Resumo No Programa de Melhoramento de Citros do Centro de Citricultura do Instituto Agronômico (IAC), foi desenvolvida uma cultivar, a tangerina IAC 2019Maria, proveniente do cruzamento entre tangor Murcott IAC (Citrus reticulata x Citrus sinensis) e laranja Pera IAC (C. sinensis). O presente trabalho teve como objetivo avaliar o número de sementes em frutos da tangerina IAC 2019Maria e identificar embriões zigóticos e plantas triploides dos cruzamentos entre tangerina IAC 2019Maria e laranja Pera IAC e tangerina Ponkan (C. reticulata Blanco), tangerina IAC 2019Maria em polinização aberta e de autopolinização. As flores de IAC 2019Maria foram autopolinizadas, polinizadas com pólens de laranja Pera e tangerina Ponkan e sem polinização. Os embriões foram identificados utilizando marcadores moleculares microssatélites e a ploidia foi avaliada por citometria de fluxo. Os resultados do tratamento sem polinização sugerem que a variedade não produz frutos partenocárpicos. Os resultados da genotipagem demonstraram que 100% de todas as populações consistem em embriões zigóticos, sugerindo que a tangerina IAC 2019Maria é uma planta com baixa taxa de poliembrionia. A análise da ploidia dos híbridos permitiu identificar uma planta triploide de semente abortada do cruzamento com laranja Pera e duas tetraploides, uma do cruzamento com laranja Pera e uma de autopolinização.

Abstract The Citrus Breeding Program of the Citriculture Center at the Agronomic Institute (IAC) has developed a mandarin cultivar IAC 2019Maria from the crossing between Murcott IAC tangor (Citrus reticulata x Citrus sinensis) and Pera IAC sweet orange (C. sinensis). The present study aimed to assess the number of seeds in fruits of IAC 2019Maria mandarin and to identify zygotic embryos and triploid plants in the crossings between IAC 2019Maria mandarin, Pera IAC sweet orange, and Ponkan mandarin (C. reticulata Blanco), in addition to IAC 2019Maria mandarin in open and self-pollination. IAC 2019Maria flowers were self-pollinated, pollinated with pollen from Pera sweet orange and Ponkan mandarin, and had no pollination. The embryos were identified using microsatellite molecular markers and ploidy was assessed by flow cytometry. The results of the treatment with no pollination suggest the variety does not produce parthenocarpic fruits. The genotyping results showed that 100% of the populations consist of zygotic embryos, suggesting that IAC 2019Maria mandarin is a plant with low polyembryony. The ploidy analysis of the hybrids allowed identifying a triploid plant from an aborted seed from the crossing with Pera sweet orange and two tetraploids, one from the crossing with Pera sweet orange and one from self-pollination.

Abstract We report the in vitro induction of polyploids from two cassava cultivars by colchicine treatment. Shoot nodal segments, collected from in vitro cultivated plants of Porquinho and Vassourinha cultivars, were used as explants. Explants were treated in liquid media without and with colchicine (0.05, 0.10 or 0.15%), at 90 rpm, in the dark, for 48 or 96 h. Normal-like and putative-polyploid phenotypes were recovered from in vitro culture, for both cultivars. All plants from the putative-polyploid group were confirmed as tetraploids by flow cytometry and root tip chromosome counting, whereas no association was found between ploidy level and phenotype in normal-like plants. Mixoploids were also recovered from both cultivars. Vassourinha was more responsive to colchicine treatment than Porquinho. Tetraploid plants have fewer, but bigger, stomata guard cells than those in diploids. Colchicine at 0.10% for 96 hours induced a high number of tetraploids in both cultivars.

Em experimentos de competição de cultivares de citros, geralmente são utilizados muitos tratamentos, o que requer o emprego de grandes blocos e parcelas com poucas plantas. Tem sido debatido que, nessas condições, pode ocorrer a correlação entre parcelas vizinhas, violando assim a pressuposição de erros independentes da análise de variância. O presente trabalho teve por objetivo avaliar diferentes parametrizações de modelos, considerando ou não a dependência espacial entre parcelas, em dois experimentos de competição de clones de laranjeira Pêra (Citrus sinensis L. Osbeck). Foi utilizada a estrutura auto-regressiva separável de primeira ordem (AR1 x AR1) como modelo de dependência espacial entre os erros. Os resultados encontrados apontam que a modelagem espacial dos erros utilizando modelos auto-regressivos separáveis de primeira ordem para experimentos de seleção de clones de laranjeira Pêra, normalmente trazem pequenos ganhos em termos de qualidade de ajuste. A análise desconsiderando o fator blocos mais o ajuste espacial auto-regressivo separável de primeira ordem apresentou melhor qualidade de ajuste entre os modelos avaliados.

