RESUMO A presente pesquisa isolou e identificou os principais grupos bacterianos presentes no cultivo de juvenis de tilápia do Nilo na presença de bioflocos e/ou perifíton. Verificou-se a produção de exoenzimas como indicadoras de potenciais fatores de virulência e a capacidade de formação de biofilme. As amostras de água foram retiradas do cultivo das tilápias na presença de bioflocos (T1), cultivo na presença de bioflocos e perifíton (T2), cultivo tradicional (T3) e cultivo na presença de perifíton (T4). Para o crescimento e seleção dos grupos bacterianos foi utilizada a técnica da semeadura em profundidade com os seguintes meios de cultura: Ágar para Contagem em Placas (PCA - DIFCO), Aero Pseudo Seletive Ágar (GSP - Himedia) e Ágar Nutriente (AN - Merck). Foram isoladas 46 cepas, distribuídas da seguinte forma: T1 (n = 12); T2 (n = 10); T3 (n = 14) e T4 (n = 10). Entre os isolados, os gêneros mais frequentes foram: Pseudomonas spp., Aeromonas spp., Staphylococcus spp., Bacillus spp., Mycobacterium spp., Micrococcus spp., e Corybacterium spp. Os isolados bacterianos dos tratamentos T1 e T3 expressaram cinco perfis de virulência enquanto aqueles isolados dos tratamentos T2 e T4 apresentaram dois e três perfis de virulência, respectivamente. Os tratamentos com presença de bioflocos e perifíton (T2) ou somente perifíton (T4) apresentaram bactérias com menor potencial patogênico. Em relação ao crescimento dos peixes, o T1 e T4 possibilitaram maior ganho em peso final.

ABSTRACT The following research isolated and identified the main bacterial groups present in the culture of juvenile Nile tilapia in the presence of bioflocs and/or periphyton. The strains were also tested for the production of exoenzymes, indicative of potential virulence factors, and ability to form biofilm. The water samples were taken from tilapia cultured in the presence of bioflocs (T1), in the presence of bioflocs and periphyton (T2), from traditional culture (T3) and from culture in the presence of periphyton (T4). In the growth and selection of the bacterial groups, pour plate method was used, along with the following media: Plate Count Agar (PCA - DIFCO), Aero Pseudo Selective Agar (GSP - Himedia) and Nutrient Agar (AN - Merck). 46 strains were isolated in the following distribution: T1 (n = 12); T2 (n = 10); T3 (n = 14) and T4 (n = 10). Among the isolates, the most frequent genera were: Pseudomonas spp., Aeromonas spp., Staphylococcus spp., Bacillus spp., Mycobacterium spp., Micrococcus spp., and Corybacterium spp. Bacterial isolates in treatments T1 and T3 tested positive for five virulence profiles each, while those isolated from T2 and T4 for two and three virulence profiles, respectively. Treatments in bioflocs and periphyton (T2) or only periphyton (T4) yielded bacteria of less pathogenic potentials. In relation to the fish growth, T1 and T4 resulted in a higher final weight.

O presente estudo objetivou determinar o perfil de suscetibilidade a antimicrobianos de cepas de Vibrio parahaemolyticus oriundas de ostras “in natura” e congeladas comercializadas em Fortaleza-Brasil. Oitenta e sete (87) cepas foram submetidas ao antibiograma com emprego de nove antibióticos: gentamicina (Gen 10 µg), ampicilina (Amp 10 µg), penicilina G (Pen 10U), ciprofloxacin (Cip 5 µg), cloranfenicol (Clo 30 µg), ácido nalidíxico (Nal 30 µg), tetraciclina (Tet 30 µg), vancomicina (Van 30 µg) e eritromicina (Eri 15 µg). Todas as cepas mostram-se resistentes a pelo menos um antibiótico, e 85 (97,7%) apresentaram multirresistência, com predomínio do perfil Van+ Pen+Amp (n = 46). Foi detectada resistência plasmidial a Pen, Amp e Eri. Dessa forma, o risco que o consumo de ostras cruas representa para a saúde dos consumidores merece ser destacado, uma vez que esses bivalves podem ser veículos de transmissão de micro organismos multirresistentes a fármacos antibacterianos.

