RESUMO O objetivo da pesquisa foi avaliar in vitro e in vivo o efeito do dodecil sulfato de sódio (SDS) sobre o lentivírus caprino (LVC) no colostro e no leite, a fim de desenvolver um método prático e eficiente no bloqueio da via de transmissão lactogênica do vírus. No experimento in vitro, o colostro e o leite de cabras positivas foram tratados com SDS a 0,25%, 0,50% e 1,0%. Em seguida, as células somáticas do colostro e do leite foram obtidas e direcionadas ao cocultivo com células de membrana sinovial caprina (MSC). No teste in vivo, os cabritos foram alimentados com colostro e leite providos de cabras positivas para LVC, tratados com SDS nas mesmas concentrações usadas no teste in vitro. Os animais foram acompanhados pelos testes de reação em cadeia da polimerase nested (nPCR) e western blot (WB). Nos resultados in vitro, no colostro, observou-se que, em todas as concentrações de SDS, ocorreu uma atividade inibitória contra o LVC, sem a inativação. Em relação às células do leite, o SDS apresentou, nas concentrações de 0,25 e 0,5%, atividade inibitória contra o LVC, e na concentração de 1%, houve inativação viral. Nos testes in vivo, as três concentrações de SDS testadas não foram efetivas na inativação do LVC no colostro e no leite caprino, o que se comprovou pela soroconversão e pela presença de DNA proviral nos animais.

ABSTRACT The aim of this study was to evaluate in vitro and in vivo the effect of sodium dodecyl sulfate (SDS) on the caprine lentivirus (CLV) in colostrum and milk. This was performed to develop a practical and efficient method of blocking the lactogenic transmission of the virus. In the in vitro experiment, colostrum and milk were treated with 0.25%; 0.50% and 1% SDS. Then, somatic cells of colostrum and milk were submitted to co-culture with caprine synovial membrane cells (CSM). In the in vivo test, goats were fed with colostrum and milk provided from CLV-positive goats treated with SDS in the same concentrations used in the in vitro experiment. Animals were tested by nested polymerase chain reaction (nPCR) and Western blot (WB) assays. In the in vitro experiment, inhibitory activity against CLV without inactivation occurred in colostrum with all SDS concentrations. However, concentrations of 0.25 and 0.5% SDS presented only inhibitory activity against CLV in milk cells, and 1% concentration provided inactivation of the virus. In the in vivo tests, none of the three concentrations of SDS was effective in inactivating LVC in colostrum or goat milk, which was confirmed by seroconversion and presence of proviral DNA in animals afterwards.

RESUMO O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização periódica de testes de diagnóstico mais sensíveis aliados às práticas de manejo, visando ao controle eficaz da artrite encefalite caprina (CAE). Foram realizadas oito coletas de sangue em matrizes e reprodutores. Da primeira à sétima análise, as coletas foram quadrimestrais, utilizando-se os testes de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-i) e Western Blot (WB). A oitava coleta aconteceu seis meses após a sétima, utilizando-se o WB e a reação em cadeia de polimerase (PCR). A prevalência da CAE foi de 6,8%, 14,9% e 39,2% no IDGA, ELISA-i e WB, respectivamente. Na última análise, foram detectados 0,9% de animais positivos pelo WB e 10,8% pela PCR. Apesar de não erradicarem a CAE, as medidas adotadas, aliadas à utilização periódica dos testes sorológicos e à combinação com a PCR, foram importantes para reduzir significativamente os animais soropositivos no rebanho.

ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the periodic use of more sensitive diagnostic tests associated to management practices for the effective control of caprine arthritis-encephalitis (CAE). We carried out eight blood samples in does and bucks. From the first to the seventh analysis, the samples were quarterly, using Agarose Gel Immunodiffusion (AGID), Enzyme linked immunosorbent assay (i-ELISA) and Western Blot (WB) tests. The eighth collection was made six months after the seventh, using the WB and Polymerase Chain Reaction (PCR). The prevalence of CAE was 6.8%, 14.9% and 39.2% in the AGID, i-ELISA and WB respectively. The last analysis detected 0.9% of animals positive by WB and 10.8% by PCR. Although they do not eradicate CAE, steps taken together with the periodic use of serological tests and the combination with PCR were important to significantly reduce positive animals in the herd.

