RESUMEN La torsión anexial es secundaria a quistes ováricos generalmente benignos. La cirugía habitual es la salpingooferectomía. Sin embargo, para mantener la función ovárica se recomienda una cirugía mínimamente invasiva con detorsión y conservación del ovario independientemente de su apariencia. Presentamos el caso de una mujer de 19 años con diagnóstico de quiste a pedículo torcido, a quien se realizó detorsión laparoscópica del pedículo torcido y exéresis del quiste paratubárico con preservación de ovario, a pesar del aspecto isquémico. La paciente presentó evolución favorable y participó en un programa de ovodonación, obteniéndose ovocitos del ovario antes afectado en cantidad y calidad similar al ovario no afectado. La detorsión ovárica laparoscópica y conservación del ovario comprometido independientemente de su apariencia es un procedimiento seguro y eficaz para preservar la fertilidad.

The objective of this study was to evaluate the effect of α-lipoic acid on in vitro maturation and of l-arginine on in vitro fertilization of oocytes for in vitro production of sheep embryos. Thus, the ovaries were collected at a local slaughterhouse and the oocytes collected by the method of follicular aspiration with a vacuum pump were divided equally into five maturation groups: CON, without addition of antioxidant; CIS group, with cysteamine as an antioxidant source; and the groups ALA5, ALA10 and ALA20, containing concentrations of 5.0, 10.0 and 20.0 µM of ALA. After 24h of maturation, the oocytes were evaluated concerning occurrence and degrees of expansion of the cumulus cells. The oocytes of the best IVM group were destinated for in vitro fertilization (IVF). The selected and capacitated sperm were included in five groups: CON, without addition of capacitator agent; HEP group, with heparin as a capacitator source; and ARG5, ARG10 and ARG20 groups, where IVF occurred in the same HEP medium, replacing heparin with 5 mM, 10 mM and 20 mM L-arginine, respectively. The results were expressed as a percentage and the variables of cumulus cell expansion and number of cleaved structures were compared using the chi-square test in Epi Info software (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Results were considered significant when P < 0.05. Regarding the expansion of cumulus cells all groups showed 100% expansion, on the total expansion category of COCs it was observed that ALA5 and ALA20 groups did not present the same proportion of COCs with total expansion as CIS group. After in vitro fertilization (IVF), there were no statistical differences in relation to the cleaved structures between CON, HEP, ARG5 and ARG10 groups. However, it was also observed that the use of 20.0 mM of L-arginine reduced the percentage of cleaved structures when compared to the ARG10 group (P<0.05).

El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del ácido α-lipoico en la maduración in vitro y la l-arginina en la fecundación in vitro de ovocitos para la producción in vitro de embriones ovinos. Así, se recolectaron ovocitos de ovarios obtenidos de mataderos mediante el método de aspiración folicular con bomba de vacío, los cuales se dividieron en cinco grupos de maduración: CON, sin adición de antioxidante, grupo CIS, con cisteamina como fuente antioxidante y los grupos ALA5, ALA10 y ALA20, que contienen concentraciones de 5, 10 y 20 µM de ácido α-lipoico. Después de 24 h de maduración, se evaluó la aparición y el grado de expansión de las células del cúmulo en los ovocitos. Los ovocitos del mejor grupo MIV fueron destinados a fecundación in vitro (FIV), siendo por tanto incluidos en gotas con medio de fecundación in vitro, junto con los espermatozoides seleccionados y capacitados, resultando en los siguientes grupos: CON, sin adición de agente capacitador; grupo HEP, con heparina como fuente de condensadores; y los grupos ARG5, ARG10 y ARG20, donde se produjo la FIV en el mismo medio HEP, reemplazando la heparina por L-arginina 5, 10 y 20 mM, respectivamente. Los resultados se expresaron en porcentajes y las variables expansión celular del cúmulo y número de estructuras escindidas se compararon mediante la prueba chicuadrado del software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Los resultados se consideraron significativos cuando P lt; 0,05. En cuanto a la expansión de las células del cúmulo, todos los grupos mostraron 100% de expansión. Evaluando los grados de expansión de las células del cúmulo, en la categoría de expansión total, se observó que los grupos ALA5 y ALA20 presentaron la misma proporción de CCO con expansión total que el grupo CIS (Plt;0.05), sin embargo se observa que hay una tendencia a la baja de las estructuras con plena expansión cuando se utilizan antioxidantes. En cuanto a las estructuras escindidas, fue posible identificar que no hubo diferencias estadísticas en relación a las estructuras escindidas, entre los grupos CON, HEP, ARG5 y ARG10. Sin embargo, también se observó que el uso de Larginina 20 mM redujo el porcentaje de estructuras escindidas en comparación con el grupo ARG10 (Plt;0.05).

