O objetivo deste trabalho foi produzir um antissoro policlonal contra a proteína capsidial (PC) do Papaya lethal yellowing virus (PLYV) e determinar sua especificidade e sensibilidade na diagnose do vírus, bem como avaliar a resistência genética de acessos de mamoeiro (Carica papaya) ao PLYV e investigar a capacidade do ácaro rajado Tetranychus urticae em adquirir e transmitir o vírus às plantas. Foram avaliados 65 acessos de mamoeiro. Para cada acesso, dez plantas foram submetidas à inoculação mecânica com extratos de plantas infectadas com PLYV, e três plantas receberam inoculação apenas com tampão de fosfato e foram usadas como controle negativo. Noventa dias após a inoculação, novas folhas sistêmicas emergentes foram coletadas das plantas inoculadas, e a infecção viral foi diagnosticada por Elisa indireto, com uso de antissoro policlonal sensível à PC do PLYV expressa in vitro. A transmissão viral por T. urticae foi avaliada em casa de vegetação. Os experimentos foram repetidos duas vezes. O antissoro policlonal reconheceu a PC do PLYV especificamente e discriminou a infecção pelo PLYV de infecções causadas por outros vírus. Dos 65 acessos de mamoeiros avaliados, 15 foram considerados resistentes, 18 moderadamente resistentes e 32 suscetíveis. O ácaro rajado T. urticae foi capaz de adquirir o PLYV, mas não de transmiti-lo para o mamoeiro.

The objective of this work was to produce a polyclonal antiserum against the coat protein (CP) of Papaya lethal yellowing virus (PLYV) and to determine its specificity and sensibility in the diagnosis of the virus, as well as to evaluate the genetic resistance to PLYV in papaya (Carica papaya) accessions and to investigate the capacity of the two-spotted spider mite Tetranychus urticae to acquire and transmit PLYV to the plants. Sixty-five papaya accessions were evaluated. For each accession, ten plants were mechanically inoculated using PLYV-infected plant extracts, and three plants were mock inoculated with phosphate buffer alone and used as negative controls. Ninety days after inoculation, newly-emerging systemic leaves were collected from the inoculated plants, and viral infection was diagnosed by indirect Elisa, using polyclonal antiserum sensible to the in vitro-expressed PLYV CP. Viral transmission by T. urticae was evaluated in greenhouse. The experiments were repeated twice. Polyclonal antiserum recognized the recombinant PLYV CP specifically and discriminated PLYV infection from infections caused by other plant viruses. Out of the 65 papaya accessions evaluated, 15 were considered resistant, 18 moderately resistant, and 32 susceptible. The two-spotted spider mite T. urticae was capable of acquiring PLYV, but not of transmitting it to papaya.

The main areas for pepper production in Cuba were surveyed during 2006-2010 to determine the molecular diversity of the begomoviruses in this crop. Six hundred leaf samples with typical symptoms of viral diseases were collected, and from them, 50 samples per region were randomly selected for their evaluation. The total DNA extracted from each sample was previously tested by conventional PCR using begomovirus universal primers (Palv 1978/PARc496). The positive samples were used as a template for the full-length circular genome amplification by Rolling Circle Amplification. The amplified products were characterized by restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP) with the enzymes Sac I, BamH I, Hind III, Cla I, Kpn I, Sal I, Pst I.Begomovirus infection was detected in 100% of the samples evaluated by conventional PCR, suggesting the presence of these viruses in all the regions of the country. The enzymes Sac I, Bamh I, Sal I and Pst I produced unique cuts in unique sites in the isolated genomes liberating a unique fragment with the expected length (2.6-2,7kb), and detecting four polymorphic profiles in these samples. The obtained results show the possible presence of different begomoviruses species circulating in the crop, the occurrence of viral recombinants of previously informed or the presence of the two viral components in these samples. These results could also be associated with the presence of the two viral components in these samples. It was made evident the molecular diversity in these species of begomoviruses in the pepper crop in Cuba.