In competition experiments of citrus cultivations one generally uses many treatments, which requires the use of big blocks and plots with few plants. One has debated that in these conditions there can occur the correlation between neighboring plots, violating, thus, the presupposition of errors independent from the variance analysis. The present work has had as objective to evaluate different model parametrizations, considering or not the spatial dependence between plots, in two competition experiments of Pera orange tree clones (Citrus sinensis L. Osbeck). One has utilized the separable auto-regressive structure of first order (AR1 x AR1) as a model of spatial dependence between the errors. The results found indicate that the spatial modeling of the errors by utilizing separable auto-regressive models of first order for selection experiments of Pera orange tree clones normally bring small gains in terms of quality of adjustment. The analysis not considering the block factor plus the separable auto-regressive spatial adjustment of first order has presented better quality of adjustment between the models evaluated.

Em programas de melhoramento de citros por indução de mutações já foi comprovada a sensibilidade diferencial às doses de mutagênico em plantas de diferentes variedades e em diferentes propágulos de uma mesma planta. O objetivo do presente estudo foi avaliar a radiossensibilidade de dois tipos de propágulos (borbulhas e segmentos de epicótilo in vitro) de tangor 'Murcott', tangerinas 'Thomas' e 'Fremont' e limão 'Cravo' (este apenas de segmentos de epicótilo in vitro) e comparar a radiossensibilidade entre propágulos e entre variedades. Foram utilizadas as doses de 0, 10, 20, 30, 40 e 50 Gy de raios-gama, com avaliações aos 60 dias dos parâmetros: porcentagem de borbulhas mortas, altura das brotações desenvolvidas, para borbulhas irradiadas; número de brotações regeneradas por explante e porcentagem de explantes responsivos, para segmentos de epicótilo in vitro irradiados. As diversas doses de radiação testadas em borbulhas causaram reduções significativas no parâmetro altura das brotações desenvolvidas das três variedades. No experimento de irradiação de segmentos de epicótilo in vitro apenas o tangor 'Murcott' e o limão 'Cravo' tiveram reduções significativas no número de brotações regeneradas por explante, em função do aumento da dose de mutagênico. Neste trabalho foi possível determinar que a radiossensibilidade de propágulos in vitro (segmentos de epicótilo) e in vivo (borbulhas) era variável em função da variedade; no caso de tangerina 'Fremont', os segmentos de epicótilo in vitro foram mais sensíveis e, em outros casos, a sensibilidade foi semelhante.

Studies have shown that the radiossensitivity in plants varies depending on the varieties and the propagules used in mutagenic treatment. The purpose of this study was to evaluate the radiossensitivity of two types of propagules (buds and in vitro segments of epicotyl) in 'Murcott' tangor, 'Thomas' and 'Fremont' mandarins and 'Rangpur' lime (only in vitro segments of epicotyl) and to compare the gamma-rays sensitivity among propagules and among varieties. The following doses were used: 0, 10, 20, 30, 40 and 50 Gy of gamma-rays. The parameters shoot mortality and shoot height, for experiment of bud irradiation, and number of regenerated shoots per explant and percentage of responsive explants, for experiment of peicotyl segments irradiation were evaluated after 60 days. The mutagenic doses tested in buds caused significant reduction in shoot height of all varieties. In the experiment of irradiation of in vitro segments of epicotyl, only 'Murcott' tangor and 'Rangpur' lime showed significant reduction in the number of regenerated shoots per explant, due to the increase of mutagen doses. Results indicate that radiossensitivity of in vitro (segments of epicotyl) and in vivo (buds) propagules is variable depending on the variety. Also, in some cases the in vitro propagules are more sensitive, to irradiation and in other cases, there is no differential sensibility.

Este trabalho teve como objetivo avaliar o conteúdo de antocianinas no suco e as características físicas e químicas dos frutos de oito variedades de laranjas sanguíneas e de laranja Valência, e, também, verificar os efeitos do armazenamento dos frutos a 10ºC, durante um período de até 60 dias, nos parâmetros avaliados. Os teores de antocianina foram determinados utilizando-se de um método espectrofotométrico, assim como dez características físicas e químicas dos frutos e dos sucos foram avaliadas antes e durante o armazenamento. Todas as variedades de laranja avaliadas apresentaram naturalmente baixos teores ou nenhum teor de antocianina no suco. O armazenamento durante um período de até 60 dias, em baixa temperatura, possibilitou acúmulo significativo de antocianina no suco, porém de maneira desigual nas variedades de laranjas sanguíneas testadas. As variedades Moro foram as que apresentaram suco contendo os maiores teores de antocianina no final do armazenamento. À exceção de duas variedades, Sanguinelli (Marrocos e Polidari), as demais variedades sanguíneas avaliadas podem ser consideradas como semelhantes entre si e adequadas ao consumo. O armazenamento dos frutos a 10ºC, durante o período máximo de 60 dias, alterou significativamente somente as variáveis: largura de frutos, teor de SS, acidez e o rendimento de suco.

