Resumo A organogênese in vitro das tangerinas Fremont (Citrus clementina x Citrus reticulata), Thomas (Citrus reticulata) e Nules (Citrus clementina) foi avaliada visando a otimizar o protocolo de regeneração para aplicação da transformação genética. O uso de explantes derivados de epicótilo resultou em maior número de explantes responsivos e maior número de brotações desenvolvidas por explante, quando comparado ao uso de explantes derivados de segmentos internodais. A maior eficiência na regeneração de brotos foi observada na presença de 1 mg L-1 de BAP, independentemente do tipo de explante e da cultivar. O protocolo de organogênese in vitro produziu plantas transgênicas das três cultivares de tangerina, expressando o gene attA sob o controle de promotores específicos de floema.

Abstract The in vitro organogenesis of Fremont (Citrus clementina x ), Citrus reticulataThomas (Citrus reticulata), and Nules (Citrus clementina) mandarins was evaluated aiming to optimize a regeneration protocol that could be applied in genetic transformation. The use of epicotyl-derived explants resulted in higher explant responsiveness and number of shoots developed per explant when compared with the use of internodal-derived explants. The highest efficiency in shoot regeneration was observed in the presence of 1 mg L-1 of BAP, regardless of the explant type and cultivar. The in vitro organogenesis protocol produced transgenic plants from three mandarin cultivars expressing attA gene under the control of phloem-specific promoters.

RESUMO A utilização de promotores preferencialmente expressos em tecidos vegetais específicos é uma estratégia desejável na busca por resistência a patógenos que colonizam tais tecidos. A bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus (Las), associada à doença huanglongbing (HLB) em citros, coloniza o tecido floemático. Alguns promotores, além de conferir expressão específica em certos tecidos, podem também responder diferencialmente à presença de patógenos. O objetivo deste estudo foi verificar se a presença de Las poderia modular a ativação dos promotores de floema AtPP2 (Arabidopsis thaliana phloem protein 2), AtSUC2 (A. thaliana sucrose transporter 2) e CsPP2 ( pCitrus phloemrotein 2), conhecidos por expressão específica em floema de Citrus sinensis. Plantas de laranja ‘Hamlin’ (Citrus sinensis L. Osbeck) transformadas com o gene reporter uidA (GUS) sob controle dos promotores AtPP2, AtSUC2 e CsPP2 foram infectadas para avaliar a interdependência entre a expressão dos transgenes e concentração de Las. Plantas foram inoculadas com Las por meio de Diaphorina citri e dezoito meses após, a concentração de bactéria e expressão do gene uidA foram determinadas por qPCR e RT-qPCR, respectivamente. A expressão do gene reporter dirigida pelo promotor AtSUC2 foi forte e positivamente correlacionada com a concentração de Las. Portanto, este promotor contém características desejáveis quanto à especificidade de expressão e indução específica por patógeno para a produção de plantas transgênicas tolerantes a Las.

ABSTRACT The use of promoters preferentially expressed in specific plant tissues is a desirable strategy to search for resistance for pathogens that colonize these tissues. The bacterium Candidatus Liberibacter asiaticus (Las), associated with huanglongbing disease (HLB) of citrus, colonizes phloem vessels. Some promoters, besides conferring tissue-specific expression, can also respond to the presence of the pathogen. The objective of the present study was to verify if the presence of Las could modulate the activation of the phloem-specific promoters AtPP2 (Arabidopsis thaliana phloem protein 2), AtSUC2 (A. thaliana sucrose transporter 2) and CsPP2 ( pCitrus phloemrotein 2), known to be expressed in Citrus sinensis phloem. ‘Hamlin’ sweet orange plants (Citrus sinensis L. Osbeck) transformed with the uidA (GUS) reporter gene under the control of AtPP2, AtSUC2 and CsPP2 promoters were infected to evaluate the interdependence between transgene expression and the concentration of Las. Plants were inoculated with Las by Diaphorina citri and eighteen months later, bacterial concentration and uidA expression were determined by qPCR and RT-qPCR, respectively. Reporter gene expression driven by AtSUC2 promoter was strongly and positively correlated with Las concentration. Therefore, this promoter combines desirable features of both tissue-specificity and pathogen-inducibility for the production of transgenic plants tolerant to Las.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a reação de quatro cultivares de laranjeira doce que expressam o gene atacina A à infecção por 'Candidatus Liberibacter asiaticus' (Las), bactéria associada à doença huanglongbing (HLB). Plantas transgênicas das cultivares Hamlin, Natal, Pêra e Valência, bem como controles não transgênicos, receberam inóculos, por enxertia, de seções de ramos infectados por HLB. A progressão da doença foi avaliada pela observação de sintomas foliares e por análise da reação em cadeia da polimerase (PCR), oito meses após a inoculação. Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado, com quatro experimentos (um para cada cultivar) realizados simultaneamente. A concentração bacteriana foi estimada por PCR quantitativo (qPCR). Sintomas de HLB e Las estavam presentes em plantas não transgênicas e em plantas transgênicas que expressaram o gene atacina A, nas quatro cultivares de laranjeira doce, oito meses após a inoculação. Cinco linhagens transgênicas (eventos de transformação) de laranjeira 'Pêra', que expressam o gene atacina A, apresentam concentrações de Las significativamente inferiores às das plantas não transgênicas desta cultivar.