El objetivo de este trabajo fue determinar la diversidad molecular de begomovirus asociados al cultivo del pimiento en Cuba. Para ello, en el periodo 2006- 2010 se realizó una prospección de begomovirus en las principales áreas de producción de pimiento en Cuba. Se colectaron 600 muestras foliares de plantas que mostraron síntomas típicos de enfermedades virales y de estas se seleccionaron al azar 50 por región para su evaluación. El ADN total extraído se evaluó mediante una PCR con cebadores universales a begomovirus (Palv1978/PARc496). A partir de muestras positivas se amplificó su ADN genómico circular completo mediante la amplificación en círculo rodante. Los productos se caracterizaron mediante análisis de restricción, utilizando las enzimas Sac I, BamH I, Hind III, Cla I, Kpn I, Sal I, Pst I. Se detectó infección por begomovirus en el 100% de las muestras evaluadas mediante PCR con cebadores universales, sugiriendo la presencia de estos virus en áreas de este cultivo de las tres regiones del país. Los enzimas Sac I, Bamh I, Sal I y Pst I produjeron un corte en sitios únicos en los ADN circulares obtenidos, liberando un único fragmento lineal de la talla esperada (2.6-2.7 Kb) en estas muestras. Los resultados obtenidos muestran la posible presencia de diferentes especies de begomovirus circulando en el cultivo, la ocurrencia de recombinantes virales de los informados previamente o la presencia de los dos componentes genómicos en estas muestras. Se evidenció diversidad molecular de estas especies en el cultivo del pimiento en Cuba.

Begomoviruses are whitefly-transmitted single-stranded DNA viruses of great economic importance in the tropics and subtropics. Several begomovirus species have been reported in tomatoes in Brazil, but only a few predominate in the field, for unknown reasons. In this study begomovirus-infected tomato samples were collected in Viçosa, State of Minas Gerais, in Nov/2009 and Dec/2010. Viral genomes were amplified, cloned and sequenced. A total of 36 DNA-A components were obtained. Sequence comparisons indicated the presence of a single begomovirus, Tomato severe rugose virus (ToSRV), with pairwise identities between isolates ranging from 97.3 to 100%. Subdivision tests indicated the existence of a single population. The analysis of variability descriptors indicated that the ToSRV population has a genetic variability similar to other begomovirus populations described in Brazil infecting tomato. Neutrality tests suggested the occurrence of purifying selection acting upon the population. Recombination analysis identified recombination events with begomoviruses from the weed species Sida micrantha. The wide distribution of ToSRV in the field and the detection of recombination indicate that continuous monitoring of viral populations in the field will be required to enable an efficient resistance-based control strategy for begomoviruses.

O mamão (Carica papaya) é uma fruta de grande importância econômica em todo o Nordeste brasileiro, região responsável por 60% da produção nacional. Mamoeiros nos estados do Ceará e Rio Grande do Norte são afetados pela doença denominada amarelo letal do mamoeiro, causada pelo papaya lethal yellowing virus (PLYV). Trabalhos anteriores indicaram que o PLYV é um possível sobemovírus. A fim de estimar a variabilidade genética do PLYV, amostras foliares de mamoeiro foram coletadas em outubro de 2008 e de 2009 em regiões produtoras do Ceará, e Rio Grande do Norte. Oligonucleotídeos específicos baseados na sequência de um isolado de PLYV previamente caracterizado foram utilizados para a amplificação via RT-PCR de um fragmento com 900 pb, correspondente à região central do genoma viral. Fragmentos de 21 isolados virais foram clonados e sequenciados. A análise das sequências de nucleotídeos indicou >97% de identidade entre os isolados, entre 94-100% com o isolado de PLYV previamente sequenciado, e uma identidade baixa, porém significativa, com sobemovírus (43-48,5%). Estes resultados sugerem um baixo grau de variabilidade genética entre isolados de PLYV, e estão de acordo com a classificação provisória do PLYV como membro do gênero Sobemovirus. Conclusões de ordem taxonômica, no entanto, só podem ser tiradas após a determinação da sequência genômica completa.