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do ácido α-lipóico na maturação in vitro e da l-arginina na fertilização in vitro de oócitos para produção in vitro de embriões ovinos. Desta forma, foram realizadas colheitas de oócitos oriundos de ovários obtidos em abatedouro através do método de aspiração folicular com bomba de vácuo, que foram divididos em cinco grupos de maturação: CON, sem adição de antioxidante, grupo CIS, com cisteamina como fonte antioxidante e os grupos ALA5, ALA10 e ALA20, contendo as concentrações de 5, 10, e 20 µM de ácido α-lipóico. Após 24h de maturação, os oócitos foram avaliados quanto à ocorrência e grau de expansão das células do cumulus. Os oócitos do melhor grupo MIV foram destinados à fertilização in vitro (FIV), sendo, portanto, incluídos em gotas com meio de fertilização in vitro, juntamente com os espermatozoides selecionados e capacitados, resultando nos seguintes grupos: CON, sem adição de capacitador agente; grupo HEP, com heparina como fonte de capacitor; e grupos ARG5, ARG10 e ARG20, onde a FIV ocorreu no mesmo meio HEP, substituindo a heparina por L-arginina 5, 10 e 20 mM, respectivamente. Os resultados foram expressos em porcentagem e as variáveis de expansão das células do cumulus e número de estruturas clivadas foram comparadas por meio do teste qui-quadrado do software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EUA, 2021). Os resultados foram considerados significativos quando P lt; 0,05. Em relação à expansão das células do cumulus, todos os grupos apresentaram 100% de expansão. Avaliando os graus de expansão das células do cumulus, na categoria de expansão total observou-se que os grupos ALA5 e ALA20 apresentaram a mesma proporção de CCO com expansão total que o grupo CIS (Plt;0,05), porém se observa que há uma tendência de queda de estruturas com expansão total quando os antioxidantes foram utilizados. Em relação às estruturas clivadas, foi possível identificar que não houve diferenças estatísticas em relação às estruturas clivadas, entre os grupos CON, HEP, ARG5 e ARG10. Contudo, também foi observado que o uso de 20 mM de L-arginina reduziu o percentual de estruturas clivadas quando comparado ao grupo ARG10 (Plt;0,05).

Resumen Plagioscion magdalenaees el recurso íctico más importante del embalse El Guájaro, en el norte de Colombia, y para sus pobladores ribereños, fundamental para las pesquerías de subsistencia de la región, lo que ha llevado a su sobreexplotación. En este artículo se describen los aspectos reproductivos deP. magdalenae,en este embalse. Se realizaron diez muestreos de recolección mensuales, entre abril de 2018 y enero de 2019, con el fin de abarcar cada momento del pulso de inundación. Se calcularon la proporción sexual, relación gonadosomática (RGS), fecundidad, diámetro de ovocitos y talla media de madurez sexual (L50). Se analizaron 207 ejemplares, y se establecieron siete intervalos de tallas; 126 individuos fueron machos y 81 hembras, con una proporción sexual de 1:1.6 (hembra-macho). La RGS indicó que este pez tiene varios picos reproductivos, los principales en julio y septiembre. La fecundidad absoluta fue 1909 ovocitos para aguas bajando, 1590 para aguas bajas, 2435 para aguas subiendo y 2132 para aguas altas, con un diámetro promedio de ovocito de 0.29 mm. Los machos maduraron primero que las hembras y la L50estuvo por debajo de la talla media de captura (30 cm), lo cual refleja que la normativa legal está bien determinada, pero no hay regulación para su pesca.

Abstract Plagioscion magdalenaeis the most important fish resource of the El Guájaro reservoir, Colombia, and its riparian inhabitants, fundamental for subsistence fisheries in the region, which has led to its overexploitation. This paper describes and evaluates the reproductive aspects ofP. magdalenaein this reservoir. Ten monthly collection samplings were made between April 2018 and January 2019, in order to cover each moment of the flood pulse. We calculated sex ratio, gonadosomatic ratio (RGS), fecundity, oocyte diameter and minimum and mean size at sexual maturity (L50). We analyzed 207 specimens and established seven size intervals; 126 individuals were males and 81 were females, with an overall sex ratio 1:1.6 (female-male). The RGS indicated that this fish has several reproductive peaks, the main ones being in July and September. Absolute fecundity was 1909 oocytes for falling water, 1590 for low water, 2435 for rising water and 2132 for high water; with an average oocyte diameter of 0.29 mm. Males matured earlier than females and their mean size at sexual maturity was below the mean catch size (30 cm), reflecting that legal regulations are well stipulated, but there is no strict control for fishing.