The following study aimed to determine the antimicrobial susceptibility profile of Vibrio parahaemolyticus strains from fresh and frozen oysters Crassostrea rhizophorae sold in Fortaleza-Brazil. An antibiogram was performed on 87 isolates using nine antibiotics: gentamicin (Gen 10 µg), ampicillin (Amp 10 µg), penicillin G (Pen 10U), ciprofloxacin (Cip 5 µg), chloramphenicol (Chl 30 µg), nalidixic acid (Nal 30 µg), tetracycline (Tet 30 µg), vancomycin (Van 30 µg) and erythromycin (Ery 15 µg). All strains were resistant to at least one antibiotic, and 85 (97.7%) were multi-resistant, with predominance of the Van+ Pen+Amp resistance profile (n = 46). Plasmid resistance to Pen, Amp and Ery was detected. Thus, the risk that raw oyster consumption poses to the health of consumers is highlighted, due to the fact that these bivalves may host antibacterial-resistant microorganisms.

O objetivo deste estudo foi detectar a presença potencial virulência de Vibrio cholerae isolado de estuários do Nordeste do Brasil. Amostras de água e sedimento foram coletadas e inoculadas sobre meio seletivo para víbrios (TCBS) e colônias com características morfológicas de V. cholerae foram isoladas. A identificação fenotípica seguiu chave dicotômica baseada em caraterísticas bioquímicas. Foram empregadas as técnicas de amplificação da polimerase em cadeia (PCR) utilizando o gene ompW e a de multiplex PCR para detecção de genes de virulência (ctx, tcp, zot e rfbO1). Os resultados da identificação das diferentes abordagens foram comparados. Nove cepas de V. cholerae foram identificadas fenotipicamente e cinco confirmadas através da detecção do gene ompW. A chave dicotômica utilizada foi eficiente para a confirmação da espécie. Os quatro estuários analisados apresentaram estirpes de V. cholerae, e nenhuma das cepas isoladas apresentaram genes de virulência.

The objectives of this study were to detect the presence of Vibrio cholerae in tropical estuaries (Northeastern Brazil) and to search for virulence factors in the environmental isolates. Water and sediment samples were inoculated onto a vibrio-selective medium (TCBS), and colonies with morphological resemblance to V. cholerae were isolated. The cultures were identified phenotypically using a dichotomous key based on biochemical characteristics. The total DNA extracted was amplified by PCR to detect ompW and by multiplex PCR to detect the virulence genes ctx, tcp, zot and rfbO1. The results of the phenotypic and genotypic identification were compared. Nine strains of V. cholerae were identified phenotypically, five of which were confirmed by detection of the species-specific gene ompW. The dichotomous key was efficient at differentiating environmental strains of V. cholerae. Strains of V. cholerae were found in all four estuaries, but none possessed virulence genes.

INTRODUCTION: The present study aimed to survey the Vibrio microbiota of oysters (Crassostrea rhizophorae) obtained from restaurants in Fortaleza, State of Ceará, Brazil, and to identify virulence factors. METHODS: The isolated vibrios were submitted to biochemical identification and were tested for hemolytic and urease activities. RESULTS: The isolated strains belonged to 13 species, with predominance of Vibrio mimicus. Of the strain isolates only from fresh samples, 20.5% and 2.8% showed hemolytic and urease activities, respectively. CONCLUSIONS: The findings support the little-publicized claim that Vibrio species other than V. parahaemolyticus and V. vulnificus can represent a health risk to public health.

Ten out of fifty fresh and refrigerated samples of shrimp (Litopenaeus vannamei) collected from retailers in Natal (Rio Grande do Norte, Northeastern Brazil) tested positive for Vibrio parahaemolyticus. The Kanagawa test and multiplex PCR assays were used to detect TDH and TRH hemolysins and the tdh, trh and tlh genes, respectively. All strains were Kanagawa-negative and tlh-positive. Antibiotic susceptibility testing was done for seven antibiotics by the agar diffusion technique. Five strains (50%) presented multiple antibiotic resistance to ampicillin (90%) and amikacin (60%), while two strains (20%) displayed intermediate-level resistance to amikacin. All strains were sensitive to chloramphenicol. Intermediate-level susceptibility and/or resistance to other antibiotics ranged from 10 to 90%, with emphasis on the observed growing intermediate-level resistance to ciprofloxacin. Half our isolates yielded a multiple antibiotic resistance index above 0.2 (range: 0.14-0.29), indicating a considerable risk of propagation of antibiotic resistance throughout the food chain.