The papaya (Carica papaya) is a fruit crop of great economic importance throughout the Brazilian northeast, which is responsible for 60% of the national output. Papayas in the states of Ceará and Rio Grande do Norte are affected by lethal yellowing disease, caused by papaya lethal yellowing virus (PLYV). Previous work suggested that PLYV is a putative sobemovirus. To assess the genetic variability of PLYV, foliar samples were collected in October 2008 and October 2009 in commercial fields from Ceará and Rio Grande do Norte states, and total RNA was extracted. Specific primers based on the sequence of a previously characterized PLYV isolate were used for the RT-PCR-based amplification of a 900 bp fragment corresponding to the central region of the viral genome. Fragments from 21 viral isolates were cloned and sequenced. Sequence analyses indicated >97% nucleotide sequence identity among the isolates, 94-100% identity with the previously sequenced PLYV isolate, and a lower but significant identity with sobemoviruses (43-48.5%). These results suggest a low genetic variability among PLYV isolates, and are in agreement with the provisional placement of PLYV in the genus Sobemovirus. Definitive taxonomic conclusions, however, can only be drawn after the determination of the full-length genomic sequence.

O objetivo deste trabalho foi identificar a presença dos genes Ty-2 e Ty-3, de resistência a begomovírus, em acessos de tomateiro do Banco de Germoplasma de Hortaliças da Universidade Federal de Viçosa. Os oligonucleotídeos TO302 F/R e FLUW25 F/R foram utilizados em reações de PCR, para verificar a presença de marcadores relacionados aos genes Ty-2 e Ty-3, respectivamente. Observou-se a presença do gene Ty-2, em heterozigose na subamostra BGH-6881 (Solanum peruvianum), e do gene Ty-3, em homozigose nas subamostras BGH-6878, BGH-6897 (S. lycopersicum) e em heterozigose na subamostra BGH-6881. A identificação dos genes de resistência, com reações de PCR, representa um avanço para os programas de melhoramento de tomateiro no Brasil.

The objective of this work was to identify the presence of the genes begomovirus resistence Ty-2 and Ty-3 in tomato accessions of the Banco de Germoplasma de Hortaliças of the Universidade Federal de Viçosa. The oligonucleotides TO302 F/R and FLUW25 F/R were used in PCR analysis to verify the presence of markers associated to the genes Ty-2 and Ty-3, respectively. The Ty-2 gene was observed in heterozygosis in the accession BGH-6881 (Solanum peruvianum), and the Ty-3 gene in homozygosis in the accessions BGH-6878, BGH-6897 (S. lycopersicum), and in heterozygosis in acession BGH-6881. The identification of resistance genes, using PCR analysis, represents an advance for tomato breeding programs in Brazil.

O Mosaico Amarelo do Pimentão é causado pelo Pepper yellow mosaic virus (PepYMV) e tem ocorrência natural na maioria das regiões produtoras de pimenta, pimentão e tomate do Brasil, causando sérias perdas nas culturas de pimentão e pimenta. Este trabalho teve como objetivo avaliar a resistência de 127 acessos de Capsicum spp. ao PepYMV, com o intuito de identificar fontes de resistência a serem utilizadas em programas de melhoramento. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado, com oito repetições, em casa de vegetação, protegida com tela à prova de insetos, para evitar a disseminação do vírus por afídeos vetores. Folhas de Nicotiana debneyi infectadas com o PepYMV foram utilizadas como fonte de inóculo. Plântulas dos diferentes acessos foram inoculadas no estádio de três a quatro folhas definitivas e reinoculadas 48 horas após, para evitar escapes. Apenas as folhas mais jovens completamente expandidas foram inoculadas. Como controle negativo, duas plantas de cada acesso foram inoculadas apenas com solução tampão. A avaliação visual foi feita por meio de escala de notas de 1 (plantas assintomáticas) a 5 (plantas com sintomas severos de mosaico bolhoso e redução da área foliar). Nove acessos foram identificados como resistentes e, por meio do teste sorológico ELISA indireto, as plantas assintomáticas foram confirmadas como resistentes. Dois acessos resistentes pertencem à espécie Capsicum baccatum var. pendulum e, sete, à espécie Capsicum chinense. Não foram encontrados acessos resistentes de C. annuum var. annuum, C. annuum var. glabriusculum e C. frutescens.

