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Revista Habanera de Ciencias Médicas

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Inmunofenotipo linfocitario en pacientes adultos cubanos convalecientes de COVID-19 con antecedentes de inmunodeficiencias
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Torres Rives, Bárbara

; Roblejo Balbuena, Hilda

; Pereira Roche, Nayade

; Zúñiga Rosales, Yaíma

; Martínez Téllez, Goitybell

; Rodríguez Pelier, Cira

; Marín Padrón, Lilia Caridad

; Marcheco Teruel, Beatriz

Revista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia

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- Sobre o periódico
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2025, Volume 41 elocation e2147

Abstract: Es En | Text: Es En | PDF: Es | PDF: En

RESUMEN Introducción: Las consecuencias de la infección por SARS-CoV-2 son objetivos primarios de investigaciones debido al conocimiento insuficiente sobre los efectos de este virus, en especial en pacientes con inmunodeficiencias. Objetivo: Caracterizar el inmunofenotipo linfocitario en adultos cubanos convalecientes de COVID-19 con antecedentes de inmunodeficiencias. Métodos: Se realizó un estudio descriptivo, transversal en el Centro Nacional de Genética Médica, La Habana, Cuba, que incluyó 251 convalecientes de COVID-19; de ellos, 10 con antecedentes de inmunodeficiencias. Se cuantificaron las subpoblaciones de linfocitos B (CD19+), linfocitos T (CD3+CD4+, CD3+ CD8+) y células asesinas naturales (CD3-CD56+) mediante citometría de flujo. Se analizaron los valores porcentuales y el conteo absoluto mediante la prueba Z de comparación de proporciones y la prueba de Mann Whitney, con un nivel de significación de p< 0,05. Resultados: Predominó el antecedente de déficit de anticuerpos (90 %) como tipo de inmunodeficiencia. El número de células asesinas naturales, fue menor en los convalecientes con inmunodeficiencia respecto a los que no presentaron esta condición tanto en porcentaje (p=0,014) y como en el conteo absoluto (p= 0,034). Conclusiones: Los convalecientes cubanos de la COVID-19 con antecedentes de inmunodeficiencias presentaron alteraciones del inmunofenotipo linfocitario, condición que los predispone a desarrollar complicaciones relacionadas con el sistema inmune.

ABSTRACT Introduction: T he consequences of SARS-CoV-2 infection have become primary objectives of global research, due to insufficient results on the effects of this infection over time, especially in patients with immunodeficiencies. Objective: To characterize the lymphocyte immunophenotype in Cuban patients convalescents from COVID-19 with a history of immunodeficiency. Methods: An analytical, cross-sectional study was carried out at the National Center for Medical Genetics, Havana, Cuba, which included 10 convalescents with a history of immunodeficiencies and 241 without a diagnosis of immunodeficiencies. The subpopulations of B lymphocyte (CD19+), T lymphocytes (CD3+CD4+, CD3+ CD8+) and natural killer cells (NK, CD3-CD56+) were quantified using flow cytometry (Beckman Coulter Gallios). Percentage values and absolute were analyzed using the Z test for comparing proportions and the nonparametric Mann-Whitney test. In all cases, p<0.05 was shown as the level of statistical significance. Results: 3.98% of the convalescents had a diagnosis of immunodeficiency with a predominance of antibody defects (90%). The percentage of natural killer cells (U=655.0; p=0.0145) and absolute count (U=729.0; p=0.0344) were lower in convalescents with immunodeficiency compared to those who did not have this condition. Conclusions: Cuban COVID-19 convalescents with a history of immunodeficiencies presented alterations in the lymphocyte immunophenotype, which predispose them to develop complications related to the immune system.

Anticuerpos antifosfolípidos determinados mediante ensayos de inmunoabsorción ligada a enzimas en pacientes con síndrome antifosfolipídico, artritis reumatoidea y lupus eritematoso sistémico
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Martínez Téllez, Goitybell

; Torres Rives, Bárbara

; Martiatu Hendrich, Maité

; Sánchez Rodríguez, Vicky

; Zúñiga Rosales, Yaima

Acta bioquímica clínica latinoamericana

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- Sobre o periódico
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dec 2024, Volume 58 N. 4 Pages 325 - 331

Abstract: Es En Pt | Text: Es En Pt | PDF: Es | PDF: En | PDF: Pt

Resumen El síndrome antifosfolipídico puede ser primario o secundario a enfermedades autoinmunes. Los anticuerpos antifosfolípidos anticardiolipina y anti-β2 glicoproteína I forman parte de los criterios de clasificación de esta enfermedad. El objetivo del trabajo fue comparar el valor diagnóstico del inmunoensayo para la determinación de anticuerpos anticardiolipina/ β2-glicoproteína I con el inmunoensayo de determinación de anticuerpos antifosfolípidos (anticardiolipina/β2-glicoproteína I/fosfatidilserina/ fosfatidilinositol/fosfatidiletanolamina/fosfatidilcolina y esfingomielina), en pacientes cubanos con síndrome antifosfolipídico. Además, se estimó la frecuencia de estos anticuerpos en pacientes con lupus eritematoso sistémico y artritis reumatoidea que tuvieron manifestaciones vasculares u obstétricas. La muestra fue de 34 pacientes con síndrome antifosfolipídico, 38 con lupus eritematoso sistémico, 33 con artritis reumatoidea y 89 controles con otras enfermedades. Los anticuerpos se determinaron mediante ensayos de inmunoabsorción ligada a enzimas. La frecuencia de anticuerpos fue superior en pacientes con síndrome antifosfolipídico en comparación con todos los grupos, para el ensayo anticardiolipina/ β2-glicoproteína I con títulos moderados o elevados (>40 U/mL) y para el ensayo de anticuerpos antifosfolípidos. No se observaron diferencias en el balance sensibilidad/especificidad entre ambos inmunoensayos, determinado por el área bajo la curva ROC (p=0,9906). Los inmunoensayos estudiados en pacientes cubanos con síndrome antifosfolipídico tienen un valor diagnóstico semejante. La presencia de los anticuerpos anticardiolipina/ β2-glicoproteína I en títulos moderados o elevados podría influir en la diferenciación de pacientes con síndrome antifosfolipídico primario y pacientes con otras enfermedades autoinmunes y con manifestaciones vasculares u obstétricas.