Para avaliação do efeito bactericida frente à Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, Escherichia coli (isolada de pescados e ambiente aquático) e Salmonella Enteretidis, foram testados extratos aquosos e etanólicos de sementes de moringa (Moringa oleifera) e casca de graviola (Annona muricata) na concentração de 1:5 e 1:10, nos volumes de 50, 100, 150 e 200 µL. Os resultados mostraram efeito antibacteriano (halo de inibição > 13mm) dos extratos aquosos e etanólicos de moringa frente a S. aureus, V. cholerae e E. coli isoladas de camarão cinza Litopenaeus vannmaei. A cepa de E. coli isolada do pescado Oreochromis niloticus apresentou sensibilidade frente ao extrato etanólico de moringa. Os extratos aquosos de graviola apresentaram efeito bactericida frente a S. aureus e V. cholerae, entretanto, os extratos etanólicos dessa planta não mostraram atividade antibacteriana.

Antibacterial effects of aqueous and ethanolic extracts of seeds of moringa (Moringa oleifera) and pods of soursop (Annona muricata) in the concentration of 1:5 and 1:10 in volumes 50, 100, 150 and 200 µL were examined against Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, Escherichia coli (isolated from the organism and the aquatic environment) and Salmonella Enteritidis. Antibacterial activity (inhibition halo > 13 mm) against S. aureus, V. cholerae and E. coli isolated from the whiteleg shrimp, Litopenaeus vannmaei, was detected in aqueous and ethanolic extracts of moringa. E. coli isolated from tilapiafish, Oreochromis niloticus, was sensitive to the ethanolic extract of moringa. The aqueous extracts of soursop showed an antibacterial effect against S. aureus and V. cholerae, but the antibacterial activity by the ethanol extracts of this plant was not demonstrated.

The aims of this study were to count and identify sucrose positive and negative vibrios isolated from cultivated Crassostrea rhizophorae oysters during their growing cycle. Every month for 12 months, 10 to 18 oysters were collected for study. Collections occurred at the Center for Studies of Coastal Aquaculture (CSCA), which is associated with the Institute of Marine Science, Labomar, located in Euzebio, Ceará, Brazil. Approximately 150 oysters and their intervalvular liquor were studied. Vibrio Standard Plates Counts (SPC) from oyster meat and their intervalvular liquor varied from 25 to 59,000,000 CFU/g. For most of the 12 months of the oysters' life, it was possible to identify Vibrio parahaemolyticus. Vibrio carchariae was identified in four collections. Among other isolated species, the most important, considering public health risks, was V. vulnificus, although only one strain was confirmed. We concluded that retail purchased oysters should never be eaten raw or undercooked because many species of the genus Vibrio are known to be pathogenic to humans and live naturally on and in shellfish throughout their life cycle.

O objetivo principal desta pesquisa foi estudar os possíveis impactos sobre as comunidades de peixes que vivem em poças de maré na praia de Pecém-CE. O método de censo visual foi utilizado para o registro dos peixes, e a análise microbiológica para verificar a qualidade das águas. No período de março a dezembro de 2001 foram observados 1.425 indivíduos pertencentes a 17 famílias e 25 espécies em três poças estudadas. As espécies mais freqüentes foram Haemulon parra, Acanthurus chirurgus, Abudefduf saxatilis e o Sparisoma axillare. A diversidade média de espécies no período foi de 1,77 bits.ind-1. Durante a pesquisa foi observado um processo crescente de assoreamento na área de estudo, em decorrência da construção do porto de Pecém. No que concerne à balneabilidade das águas dessa praia, a avaliação não mostrou sinais significativos de poluição microbiológica, embora tenha sido detectada a presença de coliformes fecais. Os resultados desta pesquisa poderão servir como referência pioneira para futuros projetos de monitoramento para áreas que venham a sofrer com atividades de construção portuária.

This study aimed to assess the impact of harbor construction at Pecém (Brazil) upon the reef fish communities in tide pools. The monitoring was carried out through a visual census and sea water quality was evaluated by microbiological analyses. From March to December 2001, 1,425 individuals of 17 families and 25 species were registered. The most frequent species were Haemulon parra, Acanthurus chirurgus, Abudefduf saxatilis and Sparisoma axillare. The average species diversity for the whole period was 1.77 bits.ind -1. There was evidence that the tide pools gradually silted up, resulting in a reduction in species diversity and richness. The microbiological analyses indicated the presence of faecal coliforms in the water though not at significant levels. The present study could be useful as an early reference for future projects, using the fish communities as indicators for the impact upon the environment of the harbor construction and other human activities.

