ABSTRACT: This study determined the zootechnical, metabolic, and health performance of Girolando calves born with high or low birth weight, conceived through in vitro fertilization. The study was carried out on a commercial dairy farm located in Passos, Minas Gerais, Brazil. For this, a hundred Girolando calves were divided into two groups: The Control, which consisted of calves that were born weighing ≤ 35 kg; and high birth weight (HBW) calves, which were born weighing > 35 kg. The calves were monitored for zootechnical parameters; epidemiological indices, for diseases such diarrhea and pneumonia; as well as serum concentrations of aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, gamma-glutamyl transferase, cholesterol, triglycerides, paraoxonase1, albumin, urea, and globulin. Calves from the HBW group had a higher general mortality rate, but no effects on the zootechnical performance or metabolism were observed. The results obtained allow us to conclude that Girolando calves generated by IVF and heavier at birth have a greater chance to present diseases such as omphalophlebitis, tympany, and bovine parasitic sadness, and have a higher rate of general mortality. Conversely, birth weight of the calves does not influence diarrhea or pneumonia, the zootechnical performance, or the metabolism.

RESUMO: Este estudo determinou o desempenho zootécnico, metabólico e saúde de bezerras Girolando nascidas com alto ou baixo peso, concebidas por fertilização in vitro. O estudo foi realizado em uma fazenda leiteira comercial localizada em Passos, Minas Gerais, Brasil. Cem bezerras Girolando foram divididas em dois grupos: Controle, que consistiu em bezerras que nasceram com peso ≤ 35 kg; e HBW, bezerras que nasceram com peso > 35 kg. As bezerras foram monitoradas quanto aos parâmetros zootécnicos; índices epidemiológicos para doenças como diarreia e pneumonia; bem como as concentrações séricas de aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase, fosfatase alcalina, gama-glutamil transferase, colesterol, triglicérides, paraoxonase1, albumina, uréia e globulina. As bezerras do grupo HBW apresentaram maior taxa de mortalidade, mas nenhum efeito no desempenho zootécnico ou metabolismo foram observados. Os resultados permitem concluir que bezerras Girolando provenientes de FIV que nascem mais pesadas têm maior chance de apresentar doenças, como onfaloflebite, timpanismo e tristeza parasitária bovina, tendo uma maior taxa de mortalidade geral. Porém, o peso ao nascimento das bezerras não influenciou a ocorrência de diarreia ou broncopneumonia, o desempenho zootécnico e o perfil metabólico.

RESUMEN El estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del suero fetal bovino (FCS) agregado al medio de cultivo los días 5 a 7 después de la fertilización in vitro sobre la producción y posterior criotolerancia de blastocistos de vaquillonas criollas ecuatorianas. Se recolectaron complejos cúmulo-ovocitos (COCs) inmaduros mediante aspiración intravaginal guiada por ultrasonido (OPU) de 10 vaquillonas criollas y de ovarios de matadero en ocho sesiones. Los COCs se sometieron a maduración in vitro (MIV), fecundación (FIV) y cultivo (IVC). El día 1 después de la FIV, los presuntos embriones de cada fuente de ovocitos (OPU [O] y Matadero [A]) se asignaron aleatoriamente en dos grupos según si se añadió FCS al 2.5% (v/v) al medio de cultivo el día 5 después de la FIV: 1) O-FCS+, 2) O-FCS-, 3) A-FCS+ y 4) A-FCS-. El día 7 después de la FIV se vitrificaron embriones de alta calidad. La criotolerancia de los embriones vitrificados-calentados se evaluó según la reexpansión del blastocele a las 2 h y la posterior reexpansión y eclosión a las 24 y 48 h de incubación. La tasa de blastocistos el día 7 no difirió entre la fuente de ovocitos y el grupo FCS. Después del proceso de vitrificación/ calentamiento, la adición de FCS solo afectó la tasa de reexpansión a las 2 h, independientemente de la fuente de ovocitos (p<0.05). Asimismo, la tasa de eclosión de los blastocistos a las 48 h de incubación se vio drásticamente afectada únicamente en los ovocitos derivados de OPU (p<0.01). En conclusión, la suplementación de FCS el día 5 después de la FIV no mejoró la producción de blastocistos y afectó negativamente la criotolerancia de embriones bovinos in vitro derivados de vaquillonas criollas criadas en los Andes ecuatorianos.

ABSTRACT This experiment aimed to assess the effect of fetal calf serum (FCS) added to culture medium on day 5 to 7 after in vitro fertilization on production and subsequent cryotolerance of blastocysts from Ecuadorian Creole heifers. Immature cumulus-oocyte complexes (COCs) were collected by ovum pick-up (OPU) from 10 Creole heifers and from ovaries collected at abattoir in eight collection sessions. COCs were subjected to in vitro maturation (IVM), fertilization (IVF), and culture (IVC). On day 1 after IVF, presumptive embryos from each oocyte source (OPU [O] and Abattoir [A]) were allocated randomly in two groups according to whether 2.5% (v/v) FCS was added to culture medium on day 5 after IVF: 1) O-FCS+, 2) O-FCS-, 3) A-FCS+, and 4) A-FCS-. On day 7 after IVF, high quality embryos were vitrified. Cryotolerance of vitrified-warmed embryos was assessed according to blastocele re-expansion at 2 h and subsequent re-expansion and hatching at 24 and 48 h of re-incubation. Blastocysts rate on day 7 did not differ between oocyte source and FCS group. After vitrification/warming process, addition of FCS affected the re-expansion rate only at 2 h, irrespective of the oocyte source (p<0.05). Likewise, blastocysts hatching rate at 48 h of incubation was drastically affected only in OPU derived oocyte (p<0.01). Supplementation of FCS on day 5 after IVF did not improve blastocyst production and adversely affected the cryotolerance of in vitro bovine embryos derived from creole heifers raised on Ecuadorian Andean highlands.