Abstract Antiphospholipid syndrome can be primary or secondary to autoimmune diseases. Anti-cardiolipin and anti-β2-glycoprotein I antiphospholipid antibodies are part of the classification criteria of the disease. The objective was to compare the diagnostic value of the immunoassay for the determination of antibodies against cardiolipin/β2-glycoprotein I with the immunoassay for the determination of antiphospholipid antibodies against cardiolipin, β2-glycoprotein I, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, phosphatidylethanolamine, phosphatidylcholine and sphingomyelin in Cuban patients with antiphospholipid syndrome. Also, the frequency of antibodies in systemic lupus erythematosus and rheumatoid arthritis patients with vascular or obstetric manifestations was estimated. The sample was of 34 patients with antiphospholipid syndrome, 38 with systemic lupus erythematosus, 33 with rheumatoid arthritis and 89 controls with other diseases. Antiphospholipid antibodies were determined by enzyme-linked solid-phase immunoassays. The frequency of antibodies was higher in patients with antiphospholipid syndrome compared to other groups, for anti-cardiolipin/b2-glycoprotein I assay with moderate or high titers (>40 U/mL). There was no difference between the sensitivity/specificity balance determined by the area of the ROC curve between both immunoassays (p=0.9906). The immunoassays studied in Cuban patients with antiphospholipid syndrome have similar diagnostic value. The presence of anti-cardiolipin/ β2-glycoprotein I antibodies in moderate or high titers could influence the differentiation of patients with primary antiphospholipid syndrome and patients with other autoimmune diseases and vascular or obstetric manifestations.

Resumo A síndrome antifosfolípide pode ser primária ou secundária a doenças autoimunes. Anticorpos antifosfolípides, anticardiolipina e anti-β2-glicoproteína fazem parte dos critérios de classificação desta doença. O objetivo do trabalho foi comparar o valor diagnóstico do imunoensaio para determinação de anticorpos anti-cardiolipina/β2-glicoproteína I com o imunoensaio de determinação de anticorpos anti-fosfolipídeos (anti-cardiolipina/β2-glicoproteína I/fosfatidilserina/fosfatidilinositol/ fosfatidiletanolamina/fosfatidilcolina e esfingomielina) em pacientes cubanos com síndrome antifosfolípide. Além disso, a frequência desses anticorpos foi estimada em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico e artrite reumatoide que apresentavam manifestações vasculares ou obstétricas. A amostra foi composta por 34 pacientes com síndrome antifosfolípide, 38 com lúpus eritematoso sistêmico, 33 com artrite reumatoide e 89 controles com outras doenças. Os anticorpos foram determinados através de ensaios de imunoabsorção ligada a enzimas. A frequência de anticorpos foi maior em pacientes com síndrome antifosfolípide em comparação com todos os grupos, para o ensaio anticardiolipina/b2-glicoproteína I em títulos moderados ou elevados (>40 U/mL) e para o ensaio de anticorpos antifosfolípides. Não foram observadas diferenças no equilíbrio sensibilidade/ especificidade entre os dois imunoensaios, determinado pela área sob a curva ROC (p=0,9906). Os imunoensaios estudados em pacientes cubanos com síndrome antifosfolípide têm valor diagnóstico semelhante. A presença dos anticorpos anticardiolipina/β2-glicoproteína I em títulos moderados ou elevados poderia influenciar a diferenciação de pacientes com síndrome antifosfolípide primária e pacientes com outras doenças autoimunes e com manifestações vasculares ou obstétricas.

Primer brote de COVID-19 en Cuba. Factores de riesgo de morbimortalidad y respuesta específica de anticuerpos en convalecientes
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Zúñiga-Rosales, Yaíma

; Marcheco-Teruel, Beatriz

; Roblejo-Balbuena, Hilda

; Monzón-Benítez, Giselle

; Sotomayor-Lugo, Francisco

; Peralta, Estela Morales

; Torres-Rives, Bárbara

; Pereira-Roche, Nayade

; Suárez-Besil, Beatriz

; Bravo-Ramírez, Maidalys

; Álvarez-Gavilán, Yudelmis

; González-Torres, María de los A.

; Collazo-Mesa, Teresa

; Marín-Padrón, Lilia Caridad

; Rodríguez-Pelier, Cira Virgen

; Benítez-Cordero, Yudelkis

; Orosa-Vázquez, Ivette

; Carmenate-Portilla, Tania

; Díaz-Hernández, Marianniz

; Chang-Calderón, Janoi

; Sánchez-Ramírez, Belinda

; Silva-Aycaguer, Luis Carlos

; Gómez-Cabezas, Enrique Javier

; Travieso-Tellez, Anitery

; Pérez-Trujillo, José

; García-Gómez, Dayana

; Quintana-Hernández, Daniel

; Perdomo-Arriens, Juan Carlos

; Ferriol-Dorticós, Diana

; Noa-Machado, María Dolores

; Cirera-Díaz, Yadira

; Sarmientos-Fleitas, Mariley

; Angulo-Cebada, Elizabeth

; Orive-Rodríguez., Nora María

; Santana-Hernández, Elayne Esther

; Vargas-Cruz, Iliana

; Argüellez-Arza, Margarita Aurora

; Tissert-Tamayo, Ana Irsi

; Acosta-Acea, Rolando

; Valdivia-Alvarez, Irinia

; Delahanty-Fernández, Aurora

; Palenzuela-Díaz, Ariel

; Ortega-León, Darien

; Romero-Carrazana, Roberto Yaniel

; Somarriba-López, Lorenzo

; Pereda-González, Ricardo

; Sabina-Martínez, Roberto Rafael

; Bess-Constantén, Sonia

; Martínez-Morales, Miguel Ángel

; Armas-Fernández, José Raúl de

; Enríquez-Puertas, Juliet María

; García-Rivera, Dagmar

; Alerm-González., Alina

; Durán-García, Francisco

; Portal-Miranda, José Ángel

Anales de la Academia de Ciencias de Cuba

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mar 2024, Volume 14 N. 1 elocation e1517

Abstract: Es En | Text: Es En | PDF: Es | PDF: En

resumen está disponible en el texto completo

ABSTRACT Introduction: The variability in clinical severity among patients with COVID-19 and the development of severe symptoms, as well as the evolution of convalescents, may be due to possible models that combine genetic and non-genetic risk factors. Objective: To characterize the risk factors for morbidity and mortality and the specific response of anti-SARS-CoV-2 antibodies during convalescence, in relation to severity, in patients recovered from the first COVID-19 outbreak in Cuba. Methods: It was carried out a cross-sectional study of 1182 cases confirmed between March 11th and June 11th of 2020. They were divided into three groups: asymptomatic, those with mild or moderate symptoms and severely ill patients. They were determined the ABO blood group, the study of gene polymorphisms related to the immune response, lymphocyte subpopulations, and the anti-SARS-CoV-2 antibody response in convalescence. They were also analyzed data of 84 deaths by COVID-19. Results: The risk of death after contracting the disease was 12.6 times higher in persons over 60 years of age (95%CI 6.3;25.2), and 2.4 times higher in men than in women (95% CI 1.4;4.2). Persons with chronic kidney disease, diabetes mellitus or cancer, had a higher risk of dying. They were identified the -308A>G polymorphisms of the TNF alpha gene, A16974C of the IL-12 p40 gene, and TaqI of the VDR gene as possible predisposing factors for the development of symptomatic forms. It was found in convalescent patients with severe forms an increase in CD3 + CD8 + and NK cells. It was found total anti-SARS-CoV-2 antibodies in the serum in 62.2% of the convalescents (95% CI 59.1;65.4). Seropositivity to total anti-SARS-CoV-2 antibodies, specific IgG antibody titers against the receptor-binding domain (RBD), its ability to inhibit the RBD-angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) receptor bond and its avidity, were higher in cases with severe forms of COVID-19. Conclusions: The vulnerabilities identified in population groups, as well as the characteristics of the humoral anti-SARS-CoV-2 response during convalescence, provided useful evidence for the dynamic updating of the action protocols in the country, including the immunization strategies. This study allowed us to have our own references to evaluate the immunogenicity of Cuban vaccine candidates.