RESUMO O objetivo deste estudo foi isolar células da geleia de Wharton do cordão umbilical (GWCU) ovino coletado por ocasião do parto natural, utilizando-se diferentes meios de cultivo, além de relatar, pela primeira vez, sua permissividade à infecção in vitro por lentivírus de pequenos ruminantes (LVPRs). Dez cordões umbilicais foram coletados de ovelhas hígidas e soronegativas para LVPRs pelo teste de imunodifusão em gel de agarose (IDGA). De cada cordão, explantes foram cultivados em quatro meios distintos que consistiram em MEM, DMEM baixa glicose, meio 199 e RPMI-1640, todos acrescidos de 10% de soro fetal bovino em estufa com atmosfera úmida e 5% de CO2 a 37ºC. A permissividade de infecção das células GWCU ovino foi testada frente às cepas CAEV-Cork e MVV-K1514, inoculando-se 0,1 MOI de cada cepa viral e corando as monocamadas com May Grunwald Giemsa para visualização do efeito citopático. Foram obtidos quatro sobrenadantes CAEV-Cork e quatro MVV-K1514, provenientes do cultivo de células GWCU ovino infectadas por 21 dias em meios distintos, dos quais foram realizadas titulação em membrana sinovial caprina e extração do DNA pró-viral para realização de nested-PCR e eletroforese em gel de agarose a 2%. Os resultados demonstraram a presença de efeito citopático na infecção in vitro tanto por CAEV-Cork como por MVV-K1514 em todos os meios de cultivo, sendo visualizados sincícios e lise celular em microscópio invertido. A nested-PCR detectou o DNA pró-viral tanto do CAEV-Cork como do MVV-K1514 em todos os sobrenadantes. Os sobrenadantes contendo o vírus CAEV-Cork apresentaram títulos em TCID50/mL de 105,5 em MEM, 104,0 em DMEM baixa glicose, 105,0 em meio 199 e 105,7 em RPMI-1640. Os sobrenadantes contendo o vírus MVV-K1514 apresentaram título em TCID50/mL de 104,3 em MEM, 103,5 em DMEM baixa glicose, 104,7 em meio 199 e 103,5 em RPMI-1640. Células GWCU ovino são permissivas à infecção in vitro pelos lentivírus de pequenos ruminantes CAEV-Cork e MVV-K1514.

ABSTRACT This study aimed to isolate cells from the Wharton's jelly of umbilical cord (WJUC) of sheep collected during natural parturition using different culture media, in addition to reporting for the first time the permissiveness of these cells to in vitro infection by small ruminant lentiviruses. Ten umbilical cords were collected from healthy sheep. Each cord explants were grown in different media consisting of MEM, low glucose DMEM, M199, and RPMI-1640. The permissiveness of infection of sheep cells from WJUC was tested with CAEV-Cork and MVV-K1514 strains, inoculating 0.1 MOI of each viral strain. Four supernatants from each strain were obtained from WJUC sheep cell cultures infected in different media. The results demonstrated the presence of cytopathic effect after the in vitro infection by CAEV-Cork and MVV-K1514 with all of the tested culture media. Nested-PCR detected proviral DNA in all supernatants. Supernatants containing CAEV-Cork viruses had TCID50/ml titres of 105.5 in MEM, 104.0 in low glucose DMEM, 105.0 in M199, and 105.7 in RPMI-1640. Supernatants containing the MVV-K1514 virus had TCID50/ml titres of 104.3 in MEM, 103.5 in low-glucose DMEM, 104.7 in M199, and 103.5 in RPMI-1640. Sheep cells from WJUC are permissive to in vitro infection by small ruminant lentivirus.

