ABSTRACT The present study explored the predictive values of milk leukocyte differentials (MLD) as a basis for improving the diagnosis of intramammary infections (IMIs) and subclinical mastitis. Quarter milk samples were collected for bacteriological analysis, quarter somatic cell count (qSCC), and MLD. The MLD were assessed using the cytospin technique, direct microscopic smears, and flow cytometry. The predictive values of each single leukocyte population and useful potential indices that could better reflect immune complexity were also calculated. Changes in the percentage of any leukocyte alone failed to substantially improve the predictive value of qSCC in diagnosing IMIs. Although certain parameters increased the area under the receiver operating characteristic curve (ROC curve) as a result of increased specificity values, a slight reduction in sensitivity was observed. The so-called CD8 complex was a unique parameter which improved both the sensitivity (78.79 %) and the specificity (80.77 %) in IMI diagnosis, resulting in the highest area under the ROC curve (0.87). To diagnose subclinical mastitis, the percentage of macrophages and the sum of the percentage PMNLs and T CD8+ cells divided by the percentage of macrophages showed the highest predictive values (sensitivity = 79.63, specificity = 73.68, and area under the ROC curve = 0.83) in the differentiation of the inflammatory condition status of cows. In conclusion, this study provides further insights into using T CD8+ lymphocytes in diagnosing bovine IMIs, combined with PMNLs and macrophages. The antidromic trend of macrophages vs. PMNLs and T CD8+ lymphocytes due to the increasing qSCCs was crucial to differentiating quarters under both inflammatory and non-inflammatory conditions. (MLD IMIs (IMIs mastitis analysis qSCC, , (qSCC) technique smears cytometry calculated observed socalled so called CD 78.79 7879 78 79 (78.7 % 80.77 8077 80 77 (80.7 0.87. 087 0.87 . 0 87 (0.87) 7963 63 79.63 7368 73 68 73.68 0.83 083 83 cows conclusion vs noninflammatory non conditions (qSCC 78.7 787 7 (78. 80.7 807 8 (80. 08 0.8 (0.87 796 6 79.6 736 73.6 78. (78 80. (80 0. (0.8 79. 73. (7 (8 (0. ( (0

Resumo A ocorrência de células viáveis em secreções das glândulas mamárias atestam a funcionalidade do sistema de defesa. Este fato, juntamente com o medicamento aplicado, é fundamental para a cura do úbere. O objetivo deste trabalho foi avaliar a viabilidade in vitro de leucócitos do leite desafiados com quatro drogas anti-mastite intramamárias. Foram coletadas oito amostras de leite de vaca negativas no exame bacteriológico. As suspensões de células foram submetidas à avaliação da viabilidade pelo método de exclusão do Azul de Trypan pré-incubação e pós-incubação com os medicamentos. A taxa média de viabilidade pré-incubação (± desvio-padrão) das células do leite foi 50,17% (± 6,50). As taxas médias de viabilidade pós-incubação (± desvio-padrão) de grupo controle (desprovido de qualquer droga), Drogas 1 (cefalônio anidro), 2 (gentamicina), 3 (benzilpenicilina procaína associada a diidroestreptomicina naficilina) e 4 (cloxacilina benzatina) foram, respectivamente, 31,36% (± 3,61); 26.23% (± 4,49); 7,82% (± 2,33); 3,10% (± 0,94); e 30,33% (± 4,14). Os maiores prejuízos foram encontrados quando as células do leite foram desafiadas com as drogas 2 e 3. Embora a atividade antimicrobiana das drogas testadas não tenha sido avaliada, e um único aspecto da função das células tenha sido testado, concluiu-se que os tratamentos 2 e 3 poderiam prejudicar a funcionalidade de leucócitos do leite e fornecer uma resposta imunológica ineficaz, e uma resposta eficaz é indispensável para controlar as infecções mamárias.