Niveles de protección contra Haemophilus influenzae tipo b en niños, adolescentes y adultos cubanos
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Rodríguez-Pelier, Cira

; Zúñiga-Rosales, Yaíma

; Torres-Rives, Bárbara

; Martínez-Perera, Adonay

; Cruz-Albelo, Dayamnis María

Vaccimonitor

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2023, Volume 32 elocation e01123

Abstract: Es En | Text: Es En | PDF: Es | PDF: En

RESUMEN La concentración de los anticuerpos contra el polisacárido capsular polirribosilribitol fosfato del Haemophilus influenzae tipo b se considera un buen indicador serológico para evaluar protección contra la enfermedad invasiva. Existen pocos reportes que estudien la inmunidad serológica en Cuba. El objetivo general de este estudio fue determinar los niveles de protección séricos contra Haemophilus influenzae tipo b en niños, adolescentes y adultos cubanos, en una muestra de 575 individuos. Se cuantificó la concentración de IgG anti-polirribosilribitol fosfato de Haemophilus influenzae tipo b mediante un inmunoensayo enzimático estandarizado y validado en el laboratorio de inmunología del Centro Nacional de Genética Médica, La Habana, Cuba. Se determinaron las concentraciones medias geométricas de anticuerpos y los niveles de protección frente a la enfermedad invasiva por Haemophilus influenzae tipo b. La concentración media geométrica de IgG anti-polirribosilribitol fosfato fue de 1,94 μg/mL (IC95% 1,80; 2,08) y fue mayor en el grupo de 16 a 22 años. El porcentaje con protección de larga duración fue mayor para el sexo femenino que para el masculino (82,2% vs 71,4%; p=0,0339) entre los que poseían inmunidad natural. El grupo de sujetos nacidos en el periodo en que se vacunó con la vacuna conjugada cubana QUIMI-HIB® presentó concentraciones medias geométricas superiores (2,75 μg/mL, IC95% 2,00; 3,79). El 99,1% de los participantes presentó protección frente a la enfermedad invasiva por Haemophilus influenzae tipo b, el 19,8% a corto plazo y el 79,3% protección de larga duración. El inmunoensayo validado para la cuantificación de IgG anti-polirribosilribitol fosfato podría emplearse en estudios de seroprevalencia. En los sujetos estudiados, se encontró un predominio de elevadas concentraciones de IgG anti- polirribosilribitol fosfato del Haemophilus influenzae tipo b que confieren protección de larga duración.

ABSTRACT The levels of antibodies directed against the capsular polysaccharide polyribosylribitol phosphate of Haemophilus influenzae type b are considered a good serological indicator to assess the immunity against invasive disease. In Cuba, there are few reports that study serological immunity. The general objective was to determine serum protection levels against Haemophilus influenzae type b in Cuban children, adolescents and adults, in a sample of 575 Cuban individuals. The concentration of IgG against Haemophilus influenzae type b was quantified by means of an indirect ELISA standardized and validated in the immunology laboratory of the National Center of Medical Genetics, Havana, Cuba. The geometric mean concentration of IgG anti- polyribosylribitol phosphate and the levels of protection against invasive Haemophilus influenzae type b disease were determined. The geometric mean concentration of IgG anti- polyribosylribitol phosphate was 1.94 μg/mL (95%CI 1.80;2.08) and the group from 16 to 22 years old presented the highest. Among those with natural immunity, the percentage with long-term protection was higher for females vs. males (82.2% vs. 71.4%; p=0.0339). The group of subjects born in the period in which they were vaccinated with the Cuban conjugate vaccine QUIMI-HIB® presented higher geometric mean concentration (2.75 μg/mL, CI95% 2.00; 3.79). The 99.1% of the participants had protection against invasive Haemophilus influenzae type b disease, 19.8% short-term and 79.3% long-term protection. The ELISA for the quantification of anti- Haemophilus influenzae type b IgG antibodies, developed and validated, could be used in seroprevalence studies. In the subjects studied, there was a predominance of high IgG anti- Haemophilus influenzae type b polyribosylribitol phosphate concentration values that confer long-term protection.

Niveles glutatión reducido y estado redox celular en pacientes pediátricos con inmunodeficiencias
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Riverón Forment, Gretel

; Zúñiga Rosales, Yaíma

; Torres Rives, Bárbara

; Pérez Rodríguez, Jacqueline

; Marín Padrón, Lilia

; Camayd Viera, Ivette

Revista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia

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jun 2022, Volume 38 N. 2 elocation e1602

Abstract: Es En | Text: Es En | PDF: Es | PDF: En

RESUMEN Introducción: Las alteraciones en el estado redox celular se han descrito como factores causales en diversas enfermedades. La depleción del glutatión reducido se ha asociado fundamentalmente a enfermedades neurodegenerativas, pulmonares, hepáticas, cardiovasculares e inmunológicas. Objetivo: Determinar las concentraciones de glutatión reducido y el estado redox celular en pacientes pediátricos con inmunodeficiencias. Métodos: Se estudiaron 21 pacientes con inmunodeficiencias procedentes de la consulta de Inmunogenética, en edades comprendidas entre 1 y 8 años, de ambos sexos, y 8 niños en el mismo rango de edad de los pacientes, como grupo control, con estudios de inmunidad humoral y celular normales. Los pacientes con diagnóstico de inmunodeficiencia se dividieron para su estudio en 2 grupos según el componente afectado de la respuesta inmune: humoral y celular. Fueron determinadas las concentraciones intraeritrocitarias de glutatión reducido y oxidado, mediante un método de HPLC-UV. Para evaluar el estado redox celular se calculó la relación entre las formas reducidas y oxidadas del glutatión (GSH/GSSG). Resultados: Las concentraciones de glutatión reducido y el estado redox celular se encontraron disminuidos en ambos grupos de pacientes en relación con los niños sin inmunodeficiencia (p=0,031 y p=0,03; respectivamente). El glutatión oxidado no mostró diferencias entre los grupos. Conclusiones: En los pacientes con inmunodeficiencia se evidenció la afectación del estado redox celular como consecuencia de la disminución del glutatión reducido. Este primer acercamiento ofreció las potencialidades del empleo de estos biomarcadores en la evaluación integral de pacientes con inmunodeficiencia.