RESUMEN El estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del suplemento Insulina-Transferrina-Selenio (ITS) en el cultivo embrionario sobre la tasa de blastocistos y calidad embrionaria. Los cigotos de bovino obtenidos por maduración (MIV) y fertilización in vitro (FIV) fueron transferidos a medio Evolve en 4 grupos (T1: Sin suplemento ITS; T2: ITS las primeras 48 h de cultivo (CIV1): T3: ITS después del día 2 de cultivo (CIV2), T4: ITS todo el tiempo de cultivo (CIV1 + CIV2). Todos los procedimientos se realizaron a 38.5 °C, 5% de CO2 y 90% de humedad relativa. Las tasas de clivaje y de blastocistos se determinaron a las 48 h y día 8 de cultivo, respectivamente. El número de células totales y la producción de especies reactivas de oxígeno (EROs) en los blastocistos expandidos fueron determinados por tinción del núcleo con Hoechst y la oxidación de la sonda fluorescente diacetato diclorodihidrofluoresceína (H2DCFDA). Los embriones cultivados de T4 presentaron la mayor tasa de blastocistos (32.6%) y número de células totales (145.6) comparada al grupo control sin ITS (26.2% y 98.6, respectivamente; p<0.05). Asimismo, la producción de EROs en los blastocistos de T4 fue menor (p<0.05) que la obtenida en los demás grupos de estudio. Los resultados demuestran que la adición del suplemento ITS durante todo el tiempo de cultivo embrionario tiene efectos benéficos sobre el porcentaje de blastocistos y calidad embrionaria, valorada por el número de células totales y la producción de EROs.

ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the effect of Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) supplementation in embryo culture on the blastocyst rate and embryo quality. The bovine zygotes obtained by in vitro maturation (MIV) and fertilization (IVF) were transferred to Evolve medium in 4 groups (T1: Without ITS supplement; T2: ITS the first 48 h of culture (CIV1): T3: ITS after day 2 of culture (CIV2), T4: ITS during all culture time (CIV1+CIV2). All procedures were performed at 38.5 °C,5%CO2and90%relativehumidity. The cleavage and blastocyst rates were determined at 48 h and day 8 of culture. The total cell number and the production of reactive oxygen species (ROS) in the expanded blastocysts were determined by staining the nucleus with Hoechst and the oxidation of the fluorescent probe dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2DCFDA). The T4 cultured embryos presented the highest rate of blastocysts (32.6%) and total cell number (145.6) compared to the control group without STI (26.2% and 98.6, respectively; p<0.05). Likewise, the production of ROS in T4 blastocysts was lower (p<0.05) than that obtained in the other study groups. The results show that the addition of the ITS supplement throughout the embryo culture time has beneficial effects on the percentage of blastocysts and embryo quality, assessed by the number of total cells and the production of ROS.

Resumen 13. El objetivo del presente estudio fue evaluar la Tasa de Fecundación in vitro de ovocitos bovinos con semen sexado (SX) y convencional (Conv.) capacitados (B.O y Percoll) con la técnica Swim-Up. Se evaluó el clivaje a las 48 horas post fecundación y al séptimo día del desarrollo embrionario. Los resultados mostraron un porcentaje de clivaje del 59,4% en el T1 (Conv. Percoll), 60% en el T2 (Conv. B.O), 75% en el T3 (SX. Percoll) y 46,6% en el T4 (SX. B.O), mostrando diferencia estadística entre T3 y T4 (p>0,05). La tasa de desarrollo del embrión al séptimo día fue 34,4% T1, 20% en T2, 15% en T3 y 10,51% en T4; en este caso, se encontró diferencia estadísticamente significativa en el uso del medio convencional más Percoll en comparación con el medio de SX B.O (p<0,05) (T1 y T4, respectivamente). Los resultados también mostraron una producción similar de mórulas y blastocitos tempranos y protruidos entre los cuatro tratamientos, y demuestran la viabilidad del desarrollo e implementación de la técnica de fertilización in vitro (FIV) para producir embriones bovinos. Concluyendo la evaluación preliminar, destaca la significativa influencia del método de sexado y del tratamiento en la calidad del semen y desarrollo embrionario en programas de reproducción animal. Aunque el semen sexado con Percoll muestra potencial para mejorar tasas de clivaje, el semen convencional, especialmente en el tratamiento T1 (Conv. Percoll), exhibe una superioridad en motilidad individual y concentración. Estos resultados informan decisiones cruciales para optimizar programas reproductivos.

Abstract 17. The study aimed to evaluate the Fertilization Rate of four independent in vitro treatments of bovine oocytes with Sexed (SX) and Conventional (Conv) semen, capacitated (B.O and Percoll) using the Swim-Up technique. Cleavage was assessed at 48 hours post-fertilization and on the seventh day of embryonic development. The results showed a cleavage percentage of 59.4% in T1 (Conv. Percoll), 60% in T2 (Conv. B.O), 75% in T3 (SX. Percoll), and 46.6% in T4 (SX. B.O), with a statistically significant difference (p>0.05) observed specifically between T3 and T4. The embryo development rate on the seventh day was 34.4% in T1, 20% in T2, 15% in T3, and 10.51% in T4. In this case, a statistically significant difference was found in the use of conventional medium with Percoll compared to SX B.O medium (p<0.05) (T1 and T4, respectively). The results also showed similar production of morula and early blastocysts and protruded embryos among the four treatments, demonstrating the feasibility of in vitro fertilization (IVF) technique for producing bovine embryos. In conclusion, the preliminary evaluation highlights the significant influence of the sexing method and treatment on semen quality and embryonic development in animal reproduction programs. Although Sexed semen with Percoll shows potential to improve cleavage rates, conventional semen, especially in T1 treatment (Conv. Percoll), exhibits superiority in individual motility and concentration. These findings provide crucial insights for optimizing reproductive programs.

Abstract Diseases such as those caused by feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV) represent health problems for cats. Feline leishmaniasis (FL) has been reported in several cities across the country. The objective was to carry out a clinical-epidemiological and laboratory study of FIV, FeLV and FL in cats from shelters in Dourados, Mato Grosso do Sul, Brazil. Blood samples and swabs from the conjunctival and nasal mucosa were obtained from 75 cats, from four animal shelters. Serology for FIV and FeLV was performed. For Leishmania, polymerase chain reaction (PCR) was performed on blood, conjunctiva and nasal mucosa. In the immunochromatographic serological test, seven cats tested positive for FIV and none for FeLV. No samples was positive in PCR for Leishmania. The study showed that despite the presence of human and canine leishmaniasis in the studied region, Leishmania spp. were absent in the cats studied. To avoid an increase in contagion in shelters, it is essential isolate cats with FIV.