The objective of this work was to evaluate the reaction of four sweet orange cultivars expressing the attacin A gene to 'Candidatus Liberibacter asiaticus' (Las) infection, a bacterium associated to huanglongbing (HLB) disease. Transgenic sweet orange plants of Hamlin, Natal, Pêra, and Valência cultivars, as well as nontransgenic controls received inocula by grafting budwood sections of HLB-infected branches. Disease progression was evaluated through observations of leaf symptoms and by polymerase chain reaction (PCR) analysis, eight months after inoculation. A completely randomized design was used, with four experiments (one for each cultivar) performed simultaneously. Bacteria title was estimated by quantitative PCR (qPCR). HLB symptoms and Las titers were present in nontransgenic and transgenic plants expressing the attacin A gene of the four sweet orange cultivars, eight months after bacteria inoculation. Five transgenic lines (transformation events) of 'Pêra' sweet orange expressing the attacin A gene have significantly lower Las titers in comparison with nontransgenic plants of this cultivar.

O objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de laranja 'Pêra' e 'Valência' por meio do gene D4E1 dirigido pelo promotor Arabidopsis thaliana phloem protein (AtPP2) e quantificar a expressão dos transgenes nos diferentes eventos de transformação. Os experimentos de transformação genética foram realizados com segmentos de epicótilo cocultivados com Agrobacterium tumefaciens. Seis plantas de laranja 'Pêra' e sete plantas de laranja 'Valência' foram confirmadas como distintos eventos transgênicos por meio das técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR) e Southern blot. A expressão dos transgenes foi quantificada por PCR quantitativo em tempo real. Os níveis de expressão do gene D4E1 variam de 5 a 50 vezes entre os diferentes eventos de transformação.

The objective of this work was to produce transgenic 'Pêra' and 'Valência' sweet orange plants using the D4E1 gene driven by the Arabidopsis thaliana phloem protein (AtPP2) promoter and to quantify transgene expression in different transformation events. Genetic transformation experiments were carried out with epicotyl segments co‑cultivated with Agrobacterium tumefaciens. Six plants from 'Pêra' sweet orange and seven plants from 'Valência' sweet orange were confirmed as different transgenic events by means of the polymerase chain reaction (PCR) and the Southern blot techniques. Transgene expression was quantified using real‑time quantitative PCR. D4E1 gene expression levels vary from 5 up to 50 times among different transformation events.

A organogênese in vitro de limão Cravo (Citrus limonia Osbeck) foi estudada em função do tipo de explante e da suplementação do meio de cultura com citocinina. Foram avaliados quatro tipos de explantes coletados da região do epicótilo e do hipocótilo de plântulas germinadas in vitro. Os explantes consistiram em segmentos de epicótilo, segmentos de hipocótilo, segmentos de hipocótilo ligado a um fragmento do cotilédone e segmentos de hipocótilo cortado longitudinalmente. Os explantes foram cultivados em meio de cultura EME suplementado com benzilaminopurina (0; 0,5; 1,0 e 1,5 mg L-1). As avaliações foram realizadas após seis semanas de incubação, e os melhores resultados considerando-se tanto a porcentagem de explantes responsivos como o número de gemas desenvolvidas por explante foram obtidos com o uso de segmentos de epicótilo como explante. Considerando os explantes derivados da região do hipocótilo, não foi detectada diferença na porcentagem de explantes responsivos com o uso de segmentos de hipocótilo ou de segmentos de hipocótilo ligado a um fragmento do cotilédone. A porcentagem de explantes responsivos diminuiu com o uso de segmentos de hipocótilo cortado longitudinalmente como explante. Não foi detectada nenhuma diferença no número de gemas adventícias desenvolvidas por explante considerando-se os três tipos de explantes derivados da região do hipocótilo. A suplementação do meio de cultura com BAP não é essencial para a organogênese in vitro de limão Cravo. No entanto, o desenvolvimento de gemas adventícias foi estimulado com concentrações entre 0,5 - 1,0 mg L-1.