The aim of this study was to assess the content of anthocyanins in the juice and the physical and chemical characteristics of the fruit of eight blood orange varieties and of orange Valencia, and also verify the effects of storage of fruits at 10ºC, for a period of up to 60 days, in the same parameters. The anthocyanin content was determined using a spectrofotometric method and ten physical and chemical characteristics of the fruits and juice were also evaluated before and during the storage. Under natural conditions all varieties showed fruits with low anthocyanin content in the juice. Cold storage during a period of up to 60 days enables a significant accumulation of anthocyanin in the juice, but in a different level in the evaluated blood orange varieties. Moro is the variety that showed the highest anthocyanin content in the end of the storage period. Except for two Sanguinelli varieties (Morocco and Polidari), the other varieties can be considered as similar as others and suitable for consumption. The storage of fruits to 10ºC during the maximum period of 60 days significantly modifies only fruit width, juice content in fruits, soluble solids content and acidity of the juice.

O objetivo deste trabalho foi obter plantas autotetraplóides de tangerina 'Ponkan', laranja 'Pêra-de-abril' e tangor 'Murcott', que serão usadas em cruzamentos com cultivares diplóides, visando à obtenção de indivíduos triplóides sem sementes. Utilizou-se o método de cultivo in vitro de segmentos de epicótilo em meio com colchicina (0,025, 0,05 e 0,1%), por diversos períodos (1, 2, 3, 7 e 14 dias), com subseqüente regeneração de brotações em meio sem a presença do alcalóide. As brotações foram microenxertadas in vitro e aclimatizadas em estufas. A determinação do nível de ploidia das plantas foi realizada por citometria de fluxo. A colchicina demonstrou ser tóxica aos explantes das três variedades, ocasionando redução significativa no número médio de brotações adventícias e aumento na porcentagem de explantes não-responsivos, em comparação com o controle. Entre as quatro plantas de laranja e uma de tangor obtidas, duas plantas de laranja e a de tangor, demonstraram ser autotetraplóides, apresentando folhas com maior espessura, arredondadas e coloração verde intensa. O método utilizado na duplicação cromossômica, com uso de colchicina, é eficiente em produzir plantas autotetraplóides de citros.

The objective of this work was to obtain autotetraploid plants of 'Murcott' tangor, 'Ponkan' mandarin and 'Pêra-de-abril' sweet orange to be used in crosses with diploid cultivars, aiming to produce triploid seedless hybrids. The methodology used was the in vitro culture of epicotyl segments in media containing different concentrations of colchicine (0.025, 0.05 and 0.1%), for several periods of time (1, 2, 3, 7 and 14 days), followed by the regeneration of adventitious shoots in culture media without the alkaloid. All shoots obtained were micro-grafted, acclimatized and transferred to a greenhouse. The evaluation of the ploidy level of the plants was performed by flow citometry technique. Colchicine was toxic to the explants of three varieties, and caused the reduction on the average number of shoots regenerated per explant as well as an increase in the percentage of non-responsive explants when comparing with the control plants. Among four plants of sweet orange obtained, two of them showed to be autotetraploid. The only plant of tangor obtained also showed to be autotetraploid. These plants presented thicker and roundisher leaves displaying deeper green color. The methodology used resulted efficient for obtaining tetraploid plants.

O objetivo deste trabalho foi avaliar, durante dois anos, a viabilidade de grãos de pólen e as correlações entre essa viabilidade e as características de frutos de plantas mutantes de laranjeira 'Pêra'. As plantas mutantes foram obtidas a partir de tratamento de borbulhas com raios-gama e selecionadas após três propagações vegetativas. A viabilidade dos grãos de pólen foi avaliada pelo método de coloração com carmin acético. Não houve diferenças entre anos na viabilidade de grãos de pólen e no número de sementes por fruto, indicando que estes caracteres não foram afetados pelas alterações ambientais anuais. Correlações positivas e significativas foram observadas entre a viabilidade média dos grãos de pólen e o número médio de sementes por fruto e, também, com o teor de sólidos solúveis totais do suco dos frutos. Uma das razões para a existência de mutantes com menor número de sementes por fruto é a baixa porcentagem de grãos de pólen viáveis.