Resumo Doenças como as causadas pelos vírus da imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV) representam problemas de saúde para os gatos. A leishmaniose felina (LF) tem sido relatada em diversas cidades do país. O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo clínico-epidemiológico e laboratorial de FIV, FeLV e LF em gatos de abrigos em Dourados, Mato Grosso do Sul, Brasil. Amostras de sangue e swabs da mucosa conjuntival e da mucosa nasal foram obtidas de 75 gatos, dos quatro abrigos de animais. Foi feita a sorologia para FIV e FeLV. Para Leishmania foi realizada a reação em cadeia da polimerase (PCR) em sangue, conjuntiva e mucosa nasal. No teste sorológico imunocromatografico, sete gatos apresentaram resultado positivo para FIV e nenhum para FeLV. Nenhuma amostra foi positiva na PCR para Leishmania. O estudo demonstrou que apesar da presença de leishmaniose humana e canina, na região estudada, não foi encontrado Leishmania spp. nos gatos analisados. Para evitar o aumento do contágio em abrigos é fundamental isolar os gatos com FIV.

ABSTRACT Feline demodicosis caused by Demodex cati is a rare parasitic disease, characterized by local or generalized dermatitis and less commonly by otitis. A feline, male, castrated, mixed breed, 11 years old, presented progressive cervical pruritus with alopecia in the caudolateral region of the right ear and mild erythema, abrasions, brownish ceruminous secretion and otopodal reflex. He had a history of feline immunodeficiency virus (FIV) infection and feline gingivitis stomatitis complex (GSC), in addition to continuous use of prednisolone. In the parasitological examination of the cerumen, different stages of Demodex sp. were found. Genetic sequencing revealed 99.33% homology for D. cati. Therapy with imidacloprid and moxidectin in spot-on formulation, in two doses at 30-day intervals, promoted remission of clinical signs and elimination of the mite.

RESUMO A demodicose felina por Demodex cati é uma doença parasitária rara, caracterizada por dermatite local ou generalizada e menos comumente por otite. Felino, macho, castrado, sem raça definida, de 11 anos, apresentou prurido cervical progressivo com alopecia em região caudolateral à orelha direita e eritema leve, escoriações, secreção ceruminosa amarronzada e reflexo otopodal. Apresentava histórico de infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) e complexo gengivite-estomatite felina (CGEF), além de uso contínuo de prednisolona. No exame parasitológico do cerúmen, foram encontrados diferentes estágios de Demodex sp. O sequenciamento genético revelou 99,33% de homologia para D. cati. A terapia com imidacloprida e moxidectina em formulação spot-on, em duas doses, com intervalos de 30 dias, promoveu a remissão dos sinais clínicos e a eliminação do ácaro.

Abstract Embryo co-culture is an effective alternative to improve the developmental capacity of embryos produced in vitro under suboptimal conditions. Bovine embryos produced by in vitro fertilization (IVF) and somatic cell nuclear transfer (SCNT) techniques were co-cultured on Vero cell monolayers and the development percentages reached were assessed. In IVF-derived embryos, a highly significant increase was observed in the percentage of first cleavage 75.4 % (n=614/814) vs. 60.9 % (n=564/926) (p<0.0052), and blastocyst production 17.8 % (n=145/814) vs. 8.1 % (p<0.0001); in both cases, under co-culture and non-culture conditions, using Vero cells, respectively. A mean of 101±61.0 nuclei/embryo (n=12 blastocysts) was obtained when co-cultured in Vero cell monolayers. The results confirm the ability of co-culture with Vero cells to increase the production percentages of bovine blastocysts by IVF and SCNT techniques.

Resumen El cocultivo de embriones es una alternativa efectiva para mejorar la capacidad de desarrollo de embriones producidos in vitro bajo condiciones subóptimas. Embriones bovinos producidos por las técnicas de fertilización in vitro (FIV) y clonación somática (CS) fueron cocultivados sobre monocapas células Vero y evaluados los porcentajes de desarrollo alcanzados. En los embriones obtenidos por FIV se observó un incrementó altamente significativo en el porcentaje de la primera división embrionaria 75,4 % (n=614/814) vs. 60,9 % (n=564/926) (p<0,0052), y la producción de blastocistos 17,8 % (n=145/814) vs. 8,1 % (p<0,0001), en ambos casos, en condiciones de cocultivo o no, con células Vero, respectivamente. En el grupo de embriones clonados se observaron diferencias significativas en la producción de blastocistos 28,9 % (n=193/668) vs 10,2 % (n=83/814) (p<0,0001) cocultivados con o sin células Vero, respectivamente. Se obtuvo un promedio de 101±61,0 núcleos/embrión (n=12 blastocistos) cuando fueron cocultivados en monocapas de células Vero. Los resultados confirman la capacidad del cocultivo con las células Vero para incrementar los porcentajes de producción de blastocistos bovinos por las técnicas de fertilización in vitro y clonación somática.

The aim of this study was to assess the effect of eugenol on the in vitro production of ovine embryos. Oocytes were aspirated and taken for in vitro maturation (IVM), where they were divided into 4 groups: the CON (control), in which the oocytes were immersed in medium without an antioxidant; in the EU10, EU20, EU40 groups, the same medium as in the COM group was used, supplemented with 10, 20, and 40 µM of eugenol, respectively. The degree of expansion of cumulus cells was evaluated. Subsequently, the oocytes underwent in vitro fertilization and in vitro culture, and at the end of this process, the rate of cleaved structures was assessed. Regarding the expansion rate of cumulus cells, the CON group exhibited higher rates compared to the groups supplemented with eugenol. Evaluating oocytes with fully expanded cumulus cells, only the EU40 group showed a lower rate when compared to the rest of the treatment groups. Whereas observing oocytes with partially expanded cumulus cells, the EU40 group showed higher expansion percentages compared to the other treatments. Concerning the presence of the first polar body in the oocytes, it was observed that there was no statistical difference between the treatment groups. Lastly, concerning the cleaved structures, the CON and EU10 groups showed the highest rates compared to the EU20 and EU40 groups. Thus, it was possible to conclude that the use of 10 µM of eugenol in the IVM of ovine oocytes proved to be the optimal concentration of this substance.