Rangpur lime (Citrus limonia Osbeck) in vitro organogenesis was studied based on explant type and cytokinin culture media supplementation. Four explants types collected from epicotyl or hypocotyl regions of in vitro germinated seedlings were evaluated. The epicotyl-derived explants consisted of epicotyl segments and the hypocotyl-derived explants consisted of the entire hypocotyl segment, the hypocotyl segment attached to a cotyledon fragment, and the hypocotyl segment divided longitudinally. The explants were cultured on EME culture medium supplemented with benzylaminopurine (0, 0.5, 1.0, or 1.5 mg L-1). The evaluation was performed after 6 weeks. Best results considering both the explant responsiveness and number of shoots developed per explants were obtained when epicotyl segments-derived explants were evaluated. Considering the explant responsiveness of hypocotyl segments-derived explants no difference was detected between the entire hypocotyl segment and the hypocotyl segment attached to a cotyledon fragment. Moreover, the percentage of responsive explants decreased when hypocotyl segments divided longitudinally were tested. No difference was detected for the number of shoots developed per explant considering the three types of hypocotyl-derived explants. Culture media supplementation with BAP was not essential for Rangpur lime in vitro organogenesis. However, adventitious shoot development was stimulated in concentrations between 0.5 - 1.0 mg L-1.

A organogênese in vitro de Cítrus foi estudada para os genótipos Citrus sinensis cv. 'Natal', C. limonia, C. volkameriana e C. aurantium, utilizando-se de segmentos de epicótilo como explante, cultivados em meio de cultura MT suplementado com diferentes concentrações de 6-benzilaminopurina (BAP - 0,0; 0,5; 1,0; 1,5 ou 2,0 mg L-1). Para os genótipos recalcitrantes C. limonia e C. aurantium, a organogênese in vitro também foi estudada, utilizando-se de segmento internodal como explante, cultivado em meio de cultura MT suplementado com 0; 0,5; 1,0; 2,0 ou 4,0 mg L-1 de BAP. A eficiência da suplementação do meio de cultura com a combinação de BAP (0,0; 1,0 ou 2,0 mg L-1) e NAA (0,0; 0,3 ou 0,5 mg L-1) no desenvolvimento de gemas adventícias foi avaliada para C. aurantium. Pode-se verificar que, nos quatro genótipos estudados, a suplementação do meio de cultura com BAP não é essencial para o desenvolvimento de gemas adventícias, quando segmentos de epicótilo são utilizados como explantes. De maneira geral, a suplementação do meio de cultura com BAP diminuiu a porcentagem de explantes responsivos, exceto para C. sinensis cv. 'Natal' e C. limonia, quando as concentrações de 1,5 e 2,0 mg L-1 foram utilizadas. Para C. limonia e C. aurantium, quando segmento internodal foi utilizado como explante, a presença de citocinina em concentrações até 2,0 mg L-1 estimulou a organogênese in vitro. No caso específico de C. aurantium, não ocorreu o desenvolvimento de gemas adventícias em explantes (segmento internodal) cultivados em meio de cultura basal, sem a presença de BAP. Embora não tenham sido detectadas diferenças estatísticas significativas, a suplementação do meio de cultura com a combinação BAP e NAA favoreceu o desenvolvimento de gemas adventícias em C. aurantium. A melhor concentração de NAA variou conforme a concentração de BAP utilizada. Pela análise dos resultados obtidos, pode-se verificar que a eficiência da organogênese in vitro de Cítrus depende da interação da composição do meio de cultura, do nível de diferenciação do explante e do genótipo utilizado.