RESUMEN Triatoma infestans y Triatoma platensis son especies interfértiles que en ocasiones comparten ecotopos y producen híbridos fértiles naturales. El cruzamiento interespecífico podría permitir la producción de genotipos híbridos capaces de colonizar nuevos hábitats. Por ello, los estudios de aspectos reproductivos sobre estos organismos son de gran importancia. En este sentido la oogénesis, proceso que implica el desarrollo del ovocito y permite la formación de huevos viables, es un aspecto relevante. En este estudio se caracterizaron aspectos histológicos enfocados en el desarrollo folicular de híbridos experimentales. Para ello, se extrajeron los ovarios de 35 hembras híbrido, se embebieron en parafina y colorearon con hematoxilina-eosina. Se caracterizó el desarrollo del epitelio folicular y del ovocito en las etapas de previtelogénesis y vitelogénesis, encontrándose que la oogénesis de las hembras híbrido se encuentra bien definida produciendo huevos viables y que los cambios ocurridos a nivel histológico se asemejan a los registrados en T. infestans.

ABSTRACT Triatoma infestans and Triatoma platensis are interfertile species that frequently share ecotopes and produce natural fertile hybrids. Interspecific crossing allows the production of more suitable hybrid genotypes capable of colonizing new habitats. Therefore, studies of reproductive aspects in hybrids are of great importance. In this sense, oogenesis, a process that involves the development of the oocyte and allows the formation of viable eggs, is a relevant aspect. In this study, histological aspects focused on the follicular development of experimental hybrids were characterized. To do this, the ovaries of35 hybrid females were removed, paraffin-embedded and stained with hematoxylin-eosin. The development of the follicular epithelium and the oocyte in the stages of previtellogenesis and vitellogenesis were characterized, finding that the oogenesis of the hybrid females is well defined producing viable eggs and that the changes occurred at the histological level resemble those registered in T. infestans.

Resumen: El objetivo de la siguiente revisión es discutir el efecto sobre la fertilidad de algunos factores clásicamente reconocidos como relevantes para el éxito de la inseminación artificial (IA) con semen congelado equino: número total de espermatozoides por IA (dosis), número de inseminaciones por ciclo (frecuencia de IA), momento óptimo de la IA relativo a la ovulación, sitio de inseminación y técnica de IA. La IA con semen congelado ha ganado popularidad entre los propietarios y veterinarios que trabajan con equinos. La dosis mínima recomendada para la IA convencional en el cuerpo del útero con semen congelado ha sido establecida en 250 x 106 de espermatozoides con motilidad progresiva. Sin embargo, la dosis mínima requerida para mantener buenos índices de preñez parece depender de la fertilidad intrínseca de cada padrillo, así como del sitio de inseminación. La inseminación profunda en la punta del cuerno es un procedimiento de rutina entre los veterinarios de campo cuando se utiliza dosis de inseminación baja. Por otro lado, el número de inseminaciones por ciclo parecería no afectar los índices de preñez siempre y cuando la última inseminación sea realizada en la ventana de tiempo entre 12 h antes o 12 h después de la ovulación. El ovocito equino permanece viable y con plena capacidad de ser fertilizado por 12 a 15 h pos-ovulación, no habiendo un aumento en las tasas de pérdidas embrionarias hasta pasadas las 12 horas pos-ovulación. Por lo que en inseminaciones pos-ovulatorias y utilizando un agente inductor de la ovulación, no habría ninguna ventaja en revisar las yeguas en intervalos menores a 12 h, ya que no parecería mejorar los índices de preñez ni las tasas de pérdida embrionaria. En conclusión, la técnica de IA será determinada por el número y costo de las dosis de semen disponibles, estatus de la yegua a inseminar y fertilidad del semen congelado.

Abstract: The aim of the following review is to discuss the effect on fertility of some factors classically recognized as relevant to the success of artificial insemination (AI) with frozen equine semen: total sperm numbers per AI (dose), number of inseminations per cycle (AI frequency), optimal timing of AI relative to ovulation, AI site and AI techniques. The frozen semen AI is widely used in the equine industry. The minimum recommended dose of spermatozoa has been established in 250 x 106 progressive motile sperm for uterine body insemination. However, the minimum dose required for maintaining the highest fertility for each stallion may differ greatly and therefore is determined by individual variation of intrinsic stallion fertility as well as with the insemination site. Deep intra-uterine insemination is commonly accepted as a routine procedure for AI with low doses. The number of AIs per cycles does not seem to be a factor affecting the final outcome of pregnancy as long as the last AI is performed within 12 h before and 12 h after the ovulation. Contrary to the extended practitioners belief, the mare’s oocyte could remain viable and fully capable of fertilization for 12-15 h, and the embryo loss rate after post-ovulatory insemination does not begin to increase until 12 h post-ovulation. Therefore, in a postovulatory insemination regime and using an ovulation inducing agent, examination of mares at intervals of any less than 12 h does not improve pregnancy or embryo loss rates. In conclusion, the number and cost of available semen doses, status of the mare to be inseminated and fertility of the frozen semen will determine the AI technique.