A artrite-encefalite caprina (CAE) é diagnosticada rotineiramente pela técnica de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), que é considerada pouco sensível. Objetivou-se com este estudo padronizar testes de Elisa-i e Western Blot (WB) para diagnóstico precoce de anticorpos em caprinos contra CAEV e comparar os resultados obtidos nesses testes com a prova de IDGA. Para a padronização dos testes Elisa-i e WB, utilizaram-se diferentes concentrações e diluições de antígeno, soros e conjugado. No Elisa-i, adotaram-se microplacas rígidas com 96 poços, sendo a combinação de concentração de 0,5µg/poço de antígeno e diluições de 1:100 de soro e 1:1500 de conjugado a que apresentou melhor resultado. No WB foram utilizadas membranas de nitrocelulose, definindo-se as diluições de 1:50 de soro e 1:15000 de conjugado. Para avaliar o desempenho das técnicas, 222 amostras de soro caprino foram testadas e os dados obtidos foram comparados com o IDGA. A sensibilidade e a especificidade do Elisa-i/IDGA, WB/IDGA e WB/Elisa-i foram de 70% e 91%, 100% e 72,6%, 84,6% e 76,5%, concomitantemente. O índice Kappa desses testes foi de 0,35, 0,2 e 0,36, respectivamente. As técnicas de Elisa-i e WB apresentaram-se mais sensíveis que a IDGA, podendo ser utilizadas como ferramentas para o diagnóstico precoce da CAE.

Caprine arthritis-encephalitis (CAE) is routinely diagnosed with the Agarose Gel Immunodiffusion (AGID) technique, which is considered to have low sensitivity. The objective of this study was to standardize testing i-Elisa and Western Blot for early detection of antibodies against CAEV in goats and compare the results obtained in these tests with proof of AGID. For standardization of i-Elisa and WB, different concentrations and dilutions of antigen, sera and conjugate were used. In the i-Elisa, rigid microplate with 96 wells was adopted, and the combination that showed the best result was a concentration of 0.5µg/ well of antigen and dilutions of the serum of 1:100 and conjugate of 1:1500. In the WB nitrocellulose membranes were used, and the dilutions of the serum were defined at 1:50 and conjugate at 1:15000. To evaluate the performance of the techniques, 222 goat serum samples were tested and the data were compared with the AGID. The sensitivity and specificity of Elisa-i/IDGA, WB/AGID and WB/Elisa-i were 70% and 91%, 100% and 72.6%, 84.6% and 76.5%, concomitantly. The Kappa index of these tests was 0.35, 0.2 and 0.36, respectively. The i-Elisa and WB techniques were more sensitive than the AGID and can be used as tools for early diagnosis of CAE.

Actinomicetos são um dos principais produtores de enzimas, vitaminas e metabólitos secundários, destacando-se o gênero Streptomyces, o qual tem uma ampla capacidade de produção de antibióticos eficazes no combate a diferentes microrganismos, entre eles o Staphylococcus sp. Em virtude dessa eficiência no combate a patógenos, o objetivo deste trabalho foi avaliar a produção de metabólitos com atividade antimicrobiana produzidos por 67 Streptomyces isolados de liquens da região amazônica, ante isolados de mastite caprina (Staphylococcus aureus) do estado de Pernambuco, Brasil. Foi utilizado um planejamento fatorial para avaliar a influência das fontes de carbono (glicose) 0%, 0,5% e 1% e de nitrogênio (farinha de soja) 1%, 2,5% e 4% na produção dos antimicrobianos, bem como das variáveis pH, biomassa e atividade antimicrobiana. Dos Streptomyces estudados, o DPUA 1566 foi o que se destacou por formação de halos de inibição entre 18 e 26mm ante os isolados de mastite caprina. Foi possível verificar que a fonte de carbono inibiu a produção de antimicrobianos quando submetidos a uma concentração de glicose de 1%; com a retirada desta, os Streptomyces apresentaram uma elevada capacidade de produção de metabólitos com atividade antimicrobiana tendo potencial para o tratamento de mastite caprina.