In vitro organogenesis of Citrus was studied for the genotypes Citrus sinensis cv. 'Natal', C. limonia, C. volkameriana, and C. aurantium, with the use of epicotyl segments-derived explants, cultured in MT salts and vitamins medium supplemented with different concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP - 0.0; 0.5; 1.0; 1.5 or 2.0 mg L-1). For the recalcitrant genotypes C. limonia and C. aurantium the in vitro organogenesis was also studied with internodal segments-derived explants, cultured in MT salts and vitamins medium supplemented with 0; 0.5; 1.0; 2.0, or 4.0 mg L-1 of BAP. The efficiency of culture medium supplementation with the combination of BAP (0.0; 1.0, or 2.0 mg L-1) and NAA (1-naphthaleneacetic acid - 0.0; 0.3, or 0.5 mg L-1) in the development of adventitious shoots was evaluated for C. aurantium. Culture medium supplementation with BAP is not essential for the adventitious shoots development in the four genotypes studied when epicotyl segments-derived explants are used. In general, culture media supplementation with BAP decreased the percentage of responsive explants excepted for C. sinensis cv. 'Natal' and C. limonia when the concentrations of 1.5 and 2.0 mg/L were used. The presence of cytokinin, in concentrations up to 2 mg/L, stimulated the in vitro organogenesis when internodal segments-derived explants were used for C. limonia and C. aurantium. For C. aurantium no adventitious shoots developed in explants (internodal segments) cultured in basal culture medium, without BAP supplementation. Although no statistic differences could be detected, culture media supplementation with the combination of BAP and NAA favored the development of adventitious shoots in C. aurantium. The best concentration of NAA varied according to BAP concentration. The results presented herein, show that Citrus in vitro organogenesis depends on the interaction of culture medium composition, explant differentiation level, and genotype.

O isolamento e plaqueamento de protoplastos são fatores fundamentais para o sucesso no cultivo in vitro deste tipo de explante visando a manipulações genéticas. A composição da solução enzimática no isolamento, a densidade de cultivo, bem como o próprio genótipo utilizado são variáveis importantes nestas etapas. Desta forma, o objetivo do trabalho foi avaliar a eficiência de isolamento de protoplastos em função de três soluções enzimáticas e a eficiência de plaqueamento em função de cinco densidades de protoplastos e diferentes composições de meio de cultura em cultivares de laranja-doce. As soluções enzimáticas avaliadas para o isolamento de protoplastos foram: 1. celulase Onozuka RS 1%, macerase R-10 1% e pectoliase 0,2%; 2. celulase Onozuka RS 1%, macerase R-10 1% ; 3. celulase Onozuka R-10 4%, macerase R-10 1%. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado nas densidades de 2 x 10(4); 5 x 10(4); 10(5); 2x 10(5) e 3 x 10(5) protoplastos.mL-1, nos meios de cultura EME 0,7M, BH3 0,7M e BH3 + EME 0,7M em ausência de luz, a 25 ± 1 ºC. A solução enzimática 2 proporcionou maior rendimento no isolamento de protoplastos das cultivares 'Hamlin', 'Natal' e 'Pera', e a solução enzimática 1 foi a mais adequada para a laranja 'Westin'. Para a cultivar 'Lima-Verde', a solução enzimática 3 foi a mais eficiente. A eficiência final de plaqueamento, avaliada aos 90 dias de cultivo, foi superior nas densidades de 3 x 10(5) e 2 x 10(5) protoplastos.mL-1 para as cultivares 'Hamlin', 'Natal' e 'Lima-Verde', e nas densidades de 2 x 10(5) e 10(5) protoplastos.mL-1 para a laranja 'Westin'.

Protoplast isolation and culture are important factors for adequate in vitro culture of this type of explant to further genetic manipulations. The composition of the enzymatic solution, protoplast platting density, and plant genotype are important variables in these steps. Therefore, this work aimed to evaluate the isolation efficiency of protoplasts related to three enzymatic solutions and platting efficiency of protoplasts based on five cell densities in different culture media compositions of sweet oranges cultivars. The enzymatic solutions tested were: 1. celulase Onozuka RS 1%, macerase R-10 1% and pectoliase 0,2%; 2. celulase Onozuka RS 1%, macerase R-10 1% ; 3. celulase Onozuka R-10 4% , macerase R-10 1%. Protoplasts were cultured at densities of 2 x 10(4); 5 x 10(4); 10(5); 2x 10(5) e 3 x 10(5) protoplasts.mL-1 in EME 0,7M, BH3 0,7M e BH3 + EME 0,7M, in darkness, at 25 ± 1 ºC. The enzymatic solution 2 provided higher yield for 'Hamlin', 'Natal' and 'Pêra' sweet orange cultivars, and enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for 'Westin' sweet orange. For 'Lima Verde' sweet orange, enzymatic solution 3 was the most efficient. Final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher at the densities of 3 x 10(5) e 2 x 10(5) protoplasts.mL-1 for 'Hamlin', 'Natal', and 'Lima Verde' sweet orange cultivars, and at the density of 2 x 10(5) e 10(5) protoplasts. mL-1 for 'Westin' sweet orange.