Resumen La cochinilla Dactylopius coccus es un insecto de gran importancia industrial para la extracción del colorante rojo ácido carmínico. Se determinó el efecto de la cópula sobre la maduración del ovario. Para ello, se emplearon hembras copuladas y hembras vírgenes de tres meses de edad, contados desde la infestación de los cladodios de Opuntia ficus indica (en Montecillo, México). Se evaluaron las características morfofisiológicas del grado de madurez de sus ovariolas. La cópula no fue necesaria para que diera inicio la maduración de las ovariolas, ya que en las hembras vírgenes un bajo porcentaje de sus ovocitos lograron culminar adecuadamente la vitelogénesis y la coriogénesis; sin embargo, la cópula promovió ambos procesos, ya que aumentó notablemente la proporción de los ovocitos maduros que se producirán en las hembras copuladas. Del mismo modo, la falta de cópula en D. coccus fue un factor que indujo la degeneración de las ovariolas y, en consecuencia, la reabsorción de sus ovocitos.

Abstract The cochineal Dactylopius coccus is an industrially-important insect used to extract carminic acid (a red dye). The effect of mating on the maturation of its ovaries was determined. In order to do this, three-month old mated and virgin females were used which were counted from Opuntia ficus indica cladode infestation (in Montecillo, Mexico). The morphophysiological characteristics of the degree of maturation of their ovarioles were evaluated. Mating was not needed to start the maturation of the ovarioles, because in virgin females, a low percentage of oocytes successfully complete vitellogenesis and choriogenesis; however, mating promotes both processes, since the proportion of mature oocytes produced in mated females noticeably increases. Similarly, lack of mating in D. coccus was a factor that induced degeneration of the ovarioles, and consequently, the resorption of their oocytes.

SUMMARY: Spondylus limbatus is a species under special protection in Mexico, of which there is little or no information in the literature of biological, histological or ultrastructural studies of the ovary. The objective of this research was to characterize the ultrastructural morphology of mature and degenerating female gametes. The female gonad of S. limbatus in mature state presented post-vitellogenic oocytes 60-70 µm in diameter, which have characteristics of metabolically active and highly synthesizing cells. The cytoplasmic membrane has specializations designed to increase the absorption surface of the cell, the microvilli; the cytoplasm presents numerous membranous systems related to synthesis of reserve and secretion material as well as the highly lobed nuclear organization pattern; a large surface that ensures core-cytoplasm exchange, is structurally incorporated into the vitellogenesis process. Finally, ultrastructural changes resulting from the lysis of the oocytes are described: collapse of nuclear and cytoplasmic membranes, and the presence of macrophage hemocytic cells.

RESUMEN: Spondylus limbatus es una especie bajo protección especial en México, de la que existe poca información biológica y nada sobre estudios histológicos o de ultraestructura del ovario. El objetivo de esta investigación fue caracterizar la morfología ultraestructural de los gametos femeninos maduros y en degeneración. La gónada femenina de S. limbatus en estado de madurez presentó ovocitos postvitelogénicos de 60-70 µm de diámetro, que presentan el aspecto característico de células metabólicamente activas y altamente sintetizadoras. La membrana citoplasmática posee especializaciones destinadas a aumentar la superficie de absorción de la célula, las microvellosidades; el citoplasma presenta numerosos sistemas membranosos relacionados con la síntesis de material de reserva y secreción; y el patrón de organización nuclear altamente lobulado, y por consiguiente con una gran superficie que asegura el intercambio núcleo-citoplasma, se incorpora de forma estructural al proceso de vitelogénesis. Finalmente, se describen los cambios ultraestructurales resultantes de la lisis de los ovocitos: colapso de las membranas nuclear y citoplásmica, y presencia de células hemocíticas macrófagas.

Resumen Antecedentes: El actual manejo reproductivo en poblaciones de bovinos de élite incluye la utilización de tecnologías de reproducción asistida (ARTs) con el fin de obtener mayor ganancia genética. Sin embargo, el uso inadecuado de las ART puede llevar a la pérdida de diversidad genética en los descendientes. Objetivo: Evaluar la diversidad genética en poblaciones de vacas de élite utilizadas en la producción comercial de embriones bovinos in vitro. Métodos: Utilizando abordajes de la genética y ecología de poblaciones basados en marcadores microsatélites, evaluamos la diversidad genética entre y dentro de poblaciones de vacas participantes de programas comerciales de producción de embriones in vitro en Brasil. Resultados: La endogamia dentro de las poblaciones varió de cero a 9,1%, mientras que la heterocigosidad entre poblaciones (FST) fue <0,05 en las diferentes interacciones de la población. El AMOVA mostró variación del 1% entre poblaciones, 8% entre individuos y 91% dentro de individuos. El método de reducción de dimensionalidad utilizado indicó una falta de estructura en las poblaciones analizadas, identificando dos grupos principales en las tres poblaciones. Conclusiones: Se evidenció una baja diversidad genética entre las poblaciones de vacas asociadas a programas comerciales de producción de embriones in vitro en Brasil. Se evidenciaron niveles variables de endogamia entre las poblaciones. Abordajes de la genética poblacional, así como de diversidad ecológica pueden ser implementados para estimar de manera más amplia la diversidad genética en poblaciones animales de interés pecuario.