ABSTRACT Introduction: Alterations in the cellular redox state have been described as causal factors in various diseases. Reduced glutathione depletion has been fundamentally associated with neurodegenerative, pulmonary, liver, cardiovascular and immunological diseases. Objective: To determine the concentrations of reduced glutathione and the cellular redox status in pediatric patients with immunodeficiencies. Methods: We studied 21 patients with immunodeficiencies from the immunogenetic service, aged between 1 and 8 years and as a control group, 8 children in the same age range as the patients, with normal humoral and cellular immunity studies. Patients diagnosed with immunodeficiency were divided into two groups according to the affected component of the immune response: humoral and cellular. The intraerythrocyte concentrations of oxidized and reduced glutathione were determined by means of an HPLC-UV method. To evaluate the cellular redox state, the relationship between the reduced and oxidized forms of glutathione (GSH/GSSG) was calculated. Results: Reduced glutathione concentrations and cellular redox status were found to be decreased in both groups of patients in relation to children without immunodeficiency (p=0,031 and p=0,03; respectively). Oxidized glutathione showed no difference between the groups. Conclusions: In patients with immunodeficiency, the cellular redox state is affected as a consequence of the decrease in reduced glutathione. This first approach offers the potential for the use of these biomarkers in the comprehensive evaluation of patients with immunodeficiency.

Hematological Alterations in Patients Recovered from SARS-CoV-2 Infection in Havana, Cuba
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Pereira-Roche, Nayade

; Roblejo-Balbuena, Hilda

; Marín-Padrón, Lilia C.

; Izaguirre-Rodríguez, Rodolfo

; Sotomayor-Lugo, Francisco

; Zúñiga-Rosales, Yaima

; González-Torres, María de los Ángeles

; Pérez-Rodríguez, Jacqueline

; Álvarez-Gavilán, Yudelmis

; Torres-Rives, Bárbara

; Bravo-Ramírez, Maidalys

; Benítez-Codero, Yudelkis

; Monzón-Benítez, Giselle

; Silva-Ayçaguer, Luis C.

; Marcheco-Teruel, Beatriz

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jun 2022, Volume 24 N. 2 Pages 7 - 14

Abstract: En | Text: En | PDF: En

Abstract INTRODUCTION COVID-19 sequelae, or the short-, medium-, and long-term manifestations of the disease are under continuous study. There are currently few reports on the evolution of hematological variables following a demonstrated absence of SARS-CoV-2 after infection. OBJECTIVE Identify hematological alterations in Cuban adults recovered from SARS-CoV-2 infection, and their relation with disease severity. METHODS We selected 348 persons recovered from COVID-19 residing in Havana, Cuba with an RT-PCR study negative for SARS-CoV-2 performed two weeks after hospital discharge; a structured survey was administered to obtain clinical–epidemiological data. Three groups were established according to COVID-19 clinical criteria: asymptomatic, mild/moderately symptomatic, and severely symptomatic, which, in turn, were divided according to hospital discharge date and blood sample collection date. We performed hemograms with differential leukocyte counts and compared results among groups. We then measured the associations between hematological variables, personal medical history, and relevant lifestyle habits (smoking). RESULTS All hematological variables were within normal reference limits, although men from the group of severely ill patients had increased total leukocytes, neutrophils and lymphocytes, and decreased hemoglobin and eosinophils, which was also evident in those with a recovery time of 31–90 days. CONCLUSIONS The relation between hematological variables and degree of clinical severity offers evidence as to persistence of systemic alterations (possibly inflammatory) associated with viral infection. Their identification and characterization can facilitate personalized patient followup and rehabilitation.

https://doi.org/10.37757/mr2021.v24.n2.1

Anticuerpos contra el citoplasma del neutrófilo y actividad clínica en pacientes cubanos con artritis reumatoide
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Martínez Téllez, Goitybell

; Torres Rives, Barbara

; Sánchez Rodríguez, Vicky

Revista Habanera de Ciencias Médicas

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oct 2021, Volume 20 N. 5 elocation e3924

Abstract: Es En | Text: Es En | PDF: Es | PDF: En

RESUMEN Introducción: Los anticuerpos contra el citoplasma del neutrófilo se detectan normalmente en pacientes con vasculitis. Aunque estos anticuerpos pueden estar presentes en un amplio número de enfermedades asociadas a estados inflamatorios y autoinmunes, como la artritis reumatoide, no se ha demostrado su significado clínico. Objetivo: evaluar la utilidad de diferentes especificidades antigénicas de los anticuerpos contra el citoplasma del neutrófilo para medir la actividad clínica en pacientes cubanos con artritis reumatoide. Material y Métodos: Se realizó un estudio transversal con 77 pacientes cubanos con artritis reumatoide. Se determinaron la velocidad de sedimentación globular, la proteína C reactiva, el indicador clínico de actividad de la enfermedad, los anticuerpos anti-proteínas citrulinadas, el factor reumatoide y los anticuerpos contra el citoplasma del neutrófilo frente a diferentes especificidades antigénicas. Resultados: La mayor cantidad de pacientes con actividad clínica elevada (> 5,1) pertenecieron al grupo de pacientes positivos de anticuerpos contra el citoplasma del neutrófilo (p=0,0364). Los pacientes con anticuerpos anti-lactoferrina tuvieron mayores valores de actividad clínica (p=0,0304). Mediante análisis multivariado se demostró la influencia de la positividad de anticuerpos anti-lisozima (p=0,0391), de la positividad doble de los anticuerpos anti-proteínas citrulinadas y anti-lactoferrina (p=0,0282), así como de la doble positividad de los anticuerpos anti-proteínas citrulinadas y anti-elastina (p=0,0182) en la actividad clínica. Conclusión: La presencia de anticuerpos contra el citoplasma del neutrófilo que reconocen las especificidades antigénicas lisozima, lactoferrina y elastina se relacionan con mayor actividad clínica en pacientes con artritis reumatoide.

ABSTRACT Introduction: Antibodies against neutrophil cytoplasm are normally detected in patients with vasculitis. Although these antibodies can be present in a wide number of diseases associated with inflammatory and autoimmune conditions such as rheumatoid arthritis, their clinical significance has not been demonstrated. Objective: To evaluate the usefulness of different antigenic specificities of antibodies against neutrophil cytoplasm to measure the clinical activity in Cuban patients with rheumatoid arthritis. Material and Methods: A cross-sectional study was conducted on 77 Cuban patients with rheumatoid arthritis. Erythrocyte sedimentation rate, C-reactive protein, the clinical indicator of disease activity, anti-citrullinated protein antibodies, rheumatoid factor, and antibodies against neutrophil cytoplasm against different specificities were determined. Results: The largest number of patients with elevated disease activity (> 5.1) belonged to the group of antibodies against neutrophil cytoplasm positive patients (p=0.0364). Patients with anti-lactoferrin antibodies had higher disease activity values (p=0.0304). Through multivariate analysis, the influence of positive anti-lysozyme antibodies (p=0.0391), of double positivity of anti-citrullinated protein and anti-lactoferrin antibodies (p=0.0282), as well as that of double positivity of anti-citrullinated protein and anti-elastin antibodies (p=0.0182) on disease activity were demonstrated. Conclusion: The antibodies against neutrophil cytoplasm that recognize the antigenic specificities of lysozyme, lactoferrin and elastin are related to higher clinical activity in patients with rheumatoid arthritis.