O objetivo deste trabalho foi otimizar a regeneração in vitro via organogênese a partir de tecidos de plantas adultas das laranjas doces 'Hamlin', 'Pêra' e 'Valência'. Os explantes foram cultivados em meio EME com diferentes concentrações de 6-benzilaminopurina (BAP) e ácido naftalenoacético (ANA), a 27ºC sem luz por 50 dias, seguido de fotoperíodo de 16 horas por 20 dias. A regeneração foi avaliada 50 e 70 dias após o cultivo in vitro. A organogênese nas cultivares Hamlin e Valência foi favorecida pelo uso de EME suplementado com BAP, enquanto ANA não apresentou efeito aparente.

The objective of this work was to optimize in vitro plant regeneration via organogenesis from tissues of adult 'Hamlin', 'Pêra', and 'Valência' sweet orange plants. Explants were grown in EME culture medium with different concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP) and naphthaleneacetic acid (NAA), at 27ºC in the absence of light for 50 days, followed by a 16-hour photoperiod for 20 days. Regeneration was assessed 50 and 70 days after in vitro culture. Organogenesis in cultivars Hamlin and Valência was promoted by EME supplemented with BAP, while NAA showed no apparent effect.

Transformação genética é considerada uma importante ferramenta auxiliar no melhoramento genético de plantas cítricas. Entretanto, a eficiência de transformação pode variar em função de diversos fatores, incluindo a própria construção gênica utilizada. Este trabalho buscou avaliar a eficiência de transformação genética de plantas de citrange 'Carrizo' [Poncirus trifoliata (L.) Raf. x Citrus sinensis (L.) Osbeck] com duas construções gênicas diferentes contendo o gene uidA (GUS) sob o controle dos promotores Arabidopsis thaliana phloem protein 2 (AtPhP2) e Arabidopsis thaliana sucrose transporter 2 (AtSuT2). Segmentos de epicótilo de plântulas germinadas in vitro foram utilizados como explantes. O gene nptII, que confere resistência ao antibiótico canamicina, foi utilizado nas construções gênicas como agente de seleção para regeneração de plantas transgênicas. O ensaio histoquímico com X-GLUC foi realizado em todas as brotações regeneradas para verificar a expressão do gene uidA. Dos 4.790 segmentos de epicótilo utilizados, registrou-se a regeneração de 366 brotações com reação positiva no ensaio histoquímico, as quais foram enxertadas em porta-enxertos cultivados in vitro. Cinco dessas brotações, de cada construção gênica, foram selecionadas para análise da PCR, com primers específicos para amplificação da sequência do gene uidA. A inserção do transgene foi confirmada por PCR em todas as brotações selecionadas. A eficiência de transformação e o número de brotos escapes, avaliada pelo teste histoquímico, variaram em função das construções gênicas utilizadas.

Genetic transformation is considered an important tool to be applied in citrus genetic improvement. However, transformation efficiency may vary according to several factors, including the genetic construction utilized. This work aimed to evaluate the transformation efficiency of 'Carrizo' citrange [Poncirus trifoliata (L.) Raf. x Citrus sinensis (L.) Osbeck], containing two different gene constructions including the uidA (GUS) gene controlled by the promoters Arabidopsis thaliana phloem protein 2 (AtPhP2) and Arabidopsis thaliana sucrose transporter 2 (AtSuT2). Epicotil segments from in vitro germinated seedlings were used as explants. The nptII gene, which confers resistance to the antibiotic kanamycin, was used in the constructions as a selection agent to regenerate transgenic plants. X-GLUC histochemical analysis was performed in all regenerated shoots in order to verify the expression of the uidA gene. From the 4790 epicotyl segments utilized, 366 shoots had a positive reaction in the histochemical analysis, and were further grafted on in vitro grown rootstocks. Five out of these shoots, from each gene construction, were selected to perform PCR analysis, with specific primers for uidA gene sequence amplification. All selected plants evaluated by PCR confirmed gene integration. Transformation efficiency and number of non-transformed shoots, evaluated by histochemical analysis, varied among gene constructions utilized