El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto del eugenol en la producción in vitro de embriones ovinos. Los ovocitos fueron aspirados y llevados para la maduración in vitro (MIV), donde se dividieron en 4 grupos: el CON (control), en el cual los ovocitos fueron sumergidos en medio sin antioxidantes; en los grupos EU10, EU20, EU40 se utilizó el mismo medio que en el grupo CON, pero con la adición de 10, 20 y 40 µM de eugenol, respectivamente. Se evaluó el grado de expansión de las células del cúmulo. Después de esto, los ovocitos fueron sometidos a la fecundación in vitro y al cultivo in vitro, y al final de este proceso se evaluó la tasa de estructuras clivadas. En cuanto a la tasa de expansión de las células del cúmulo, el grupo CON mostró tasas más altas en comparación con los grupos suplementados con eugenol. Al evaluar los ovocitos con células del cúmulo totalmente expandidas, solo el grupo EU40 mostró una tasa más baja en comparación con el resto de los grupos de tratamiento. Mientras que al observar los ovocitos con células del cúmulo parcialmente expandidas, el grupo EU40 mostró porcentajes de expansión más altos en comparación con los otros tratamientos. Respecto a la presencia del primer corpúsculo polar en los ovocitos, se observó que no hubo diferencia estadística entre los grupos de tratamiento. Por último, en relación con las estructuras clivadas, los grupos CON y EU10 mostraron las tasas más altas en comparación con los grupos EU20 y EU40. Por lo tanto, se pudo concluir que el uso de 10 µM de eugenol en la MIV de ovocitos ovinos resultó ser la concentración óptima de esta sustância.

Objetivando avaliar o efeito do eugenol na produção in vitro de embriões ovinos. Os oócitos, foram aspirados e levados para a maturação in vitro (MIV), onde foram divididos em 4 grupos: o CON (controle), no qual os oócitos foram imersos em meio, sem antioxidante, já nos grupos EU10, EU20, EU40 foi utilizado o mesmo meio do grupo CON, acrescido de 10, 20 e 40 µM de eugenol, respectivamente. Foi avaliado o grau de expansão das células do cumulus. Após isso, os oócitos seguiram para a fecundação in vitro e cultivo in vitro, sendo, ao final desse processo, avaliada a taxa de estruturas clivadas. Em relação à taxa de expansão das células do cumulus, o grupo CON apresentou maiores taxas, quando comparado aos grupos adicionados de eugenol. Avaliando os oócitos com células do cumulus totalmente expandidas, somente o grupo EU40, apresentou-se menor, quando comparado ao restante dos grupos de tratamento. Já observando os oócitos com células do cumulus parcialmente expandidas, o grupo EU40, apresentou maiores percentuais de expansão, quando comparado aos demais tratamentos. Sobre a presença do primeiro corpúsculo polar nos oócitos, observou-se que não houve diferença estatística entre os grupos de tratamentos. E, por último, em relação às estruturas clivadas, os grupos CON e EU10 apresentaram as maiores taxas, quando comparado aos grupos EU20 e EU40. Dessa maneira, foi possível concluir que a utilização de 10 µM de eugenol na MIV de oócitos ovinos apresentou ser a melhor concentração dessa substância.

The aim of this study was to evaluate the effect of quercetin on the in vitro maturation (IVM) of oocytes and the subsequent in vitro fertilization (IVF) of ovine embryos. For this purpose, oocytes were collected and divided into the following treatment groups: control group, containing CON medium (control); and groups Q2, Q4, and Q8, with control medium supplemented with 2, 4, and 8 µM of quercetin, respectively. After IVM, the degree of cumulus cells expansion, presence of the first polar body (PB), and the other part of the oocytes proceeded to in vitro fertilization (IVF), where oocytes were incubated with spermatozoa for a period of 20 hours. Subsequently, the presumptive zygotes underwent in vitro culture (IVC) for 48 hours, and at the end of the process, the rate of cleaved structures was evaluated. The results were expressed in percentage and compared using the Chi-square test, with a significant difference considered when P&lt;0.05. Evaluating the expansion of cumulus cells, the CON and Q2 groups showed the best expansion rates compared to the Q4 and Q8 groups. Regarding the presence of the 1st PB, it was observed that only the Q8 group exhibited lower rates compared to the control group. When evaluating the rate of cleaved structures, it was observed that the Q2 group showed a higher number compared to the Q8 group. Quercetin does not influence the maturation of ovine oocytes.

El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de la quercetina en la maduración in vitro (MIV) de ovocitos y la posterior fertilización in vitro (FIV) de embriones ovinos. Para ello, se recolectaron y seleccionaron ovocitos divididos en los siguientes grupos de tratamiento: grupo control, que contenía medio CON (control); y los grupos Q2, Q4 y Q8, con medio control al que se le añadieron 2, 4 y 8 µM de quercetina, respectivamente. Tras la MIV se evaluó el grado de expansión de las células del cúmulo, la presencia del primer corpúsculo polar (CP) y la otra parte de los ovocitos se utilizó para la fecundación in vitro (FIV), donde los ovocitos fueron incubados con espermatozoides durante un período de 20 horas. Posteriormente, los presuntos cigotos pasaron a cultivo in vitro (CIV) durante 48 horas y, al final del proceso, se evaluó la tasa de estructuras clivadas. Los resultados se expresaron en porcentaje y se compararon utilizando la prueba de Chi-cuadrado, considerando una diferencia significativa cuando P&lt;0,05. Al evaluar la expansión de las células del cúmulo, los grupos CON y Q2 mostraron las mejores tasas de expansión en comparación con los grupos Q4 y Q8. En cuanto a la presencia del 1er CP, se observó que solo el grupo Q8 mostró tasas más bajas en comparación con el grupo control. Al evaluar la tasa de estructuras clivadas, se observó que el grupo Q2 mostró un número mayor en comparación con el grupo Q8. La quercetina no influye en la maduración de ovocitos ovinos.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da quercetina na MIV de oócitos e na subsequente PIV de embriões ovinos. Para isso, foram colhidos e selecionados oócitos divididos nos seguintes grupos de tratamento: grupo controle, contendo meio CON (controle); e grupos Q2, Q4 e Q8, com meio controle, acrescido de 2, 4 e 8 µM de quercetina, respectivamente. Após a MIV foi avaliado o grau de expansão das células do cumulus, presença do primeiro corpúsculo polar (CP) e a outra parte dos oócitos seguiu para a fecundação in vitro (FIV), onde os oócitos foram incubados com os espermatozoides, por um período de 20 h. Em seguida, os presumíveis zigotos seguiram para o cultivo in vitro (CIV), por um período de 48 h e, ao final do processo, foi avaliada a taxa de estruturas clivadas. Os resultados foram expressos em porcentagem e comparados, usando o Teste do Qui-quadrado e foi considerada diferença significativa quando P&lt;0,05. Avaliando a expansão das células do cumulus, os grupos CON e Q2 apresentaram as melhores taxas de expansão, quando comparadas aos grupos Q4 e Q8. Quanto à presença do 1º CP, foi possível observar que somente o grupo Q8 apresentou taxas menores, quando comparado ao grupo controle. Já avaliando a taxa de estruturas clivadas, foi possível observar que o grupo Q2 apresentou maior número quando comparado ao grupo Q8. A quercetina não influencia na maturação de oócitos ovinos.