Abstract The occurrence of viable cells in mammary gland secretions attests the functionality of the defense system. This fact, along with applied medicine, is fundamental for the healing udder. The objective of this study was to evaluate the in vitro viability of milk leukocytes challenged with four intramammary anti-mastitis drugs. We collected eight cow milk samples that were negative after a bacteriological examination. Cell suspensions were submitted to an evaluation of viability through Trypan Blue exclusion before and after incubation with the drugs. Mean pre-incubation viability rate (± standard deviation) of milk cells was 50.17% (± 6.50). Mean post-incubation viability rates (± standard deviation) of control group (devoid of any drug), Drug 1 (anhydrous cephalonium), Drug 2 (gentamicin), Drug 3 (procaine benzylpenicillin associated with dihydrostreptomycin nafcillin), and Drug 4 (benzathine cloxacillin) were, respectively, 31.36% (± 3.61); 26.23% (± 4.49); 7.82% (± 2.33); 3.10% (± 0.94); and 30.33% (± 4.14). The uppermost impairments were found when milk cells were challenged with Drug 2 and Drug 3. Although antimicrobial activity of tested drugs was not appraised, and a single aspect of cell function was tested, we concluded that treatments 2 and 3 could impair the functionality of milk leukocytes and could provide an ineffective immunological response, and an effective response is essential to control mammary infections.

A identificação do impacto que certas formas de estresse causam ao bem estar animal e equilíbrio orgânico, representa um desafio á adoção de boas práticas de criação. Assim, a presente pesquisa verificou o impacto de um desafio doloroso rotineiro dos bovinos na imunidade pulmonar e sistêmica. Avaliou-se hemograma e cortisol, em quatro momentos, sendo M1, M6, M7 e M8 (respectivamente sete dias antes e um, três e oito dias depois do desafio doloroso) e citologia broncolaveolar, obtida por broncoscopia, nos momentos M1, M6 e M8. Houve uma redução dos valores do eritrograma no primeiro dia após o desafio, compatível com anaplasmose e agravada pela perda de sangue durante a cirurgia e um influxo de leucócitos para a região pulmonar. Oito dias após o desafio, evidenciou-se aumento de cortisol, gerando uma leucocitose por neutrofilia e monocitose no sangue com provável redução de quimiotaxia para o pulmão, tornando o trato respiratório potencialmente mais susceptível a infecções, sugerindo que esta prática de manejo, mesmo acompanhado de protocolo analgésico, pode ser considerada um fator de risco a penumonias afetando o bem estar animal.

The recognition of the impact of certains forms of stress in the animal well being and organic equilibrium, represents a challenge to the adoption of good practices. Thus, this research verified the impact of a painful rotine of the cattle husbandry can cause on pulmonary and systemic immunity. Was evaluated hemogram and cortisol, in four moments, being M1, M6, M7 e M8 (respectively seven days before and one, three and eight days after the painful challenge) and bronchoalveolar cytology,obtained by bronchoscopy, in the moments of M1, M6 e M8. There was a reduction of the erythrogram values in the first day after the challenge, compatible with the anaplasmosis and aggravated by the blood loss during the surgery and an influx of leukocytes to the pulmonary region. Eight days after the challenge, became evident the cortisol increase, enerating leukocytosis by neutrophilia and monocytosis in the blood with a probable reduction of chemotaxis to the lungs, turning the respiratory tract potentially more susceptible to infections, suggesting that this practice, even accompanied by analgesic protocol, increases the risk of pneumonia, affecting the animal well-being.

O presente trabalho teve como objetivo investigar a influência do estágio da lactação sobre as características físico-químicas e a celularidade do leite em ovelhas da raça Santa Inês. Desse modo, 143 amostras de leite negativas no exame bacteriológico e sem alterações na prova da caneca de fundo escuro provenientes de 33 ovelhas Santa Inês foram utilizadas para determinar a contagem automática e microscópica de células somáticas, os teores de extrato seco total, gordura, lactose e proteína. Os resultados do presente estudo apontaram para aumento da celularidade do leite e dos teores de gordura e proteína e redução do teor de lactose no final da lactação, embora não tenham sido observadas alterações no extrato seco total no leite desses animais durante a lactação. O presente estudo apontou ainda para correlação significativa entre a contagem automática e a microscópica de células somáticas (r = 0,80), a porcentagem de leucócitos mononucleares (r = -0,45), a porcentagem de leucócitos polimorfonucleares (r = 0,45), os teores de lactose (r = - 0,44), proteína (r = 0,37) e gordura (r = 0,30). No entanto, não se observou correlação significativa entre a CCS automática e o teor de extrato seco total (r = 0,007).