The objective of this work was to evaluate the pollen grain viability of 'Pêra' sweet orange mutant plants and to estimate its correlation with fruit characteristics. Mutant plants were obtained from shoot treatment with gamma-rays and selected after three vegetative propagations. Pollen grain viability was evaluated using carmine-acetic staining method. No difference was found between years for pollen grain viability and for number of seeds per fruit, indicating that these characters were not affected by the yearly environmental alterations. Positive correlations were found between pollen grain viability and mean number of seeds per fruit, and with the total soluble solid content in juice. Therefore, one of the reasons for the smaller number of seeds per fruit in these mutants is the low percentage of viable pollen grain.

Este trabalho teve como objetivo a obtenção de híbridos somáticos entre o limão 'Cravo' (Citrus limonia Osbeck) e a tangerina 'Cleópatra' (Citrus reshni Hort.), para serem usados como porta-enxertos de citros. O limão 'Cravo' é atualmente o principal porta-enxerto comercial utilizado no Brasil, em virtude de suas boas qualidades agronômicas. Entretanto, é suscetível ao "declínio" dos citros, doença responsável pela eliminação anual de milhões de plantas cítricas no Brasil. A tangerina 'Cleópatra' é uma espécie bastante utilizada como porta-enxerto em outros países e tem sido descrita na literatura como tolerante ao "declínio". Protoplastos de suspensões celulares embriogênicas e protoplastos derivados de tecidos foliares foram utilizados para fusão com solução de PEG (50%) e posterior cultivo em agarose. A porcentagem de obtenção de células híbridas interespecíficas logo após a fusão, variou entre 5,1% e 6,8%. Foram obtidas mais de 500 plantas a partir de produtos de fusão cultivados em gotas de agarose. No total de 180 plantas avaliadas, 11 híbridos somáticos foram discriminados e confirmados, utilizando-se marcadores moleculares RAPD e isoenzimáticos (sistemas PO, IDH e PGI). Seis plantas foram aclimatizadas, plantadas no solo e estão sendo multiplicadas por estaquia para avaliação futura como porta-enxertos de citros.

The aim of this work was to obtain somatic hybrids between 'Rangpur' lime (Citrus limonia Osbeck) and 'Cleópatra' mandarin (Citrus reshni Hort.), to be used as a citrus rootstock. 'Rangpur' lime is the most important Brazilian citrus rootstock due to its higher horticultural performance. Nevertheless, this species is susceptible to blight disease, which is responsible for the death of millions of productive trees per year in Brazil. 'Cleópatra' mandarin has become an increasingly important rootstock in other countries and has been reported as being tolerant to citrus blight disease. Leaf protoplasts and protoplasts from embryogenic cell suspension cultures were fused using PEG solution (50%) and further cultivation in agarose. The frequency of heterokaryon formation was 5.1% to 6.8%. More than 500 plants were regenerated from these fusion experiments and 180 were tested. Among them, 11 plants were confirmed to be a somatic hybrid by means of molecular markers (RAPD) and isoenzymes markers (PO, IDH and PGI systems). Six plants were acclimatized, planted in the soil and have been multiplied by cuttings in order to evaluate their potential as citrus rootstocks.

A obtenção de cultivares de citros com pequeno número de sementes é importante quando o objetivo é a produção de frutas para o consumo in natura. O objetivo deste trabalho foi o de avaliar, por três anos (1997, 1998 e 1999), o número médio de sementes e 15 outras características agronômicas, de 127 mutantes putativos de laranja-'Pêra', selecionados após irradiação de borbulhas com raios-gama e 8 plantas selecionadas do controle não irradiado. Os mutantes foram divididos em 16 grupos baseados nos tipos de mutações observados e em cada grupo, como controle comum, foram incluídas plantas de laranja-'Pêra' comercial. Observou-se que 46 mutantes putativos e uma planta do controle não irradiado (PSC) apresentaram redução significativa no número de sementes por fruto, nos três anos consecutivos, sendo que 15 mutantes apresentaram frutos com média entre uma e duas sementes e 9 mutantes, frutos com média inferior a uma semente. Dentre estes 9 mutantes, os de número 27, 28 e 58, que apresentaram também alterações significativas no diâmetro de copa ou na altura de planta, além do 59 e 101, que não apresentaram alterações nas outras 15 características avaliadas, possuem um maior potencial para serem lançados como novos mutantes de laranja-'Pêra' com pequeno número de sementes.