RESUMEN Las mujeres retrasan cada vez más la maternidad por diferentes motivos, lo que les ocasiona recurrir a tratamientos de fertilización in vitro (FIV) con óvulos propios u óvulos donados para conseguir embarazo. En los tratamientos de FIV con óvulos donados se realiza una selección estricta de las donantes, quienes son sometidas a estimulación ovárica con posterior aspiración de los folículos. La edad recomendada para donar es entre 21 y 34 años. Se recomienda un máximo de 6 donaciones por donante. La receptora es la persona a quien se le realizará la transferencia del embrión y llevará el embarazo. Las tasas de embarazo con esta técnica de reproducción asistida son altas y las indicaciones más frecuentes son edad materna avanzada y falla ovárica precoz.

ABSTRACT Women are increasingly delaying childbearing for different reasons, which causes them to resort to in vitro fertilization (IVF) treatments with their own oocytes or donated oocytes to achieve pregnancy. In IVF treatments with donated oocytes, donors are strictly selected and undergo ovarian stimulation with subsequent follicle aspiration. The recommended age to donate is between 21-34 years old. A maximum of 6 donations per donor is recommended. The recipient is the person to whom the embryo transfer will be performed and who will carry the pregnancy. Pregnancy rates with this assisted reproduction technique are high and the most frequent indications are advanced maternal age and early ovarian failure.

RESUMEN Las mujeres posponen su maternidad por el deseo de superación personal y profesional. Se conoce que la cantidad y calidad de los óvulos por ciclo dependen de la edad de la paciente. Las tasas de éxito en tratamientos de reproducción asistida disminuyen con la edad, especialmente después de los 40 años. Se observan tasas más altas de nacidos vivos en mujeres más jóvenes y las tasas disminuyen significativamente en mujeres mayores debido a la disminución de la fertilidad y el aumento de abortos espontáneos. Por ello, la edad es crucial al evaluar la posibilidad de un embarazo exitoso mediante tratamientos de reproducción asistida (TRA). Las indicaciones para realizar fertilización in vitro (FIV) con óvulos propios en mujeres mayores de 40 años incluyen iniciar lo más pronto procedimientos de alta complejidad, buena evaluación de la reserva ovárica con análisis de la hormona antimülleriana y conteo de folículos antrales para realizar asesoramiento genético, proponer FIV-inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) antes de los 44 años, generar expectativas realistas y realizar consentimiento informado, con estadisticas propias. En la REDLARA, de todos los procedimientos de FIV-ICSI, el 34% de las pacientes tienen más de 40 años; se prefiere transferir blastocistos con prueba genética preimplantacional de aneuploidías (PGT-A) para seleccionar embriones euploides. Las tasas de éxito son bajas, inclusive cuando son tasas de embarazo por transferencia de un embrión en el grupo de mujeres ≥ 40 años (18,2% sin PGT, 42,7% con PGT en el IMRCRP). Se recomienda acumular óvulos o embriones realizando múltiples estimulaciones ováricas. Se debe optar por transferir un solo embrión para evitar complicaciones obstétricas con embarazos múltiples en pacientes ≥ 40 años, por el alto riesgo debido a la edad.

ABSTRACT Women postpone motherhood because of their desire for personal and professional improvement. It is known that the quantity and quality of oocytes per cycle depends on the patient’s age. Success rates in assisted reproduction treatments decrease with age, especially after 40 years of age. Higher live birth rates are observed in younger women, and rates decrease significantly in older women due to decreased fertility and increased miscarriages. Therefore, age is crucial when assessing the possibility of a successful pregnancy through assisted reproductive treatments (ART). The indications to perform in vitro fertilization (IVF) with own ovules in women older than 40 years include starting as soon as possible highly complex procedures, good evaluation of ovarian reserve with antimüllerian hormone analysis (AMH) and antral follicle count (AFC) for genetic counseling, proposing IVF-intracytoplasmatic sperm injection (ICSI) before the age of 44 years, generating realistic expectations and informed consent, with own statistics. At REDLARA, of all IVF-ICSI procedures, 34% of patients are over 40 years old; preference is given to transfer blastocysts with preimplantation genetic testing for aneuploidy (PGT-A) to select euploid embryos. Success rates are low, even when they are pregnancy rates per embryo transfer in the group of women ≥ 40 years (18.2% without PGT, 42.7% with PGT in IMRCRP). It is recommended to bank ovules or embryos by performing multiple ovarian stimulations. A single embryo transfer should be chosen to avoid obstetric complications with multiple pregnancies in patients ≤ 40 years, because of the high risk due to age.