The purpose of the present trial was to investigate the influence of lactation stage on milk cellularity and physicochemical characteristics. Thus, 143 milk samples from 33 Santa Ines ewes negative in the bacteriological examination and without any alteration in the strip cup test were used to determine the automatic and microscopic somatic cell count (SCC), and the fat, lactose, protein and total solids content. The results of the present study showed an augment in the SCC and in the fat and protein content, besides a reduction in lactose content at the last lactation stage. Otherwise, no alteration was observed in the total solids content during the lactation period. This study pointed out to a significant correlation between the automatic SCC and the microscopic SCC (r = 0.80), percentage of polymorphonuclear leukocytes (r = 0.45), percentage of mononuclear leukocytes (r = -0.45), lactose (r = - 0.44), protein (r = 0.37) and fat (r = 0.30) content. Nevertheless, significant correlation between the automatic SCC and the total solids content was not observed.

O presente estudo objetivou avaliar a correlação entre a contagem de células somáticas (CCS) automática e a CCS microscópica direta por diferentes colorações no leite de ovelhas da raça Santa Inês. Avaliou-se a CCS automática por citometria de fluxo, e a CCS microscópica foi realizada por esfregaços lácteos corados com as colorações de Broadhurst-Paley (BP), Hematoxilina-eosina (HE) e Rosenfeld. Os valores logarítmicos da CCS microscópica pela coloração de BP e Rosenfeld foram superiores aos valores logarítmicos da CCS automática e a CCS microscópica pela coloração de HE (P<0,0001), e os valores logarítmicos da CCS pela coloração de HE foram inferiores aos valores logarítmicos da CCS automática (P<0,0001). As correlações entre os valores logarítmicos da CCS automática e os valores logarítmicos das CCS microscópica pelas colorações de HE, BP e Rosenfeld foram de 0,774, 0,803 e 0,859 (P<0,0001), respectivamente. Os valores logarítmicos reais da CCS microscópica e aqueles estimados pela CCS automática, considerando as equações das curvas por regressão quadrática, não foram estatisticamente diferentes pelas colorações de HE (P=0,90), BP (P=0,09) e Rosenfeld (P=0,23). Conclui-se que a metodologia influencia a CCS no leite de ovinos e propõe-se a utilização da equação da curva para estimação da CCS automática a partir dos valores da CCS microscópica, quando colorações não específicas para o ácido desoxirribonucleico são aplicadas para avaliação da celularidade do leite no diagnóstico da mastite em ovinos.

The present study was designed to assess the correlation among the automatic somatic cell count and the microscopic somatic cell count using the Broadhurst-Paley (BP), Hematoxilin-eosin (HE) and Rosenfeld dyes. The milk smears were stained with BP, HE and Rosenfeld and the automatic cell count was performed by flow cytometry. The mean logarithmic microscopic SCC by BP and Rosenfeld was higher than the values from automatic SCC and microscopic SCC by HE (P<0.0001). Indeed, the mean values from microscopic SCC using the HE was lower than the automatic cell count (P<0.0001). The correlation among the automatic cell count and the microscopic SCC using the HE, BP and Rosenfeld dyes were 0.774, 0.803 e 0.859 (P<0.0001), respectively. The automatic SCC values and the estimated automatic SCC applying the quadratic equation using the results of the microscopic SCC using the HE (P=0.90), BP (P=0.09) and Rosenfeld (P=0.23) dyes were not different. Thus, it can be concluded that the SCC was influenced by the methodology applied, and nonspecific stains used for microscopic SCC can be used to assess udder health in ewes if an equation is applied to estimate automatic SCC.