A regeneração de plantas, por organogênese ou embriogênese somática, a partir do cultivo de células e tecidos vegetais in vitro, é a base para a utilização da biotecnologia no melhoramento. O objetivo deste trabalho foi avaliar a embriogênese somática a partir de calos embriogênicos das cultivares de laranjeiras doces 'Hamlin', 'Pêra', 'Natal', 'Lima Verde' e 'Westin', em função da composição dos meios de cultura relacionada à fonte e concentração de diferentes carboidratos, utilizando-se meio de cultura MT modificado com 500mg L-1 de extrato de malte, acrescido de sacarose, galactose, glicose, sorbitol, lactose ou maltose, nas concentrações de 18, 37, 75, 110 ou 150mM à 27°C. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial cinco (cultivares) x seis (fontes de carboidratos) x cinco (concentrações das fontes de carboidratos no meio de cultura), com cinco repetições. A formação de embriões somáticos variou conforme a cultivar, e as laranjeiras 'Hamlin' e 'Natal' registraram o maior número de embriões, enquanto 'Lima Verde' e 'Westin' apresentaram menores números. A melhor fonte de carboidratos para indução de embriogênese somática foi a maltose, seguida pela lactose, nas concentrações de 37 e 75mM. Embriogênese somática não foi observada nos meios de cultura contendo galactose, glicose ou sorbitol para nenhuma cultivar estudada.

Plant regeneration, by organogenesis or somatic embryogenesis, from cell cultures and in vitro plant tissue culture is the basis for biotechnology usage in plant breeding. This research aimed to evaluate somatic embryogenesis from embryogenic calli of 'Hamlin', 'Pêra', 'Natal', 'Lima Verde', and 'Westin' sweet orange cultivars related to culture medium composition as source and concentration of carbohydrates with the use of MT culture medium modified with 500mg L-1 of malt extract, supplemented with sucrose, galactose, glucose, maltose, lactose, or sorbitol at concentrations of 18, 37, 75, 110 or 150mM at 27°C. Statistical design were complete randomized, in a factorial five (cultivars) x six (carbohydrate source) x six (carbohydrate concentration in culture medium) with five replicates. The production of somatic embryos varied with the genotype, as 'Hamlin' and 'Natal' cultivars registered higher number of embryos, whereas 'Lima Verde' and 'Westin' showed lower numbers. The best carbohydrate source was maltose, followed by lactose at concentrations of 37 and 75mM. Somatic embryogenesis was not observed on culture media supplemented with galatose, glucose or sorbitol in any studied cultivar.

Este trabalho avaliou a resistência à infecção de tronco e de raízes por Phytophthora nicotianae em híbridos somáticos de citros com potencial para serem utilizados como porta-enxertos. Os híbridos somáticos avaliados foram laranja 'Hamlin' (Citrus sinensis) + toranja 'Indian Red' (Citrus grandis) (plantas 1 e 2) e laranja 'Hamlin' (C. sinensis) + toranja 'Singapura' (C. grandis). Plantas de limão 'Cravo' (Citrus limonia), laranja 'Caipira' (C. sinensis), laranja-azeda (C. aurantium) e Poncirus trifoliata 'Davis A' (Poncirus trifoliata) foram utilizadas como plantas-controle devido à reação conhecida à infecção pelo patógeno. Avaliações realizadas entre 30 e 60 dias após as inoculações com o patógeno incluíram o comprimento das lesões no tronco e a massa seca do sistema radicular nas plantas avaliadas. O híbrido somático laranja 'Hamlin' + toranja 'Indian Red' (planta 1) mostrou-se tolerante a P. nicotianae, indicando potencial para continuidade nas suas avaliações como porta-enxerto para citros.