Abstract Background: Current reproductive management of bovine elite populations involves the use of assisted reproductive technologies (ARTs), aiming to obtain the greatest genetic gain. However, inadequate use of ARTs may lead to loss of genetic diversity in the offspring. Objective: To assess the genetic diversity in elite female cattle populations used in commercial in vitro embryo production. Methods: Using genetic and ecological approaches for the study of populations based on microsatellite markers, we assessed the genetic diversity between and within populations of cows used in commercial in vitro embryo production programs in Brazil. Results: Endogamy within populations varied from zero to 9.1%, while heterozygosity between populations (FST) was <0.05 in the different population interactions. AMOVA showed 1% variation between populations, 8% between individuals and 91% within individuals. The dimensionality reduction method utilized indicated a lack of structure in the populations analyzed, identifying two main clusters in the three populations. Conclusions: Low genetic diversity between cow populations associated with commercial programs of in vitro embryo production in Brazil was evidenced. Variable levels of endogamy within the populations were observed. Approaches of population genetics as well as ecological diversity can be implemented to more thoroughly estimate genetic diversity in livestock populations.

Resumo Antecedentes: O atual manejo reprodutivo das populações de elite em bovinos envolve o uso de tecnologias de reprodução assistida (ARTs), visando obter o maior ganho genético. No entanto, o uso inadequado de ARTs pode levar à perda de diversidade genética na prole. Objetivo: Avaliar a diversidade genética em populações de vacas de elite utilizadas na produção comercial de embriões bovinos in vitro. Métodos: Utilizando abordagens da genética e ecologia de populações baseadas em marcadores microssatélites, foi avaliada a diversidade genética entre e dentro das populações de vacas participantes de programas comercias de produção in vitro de embriões. Resultados: A endogamia dentro das populações variou de zero a 9,1%, enquanto a heterozigosidade entre populações (FST) foi <0,05 nas diferentes interações populacionais. AMOVA mostrou variação de 1% entre populações, 8% entre indivíduos e 91% dentro de indivíduos. O método de redução de dimensionalidade utilizado indicou uma falta de estrutura nas populações analisadas, identificando dois clusters principais nas três populações. Conclusões: Baixa diversidade genética entre populações de vacas associadas a programas de produção in vitro de embriões foi evidenciada. Níveis de endogamia variáveis dentro das populações foram observados. Abordagens da genética populacional assim como de diversidade ecológica podem ser implementadas na tentativa de estimar de maneira mais abrangente a diversidade genética em populações animais de interesse pecuário.

Intracytoplasmic sperm injection (ICSI) is an in vitro fertilization technique in which a sperm is injected through a micropipette to achieve fertilization. This technique, widely used in assisted reproduction, causes a moderate deformation of the oocyte membrane, which becomes harmful in some cases. The Piezo-ICSI technique minimizes this deformation because the Piezo device generates submicron vibration in the ICSI micropipette that crosses the zona pellucida without generating any resistance. There is no prior evidence of a pregnancy obtained through this technique in Latin America. Therefore, we present this report as the first case of a 16-week clinical pregnancy with present heartbeat from an embryo fertilized using the Piezo-ICSI technique.

La inyección intracitoplasmática del espermatozoide al ovulo (ICSI) es una técnica de fertilización in vitro en la que un espermatozoide es inyectado al ovocito utilizando una micropipeta biselada, para conseguir la fecundación. Esta técnica, ampliamente usada en reproducción asistida, genera una deformación moderada de la membrana del ovocito, llegando a ser, en algunos casos, nocivo para este. Utilizando la técnica Piezo-ICSI, esta deformación se minimiza, ya que el dispositivo Piezo genera vibración submicrónica en la micropipeta de ICSI, y atraviesa la zona pelúcida sin generar resistencia alguna. No existe evidencia que esta técnica haya logrado un embarazo en América Latina, por lo tanto, se presenta el siguiente reporte como el primer caso de embarazo clínico con actividad cardiaca de 16 semanas de gestación proveniente de un embrión fecundado con la técnica de Piezo-ICSI.