Actinomycetes are a leading producer of enzymes, vitamins and secondary metabolites, especially the genus Streptomyces, which have a large capacity for the production of natural antibiotics and are effective against various micro-organisms including Staphylococcus sp. Due to this efficiency in combating micro-organisms, the aim of this study was to evaluate the production of metabolites with antimicrobial activity produced by Streptomyces isolated from lichens 67 in the Amazonia, compared to isolates from goat mastitis (Staphylococcus aureus) in the state of Pernambuco, Brazil. We used a complete factorial design to evaluate the influence of concentrations of carbon sources (glucose) at 0%, 0.5% and 1% and nitrogen (soybean flour) at 1%, 2.5% and 4% in the production of antimicrobial metabolites, and the influence of the pH, microbial biomass and activity variables. Of the studied Streptomyces DPUA 1566 what stood out was the formation of inhibition halos between 18 to 26 mm compared to the isolates from goats mastitis. It was noted that the carbon source inhibited the production of antimicrobial metabolites when subjected to a glucose concentration of 1%. However, after the discontinuation, Streptomyces showed a high capacity to produce metabolites with antimicrobial activity, which has an excellent potential for the treatment of mastitis in goats.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorrência de ovinos soropositivos para o vírus da língua azul (VLA) no Estado do Ceará, Brasil, e analisar as proteínas imunogênicas das cepas virais circulantes nesses rebanhos. O teste de imunodifusão em gel de agarose (IDGA) foi utilizado para pesquisar 271 amostras de soro oriundas de 16 rebanhos. Os resultados demonstraram que 27,3% (74/271) das amostras analisadas apresentaram anticorpos contra o agente e 68,8% (11/16) das propriedades tiveram animais positivos. O immunoblotting (IB) foi utilizado para analisar as proteínas imunogênicas do VLA a partir dos soros de animais positivos no IDGA. Os soros demonstraram forte reação contra a proteína viral VP2. Para o VLA, das sete proteínas estruturais, a VP2 é a principal a estimular a resposta imune protetora. Concluiu-se que a soropositividade para a língua azul (LA) nos rebanhos ovinos estudados no Ceará é alta, apesar dos animais não apresentarem sinais clínicos, indicativo de que o vírus ocorra de forma endêmica. Além disso, a resistência à doença apresentada pelos animais pode estar relacionada com a forte reação imunológica desses à proteína VP2. Sendo assim, outros estudos são necessários para melhor esclarecer a situação epidemiológica da LA no país, através da identificação dos vetores e sorotipos virais circulantes nas diferentes regiões.

The objective of this work was to verify the occurrence of sheep serologically positive for bluetongue virus (BTV) in the state of Ceará, Brazil, and analyze immunogenic proteins of circulating viral strains in these flocks. The agar gel immunodifusion test (AGID) was used to examine 271 serum samples from 16 herds. The results demonstrated that 27.3% (74/271) of the analyzed samples presented antibodies for the agent, and that 68.8% (11/16) of the properties presented positive animals. Immunoblotting (IB) was used to analyze the immunogenic proteins of BTV derived from AGID positive sera. Sera showed strong reaction against viral protein VP2. Of the seven BTV structural proteins, VP2 is the major protein to elicit protective immune responses. It was concluded that bluetongue (BT) seropositivity in sheep flocks studied in Ceará is high, despite that the animal's do not show clinical signs, indicating that it occurs in an endemic form. The animals' resistance to the disease may be related to the strong immune response to the protein VP2. Therefore, further studies are needed to better clarify the epidemiological situation of BT in Brazilian sheep flocks, through the identification of viral vectors and serotypes circulating in different regions.