The Pepper yellow mosaic virus (PepYMV) naturally infects chili and sweet pepper, as well as tomato plants in Brazil, leading to severe losses. This work reports the reaction to the PepYMV of 127 Capsicum spp. accessions, aiming at identifying resistance sources useful in breeding programs. The experiment was carried out in a completely randomized design, with eight replications, in greenhouse conditions. Plants were protected with an insect-proof screen to avoid virus dissemination by aphids. Leaves of Nicotiana debneyi infected with the PepYMV were used as the inoculum source. Plants were inoculated with three to four fully expanded leaves. A second inoculation was done 48 hours later to avoid escapes. Only the youngest fully expanded leaf was inoculated. Two plants were inoculated only with buffer, as negative control. Symptoms were visually scored using a rating scale ranging from 1 (assymptomatic plants) to 5 (severe mosaic and leaf area reduction). Nine accessions were found to be resistant based on visual evaluation. Their resistance was confirmed by ELISA. Two resistance accessions belong to the species C. baccatum var. pendulum, while the seven other were C. chinense. No resistant accessions were identified in C. annuum var. annuum, C. annuum var. glabriusculum, and C. frutescens.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a base genética da resistência de Lycopersicon hirsutum ao potyvírus Pepper yellow mosaic virus (PepYMV). Foram avaliadas 540 plantas, inclusive os parentais 'Santa Clara' (suscetível) e 'BGH 6902' (resistente), e as gerações F1, F2, RC1:1 e RC1:2, derivadas do cruzamento desses parentais. As plantas receberam inoculações mecanicamente, e a concentração viral de PepYMV em cada planta foi determinada por ELISA indireto. Foram realizadas as análises quantitativa e qualitativa. A primeira, baseada na concentração viral de cada planta, indicou herança oligogênica com herdabilidade de 99%. Os mesmos dados, quando analisados de forma qualitativa, indicaram herança governada por dois genes, com interação epistática dominante e recessiva. Entretanto, quando foi analisada a geração F2:3, oriunda da autofecundação de plantas F2 resistentes, a hipótese de dois genes foi descartada e a de um gene, com dominância completa entre os alelos, foi a que melhor se ajustou aos dados. A análise qualitativa, pela sintomatologia observada, demonstrou que a herança da resistência ao PepYMV é determinada por um gene recessivo, com ausência de dominância entre os seus alelos.

The aim of this work was to evaluate the genetic basis of resistance of Lycopersicon hirsutum to the potyvirus Pepper yellow mosaic virus (PepYMV). Five hundred and forty plants, including the parentals 'Santa Clara' (susceptible) and 'BGH 6902' (resistant) were evaluated, as well as the generations F1, F2, RC1:1 and RC1:2, from the crossing of the above parentals. PepYMV was mechanically inoculated, and the virus concentration in each plant was determined by indirect ELISA. The quantitative and qualitative analyses were carried out. The first one, based on the virus concentration of each plant, suggest oligogenic inheritance with heritability of 99%. The same data, when analyzed under the qualitative form, indicated an inheritance governed by two genes, with dominant and recessive epistatic interaction. However, when F2:3 generation, arising from self-fertilization of resistant F2 plants, was analyzed, the hypothesis of two genes was rejected, while the best fitted to data was that of one gene with complete dominance among the alleles. The qualitative analysis, considering sintomatology observed, showed that the inheritance of resistance to PepYMV is determined by a recessive gene, with the absence of dominance among their alleles.

