O extrato aquoso de T. cruzi, previamente tratado pelo benzeno, mostrou, por cromatografia em Sephadex G-200, que sua reatividade antigênica estava presente nos primeiros eluatos, separando nitidamente daquelas frações inertes sorologicamente. A extração pela água remove parte dos antigenos especificos do Trypanosoma cruzi de onde podem ser removidos pelo metanol. Aqui também os perfis do cromatograma permitem separar as frações específicas enquanto os contaminantes se acumulam nos últimos eluatos. Quando o antígeno aquoso e liofilizado e reconstituído com metanol, em vez da solucao salina, os seus títulos por fixação de complemento, são maiores do que os determinados com o antígeno aquoso. A análise cromatográfica dos antigenos de Trypanosoma cruzi permitiu preparar um antígeno, para as reações de fixação do complemento, destituido de contaminantes sorologicamente inertes.

The aqueous extract of Trypanosoma cruzi, previously treated by benzene, was filtered throught a column of Sephadex g-200. The eluted fractions were tested by complement-fixation with the chagasic reference serum. It was found that the CF antigens were aluted in the first fractions and the contaminants in the last ones. The aqueous antigen, when dried and extracted with metanol, showed a very high titer in the complement-fixation quantitative test. this antigen is free of contaminants and can be recommended for use in the serological test for the diagnosis of Chagas' disease.

O aquecimento de soros chagásicos a 56 grausC por 30 minutos, não só inativa o complemento, como altera a mobilidade iônica das proteínas séricas. Com a inativação, os títulos dos soros por fixação de complemento decrescem sendo a queda do poder fixador relacionada com a diminuição da avidez do complexo-imune, formado com o antígeno de Trypanosoma cruzi para o complemento. Não se observaram diferenças na reatividade específica dos soros chagásicos, antes e depois de inativados, quando os títulos foram determinados por técnicas que não envolvem o complemento, tais como a imunofluorescência e a hemaglutinação.

The heating for 30 minutes at 56°C not only modifies the electrophoretic profiles of the Chagasic sera, but also their specific reactivity in complement-fixation with Trypanosoma cruzi antigens. the complement fixation titers are lower in inactivated sera and the avidity for complement of the immune-complex is reduced. It was found a correlation between the diminution of the CF titers and the reduction of the avidity for complement. The effects of inactivation on the specific reactivity of Chagasic sera was not observed with immunofluorescent antibody test or with hemagglutination. This finding does no support the hypothesis of thermolability of chagasic antibodies.

Um ensaio para a avaliação da reatividade de antígenos de Trypanosoma cruzi, baseado na medida do complemento livre pelo tempo necessário à hemólise de 50% pôde ser aplicado na determinação da dose de máxima reatividade de antígenos, em reações com o sôro chagásico de referência. Quando se avalia, por método cinético, as quantidades de complemento livre, em reações incubadas, por vários períodos de tempo e se projetam em logaritmos os tempos necessários para 50% de hemólise, contra os tempos de incubação, determinam-se pontos sobre uma reta, cujos parâmetros caracterizam a capacidade fixadora do complemento, dos complexos imunes. O método cinético se recomenda pela sua precisão, fácil execução e rapidez, na comparação de antígenos, em reações de fixação do complemento.

An assay for the evaluation of the antigens reactivity, based in the determination of free complement by the time required for 50% hemolysis, couid be applied for detection of the maximally reactive dose of antigens, in reactions with the reference Chagasic serum. When the logarithms of the time required for 50% hemoiysis are piotted against the time of incubation, the points describe a reggression Une, whose parameters characterized the combining capacity of the immune-complexes, in reactions with complement. The kinectic method is recommended for the preiiminary evaluation of antigens, for its precision and reliability.

Antígenos preparados de culturas de Trypanosoma cruzi foram experimentados com um sôro chagásico de referência, em reações quantitativas de fixação do complemento. Quatro deles foram liofilizados em pequenos volumes e mantidos em geladeira. Um outro foi mantido em estado líquido, com az ida sódica e a 3-6º C. Os títulos do complexo-imune, em termos de sôro ou de antígeno foram determinados como a inclinação da linha de regressão traçada quando se projetam as quantidades de complexo (em termos de sôro ou de antígeno) necessárias para 50% de hemólise contra o número de unidades de complemento usadas na reação. Dividindo-se o título do antígeno pelo título do sôro, obtem-se um índice de reatividade específica (I.R.E.), que informa sobre a reprodutibilidade e estabilidade do antígeno. Examinando os antígenos, de frascos colhidos ao acaso, verificou-se que os antígenos B.W. 89 e CDC 10-75 apresentaram um I.R.E. com pequena diferença entre as amostras, enquanto maior variação foi observada com os antígenos B.W. 105 e 760130. Antígenos reconstituídose mantidos em geladeira, até oito meses, perdiam lentamente sua capacidade reativa, com exceção do antígeno B.W. 89 e CDC 10-75. Os dados sugerem que o uso de antígenos de para reações de fixação do complemento devem ser empregados quando reconstituídos, evitando-se sua manutenção em estado líquido, pela queda do seu poder fixador.

Antigens prepared from cultures of Trypanosoma cruzi were tested by the quantitative complemento fixation test, with a Chagasic reference serum. The titer was computed as the slope of the linear relatioship between antigen (or serum) required for 50% hemolysis and the amount of complement present. When the antigen titer was divided by the serum titer, an index of specific reactivity was obtained. From the values of this index the reprodutibility of antigens was evaluated and also the decay of the capacity of the reativity against the reference serum. It was observed some variations from different vials and some decay of the specific reactivity after 8 months, when kept at 3-6° C. From five antigens prepared by similar technics, two presented comparable reactivity (CDC-10-75 and B.W. 89). The relative discrepancies of specific reactivity were within acceptable limits with the antigens B.W. 89 and B.W. 105, in titrations performed at different time. The highest discrepancy was observed when the antigen 760130 was compared with CDC-10 75, B.W. 89 and B.W. 105. The index of reactivity capacity permitted the evaluation of antigens prepared from, informing on their reproductibility and stability.