As ostras são alimentos marinhos freqüentemente ingeridos crus ou parcialmente cozidos. Por esta razão, o risco para a saúde dos consumidores desses produtos é muito elevado, principalmente, quando são de regiões tropicais. Foi estudada a presença de Vibrio cholerae e Vibrio parahaemolyticus em ostras de um estuário na região Nordeste do Brasil. Trezentas ostras foram analisadas, em um período de 8 meses. A salinidade da água, no local de coleta, variou de 3 a 27‰. V. cholerae foi o vibrio mais freqüentemente detectado (33,3% das amostras). Dos 22 isolados, 20 foram identificados como V. cholerae não-O1/não-O139, duas delas apresentando forma rugosa sendo a maioria das demais pertencente ao tipo fermentativo Heiberg II. V. parahaemolyticus foi isolado em apenas umas das coletas. Foram, também, identificadas nas amostras isolados de Providencia spp., Klebsiella spp., Proteus spp. e Morganella morganii.

Oysters are edible organisms that are often ingested partially cooked or even raw, presenting therefore a very high risk to the consumers' health, especially in tropical regions. The presence of Vibrio cholerae and Vibrio parahaemolyticus in oysters sampled at an estuary in the Brazilian northeastern region was studied, with 300 oysters tested through an 8-months period. The salinity of the water at the sampling point varied between 3% and 27‰. V. cholerae was the most frequently detected species (33.3% of the samples), and of the 22 V. cholerae isolates, 20 were identified as non-O1/non-O139, with two of the colonies presenting a rough surface and most of remaining ones belonging to the Heiberg II fermentation group. V. parahaemolyticus was isolated from just one of the samples. Other bacteria such as Providencia spp., Klebsiella spp. and Morganella morganii were also isolated.

Nos últimos 30 anos várias espécies de Vibrio que vivem em ambientes aquáticos têm sido proclamadas como vetor de doenças que atingem o ser humano. Vibrio vulnificus é um patógeno de origem marinha, com potencial invasor, podendo ser letal. Tem sido relacionado com feridas infeccionadas e responsável por incontáveis casos de gastrenterites e septicemia primária. Sua frequência em organismos marinhos é considerada alta, principalmente em moluscos. Este trabalho objetivou isolar e identificar cepas de Vibrio vulnificus a partir de 20 amostras de camarão sete- barbas, Xiphopenaeus kroyeri (Heller), comercializado na feira de pescado do Mucuripe, Fortaleza, Ceará, Brasil. O ágar TCBS foi usado para isolamento primário e as cepas confirmadas através de provas bioquímicas eram submetidas a testes de virulência em camundongos. Posteriormente as cepas identificadas como Vibrio vulnificus foram testadas em relação à susceptibilidade a antimicrobianos. De 29 cepas, isoladas de 20 amostras, sete (35%), originadas de sete diferentes amostras, foram confirmadas como Vibrio vulnificus, significando alta percentagem de amostras contaminadas. Nenhuma das cepas apresentou virulência após 24 horas de observação, possivelmente devido à perda das cápsulas pela célula. As sete cepas de Vibrio vulnificus mostraram-se sensíveis a nitrofurantoína (NT), ciprofloxacina (CIP), Gentamicina (GN), Cloranfenicol (CO), mas resistentes a Clindamicina (CI), Penicilina (PN) e a Ampicilina (AP).

Over the last 30 years, a number of Vibrio species found in the aquatic environment have been indicated as cause of disease in human beings. Vibrio vulnificus is an emergent pathogen, an invasive and lethal marine bacterium related to wound infection and held accountable for gastroenteritis and primary septicemia. It occurs quite frequently in marine organisms, mainly in mollusks. This study aimed at isolating and identifying strains of V. vulnificus based upon the analysis of twenty samples of seabob shrimp, Xiphopenaeus kroyeri (Heller), purchased at the Mucuripe fish market (Fortaleza, Brazil). TCBS agar was used to isolate suspect strains. Seven of twenty-nine strains isolated from six different samples were confirmed as such by means of biochemical evidence and thus submitted to biological assays to determine their virulence. The susceptibility of the V. vulnificus strains to a number of antibiotics was tested. None of the V. vulnificus strains showed signs of virulence during a 24-hour observation period, possibly due to the shedding of the capsules by the cells. As to the results of the antimicrobial susceptibility tests, the seven above-mentioned V. vulnificus strains were found to be sensitive to nitrofurantoin (NT), ciprofloxacin (CIP), gentamicin (GN) and chloramphenicol (CO) and resistant to clindamycin (CI), penicillin (PN) and ampicillin (AP).