A presença de sintomas de 'big vein' ou engrossamento das nervuras em alface e a associação do Lettuce big-vein associated virus (LBVaV) e Mirafiori lettuce big-vein virus (MLBVV) foram verificadas por RT-PCR utilizando-se oligonucleotídeos específicos para ambos os vírus. Foram coletadas 366 plantas sintomáticas nas regiões de Bauru, Campinas e Mogi das Cruzes no estado de São Paulo nos meses de junho e setembro de 2004 e abril e julho de 2005, e 18 plantas assintomáticas na região de Mogi das Cruzes no mês de dezembro de 2004. Infecção mista do LBVaV e MLBVV foi detectada em 76,2% das plantas sintomáticas, em 11,5% somente o MLBVV foi detectado e em 6,6% somente o LBVaV. Nas plantas assintomáticas coletadas em dezembro na região de Mogi das Cruzes, em áreas de alta incidência da doença durante o inverno, foi detectada a presença de MLBVV em 9 amostras e LBVaV em 7 amostras. Quatro dessas amostras apresentaram infecção mista, indicando que o desenvolvimento de sintomas depende de fatores abióticos, como temperatura. A inoculação via extrato vegetal a partir de plantas de alface com infecção mista pelo MLBVV e LBVaV foi realizada a 16°C/ 10°C (dia/noite) e fotoperíodo de 11 horas, verificando-se que o MLBVV foi transmitido para Nicotiana tabacum TNN, N. rustica, N. occidentalis, Chenopodium quinoa e para as cultivares de alface Trocadero e White Boston, enquanto o LBVaV foi transmitido apenas para a alface White Boston. Entretanto, nenhuma destas plantas apresentou sintomas da doença, com exceção de C. quinoa que apresentou sintomas de lesões locais. Plantio em solo proveniente de áreas com histórico da doença de Mogi das Cruzes permitiu a transmissão do LBVaV para alface cv. White Boston e do MLBVV para alface cv. Trocadero e White Boston, embora apenas a cv. White Boston tenha apresentado sintomas da doença. Em conjunto, estes resultados demonstram a dificuldade de transmissão de ambos os vírus, mesmo em condições de laboratório.

The occurrence of big vein disease symptoms and the association of Lettuce big-vein associated virus (LBVaV) and Mirafiori lettuce big-vein virus (MLBVV) was evaluated by RT-PCR using specific primers for both viruses. A total of 366 symptomatic plants were collected during June and September 2004 and during April and July 2005 at Bauru, Campinas and Mogi das Cruzes in São Paulo state, and 18 symptomless plants were collected in Mogi das Cruzes on December 2004. Mixed infection was detected in 76,2% of the symptomatic plants, 11,5% had only MLBVV and 6,6% had only LBVaV. In the symptomless plants collected in areas with high incidence of the disease throughout the winter, MLBVV was found in 9 plants and LBVaV in 7 plants. Four plants had both viruses, indicating that symptom development depends on abiotic factors, such as temperature. Plants with MLBVV and LBVaV (mixed infection) were used as source of virus in a host range assay at 16C/ 10°C (day/ night) and 11h light period. MLBVV was transmitted to Nicotiana tabacum TNN, N. rustica, N. occidentalis, Chenopodium quinoa and lettuce cv. Trocadero and White Boston, while LBVaV was transmitted only to lettuce cv. White Boston. No symptons could be verified for these plants with the exception of C. quinoa that showed local lesions. Transmission through soil in areas with high incidence of the disease was observed for LBVaV to lettuce cv. White Boston and MLBVV for lettuce cv. Trocadero and White Boston, but only cv. White Boston showed symptoms. Together, these results demonstrate the difficulties in transmitting both viruses, even under controlled laboratory conditions.

A diversidade genética de vírus pertencentes ao gênero Begomovirus em tomateiro (Lycopersicon esculentum Mill) foi analisada em regiões produtoras do Centro-Oeste paulista. No período de janeiro de 2003 a fevereiro de 2004, cento e sessenta e seis amostras de tomate foram coletadas e a presença de begomovírus observada em 60% das amostras, por PCR, utilizando-se oligonucleotídeos universais para o gênero Begomovirus. O sequenciamento direto do produto de PCR de 16 dessas amostras indicou a possível presença do Tomato severe rugose virus (ToSRV), Sida mottle virus (SiMoV-[BR]) e da espécie tentativa Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV-[BR]). Em duas amostras foi detectada uma possível nova espécie de begomovírus. A presença do ToSRV e do SiMoV ainda não havia sido verificada em tomateiro no estado de São Paulo. Estes resultados indicam a existência de diversidade de espécies de begomovírus infectando o tomateiro nesta região, servindo como um alerta para melhoristas que trabalham na busca de fontes de resistência a esse importante grupo de patógenos.