The objective of this study was to evaluate the effect of α-lipoic acid on in vitro maturation and of l-arginine on in vitro fertilization of oocytes for in vitro production of sheep embryos. Thus, the ovaries were collected at a local slaughterhouse and the oocytes collected by the method of follicular aspiration with a vacuum pump were divided equally into five maturation groups: CON, without addition of antioxidant; CIS group, with cysteamine as an antioxidant source; and the groups ALA5, ALA10 and ALA20, containing concentrations of 5.0, 10.0 and 20.0 µM of ALA. After 24h of maturation, the oocytes were evaluated concerning occurrence and degrees of expansion of the cumulus cells. The oocytes of the best IVM group were destinated for in vitro fertilization (IVF). The selected and capacitated sperm were included in five groups: CON, without addition of capacitator agent; HEP group, with heparin as a capacitator source; and ARG5, ARG10 and ARG20 groups, where IVF occurred in the same HEP medium, replacing heparin with 5 mM, 10 mM and 20 mM L-arginine, respectively. The results were expressed as a percentage and the variables of cumulus cell expansion and number of cleaved structures were compared using the chi-square test in Epi Info software (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Results were considered significant when P &lt; 0.05. Regarding the expansion of cumulus cells all groups showed 100% expansion, on the total expansion category of COCs it was observed that ALA5 and ALA20 groups did not present the same proportion of COCs with total expansion as CIS group. After in vitro fertilization (IVF), there were no statistical differences in relation to the cleaved structures between CON, HEP, ARG5 and ARG10 groups. However, it was also observed that the use of 20.0 mM of L-arginine reduced the percentage of cleaved structures when compared to the ARG10 group (P&lt;0.05).

El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del ácido α-lipoico en la maduración in vitro y la l-arginina en la fecundación in vitro de ovocitos para la producción in vitro de embriones ovinos. Así, se recolectaron ovocitos de ovarios obtenidos de mataderos mediante el método de aspiración folicular con bomba de vacío, los cuales se dividieron en cinco grupos de maduración: CON, sin adición de antioxidante, grupo CIS, con cisteamina como fuente antioxidante y los grupos ALA5, ALA10 y ALA20, que contienen concentraciones de 5, 10 y 20 µM de ácido α-lipoico. Después de 24 h de maduración, se evaluó la aparición y el grado de expansión de las células del cúmulo en los ovocitos. Los ovocitos del mejor grupo MIV fueron destinados a fecundación in vitro (FIV), siendo por tanto incluidos en gotas con medio de fecundación in vitro, junto con los espermatozoides seleccionados y capacitados, resultando en los siguientes grupos: CON, sin adición de agente capacitador; grupo HEP, con heparina como fuente de condensadores; y los grupos ARG5, ARG10 y ARG20, donde se produjo la FIV en el mismo medio HEP, reemplazando la heparina por L-arginina 5, 10 y 20 mM, respectivamente. Los resultados se expresaron en porcentajes y las variables expansión celular del cúmulo y número de estructuras escindidas se compararon mediante la prueba chicuadrado del software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Los resultados se consideraron significativos cuando P lt; 0,05. En cuanto a la expansión de las células del cúmulo, todos los grupos mostraron 100% de expansión. Evaluando los grados de expansión de las células del cúmulo, en la categoría de expansión total, se observó que los grupos ALA5 y ALA20 presentaron la misma proporción de CCO con expansión total que el grupo CIS (Plt;0.05), sin embargo se observa que hay una tendencia a la baja de las estructuras con plena expansión cuando se utilizan antioxidantes. En cuanto a las estructuras escindidas, fue posible identificar que no hubo diferencias estadísticas en relación a las estructuras escindidas, entre los grupos CON, HEP, ARG5 y ARG10. Sin embargo, también se observó que el uso de Larginina 20 mM redujo el porcentaje de estructuras escindidas en comparación con el grupo ARG10 (Plt;0.05).

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do ácido α-lipóico na maturação in vitro e da l-arginina na fertilização in vitro de oócitos para produção in vitro de embriões ovinos. Desta forma, foram realizadas colheitas de oócitos oriundos de ovários obtidos em abatedouro através do método de aspiração folicular com bomba de vácuo, que foram divididos em cinco grupos de maturação: CON, sem adição de antioxidante, grupo CIS, com cisteamina como fonte antioxidante e os grupos ALA5, ALA10 e ALA20, contendo as concentrações de 5, 10, e 20 µM de ácido α-lipóico. Após 24h de maturação, os oócitos foram avaliados quanto à ocorrência e grau de expansão das células do cumulus. Os oócitos do melhor grupo MIV foram destinados à fertilização in vitro (FIV), sendo, portanto, incluídos em gotas com meio de fertilização in vitro, juntamente com os espermatozoides selecionados e capacitados, resultando nos seguintes grupos: CON, sem adição de capacitador agente; grupo HEP, com heparina como fonte de capacitor; e grupos ARG5, ARG10 e ARG20, onde a FIV ocorreu no mesmo meio HEP, substituindo a heparina por L-arginina 5, 10 e 20 mM, respectivamente. Os resultados foram expressos em porcentagem e as variáveis de expansão das células do cumulus e número de estruturas clivadas foram comparadas por meio do teste qui-quadrado do software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EUA, 2021). Os resultados foram considerados significativos quando P lt; 0,05. Em relação à expansão das células do cumulus, todos os grupos apresentaram 100% de expansão. Avaliando os graus de expansão das células do cumulus, na categoria de expansão total observou-se que os grupos ALA5 e ALA20 apresentaram a mesma proporção de CCO com expansão total que o grupo CIS (Plt;0,05), porém se observa que há uma tendência de queda de estruturas com expansão total quando os antioxidantes foram utilizados. Em relação às estruturas clivadas, foi possível identificar que não houve diferenças estatísticas em relação às estruturas clivadas, entre os grupos CON, HEP, ARG5 e ARG10. Contudo, também foi observado que o uso de 20 mM de L-arginina reduziu o percentual de estruturas clivadas quando comparado ao grupo ARG10 (Plt;0,05).