Foram coletadas doze amostras de camarão e peixes nas imediações do interceptor oceânico, em Fortaleza e igual número na Feira de pescado do Mucuripe, Fortaleza, para isolamento de E. coli e Staphylococcus aureus, respectivamente. Extratos aquosos, alcoólicos e cetônicos de broto de goiabeira e de folha de mamão foram testados frente às bactérias para se verificar suas ações antibióticas. As cepas de E. coli utilizadas nos ensaios foram as classificadas como LT positivas. Os extratos de folhas de mamão (Carica papaya Linn) não revelaram quaisquer atividades antibióticas enquanto que os preparados com broto de goiabeira (Psidium guajava Linn) apresentaram halos sempre >13 mm para as duas espécies, considerados como de inibição pelo método empregado. Os extratos de broto de goiabeira que apresentaram melhores resultados frente às cepas de E. coli ETEC foram os alcoólicos a 50% seguido do cetônico também a 50%. Concluímos que nos tratamentos de diarréias causadas por E. coli ou por toxinas elaboradas por S. aureus o extrato de brotos de goiabeira é uma opção devido a sua pronta ação curativa, seu fácil cultivo nos países tropicais e ao seu baixo valor aquisitivo.

Out of the twenty-four samples of shrimp and fish muscle used for this study, twelve were collected near a large marine sewer for waste disposal, 3 km off the coast of Fortaleza (Brazil) and used for the isolation of E. coli. Other twelve were collected at the Mucuripe fresh fish market (Fortaleza, Brazil) and used for the isolation of Staphylococcus aureus. Ethanol, water and acetone-diluted extracts of guava and papaya leaf sprouts were tested on the bacteria in order to verify their microbicidal potential. The E. coli strains used in the trials were rated LT positive. The papaya leaf extracts (Carica papaya Linn) showed no microbicidal activity while the guava sprout extracts (Psidium guajava Linn) displayed halos exceeding 13 mm for both species, an effect considered to be inhibitory by the method employed. Guava sprout extracts by 50% diluted ethanol most effectively inhibited E. coli (EPEC), while those in 50% acetone were less effective. It may be concluded that guava sprout extracts constitute a feasible treatment option for diarrhea caused by E. coli or by S. aureus-produced toxins, due to their quick curative action, easy availability in tropical countries and low cost to the consumer.

No presente trabalho, avaliou-se a presença de contaminação fecal e de microrganismos patogênicos em areia seca e areia úmida de três praias de Fortaleza, Ceará: Praia do Mucuripe, Praia do Futuro e Praia do Caça e Pesca. A praia que apresentou maior índice de contaminação com E.coli em areia seca foi a do Caça e Pesca (56%), seguido das praias do Mucuripe (28%) e Futuro (16%). Em areia úmida a ordem decrescente de contaminação por E. coli foi Praia da Caça e Pesca, Futuro e Mucuripe com 48%, 28% e 24% de contaminação, respectivamente. Salmonella foi isolada de duas amostras da Praia do Futuro, uma de areia seca e outra de areia úmida. V. parahaemolyticus foi isolado em 2 amostras de areia seca e 2 de úmida da Praia da Caça e Pesca. Esse patógeno foi isolado de uma amostra de areia úmida da Praia do Futuro e de três de areia úmida e quatro de areia seca da Praia do Mucuripe. As leveduras encontradas em todas as amostras pertenciam ao gênero Candida. O índice de contaminação por leveduras foi maior em amostras de areia seca que de areia úmida. A praia que apresentou maior contaminação por leveduras foi a Praia do Futuro (41%), seguida da Praia do Caça e Pesca e (33%) e da Praia do Mucuripe (26%).

The presence of faecal contamination and pathogenic microorganisms in samples of dry and wet sand collected from three major beaches in Fortaleza, Ceará State, Brazil: (Praia do Mucuripe, Praia do Futuro and Praia do Caça e Pesca), during the period of May 1999 to January 2000 was evaluated. Praia do Caça e Pesca had the highest incidence of E. coli in dry sand (56%) followed by Praia do Mucuripe (28%) and Praia do Futuro (16%). In wet sand, results were 48%, 28% and 24% for Praia do Caça e Pesca, Praia do Futuro and Praia do Mucuripe, respectively. Only two samples from Praia do Futuro, one from dry sand and another one from wet sand, were positive for Salmonella. V. parahaemolyticus was isolated from four samples from Praia do Caça e Pesca (two from dry-sand samples and two from wet-sand), one from Praia do Futuro (wet sand), and three and four from Praia do Mucuripe (wet and dry sand, respectively). Yeasts belonged to the Candida genus. Dry-sand samples presented higher yeast contaminations level than wet-sand ones. Praia do Futuro had the highest level of yeast contamination (41%), followed by Praia do Caça e Pesca (33%) and Praia do Mucuripe (26%).