Relación entre el estado redox celular y marcadores sistémicos de inflamación
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Forment, Gretel Riverón

; Sánchez, Tatiana Acosta

; Padrón, Lilia Caridad Marín

; Rosales, Yaíma Zúñiga

; Rives, Bárbara Torres

; Rodríguez, Jacqueline Pérez

Revista Finlay

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sep 2021, Volume 11 N. 3 Pages 316 - 322

Abstract: Es En | Text: Es En | PDF: Es | PDF: En

RESUMEN Fundamento: la relación entre la forma reducida y oxidada del glutatión, GSH/GSSG, es frecuentemente utilizada como indicador del estado redox celular. En las condiciones donde se generan altos niveles de especies oxidantes, se pueden aumentar los requerimientos de glutatión reducido, y por tanto, afectarse el estado redox celular. Objetivo: determinar la relación entre el estado redox celular y marcadores sistémicos de inflamación. Métodos: se realizó un estudio descriptivo en una serie de 56 casos remitidos de la consulta de inmunogenética, en edades comprendidas entre 1 y 76 años, de ambos sexos. Se determinaron la velocidad de eritrosedimentación y los niveles séricos de proteína C-reactiva como marcadores sistémicos de inflamación. La relación GSH/GSSG se calculó a partir de las concentraciones intraeritrocitarias de glutatión reducido y su forma oxidada, las que fueron determinadas mediante un método de HPLC-UV. Resultados: la relación GSH/GSSG promedio fue de 7,9 (IC 95 %:6,4-9,4) y la edad no influyó en esta proporción. En los casos que tenían valores alterados de los marcadores de inflamación, mostraban una disminución en la relación GSH/GSSG. El estado redox celular se correlacionó negativamente con los valores de la eritrosedimentación (r=-0,41; p=0,017). Sin embargo, esta asociación no aparece cuando se analizan los niveles de proteína C-reactiva. Conclusiones: los pacientes que presentan alteraciones en los marcadores de inflamación muestran cambios en el estado redox celular. El estudio combinado de estos biomarcadores permite realizar un análisis integral del estado de salud del paciente con enfermedades inflamatorias.

ABSTRACT Background: the relationship between the reduced and oxidized form of glutathione, GSH/ GSSG, is frequently used as an indicator of the cellular redox state. Under conditions where high levels of oxidizing species are generated, reduced glutathione requirements can be increased, and therefore, the cellular redox state can be affected. Objective: to determine the relationship between the cellular redox state and systemic markers of inflammation. Methods: a descriptive study was carried out in a series of 56 cases referred from the immunogenetics clinic, aged between 1 and 76 years old, of both sexes. Erythrocyte sedimentation rate and serum levels of C-reactive protein were determined as systemic markers of inflammation. The GSH/GSSG ratio was calculated from the intraerythrocyte concentrations of reduced glutathione and its oxidized form, which were determined by an HPLC-UV method. Results: the average GSH/GSSG ratio was 7.9 (95 % CI: 6.4-9.4) and age did not influence this proportion. In the cases that had altered values of the inflammation markers, they showed a decrease in the GSH/GSSG ratio. Cellular redox status was negatively correlated with erythrocyte sedimentation values (r=0.41; p=0.017). However, this association does not appear when C-reactive protein levels are analyzed. Conclusions: the patients who present alterations in the inflammation markers show changes in the cellular redox state. The combined study of these biomarkers allows a more comprehensive analysis of the health status of patients with inflammatory diseases.

Niveles de antitoxina tetánica y diftérica relacionadas con el alelo HLA-B27 en pacientes cubanos con uveítis anterior no infecciosa
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Torres-Rives, Bárbara

; Martínez-Téllez, Goitybell

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; Zúñiga-Rosales, Yaíma

; Collazo-Mesa, Teresa

Vaccimonitor

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apr 2021, Volume 30 N. 1 Pages 10 - 17

Abstract: Es En | Text: Es En | PDF: Es | PDF: En

RESUMEN La uveítis anterior no infecciosa es una enfermedad inflamatoria del ojo que afecta al tracto uveal y que puede causar ceguera total y otras discapacidades visuales. Esta enfermedad se ubica en el espectro de enfermedades autoinmunes y autoinflamatorias. Se han descrito respuestas no adecuadas a la vacunación en enfermedades mediadas por el sistema inmune, por lo que se evaluaron los niveles de antitoxina tetánica y diftérica en pacientes cubanos con uveítis anterior no infecciosa, relacionada con el alelo HLA-B27. Se determinaron los niveles de antitoxina tetánica y diftérica mediante ELISA en 190 pacientes con uveítis anterior no infecciosa y controles supuestamente sanos. El 97,37% de los pacientes con uveítis mostraron niveles de protección de antitoxina tetánica mayor o igual a 0,1 UI/mL, similar a lo observado en los controles sanos (98,95%) (p=0,4385). Las proporciones de pacientes con uveítis anterior no infecciosa y sus controles en los diferentes niveles de protección de antitoxina tetánica fueron similares (p>0,05), al igual que los títulos medios geométricos (p=0,2907). En los pacientes con uveítis, de 65 años o más, se detectó una mayor proporción de individuos con títulos protectores de larga duración (>1,0 UI/mL) de antitoxina diftérica (p=0,0065). En los pacientes con uveítis no se observó asociación entre la presencia del alelo HLA-B27 y la respuesta de anticuerpos frente al toxoide tetánico (p=0,6196) y diftérico (p=0,1917). El 37,9% de los pacientes con uveítis y el 42% de los controles, presentaron títulos no protectores (<0,1 UI/mL) de antitoxina diftérica (0,1148). La mayoría de los pacientes con uveítis anterior no infecciosa y los controles supuestamente sanos presentaron protección frente al toxoide tetánico; mientras que, en los pacientes con uveítis, así como en los controles supuestamente sanos, con edad igual o más de 18 años, se debe reevaluar incluir refuerzos con toxoide diftérico para alcanzar mayores niveles de protección frente a la difteria.

ABSTRACT Non-infectious anterior uveitis is an inflammatory disease of the eye that affects the uveal tract and can cause total blindness and other visual disabilities. Autoimmune and inflammatory diseases are associated with qualitative and quantitative alterations in the immune response; therefore, the levels of tetanus and diphtheria antitoxin related to the HLA-B27 allele were evaluated in Cuban patients with non-infectious anterior uveitis. Tetanus and diphtheria antitoxin levels were determined by ELISA in 190 patients with non-infectious anterior uveitis and healthy control individuals. 97.37% of patients with uveitis showed protective tetanus antitoxin levels greater than and equal to 0.1 IU/mL as well as healthy controls (98.95%) (p=0.4385). The proportions of patients with non-infectious anterior uveitis and presumably healthy controls in the different levels of protective tetanus antitoxin were similar (p>0.05) at all levels of protection, as were the geometric mean titers for this antitoxin (p=0.2907). Patients with uveitis aged 65 years or older had a higher proportion of individuals with long-term reliable protective titers (>1.0 IU/mL) of diphtheria antitoxin (p=0.0065). In uveitis patients, no association was observed between the presence of the HLA-B27 allele and the antibody response against tetanus toxoid (p=0.6196) and diphtheria (p=0.1917). Similarly, 37.9% of patients with uveitis and 42% of their controls had non-protective titers (<0.1 IU/mL) of diphtheria antitoxin (0.1148). Most patients with anterior uveitis and control subjects were protected against tetanus (p>0.05), while in patients with uveitis and supposedly healthy controls, aged 18 years or older, the administration of booster doses with diphtheria toxoid should be reevaluated to achieve higher levels of protection against diphtheria.