The objective of this study was to evaluate the effect of including cilostazol in the in vitro maturation medium of oocytes on the in vitro production of sheep embryos. Oocytes were collected from ovaries obtained from a slaughterhouse by follicular aspiration with a vacuum pump. The oocytes were divided into four maturation groups: the CON group, where the cumulus-oocyte complexes were immersed in TCM-199 supplemented with 500 IU of penicillin, 0.5 mg of streptomycin, 1.25 µg of amphotericin, 0.2 mM of sodium pyruvate, 10% (v/v) fetal bovine serum (FBS), 10 ng/mL of epidermal growth factor (EGF), 10 µg/mL of FSH, 10 µg/mL of LH, 10 µg/mL of estradiol, and 100 µM of cysteamine; and in the CILO0.3, CILO1, and CILO10 groups, the oocytes were matured in the CON group medium without the addition of cysteamine and supplemented with concentrations of 0.3, 1, and 10 µM of cilostazol, respectively. After 24 hours, the oocytes were evaluated for the presence or absence of cumulus cells and the degree of expansion and then subjected to in vitro fertilization (IVF) with sperm in FIV medium. After IVF, the presumptive zygotes were cultured in vitro. Cleavage was evaluated on day 2, with day 0 being the start of IVF. Results were expressed as a percentage, and variables such as cumulus cell expansion and the number of cleaved structures were compared using the chi-square test in the Epi Info software (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Results were considered significant when P lt; 0.05. All groups showed 100% cumulus cell expansion, and there were no significant differences in cumulus cell expansion degree between the cilostazol- and cysteamine-supplemented groups (P gt; 0.05), as well as no significant differences in cleavage rates between the cilostazol- and cysteamine-supplemented groups (P gt; 0.05).

El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la inclusión de cilostazol en el medio de maduración in vitro de ovocitos sobre la producción in vitro de embriones ovinos. Para ello, se realizaron recolecciones de ovocitos provenientes de ovarios obtenidos en un matadero mediante el método de aspiración folicular con bomba de vacío. Los ovocitos se dividieron en cuatro grupos de maduración: grupo CON, donde los complejos cúmulus ovocitos se sumergieron en TCM-199, suplementado con 500 UI de penicilina, 0,5 mg de estreptomicina, 1,25 µg de anfotericina, 0,2 mM de piruvato de sodio, 10% (v/v) de suero fetal bovino (SFB), 10 ng/mL de factor de crecimiento epidérmico (EGF), 10 µg/m de FSH, 10 µg/mL de LH, 10 µg/mL de estradiol y 100 µM de cisteamina; y en los grupos CILO0,3; CILO1 y CILO10, los ovocitos se maduraron en el medio del grupo CON, pero sin la adición de cisteamina y suplementado con las concentraciones de 0,3; 1 y 10 µM, respectivamente. Después de 24 horas, los ovocitos se evaluaron en cuanto a la presencia o no de células del cúmulus y en cuanto al grado de expansión y se destinaron a la fecundación in vitro, en medio FIV, junto con espermatozoides. Después de la FIV, los presuntos cigotos siguieron para el cultivo in vitro. Se evaluaron las clivajes en el día 2, siendo el día 0 el día del inicio del CIV. Los resultados se expresaron en porcentaje y las variables de expansión de las células del cúmulus y número de estructuras clivadas se compararon mediante la prueba del chi-cuadrado del software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EE. UU., 2021). Los resultados se consideraron significativos cuando P lt; 0,05. En relación a la expansión de las células del cúmulus, todos los grupos presentaron el 100% de expansión. No hubo diferencias significativas en cuanto al grado de expansión de las células del cúmulus entre los grupos suplementados con cilostazol y cisteamina (P gt; 0,05), así como no hubo diferencias significativas entre las tasas de clivaje entre los grupos suplementados con cilostazol y cisteamina (P gt; 0,05).

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da inclusão de cilostazol no meio de maturação in vitro de oócitos sobre produção in vitro de embriões ovinos. Para isso, foram realizadas colheitas de oócitos oriundos de ovários obtidos em abatedouro por meio do método de aspiração folicular com bomba de vácuo. Os oócitos foram divididos em quatro grupos de maturação: grupo CON, onde os complexos cumulus oócitos foram imersos em TCM-199, suplementado com 500 UI de penicilina, 0,5 mg de estreptomicina, 1,25 µg de anfotericina, 0,2 mM de piruvato de sódio, 10% (v/v) de soro fetal bovino (SFB), 10 ng/mL de fator de crescimento epidérmico (EGF), 10 µg/m de FSH, 10 µg/mL de LH, 10 µg/mL de estradiol e 100 µM de cisteamina; e nos grupos CILO0,3; CILO1 e CILO10, os oócitos foram maturados no meio do grupo CON, mas sem a adição de cisteamina e suplementado com as concentrações de de 0,3; 1 e 10 µM , respectivamente. Após 24h, os oócitos foram avaliados quanto a presença ou não de células do cumulus e quanto ao grau de expansão e destinados à fecundação in vitro, em meio FIV, juntamente com espermatozoides. Após a FIV, os presumíveis zigotos seguiram para o cultivo in vitro. Foram avaliadas clivagens no dia 2, sendo dia 0 o dia do início do CIV. Os resultados foram expressos em porcentagem e as variáveis de expansão das células do cumulus e número de estruturas clivadas foram comparadas por meio do teste qui-quadrado do software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EUA, 2021). Os resultados foram considerados significativos quando P lt; 0,05. Em relação à expansão das células do cumulus, todos os grupos apresentaram 100% de expansão. Não houve diferenças significativas quanto ao grau de expansão das células do cumulus entre os grupos suplementados com cilostazol e cisteamina (P gt; 0,05), assim como não houve diferenças significativas entre as taxas de clivagem entre os grupos suplementados com cilostazol e cisteamina (P gt; 0,05).