The antioxidant and metabolic effect of L-carnitine (LC) was evaluated during the in vitro maturation of bovine oocytes on parameters associated with quality: relative amount of lipids, generation of reactive oxygen species (ROS), reduced glutathione levels (GSH), mitochondrial activity and competence for embryonic development after fertilization. The cumulus-oocyte complexes were matured for 24 h with and without L-C (3.8 mM), and incubated with the specific fluorophore for each parameter, Nile Red (lipids), Dichlorofluorescein diacetate (EROs), Monoclorobimane (GSH), Mitotracker Green (mitochondria). The intensity of the fluorescence was analyzed with the ImageJ software and normalized to the control group of matured oocytes without L-Carnitine. To determine the competence of the oocyte for embryonic development, the matured oocytes were fertilized and cultured for 8 days. In oocytes matured with L-C a decrease of 8.1% of the relative amount of lipids and 41.6% in the generation of EROs was found, while mitochondrial activity increased by 160% with respect to control, plus improved the kinetics and percentage of blastocysts. However, GSH levels were not affected by L-C. The results support the beneficial effect of L-C during the in vitro maturation of the bovine oocyte to improve antioxidant and metabolic parameters that are reflected in the in vitro production of bovine embryos.

Se evaluó el efecto antioxidante y metabólico de la L-Carnitina (L-C) durante la maduración in vitro de ovocitos bovinos sobre parámetros asociados a la calidad: cantidad relativa de lípidos, generación de especies reactivas de oxígeno (EROs), niveles de glutatión reducido (GSH), actividad mitocondrial y la competencia para el desarrollo embrionario posterior a la fertilización. Los complejos cúmulo ovocito fueron madurados por 24 h con y sin L-C (3.8 mM), e incubados con el fluoróforo específico para cada parámetro, Rojo Nilo (lípidos), Diclorofluoresceina diacetato (EROs), Monoclorobimane (GSH), Mitotracker Green (mitocondria). La intensidad de la fluorescencia fue analizada con el software ImageJ y normalizada al grupo control de ovocitos madurados sin L-Carnitina. Para determinar la competencia del ovocito para el desarrollo embrionario, los ovocitos madurados fueron fertilizados y cultivados por 8 días. En los ovocitos madurados con L-C se encontró una disminución del 8.1% de la cantidad relativa de lípidos y en la generación de EROs del 41.6%; mientras que la actividad mitocondrial aumentó en 160% con respecto al control, y mejoró la cinética y el porcentaje de blastocistos. Sin embargo, los niveles de GSH no se afectaron con la L-C. Los resultados soportan el efecto benéfico de la L-C durante la maduración in vitro del ovocito bovino para mejorar parámetros antioxidantes y metabólicos que se reflejan en la producción in vitro de embriones bovinos

Resumen El estrés oxidativo es generado por un desbalance entre radicales libres y antioxidantes. Bajo condiciones fisiológicas normales, los radicales libres participan en eventos reproductivos tales como activación del ciclo celular, ovulación y luteólisis. Sin embargo, cuando estos son producidos en cantidades que sobrepasan la capacidad antioxidante del organismo producen daño oxidativo y trastornos reproductivos que disminuyen la fertilidad de la hembra. La suplementación con antioxidantes previene el daño oxidativo y su incorporación a programas de manejo reproductivo puede ser una opción para mejorar la fertilidad de la hembra. La selección del folículo preovulatorio, ovulación, fecundación, desarrollo embrionario y formación del cuerpo lúteo ocurren durante el periodo periconcepcional. Este es un periodo dinámico y los eventos que ocurren en él son susceptibles a daño por estrés oxidativo. Por tanto, el objetivo de esta revisión es discutir el efecto del estrés oxidativo en los eventos reproductivos durante el periodo periconcepcional, así como la suplementación de antioxidantes en rumiantes durante este periodo.

Abstract Oxidative stress is the result of an imbalance between free radicals and antioxidants. Under normal physiological conditions, free radicals are involved in reproductive events such as cell cycle activation, ovulation and luteolysis. However, when an overproduction of free radicals surpasses antioxidant capacity, oxidative damage, reproductive anomalies and diminished fertility occur. Supplementation with antioxidants prevents oxidative damage and can be incorporated into reproductive management to improve fertility in females. Selection of the preovulatory follicle, ovulation, fertilization, embryo development and formation of the corpus luteum occur during the periconceptional period. This is a dynamic period and the events are susceptible to oxidative stress damage. Therefore, the objective of this review is to discuss the effect of oxidative stress on reproductive events during the periconceptional period, as well as to address antioxidant supplementation during this period.

Resumo O stress oxidativo é gerado por um desequilíbrio entre radicais livres e antioxidantes. Sob condições fisiológicas normais, os radicais livres participam de eventos reprodutivos, como ativação do ciclo estral, ovulação e luteólise. No entanto, quando é produzido em quantidades que excedem a capacidade antioxidante do organismo, produzem danos oxidativos e distúrbios reprodutivos que diminuem a fertilidade da fêmea. A suplementação com antioxidantes previne o dano oxidativo e sua incorporação em programas de gerenciamento reprodutivo pode ser uma opção para melhorar a fertilidade da fêmea. A seleção do folículo pré-ovulatório, ovulação, fecundação, desenvolvimento embrionário e formação do corpo lúteo ocorrem durante o período periconcepcional. Este é um período dinâmico e os eventos que ocorrem são suscetíveis ao dano por estresse oxidativo. Portanto, o objetivo dessa revisão é fornecer ao leitor conhecimento sobre o efeito do estresse oxidativo em eventos reprodutivos durante o período periconcepcional, e também discutir a suplementação com antioxidantes em ruminantes durante este período.