This study aimed to evaluate the resistance to trunk and root infection by Phytophthora nicotianae in citrus somatic hybrids with potential to be utilized as rootstocks. The somatic hybrids evaluated were 'Hamlin' sweet orange (Citrus sinensis) + 'Indian Red' pummelo (Citrus grandis) (plants 1 and 2), and 'Hamlin' sweet orange (C. sinensis) + 'Singapura' pummelo (C. grandis). Plants of 'Rangpur' lime (Citrus limonia), 'Caipira' sweet orange (C. sinensis), sour orange (C. aurantium), and Poncirus trifoliata 'Davis A' (Poncirus trifoliata) were used as control due to their known reaction to the pathogen. Evaluations performed between 30 and 60 days after pathogen inoculation included the length of trunk lesions, and root dry mass of the root system of evaluated plants. The somatic hybrid 'Hamlin' sweet orange + 'Indian Red' pummelo (plant 1) was tolerant to P. nicotianae, indicating potential to be further evaluated as a rootstock.

Com o objetivo de avaliar a formação de gemas adventícias e regeneração in vitro de plantas de laranja-azeda (Citrus aurantium L.), foram realizados dois experimentos de indução à organogênese. No primeiro experimento, a indução e a regeneração in vitro de gemas adventícias foram investigadas a partir de segmentos internodais e segmentos de epicótilo sob o efeito de BAP ou CIN associados com ANA. O segundo experimento avaliou a regeneração in vitro de plantas de laranja-azeda em função do tipo de explante (segmentos de epicótilo, segmentos internodais de plantas germinadas in vitro e segmentos internodais de plantas cultivadas em casa de vegetação). Os dados coletados em ambos os experimentos incluíram a porcentagem de explantes responsivos (explantes que formaram gemas) e número de gemas por explante. A adição de BAP revelou a melhor resposta organogenética. Segmentos de epicótilo e segmentos internodais são explantes recomendados para a indução de organogênese in vitro de laranja-azeda. Enraizamento das brotações foi alcançado sem a adição de auxinas ao meio de cultura.

In order to evaluate the formation of adventitious buds and in vitro regeneration of sour orange plants (Citrus aurantium L.) two organogenesis-inducing experiments were conducted. In the first experiment, the induction and in vitro regeneration of adventitious buds were tested on epicotyl and internodal segments under the influence of BAP or KIN associated with NAA. The second experiment evaluated the in vitro regeneration of sour orange plants related to different explant types (epicotyls segments, internodal segments of in vitro germinated plantlets and internodal segments of greenhouse cultivated plants). Data collected on both experiments included the percentage of responsive explants (explants that formed buds), and the number of buds per explant. The addition of BAP showed the best organogenic response. In vitro germinated epicotyl segments and internodal segments are recommended as explants for sour orange in vitro organogenesis. Rooting of regenerated shoots was achieved without the need of auxin in the medium.

Objetivou-se neste trabalho comparar o enraizamento de estacas do híbrido somático laranja 'Caipira' (C. sinensis L. Osbeck) + limão 'Volkameriano' (C. volkameriana V. Tennore et Pasquale) com aquelas dos seus genitores tratadas com ácido indolbutírico (AIB) (0; 500; 1.000 e 2.000 mg L-1). As estacas de laranja 'Caipira' e limão 'Volkameriano' foram retiradas de plantas obtidas a partir de sementes, e as do híbrido somático, de plantas enxertadas recém-podadas. O delineamento experimental utilizado foi um fatorial 3 x 4 (genótipos x concentrações de AIB) inteiramente casualizado, com quatro repetições de 10 estacas por repetição, totalizando 480 estacas. As estacas foram cultivadas em bandejas de poliestireno expandido, contendo substrato comercial, em estufa com sistema de nebulização intermitente, por 90 dias. A produção de plantas enraizadas foi altamente eficiente para os três genótipos avaliados, considerando-se a maioria das variáveis relacionadas ao enraizamento e vigor das estacas, independentemente do uso de AIB. Estacas de limão 'Volkameriano' apresentaram médias de comprimento e massa seca das raízes superiores às dos demais genótipos. Para todos os genótipos, as porcentagens de estacas vivas e enraizadas foram elevadas (acima de 90%), indicando o alto potencial deste germoplasma para ser utilizado na produção de mudas e porta-enxertos por estaquia.