The genetic variability of viruses belonging to the Begomovirus genus infecting tomatoes (Lycopersicon esculentum Mill) on field areas from the mid-western region of São Paulo state was evaluated. From January 2003 to February 2004, one hundred and sixty-six tomato samples were collected and the presence of begomoviruses detected on 60% of the samples by PCR, using universal primers for the genus. Direct sequencing of PCR products of 16 selected samples indicated the possible presence of Tomato severe rugose virus (ToSRV), Sida mottle virus (SiMoV-[BR]) and the tentative species Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV-[BR]). A possible new species of begomovirus was detected in two samples. The presence of ToSRV and SiMoV had not yet been reported in São Paulo state. These results indicate the existence of genetic diversity of begomovirus species infecting tomatoes in this area, and serve as an alert for breeders searching for resistance against this important group of pathogens.

O objetivo deste trabalho foi a caracterização biológica e molecular de um begomovírus detectado em tomateiros em São Joaquim de Bicas, Minas Gerais, denominado TGV-[Bi2]. A caracterização biológica consistiu em teste de gama de hospedeiros, realizado por meio de inoculação via extrato foliar tamponado ou bombardeamento de partículas. O isolado TGV-[Bi2] infecta plantas das famílias Solanaceae e Amaranthaceae, inclusive espécies economicamente importantes como o pimentão, e algumas plantas daninhas como Datura stramonium e Nicotiana silvestris. A caracterização molecular consistiu na clonagem e seqüenciamento de seu genoma completo (DNA-A e DNA-B). A comparação de seqüências e análise filogenética indicaram que o TGV-[Bi2] constitui uma nova espécie de begomovírus, denominada Tomato yellow spot virus (ToYSV), filogeneticamente relacionado ao Sida mottle virus (SiMoV).

The objective of this work was the biological and molecular characterization of a begomovirus detected in São Joaquim de Bicas, Minas Gerais, Brazil, named TGV-[Bi2], by determining its host range, complete nucleotide sequence and phylogenetic relationships with other begomoviruses. Biological characterization consisted of a host range study using either sap inoculation or particle bombardment as inoculation methods. The yellow spot virus can infect plants in Solanaceae and Amaranthaceae, including economically importat crops as sweet pepper, and weeds as Datura stramonium and Nicotiana silvestris. For the molecular characterization, the full-length genome (DNA-A and DNA-B) was amplified, cloned and completely sequenced. Sequence comparisons and phylogenetic analyses indicated that TGV-[Bi2] constitutes a novel begomovirus species named Tomato yellow spot virus (ToYSV), closely related to Sida mottle virus (SiMoV).

Dois isolados de Lettuce mosaic virus capazes de contornar a resistência conferida pelo gene mo1² em alface, LMV-AF199 proveniente do Brasil e LMV-E um isolado europeu, foram avaliados quanto à rapidez e à severidade dos sintomas induzidos em alface variedade Salinas 88 (mo1²). Os sintomas de mosaico induzidos pelo isolado LMV-AF-199 em Salinas 88 são mais severos e aparecem aos 7 dias após a inoculação (dpi), enquanto que para o isolado LMV-E os sintomas são visíveis somente a partir dos 15 dpi. Com o intuito de identificar a região do genoma viral responsável por este fenótipo, vírus recombinantes foram construídos entre estes dois isolados, e o fenótipo avaliado quanto a rapidez e severidade dos sintomas em Salinas-88. A região codificadora para as proteínas P1 e Hc-Pro do LMV-AF199 foi associada com o aumento da virulência deste isolado em Salinas-88.

Two Lettuce mosaic virus isolates capable of overcoming the resistance afforded by the resistance gene mo1² in lettuce, LMV-AF199 from Brazil, and LMV-E, an European isolate, were evaluated for the rapidity and severity of symptoms induced on the lettuce variety Salinas 88 (mo1²). The mosaic symptoms on Salinas 88 plants inoculated with LMV-AF199 appeared 7 days post-inoculation (dpi) and 15 dpi for LMV-E. The symptoms induced by LMV-AF199 in this cultivar were also more severe than those induced by LMV-E. In order to identify the region of the viral genome responsible for this phenotype, recombinant viruses were constructed between these isolates and the phenotype of each recombinant was analysed. The region encoding proteins P1 and HcPro from LMV-AF199 was associated with the increased virulence in Salinas 88.