Abstract Background: The term fecundity in abalone is defined according to an estimate of its absolute fecundity, which is the number of mature oocytes present in the gonad, or as potential fecundity, i.e., the total number of oocytes present in the gonad. In Mexico, few studies have estimated the fecundity of mollusks and these have been performed on gonads in different phases of gonadal development, obtaining values that are very different or overestimated, for example, values ranging from 80000 to 22 million oocytes in a gonad. Goals: Estimate the fecundity of Haliotis fulgens (blue abalone) and Haliotis corrugata (yellow abalone), using mature gonads and a particle counter (Multisizer 3) to count only mature oocytes. Methods: Each month from October 2011 to February 2013, 30 adult organisms of each species were collected in two localities of Baja California Sur, Mexico (La Bocana and Bahía Tortugas). A histological analysis identified those that were mature females. To obtain the number of eggs per gram, triplicate oocyte counts were performed in a coulter counter Multisizer 3, in a solution of 4 g wet weight of mature oocytes diluted to 50 mL of filtered seawater (μm). Absolute fecundity was calculated by multiplying the total weight of the gonad by the number of mature oocytes present in one gram of oocytes. Results: The fecundity in La Bocana was found to be 2x106 eggs in H. corrugata and H. fulgens, while in Bahia Tortugas it was 4x106 eggs in H. fulgens. Conclusions: This study suggests that estimating absolute fecundity in species with partial spawning, such as H. fulgens and H. corrugata, should be performed on all females regardless of the degree of gonadal development. However, only mature oocytes should be considered as an indicator of absolute fecundity. Therefore, the use of an apparatus that counts and measures mature oocytes, such as a particle counter, facilitates and guarantees a good estimate of fecundity.

Resumen Antecedentes: De acuerdo con su estimación, el término fecundidad en Haliotis spp. se clasifica como fecundidad absoluta (número de ovocitos maduros presentes en la gónada) y como fecundidad potencial (número total de ovocitos presentes en la gónada). En México, son pocos los trabajos que estiman la fecundidad en Haliotis, y los que se han realizado, han utilizado gónadas en diferentes fases de desarrollo, por lo que se han obtenido valores muy diferentes o sobreestimados, por ejemplo, valores que van desde 80,000 a 22 millones de ovocitos en una gónada. Objetivos: Estimar la fecundidad de Haliotis fulgens (abulón azul) y Haliotis corrugata (abulón amarillo) mediante gónadas maduras y un contador de partículas (Multisizer 3) para el conteo selectivo de ovocitos maduros. Métodos: Entre octubre de 2011 y febrero de 2013, se recolectaron mensualmente 30 organismos adultos de cada especie en dos localidades de la costa occidental de Baja California Sur, México (La Bocana y Bahía Tortugas). Se identificaron las hembras en fase de madurez por medio de un análisis histológico, y para obtener el número de ovocitos por gramo de peso húmedo, se realizaron por triplicado conteos de ovocitos en un contador de partículas, a una solución de 4 g de ovocitos (peso húmedo) diluidos en 50 mL de agua de mar marina filtrada a 1 µm. La fecundidad absoluta se calculó multiplicando el peso húmedo total de la gónada por el número de ovocitos maduros promedio presentes en un gramo de ovocitos. Resultados: En La Bocana se encontró que la fecundidad absoluta fue de 2 x 106 ovocitos en H. corrugata y en H. fulgens, mientras que en Bahía Tortugas fue de 4 x 106 ovocitos en H. fulgens. Conclusiones: Se sugiere que la estimación de la fecundidad absoluta en especies con desoves parciales, como H. fulgens y H. corrugata, se debe realizar en todas las hembras, sin importar el grado de desarrollo gonádico; sin embargo, es recomedable considerar sólo los ovocitos maduros como un estimador de la fecundidad absoluta. Por lo tanto, la utilización de un aparato que cuente y mida los ovocitos maduros, como es un contador de partículas, facilita y garantiza una buena aproximación en la estimación de la fecundidad.