This work aimed to compare the rooting capacity of cuttings of the somatic hybrid 'Caipira' sweet orange (C. sinensis L. Osbeck) + 'Volkamer' lemon (C. volkameriana V. Tennore et Pasquale) with those of their progenitors treated with indol butyric acid (IBA) (0, 500, 1000 and 2000 mg L-1). Cuttings of 'Caipira' sweet orange and 'Volkamer' lemon were collected from seed derived plants, whereas those of the somatic hybrid were obtained from recently pruned grafted plants. The experimental design was a completely randomized block 3 x 4 factorial (genotypes x IBA concentrations), with four replications (10 cuttings per replication) in a total of 480 cuttings. Cuttings were cultivated in expanded polystyrene trays filled with commercial potting mix, inside an intermittent mist chamber, for 90 days. The production of the rooted plants was highly efficient for the three genotypes evaluated, considering most of the variables related with rooting and cutting vigor, regardless the use of IBA. 'Volkamer' lemon cuttings had higher root length and root dry mass than the other genotypes. However, percentage of live cuttings, rooted cuttings and sprouted cuttings were high (above 90%) for all evaluated genotypes, indicating the great potential of this material to be used in nursery tree multiplication through cuttings.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a indução e a formação de gemas adventícias em explantes de laranja-azeda, pelo uso de fitorreguladores. Em experimentos de organogênese in vitro foram avaliados 6-benzilaminopurina (BAP), thidiazuron (TDZ) e cinetina (CIN), em diferentes concentrações e sob duas condições de luminosidade; BAP e CIN combinados ou não com ácido naftalenoacético (ANA); e BAP e CIN isoladamente ou combinados entre si. Segmentos de epicótilo de 1 cm de comprimento, provenientes de plântulas de laranja-azeda germinadas in vitro, foram utilizados como explantes. Para induzir a formação de gemas, os segmentos foram cultivados em meio MT com ou sem adição de fitorreguladores. O material foi cultivado a 27ºC em ausência de luz por 30 dias, seguidos de fotoperíodo de 16 horas. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com quatro ou cinco repetições, a depender do experimento e, cada repetição foi constituída de placa de Petri com 20 explantes. Após 60 ou 70 dias de cultivo foram avaliados o percentual de explantes responsivos e o número de gemas por explante. A adição de BAP ao meio de cultura, combinada ou não com ANA, e em combinações com CIN promovem melhor resposta organogênica.

The objective of this work was to evaluate the induction and formation of adventitious buds in sour orange explants through the use of plant regulators. In vitro organogenesis experiments were conducted to evaluate the effect of BAP, TDZ, and KIN in different concentrations and under two light conditions; BAP and KIN, combined or not with NAA; BAP and KIN, separately or in combined concentrations. Sour orange epicotyl segments (1 cm length), from in vitro germinated plants, were used as explants. In order to induce bud formation, the explants were cultured in MT medium with or without the addition of plant regulators. The material was cultivated at 27ºC in the absence of light for 30 days, followed of culture under a 16-hour photoperiod. The experimental design was completely randomized, with four or five replicates, depending on the experiment; each replicate comprised one Petri dish with 20 explants. After 60 or 70 days of cultivation, the percentage of responsive explants and the number of buds were evaluated. The addition of BAP to the culture medium, combined or not with ANA, and in combinations with CIN, induces better organogenic response.

RNA de interferência, silenciamento gênico transcricional, silenciamento gênico induzido por vírus e micro RNAs compõem uma série de mecanismos capazes de suprimir a expressão gênica em plantas. Estes mecanismos revelaram rotas metabólicas parecidas e interagem em vários níveis. A capacidade de manipular técnicas de silenciamento gênico tem produzido plantas transgênicas capazes de suprimir a expressão de genes endógenos e ácidos nucléicos invasores. Esta poderosa ferramenta biotecnológica tem ofertado a possibilidade de acelerar programas de melhoramento e pesquisas em desenvolvimento de plantas lenhosas. Este trabalho visa revisar pesquisas de silenciamento gênico em plantas lenhosas e discutir aplicações e rumos futuros.

RNA interference, transcriptional gene silencing, virus induced gene silencing, and micro RNAs comprise a series of mechanisms capable of suppressing gene expression in plants. These mechanisms reveal similar biochemical pathways and appear to be related in several levels. The ability to manipulate gene silencing has produced transgenic plants able to switch off endogenous genes and invading nucleic acids. This powerful biotechnological tool has provided plant breeders and researchers with great opportunity to accelerate breeding programs and developmental studies in woody plants. This research work reports on gene silencing in woody plants, and discuss applications and future perspectives.