Descreve-se um procedimento rápido para extração de DNA genômico de isolados de Staphylococcus aureus capaz de produzir DNA estafilocócico em qualidade e quantidade suficiente para a amplificação de genes que codificam enterotoxinas estafilocócicas (A - E) e para TSST-1 e restrição enzimática (HaeIII) de isolados ambientais. O método proposto foi capaz de detectar esses genes em um produto de extração contendo tanto quanto 10(5) células, e reações positivas de PCR foram obtidas de aproximadamente 10pg de DNA.

This study describes a rapid procedure for the isolation of genomic DNA from Staphylococcus aureus that yielded a good amount of high quality DNA for the amplification of staphylococcal enterotoxins genes (A, B, C, D, and E) and the TSST-1 gene as well as enzymatic restriction (HaeIII) from environmental isolates. With this method, it was possible to detect these genes in a sample containing as little as 10(5) cells with positive PCR reactions obtained from approximately 10pg of DNA in a final reaction volume of 25µl.

RESUMO Durante um período de 2 anos (20032004), 132 cepas de Staphylococcus aureus isoladas de leite cru foram coletadas de diferentes regiões de Piracicaba, no Estado de São Paulo. Foi investigada a presença dos genes de enterotoxinas (ent) e genes da Toxina-1 da Síndrome do Choque Tóxico (tst). A reação da polimerase em cadeia (PCR) foi executada usando 6 pares de oligonucleotídeos específicos para cada gene em questão. Noventa e quatro isolados (68,18%) se mostraram positivos para a presença de um (47 isolados) ou mais genes (43 isolados). A combinação da presença de entA e tst mostrou alta prevalência (33 isolados). Houve boa correlação entre a presença do gene e a produção/detecção da toxina, feita pelo teste da sensibilidade ótima em placas (OSP), que foi observada quando 44,44% dos isolados mostraramse positivos para a produção de toxina.

ABSTRACT During a 2-year period (2003-2004), 132 strains of Staphylococcusaureus isolated from crude milk (without thermal treatment) collected in different places in Piracicaba, São Paulo State, Brazil, were investigated for the presence of genes for enterotoxins (ent) and toxic shock syndrome toxin-1 (tst). Polymerase-chain reaction (PCR) was performed by using 6 pairs of relevant oligonucleotide primers. Ninety isolates (68.18%) were positive for (47 strains) or 2 (43 strains) toxin genes. The combination of entA and tst showed the highest prevalence (33 strains).The good correlation between PCR results and toxin protein detection and identification by optimum-sensitivity-plate (OSP) test was observed when 44.45% of strains showed positive for toxin production.