelas de batata. Utilizando alça de Drigalski, o micélio visível foi transferido para meio de centeio e ágar. Após o preenchimento da placa por P. infestans, estimou-se com câmara de Neubauer a concentração de 1,79 x 104 esporângios mL-1, com taxa de germinação variando entre 69 e 78%. Essa técnica de isolamento simplifica o processo de obtenção in vitro de P. infestans, contribuindo significativamente para pesquisas relacionadas a essa importante doença. RESUMO estudo desafiador infectadas 3 minutos Posteriormente neutro flambados seguida tubérculo P dias esterilizadas BOD 1 período observouse observou se Drigalski ágar estimouse estimou 179 79 1,7 10 mL1, mL1 mL 1, mL-1 6 78 78% doença 17 7 mL-