10.

Autoanticuerpos para diagnóstico y pronóstico en artritis reumatoide: inmunoensayo cubano con péptido citrulinado del fibrinógeno
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Martínez Téllez, Goitybell

; Torres Rives, Bárbara

; Sánchez Rodríguez, Vicky

; Martiatu Hendrich, Maité

; Rodríguez Pelier, Cira

Anales de la Academia de Ciencias de Cuba

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apr 2021, Volume 11 N. 1 elocation e835

Abstract: Es En | Text: Es En | PDF: Es | PDF: En

RESUMEN Introducción: La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria crónica que se caracteriza por la presencia de autoanticuerpos. Objetivo: desarrollar inmunoensayos cubanos para determinar anticuerpos y evaluar la utilidad de anticuerpos contra un péptido del fibrinógeno citrulinado para diagnóstico y valoración clínico terapéutica de pacientes con AR. Métodos: Se realizó un estudio de casos y controles. Participaron 162 pacientes con AR, 112 pacientes con otras enfermedades y 50 individuos sanos. Se evaluó el desempeño analítico y diagnóstico de un inmunoensayo novedoso para determinar anticuerpos contra un péptido del fibrinógeno citrulinado diseñado mediante informática, de factor reumatoide y anticuerpos antiqueratina. Se determinaron mediante inmunoensayos comerciales los anticuerpos factor reumatoide, antipéptidos citrulinados de segunda generación, anti vimentina citrulinada mutada, anti vimentina carbamilada y antiqueratina. Se realizó un estudio longitudinal con 60 pacientes con AR temprana. Se determinaron los anticuerpos, proteína C reactiva, velocidad de sedimentación globular, índice de actividad y respuesta al metotrexato a los seis meses. Resultados: Se introdujeron en la práctica 3 inmunoensayos. El desempeño diagnóstico de los anticuerpos contra el péptido del fibrinógeno citrulinado fue superior a los inmunoensayos comerciales más utilizados, con un costo por paciente inferior (5,52 CUC) a los anticuerpos de segunda generación (14,00 CUC). Los pacientes con estos anticuerpos, tuvieron mayor riesgo para mayor actividad (riesgo=0,96; p=0,0424) y baja respuesta al tratamiento (riesgo = 0,82; p = 0,0402). La determinación de anticuerpos contra un péptido novedoso del fibrinógeno citrulinado tiene menor costo y gran utilidad para el diagnóstico y evaluación clínico terapéutica en la AR.

ABSTRACT Introduction: Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic and inflammatory disease characterized by presence of autoantibodies. Objective: to develop Cuban immunoassays to determine antibodies and evaluate the usefulness of antibodies against a citrullinated fibrinogen peptide for diagnosis and therapeutic clinical assessment of patients with RA. Methods: A case-control study was conducted. Participants were 162 patients with RA, 112 patients with other diseases and 50 healthy individuals. The analytical and diagnostic performance of a novel immunoassay was evaluated to determine antibodies against a citrullinated fibrinogen peptide designed by computer, rheumatoid factor and antiqueratin antibodies. Commercial rheumatoid factor antibodies, second generation citrullinated peptides, mutated citrullinated vimentin, carbamylated vimentin and antiqueratin were determined by commercial immunoassays. A longitudinal study was conducted on 60 patients with early RA. Antibodies, C-reactive protein, erythrocyte sedimentation rate, activity index and response to methotrexate after six months were determined. Results: Three immunoassays were introduced into practice. The diagnostic performance of the antibodies against the citrullinated fibrinogen peptide was superior to the most commonly used commercial immunoassays, with a lower cost per patient (5,52 CUC) than the second-generation antibodies (14,00 CUC). Patients with these antibodies had a higher risk for greater activity (risk = 0,96; p = 0,0424) and low response to treatment (risk = 0,82; p = 0,0402). The determination of antibodies against a novel citrullinated fibrinogen peptide has lower cost and great utility for the diagnosis and therapeutic clinical evaluation in RA.

11.

Diseño y optimización de un tubo policromático de citometría de flujo para inmunofenotipo linfocitario periférico
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Zúñiga Rosales, Yaíma

; Villegas Valverde, Carlos Agustín

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; Hernández Reyes, Evelyn

Revista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia

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sep 2020, Volume 36 N. 3 elocation e1151

Abstract: Es En | Text: Es En | PDF: Es | PDF: En

RESUMEN Introducción: La citometría de flujo permite la cuantificación de las subpoblaciones de linfocitos con una elevada sensibilidad, especificidad y objetividad. Estas ventajas solo se logran con un proceso laborioso de diseño individualizado y controlado para cada experimento. Objetivo: Diseñar un protocolo de un solo tubo policromático de citometría flujo para inmunofenotipo linfocitario periférico. Métodos: Se realizó un estudio experimental in vitro con muestras de sangre periférica obtenidas de tres voluntarios sanos, en el Centro Nacional de Genética Médica, en marzo de 2019. El tubo se compuso de seis marcadores de linaje para identificar linfocitos B, T, natural killer y natural killer T. Se desarrolló un protocolo de lisis de hematíes sin lavado. Se emplearon anticuerpos monoclonales conjugados con fluorocromos. El punto óptimo de concentración correspondió al mayor índice de tinción y conservación de los porcentajes de positividad de cada población. Se realizó la construcción progresiva del tubo y se propuso una estrategia lógica de secuencia de ventanas para el análisis de datos. Resultados: Los marcadores seleccionados permitieron realizar correctamente el inmunofenotipo linfocitario periférico. En los cinco puntos de titulación se observaron buenas discriminaciones entre las señales positivas y negativas, excepto para el anti-CD56 que presentó una tendencia decreciente del índice de tinción. El volumen total de conjugados requeridos para la determinación de los 6 antígenos fue de 3,75 μL por tubo. Conclusiones: Se obtuvo un tubo policromático que permite el inmunofenotipo periférico de forma rápida y precisa por seis antígenos linfocitarios simultáneamente, con el empleo de pequeños volúmenes de conjugado y sangre.