RESUMO A investigação da multicolinearidade permite que parâmetros em análises multivariadas sejam estimados com maior precisão e com interpretação biológica. Para ter confiabilidade nas estimativas do grau de multicolinearidade, é necessário utilizar adequado tamanho de amostra. Assim, os objetivos deste trabalho foram determinar o tamanho de amostra (número de plantas) necessário para a estimação dos indicadores do grau de multicolinearidade - número de condição (NC), determinante da matriz de correlação (DET) e fator de inflação da variância (FIV) -em caracteres morfológicos de centeio e verificar a variabilidade do tamanho de amostra entre os indicadores. Foram conduzidos cinco e três ensaios de uniformidade com as cultivares BRS Progresso e Temprano, respectivamente. Foram avaliados oito caracteres morfológicos em 780 plantas em oito ensaios. Para cada ensaio, foram selecionados 22 casos entre os 28 formados pela combinação de oito caracteres, tomados seis a seis, totalizando 176 casos. Para cada caso, foram planejados 197 tamanhos de amostra (20, 25, 30, ..., 1.000 plantas) e para cada tamanho foram realizadas 2.000 reamostragens, com reposição, determinados o NC, DET e FIV e calculada a média das 2.000 estimativas. Após, para cada caso e indicador, foi determinado o tamanho de amostra, por meio de três modelos: método da máxima curvatura modificado e modelos linear e quadrático segmentados com resposta em platô. Há variabilidade entre os tamanhos de amostra entre os indicadores, com necessidade de maiores tamanhos de amostra para DET, seguido de NC e FIV, nessa ordem, com no mínimo de 180, 116 e 85 plantas, respectivamente. biológica Assim , (NC) (DET (FIV Temprano respectivamente 78 ensaio 2 17 19 20, 20 (20 25 30 ... 1000 1 000 1.00 2000 2.00 reamostragens reposição Após indicador platô ordem 180 11 8 (NC 7 (2 3 .. 100 00 1.0 200 2.0 18 ( . 10 0 1. 2.

ABSTRACT Investigation of multicollinearity allows parameters in multivariate analysis to be estimated with higher precision and with biological interpretation. In order to generate reliable estimates of the degree of multicollinearity, it is necessary to use appropriate sample size. Thus, the objectives of this study were to determine the sample size (number of plants) necessary to estimate the indicators of the degree of multicollinearity - condition number (CN), correlation matrix determinant (DET), and variance inflation factor (VIF) - in morphological traits of rye and to verify the variability of the sample size between the indicators. Five and three uniformity trials were conducted with the cultivars BRS Progresso and Temprano, respectively. Eight morphological traits were evaluated in 780 plants in eight trials. For each trial, 22 cases were selected among the 28 formed by the combination of eight traits, taken six by six, totaling 176 cases. In each case, 197 sample sizes were planned (20, 25, 30, ..., 1,000 plants) and in each size 2,000 resampling procedures with replacement were performed, CN, DET, and VIF were determined and the average among 2,000 estimates was calculated. For each case and indicator (CN, DET, and VIF), the sample size was determined through three models: modified maximum curvature method and linear and quadratic segmented models with plateau response. There is variability between sample sizes between indicators, with larger sample sizes required for DET, followed by CN and VIF, in that order, with at least 180, 116 and 85 plants, respectively. interpretation Thus , (CN) DET (DET) (VIF Temprano respectively 78 trial 2 17 19 20, 20 (20 25 30 ... 1000 1 000 1,00 2000 2,00 performed calculated (CN VIF) response 180 11 8 (DET 7 (2 3 .. 100 00 1,0 200 2,0 18 ( . 10 0 1, 2,

Abstract Objective To understand the impact of the coronavirus disease 2019 pandemic on in vitro fertilization (IVF) clinical pregnancy rates and analyze factors that may have influenced their outcome. Methods This was a retrospective observational study conducted at a tertiary-care Brazilian fertility center. All fresh IVF and embryo warming cycles performed from March 11 to December 31, 2018–2021 were analyzed, and their data were used to calculate fertilization, embryo cleavage, cycle cancellation, embryo transfer (ET), and clinical pregnancy rates. Statistical tests were used to evaluate the alterations found. Logistic regression models were used to explore the association of the categorical variables with the observed clinical pregnancy rates. Data from 2018 and 2019 (prepandemic) and 2020 and 2021 (pandemic) were grouped. Results A total of 756 cycles were analyzed (n = 360 prepandemic and n = 396 pandemic). The age group of the patients, fertilization rates, and cleavage rates did not have significant differences (p > 0.05). There was a reduction in the percentage of fresh IVF and an increase in embryo warming cycles (p = 0.005) during the pandemic. There was also an increase in fresh cycle cancellations (p < 0.001) and a reduction in ET rates (p < 0.001). The pandemic had a negative impact on clinical pregnancy rates (p < 0.001) especially due to the increase in fresh cycle cancellations (p < 0.001). Conclusion Embryo warming cycles with subsequent frozen-thawed ET were presented as a viable alternative to continue assisted reproductive treatments against pandemic restrictions on fresh cycles, ensuring clinical pregnancy, albeit at a lower rate than that of the prepandemic period.

Resumo Objetivo Compreender os impactos da pandemia de COVID-19 nas taxas de gravidez clínica em fertilização in vitro (FIV) e analisar fatores que possam ter influenciado seu resultado. Métodos Foi realizado um estudo observacional retrospectivo em um centro brasileiro de reprodução assistida. Todos os ciclos de FIV com embriões frescos e descongelados realizados entre 11 de março e 31 de dezembro, 2018-2021 foram analisados, e seus dados utilizados para cálculo das taxas de fertilização, clivagem embrionária, cancelamento de ciclos, transferência de embriões (TE) e gravidez clínica. Testes estatísticos avaliaram significância das alterações encontradas e modelos de regressão logística exploraram associação das variáveis categóricas estudadas com as taxas de gravidez clínica observadas. Os dados de 2018 e 2019 (pré-pandemia) e 2020 e 2021 (pandemia) foram agrupados. Resultados Foram analisados um total de 756 ciclos (n = 360 na pré-pandemia e n = 396 na pandemia). A faixa etária das pacientes e as taxas de fertilização e de clivagem não tiveram alterações significativas (p > 0,05). Na pandemia, houve redução da porcentagem de ciclos de FIV com embriões frescos e aumento dos com descongelamento (p = 0,005). Também foi notado aumento das taxas de cancelamentos de ciclos com embriões frescos (p < 0,001) e redução do número de TEs (p < 0,001). A pandemia exerceu impacto negativo na taxa de gravidez clínica (p < 0,001), especialmente devido ao aumento de cancelamentos dos ciclos a fresco (p < 0,001). Conclusão Frente às limitações pandêmicas impostas aos ciclos com embriões frescos, os ciclos de descongelamento de embriões se apresentaram como alternativa viável à continuidade dos ciclos de FIV, garantindo gravidez clínica ainda que em taxas inferiores às do período pré-pandêmico.