Citrus varieties with low number of seeds are important for in natura fruit market. The objective of the present work was to evaluate, for three years (1997, 1998 and 1999), the average number of seeds per fruit and 15 other agronomic characteristics of 127 putative mutated clones of sweet orange 'Pêra', selected after gamma-irradiation of budwood and 8 non irradiated control clones. Mutants were divided in 16 groups based on the type of mutation observed 'Pêra' commercial control plants (PCC) were included. It was observed that 46 putative mutants and one non-irradiated plant (PSC) showed significant reduction in seed number per fruit. Fifteen mutants had 1 -- 2 seeds on an average and 9 mutants less than one seed per fruit. Among them, the mutants 27, 28 and 58 showed other significant changes in the tree crown diameter or plant height. The mutants 59 and 101 showed no significant differences in the other 15 characteristics evaluated, indicating that they have a good potential to be released as new sweet orange 'Pêra' mutants with low number of seeds.

O tratamento mutagênico de meristemas multicelulares em plantas de propagação vegetativa geralmente resulta na formação de plantas quiméricas. Os setores mutados podem ser ampliados e estabilizados por meio de podas repetidas. Este trabalho teve como objetivo estudar a influência de podas em distintas posições (da 1a até a 6a gema axilar) de um ramo M1V1, na freqüência de obtenção de mutantes de coloração de inflorescência e no tamanho dos setores mutados, em plantas de crisântemo irradiadas com raios-gama. Para tal, mudas enraizadas do cultivar ‘Ingrid’ (de coloração rosa escuro) foram tratadas com 20 Gy de raios-gama. Após 40 dias do plantio foram realizadas as podas. Avaliaram-se a freqüência de mutantes e o espectro de mutação para a coloração da inflorescência nos ramos M1V2. Não foram observados mutantes no controle. No total de plantas avaliadas, 22,1% apresentavam mutações na coloração das flores sendo que, do total de plantas mutantes, 1,8% eram mutantes periclinais (com coloração única) e as restantes (98,2%), apresentavam apenas alguns setores mutados. Não se observou diferença significativa quanto ao tamanho do setor mutado e ao número de mutantes nos diversos tratamentos (podas em diferentes gemas axilares). Com relação ao espectro de mutação, observaram-se mutantes com flores de coloração bronze, rosa claro, chá-rosa, variegado, amarelo, branco, vinho e creme. Um mutante de coloração vinho foi selecionado, multiplicado e avaliado em ensaio de produção. Este mutante denominado ‘Magali’ foi multiplicado para lançamento como novo cultivar.

Mutagenic treatment of multicellular meristems from vegetatively propagated plants generally results in the formation of chimeric plants. Mutated sectors can be increased and stabilized through the cutting-back method. The objective of the present research was to study the influence of the application of this method in the M1V2 population, originated from six different axillary buds from the M1V1 chrysanthemum branches. For this purpose, rooted plants of the cultivar ‘Ingrid’ (dark pink) were irradiated with 20 Gy of gamma-rays and the prune was carried out 40 days after planting. Frequency and spectrum of flower color mutants were evaluated. No mutants were observed in the control population. In the M1V2 population, 22.1% of the total plants were mutants (white color, dark bronze, pale pink, yellow, wine, variegated and cream). Among them, 1.8% were periclinal chimeras (with only one different color from the original) and the others showed mutated sectors. No differences were observed in mutation frequency and size of mutated sector among six M1V2 populations. The wine colored mutant was selected, multiplied and evaluated in a yield trial. This mutant named ‘Magali’ was multiplied and was released as a new cultivar.

Este trabalho descreve uma metodologia para a regeneração de plantas de tangerina 'Cleópatra' e limão 'Cravo', a partir do cultivo de protoplastos de suspensão celular. Para tal, calos nucelares foram induzidos em meio contendo BAP e cultivados em meio sem reguladores de crescimento. Protoplastos foram isolados de suspensões celulares e cultivados em gotas de agarose, com densidade de 2 X 105 protoplastos.ml-1. O meio MT, contendo ácido giberélico e água de coco, foi eficiente na germinação de embriões somáticos. Os métodos de aclimatação de plantas testados apresentaram baixa eficiência. Como resultado final, 17 plantas adaptadas de tangerina e 8 de limão foram obtidas.

The present research describes the regeneration of 'Cleópatra' mandarin and 'Rangpur' lime plants from cell suspension protoplasts. Nucelar calli were induced on a medium containing BAP and maintained on growth regulator free medium. Protoplasts were isolated from embryogenic suspension and plated at a concentration of 2 X 105 protoplasts.ml-1, on agarose droplets. The MT medium with gibberellic acid and coconut water was efficient to stimulate somatic embryo conversion. Rooted plants acclimation had low efficiency. Seventeen mandarin plants and eight lime plants were obtained.