ABSTRACT Introduction: Flow cytometry allows quantification of lymphocyte subpopulations with high sensitivity, specificity and objectivity. These advantages are only achieved through the hardworking process of individualized and controlled design for each experiment. Objective: To design a flow cytometry protocol of a single polychromatic tube for peripheral lymphocyte immunophenotype. Methods: An experimental in vitro study was carried out, in March 2019, with peripheral blood samples obtained from three healthy volunteers, at the National Center for Medical Genetics. The tube was made up of six lineage markers for identifying natural B and T lymphocytes, natural killers and natural killer T cells. A protocol was developed for red blood cell lysis without washing. Fluorochrome-conjugated monoclonal antibodies were used. The optimal point of concentration corresponded to the highest staining index and preservation of the positivity percentages of each population. Progressive tube construction was performed and a logical window sequence strategy was proposed for data analysis. Results: The chosen markers allowed to carry out correct peripheral lymphocyte immunophenotype. Good discriminations between positive and negative signals were observed at the five titration points, except for anti-CD56, which presented a decreasing trend in the staining index. The total volume of conjugates required for determination of the six antigens was 3.75 μL per tube. Conclusions: A polychromatic tube was obtained that allows to carry out peripheral immunophenotype quickly and precisely by six lymphocyte antigens simultaneously, with the use of small volumes of conjugate and blood.

12.

Validación de un ensayo inmunoenzimático tipo ELISA para cuantificar niveles de antitoxina diftérica en suero humano
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Rodríguez Pelier, Cira Virgen Zúñiga Rosales, Yaíma Torres Rives, Bárbara Matarán Valdés, Minerva

Revista Habanera de Ciencias Médicas

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aug 2018, Volume 17 N. 4 Pages 527 - 539

Abstract: En Es | Text: En Es | PDF: En | PDF: Es

ABSTRACT Introduction: Diphtheria still persists in many countries. In Cuba, studies conducted in different age groups have demonstrated that there are non-protective levels of diphtheria antitoxin in the population, so it is necessary to have methods that allow the serologic survey of population immunity. The quantification of antibodies against vaccine antigens such as diphtheria toxin is also a useful, rapid and economic method to evaluate the immune response. Objective: To validate an ELISA-type immune-enzymatic test to quantify the levels of diphtheria antitoxin in human serum. Material and Method: An experimental study of technological development was carried out in the Immunology Laboratory of the National Medical Genetics Center, Havana, Cuba. The optimal values of the variables that influence on the result of the indirect heterogeneous immune-enzymatic test for the quantification of diphtheria antitoxin were determined. The calibration curve obtained was evaluated against the WHO standard (Diphtheria Antitoxin Human Serum 00/496). The analytical validation of the standardized method was performed. Results: The intra-assay and inter-assay coefficients of variation were less than 10% and 20%, respectively. Recovery values between 90 and 110% were found in accuracy and selectivity. The parallelism between the standard curve and the samples studied showed a coefficient of variation lower or equal to 10%. The limit of quantification was 0,015 IU/mL and the one of detection was 0,0039 IU/mL. Conclusions: The result obtained in the precision, accuracy and selectivity of the ELISA-type immune-enzymatic test developed and validated in the National Medical Genetics Center demonstrated that it can be used in the clinical practice to quantify the values of diphtheria antitoxin in human serum.

RESUMEN Introducción: La difteria aún persiste en numerosos países. En Cuba, estudios realizados en diferentes grupos etarios han demostrado que existen niveles no protectores de antitoxina diftérica en la población, por lo que es necesario contar con métodos que permitan la estimación serológica de la inmunidad poblacional. La cuantificación de anticuerpos contra antígenos vacunales como la toxina diftérica es además un método útil, rápido y económico para evaluar la respuesta inmune. Objetivo: Validar un ensayo inmunoenzimático tipo ELISA para cuantificar los niveles de antitoxina diftérica en suero humano. Material y Método: Se realizó un estudio experimental de desarrollo tecnológico, en el cual se determinaron los valores óptimos de las variables que influyen en el resultado de un ensayo inmunoenzimático heterogéneo indirecto para la cuantificación de antitoxina diftérica, desarrollado en el laboratorio de Inmunología del Centro Nacional de Genética Médica de Cuba. La curva de calibración se evaluó contra el estándar de la OMS (Diphtheria Antitoxin Human Serum 00/496). Se realizó la validación analítica del método estandarizado. Resultados: Los coeficientes de variación intraensayo e interensayo fueron inferiores a 10% y 20%, respectivamente. En la exactitud y selectividad se encontraron valores de recobrado entre 90 y 110%. El paralelismo entre la curva estándar y las muestras estudiadas presentó un coeficiente de variación menor o igual a 10%. El límite de cuantificación fue 0,015 UI/mL y el de detección 0,0039 UI/mL. Conclusiones: El resultado obtenido en la precisión, exactitud y selectividad del ensayo inmunoenzimático tipo ELISA desarrollado demostró que puede ser utilizado en la práctica clínica para cuantificar los valores de antitoxina diftérica en suero humano.

13.

Eficacia diagnóstica de anticuerpos antipéptidos citrulinados de segunda y tercera generaciones para la artritis reumatoide
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Martínez Téllez, Goitybell Torres Rives, Bárbara Gómez, Jorge Alexis Prada Hernández, Dinorah M. Sánchez Rodríguez, Vicky

Revista Habanera de Ciencias Médicas

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aug 2018, Volume 17 N. 4 Pages 540 - 554

Abstract: En Es | Text: En Es | PDF: En | PDF: Es

ABSTRACT Introduction: Rheumatoid arthritis is an autoimmune disease characterized by the presence of antibodies against citrullinated peptides, which are one of the indicators for the diagnosis of a disease. The usefulness of different methods for the determination of these antibodies in the diagnosis of Cuban patients with rheumatoid arthritis is necessary to be established. Objective: To establish the diagnostic effectiveness of the second (anti-CCP2) and third (anti-CCP3) generation assays for the determination these antibodies against citrullinated peptides in Cuban patients with rheumatoid arthritis. Material and method: 101 patients with rheumatoid arthritis, 58 patients with other rheumatic and inflammatory diseases, and 43 healthy persons participated in the study. The diagnostic efficiency of rheumatoid factor (RF), anti-CCP2 and anti-CCP3 antibodies were determined using ELISA test, by calculating sensitivity, specificity, and positive and negative predictive values. Results: The anti-CCP2 assay showed a better balance of sensitivity (48.5 %) and specificity (98.0 %). The lower sensibility was observed for RF (40.3%) when the specificity was set at 98 %. Specificity increased to 100% when anti-CCP2 and RF assays were used. All autoantibodies showed association with C-reactive protein and correlation with erythrocyte sedimentation rate. Only anti-CCP2 antibodies showed no correlation with the DAS28 clinical indicator. Conclusions: Anti-CCP2 antibodies are the ones of greater effectiveness in the diagnosis of Cuban patients with rheumatoid arthritis. RF identification allows to identify seronegative anti-CCP2 patients; therefore, the combination of both immunoassays leads to an improvement in the diagnostic effectiveness.