ABSTRACT The oocyte is indispensable for the embryonic development of an organism. Its quality is currently evaluated considering the morphological parameters that allow identifying the alterations that compromise the development of the embryo. So far, no morphological abnormalities have been reported in sheep oocytes. The objective of this study was to determine the frequency and type of morphological alterations in them. For this, 10 collections were carried out, of which 567 ovaries were obtained from slaughtered females and 2 374 oocytes were obtained by follicular aspiration; all of them matured in vitro. According to the criteria of the Association for the Study of Reproductive Biology (ASEBIR), 798 oocytes (33.6 %) were classified as normal morphology and 1 576 (66.4 %) presented different morphological alterations, as granular cytoplasm (32.6 %), incomplete cytoplasm (21.1 %), increased perivitelline space (11.7 %), presence of vacuoles (11.6 %), degenerated oocytes (8.9 %), abnormalities of the pellucid zone ( 7 %), cytoplasm exudates (4.7 %), polar body dimorphism (0.3 %), and alterations produced by the management technique, like the absence of pellucid zone (2.1 %). It is concluded that, given the high rate of morphological abnormalities in the in vitro maturation of oocytes, their detailed selection is important to obtain better results in the in vitro embryonic development.

RESUMEN El ovocito es indispensable para el desarrollo embrionario de un organismo. Actualmente, su calidad se evalúa considerando parámetros morfológicos que permiten identificar alteraciones que comprometen el desarrollo del embrión. Sin embargo, en ovocitos de ovino, hasta el momento, no se han reportado anormalidades morfológicas. El objetivo del presente trabajo fue determinar la frecuencia y el tipo de alteraciones morfológicas en ovocitos de borrega. Para ello se realizaron 10 colectas, de las que se obtuvieron 567 ovarios procedentes de hembras sacrificadas en rastro y, mediante aspiración folicular, se lograron 2 374 ovocitos; todos ellos fueron madurados in vitro. De acuerdo a los criterios de la Asociación para el Estudio de la Biología de la Reproducción (ASEBIR), 798 ovocitos (33,6 %) se clasificaron de morfología normal y 1 576 (66,4 %) presentaron diferentes alteraciones morfológicas, como citoplasma granuloso (32,6 %), citoplasma incompleto (21,1 %), espacio perivitelino aumentado (11,7 %), presencia de vacuolas (11,6 %), ovocitos degenerados (8,9 %), alteraciones de la zona pelúcida (7 %), exudados citoplasmáticos (4,7 %), dimorfismo del cuerpo polar (0,3 %) y alteraciones producidas por la técnica de manejo, como la ausencia de zona pelúcida (2,1 %). Se concluye que, dada la alta tasa de anormalidades morfológicas en los ovocitos de ovinos madurados in vitro, es importante su minuciosa selección para obtener mejores resultados en el desarrollo embrionario in vitro.

Abstract Oocyte maturation involves several complex events which are partially regulated by the gonadotropins. However, in order to fully understand these events it is necessary to identify all those genes whith roles in maturation. One of these genes is the protein ATPase6, which is a component of ATP synthase and is upregulated during oocyte maturation, nevertheless, its participation has not been experimentally evaluated. Therefore, the aim of the present study was to determine if ATPase6 has a relevant role in pig oocyte maturation, by conforming two groups of oocytes: The experimental, oocytes microinjected with ATPase6-interfering RNA (RNAi) in order to silence its expression, and the control, oocytes microinjected with an invertebrate gene-RNAi. After microinjection, both groups of oocytes were cultured in maturation medium for 48 h. ATPase6 expression was reduced 71% in ATPase6-RNAi microinjected oocytes, while the percentage of matured oocytes was reduced 51% in this group (67.5% in control oocytes vs 33% in ATPase6-RNAi microinjected oocytes; p<0.05 with Student’s t test). These results allow us to conclude that ATPase6 has an important role in the maturation of pig oocytes.

Resumen La maduración del ovocito en los folículos preovulatorios comprende complejos eventos regulados en parte por gonadotropinas. Sin embargo para entender estos eventos, es necesario identificar los diferentes genes que participan en la maduración. Uno de estos genes corresponde a la proteína ATPasa6, componente de la ATP sintasa que se sobreexpresa durante la maduración de los ovocitos pero hasta ahora no ha sido comprobada su participación experimentalmente. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio se encaminó a determinar si la ATPasa6 tiene un papel relevante en la maduración de los ovocitos del cerdo, a partir de la conformación de dos grupos de ovocitos: El experimental microinyectados con un RNA interferente para ATPasa6, silenciando su expresión, y el grupo control microinyectados con un RNAi para un gen de invertebrado. Después de la microinyección, ambos grupos se cultivaron in vitro durante 48 h en medio de maduración. El grupo microinyectado con siRNA para ATPasa6 mostró una disminución del 71% en la expresión de este gen a las 24 h de incubación, en tanto que el porcentaje de ovocitos maduros en este grupo disminuyó 51.1% (67.5% en el grupo control vs 33% en el grupo tratado con ATPasa6-RNAi; p<0.05 con t de Student). Estos resultados permiten concluir que la ATPasa6 juega un papel importante durante la maduración de los ovocitos del cerdo.