RESUMEN Introducción: La artritis reumatoide es una enfermedad autoinmune caracterizada por la presencia de anticuerpos contra péptidos citrulinados, que constituyen indicadores para el diagnóstico de la enfermedad. Es necesario determinar la utilidad de diferentes métodos de determinación de estos anticuerpos para el diagnóstico de pacientes cubanos con artritis reumatoide. Objetivo: Determinar la eficacia de los ensayos de determinación de anticuerpos anti-CCP2 y anti-CCP3 para el diagnóstico de pacientes cubanos con artritis reumatoide. Material y método: Participaron 101 pacientes con artritis reumatoide, 58 pacientes con otras enfermedades reumáticas e inflamatorias y 43 individuos sanos. Se determinó la eficacia diagnóstica de los anticuerpos factor reumatoideo (FR), anti-CCP2 y anti-CCP3 medidos mediante ELISA, con el cálculo de la sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivos y negativos. Resultados: El ensayo anti-CCP2 mostró un mejor balance sensibilidad (48,5%) y especificidad (98,0%). Cuando se fijó la especificidad a 98%, se observó la menor sensibilidad para el FR (40,3%). Utilizar los ensayos anti-CCP2 y FR aumentó la especificidad a 100%. Todos los autoanticuerpos mostraron asociación con la proteína C reactiva y correlación con la velocidad de sedimentación globular. Solamente los anticuerpos anti-CCP2 no mostraron correlación con el indicador clínico de actividad DAS 28. Conclusiones: Los anticuerpos anti-CCP2 son los de mayor eficacia para el diagnóstico de pacientes cubanos con artritis reumatoide. La determinación de FR permite identificar pacientes con artritis reumatoide seronegativos de anticuerpos anti-CCP2, por lo que la combinación de ambos inmunoensayos produce una mejoría en la eficacia diagnóstica.

14.

Validación de un inmunoensayo tipo ELISA para la cuantificación de los niveles séricos de antígeno de superficie en pacientes con infección crónica por Virus de la Hepatitis B.
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Rodríguez-Pelier, Cira V. Chang-Monteagudo, Arturo Zúñiga-Rosales, Yaíma Torres-Rives, Bárbara Martínez-Tellez, Goytibell Rosa-Hernández, Deyanira la Martínez-Perera, Adonay

Revista biomédica

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dec 2017, Volume 28 N. 3 Pages 111 - 123

Abstract: Es En | Text: Es En | PDF: Es | PDF: En

Resumen Introducción Durante la etapa aguda de la infección por el Virus de la Hepatitis B (VHB) y el período inicial de una infección crónica, el DNA está en forma episomal (libre o extracromosomal) y se replica en el hepatocito produciendo, entre otros, viriones infectivos, DNA polimerasa y antígeno de superficie del virus (HBsAg). Objetivo Validar un inmunoensayo tipo ELISA para cuantificar los niveles de HBsAg en pacientes con hepatitis B crónica. Método Se realizó un estudio experimental de desarrollo tecnológico. Se llevó a cabo la normalización y validación de un inmunoensayo enzimático heterogéneo de doble anticuerpo para la cuantificación de HBsAg en sueros de seres humanos. 115 muestras de pacientes con hepatitis B crónica con resultados de carga viral se correlacionaron con las concentraciones de HBsAg. Resultados y discusión El método presentó coeficientes de variación intra e interensayo de 9,8 y 13,2% respectivamente. El rango de trabajo se estimó entre 0.15 y 60 ng/mL. El porcentaje de recuperación estuvo entre el 90 y 110% y el ajuste lineal de la curva estándar presentó un coeficiente de determinación superior a 0,99. La correlación alcanzada entre los niveles de DNA y la concentración de HBsAg fue de 62.5%. Conclusiones La evaluación del ELISA para la cuantificación de HBsAg desarrollado en el laboratorio mostró que cumple los parámetros de validación para su uso clínico.

Abstract Introduction During the acute phase of infection with Hepatitis B Virus (HBV) and the initial period of chronic infection, DNA is episomally (free or extrachromosomal) and replicates in hepatocytes producing among other virions, DNA polymerase and virus surface antigen (HBsAg). Objective Validate an ELISA to quantify HBsAg levels in patients with chronic hepatitis B. Method An experimental study of technological developmentwas conducted. The normalization and validation of heterogeneous double antibody enzyme linked inmunoassay for quantitation of HBsAg in human sera was carried out. 115 serum samples from patients with chronic hepatitis B with viral load results were correlated with its HBsAg concentrations. Results and discussion The developed method presented variation coefficients intra and interassay of 9.8 and 13.2% respectively. The working range was estimated between 0.15 and 60 ng/mL. The recovery rate was between 90 and 110% and the linear fit of the standard curve presented a determination coefficient greater than 0, 99. The correlation between the DNA levels and HBsAg concentration was 62.5%. Conclusions The assessment of the ELISA for quantitation of HBsAg developed in the laboratory showed that it achieved validation parameters for its clinical use.

https://doi.org/10.32776/revbiomed.v28i3.549

15.

Estandarización y validación de un ELISA para la cuantificación de antitoxina tetánica en suero humano
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Rodríguez Pelier, Cira Virgen Martínez Téllez, Goitybell Torres Rives, Bárbara Zúñiga Rosales, Yaíma Alles Gustavo, Alexis Martínez Perera, Adonay

Revista Habanera de Ciencias Médicas

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dec 2013, Volume 12 N. 4

Abstract: En Es | Text: En Es | PDF: En | PDF: Es

Introduction: the Titanic antitoxin quantification is useful to assess the immune response against vaccinal antigens. Objective: to develop a standardization and validation technique of the indirect ELISA to quantify titanic antitoxin in human serum. Materials and Methods: the standard preparing to the assay curve was calibrated front the preparing Finlay Institute. The optimal indicators were normalized to each technique step developed. Results: a good intra-assay precision was reach during validation in all cases. The coefficient of variation to parallelism was less than 10% and 110%. Detection limit was 0.002 UI/ ml. Analytic sensitivity reached was 0.01 UI/ ml. Conclusions: the assay may be used to quantify Titanic antitoxin in human serum.

Introducción: la cuantificación de antitoxina tetánica es útil para la evaluación de la respuesta inmune humoral frente a antígenos vacunales. Objetivo: desarrollar la estandarización y validación técnica de un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzima (ELISA) de tipo indirecto para cuantificar antitoxina tetánica en suero humano. Material y Método: el estándar preparado para la curva del ensayo se calibró frente al preparado en el Instituto Finlay. Se normalizaron los indicadores óptimos para el desarrollo de cada paso de la técnica. Resultados y Discusión: durante la validación se alcanzó una buena precisión intraensayo e interensayo en todos los casos. Al evaluar el paralelismo el coeficiente de variación fue menor de 10%. El ensayo mostró una excelente exactitud, con valores de recuperación entre 90% y 110%. El límite de detección fue 0,002 UI/mL. La sensibilidad analítica alcanzada fue de 0,01 UI/mL. Conclusiones: el ensayo puede ser utilizado para la cuantificación de antitoxina tetánica en suero humano.

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