Avaliou-se a influência do vírus da CAE nas características físico-químicas de amostras de leite de 54 cabras, sem predileção racial, distribuindo-as em dois grupos: cabras positivas e negativas para o teste de imunodifusão em gel de agarose. As amostras de leite foram submetidas à análise ultrassônica para obtenção de parâmetros físico-químicos - gordura, extrato seco, proteínas, lactose e densidade; realização de microbiologia - bactérias mesófilas (UCF/mL). Foram coletadas amostras de tecido mamário para exame histopatológico e imunohistoquímica. Não houve diferença significativa das características avaliadas entre os dois grupos; no microbiológico, não houve relação direta da presença de mesófilas associada à infecção pelo CAEV. Na histopatologia, observaram-se áreas com infiltração celular de monócitos, polimorfonucleares, plasmócitos, fibrose, ausência de morfologia normal do parênquima mamário, denotando processo inflamatório crônico; e foi confirmada a presença do vírus na glândula pela imunohistoquímica. Os resultados não mostraram relação direta da incidência da CAE como fator negativo no desenvolvimento do rebanho.

Aiming to evaluate the influence of CAE viruses in the chemical and physical characteristics of milk, the samples were collected from 54 goats, without racial predilection, these were divided into two groups: goats positive and negative according results of test Agarose Gel Immunodiffusion. Milk samples were ultrasonic analyzed to obtain physicochemical parameters (fat, solids, protein, lactose and density); performance microbiology (mesophilic bacteria - CFU/mL) and mammary gland samples were collected for evaluation histopathology and immunohistochemistry. The results of physical-chemical analysis showed no significant difference between the milk samples of two groups. In the microbiological analysis showed the presence of aerobic mesophilic bacteria, but this change is not associated with the presence of CAEV infection. On histopathology, there were areas with infiltration of mononuclear-leukocyte and polymorph nuclear, plasma cells, fibrosis and absence of normal morphology of the mammary tissue, indicating a chronic inflammatory process; and confirmed the presence of virus, in the gland, by immunohistochemistry. The results showed no direct relationship between incidence of CAE in the herd as a negative factor for its development, however it is known that the disease in its chronic nature, causes reduction in the productivity of the herd.

Objetivou-se estudar a influência da artrite encefalite caprina no hemograma de cabras durante a lactação. Para tanto, 38 matrizes F1 Anglo-Nubiana x Saanen, com idade entre 14 e 38 meses e escore corporal entre dois e três, foram previamente testadas por IDGA e Western Blot para a divisão em grupo soropositivo (n = 19) e soronegativo (n = 19). Os grupos foram mantidos em piquetes distintos, sem contato físico, recebendo o mesmo manejo nutricional e sanitário. O sangue foi coletado por venipunção da jugular, mensalmente, desde o parto até o fim da lactação. Foram determinados os valores do eritrograma e do leucograma. Em dados momentos, os soropositivos apresentaram alterações morfológicas nas hemácias, com diminuição significativa do VCM, aumento significativo do HCM e CHCM. Não houve diferença significativa entre grupos na contagem de hemácias e volume globular. Os valores absolutos de monócitos e eosinófilos dos soropositivos, em algumas ocasiões, encontraram-se significativamente superiores aos dos soronegativos e acima da faixa de normalidade para a espécie caprina.

The objective was to study the influence of caprine arthritis encephalitis in the blood count of goats during lactation. To this end, 38 F1 Anglo-Nubian x Saanen reproductive female goats, aged 14 to 38 months and body condition score between 2 and 3, were first tested by AGID and Western Blot, and divided into either a seropositive group (n = 19) or a seronegative group (n = 19). The groups were kept in separate paddocks, without physical contact, receiving the same nutritional and health management. The blood of these animals was collected by jugular venipuncture, monthly, from the partum period until the end of lactation, and their erythrogram and leukogram values were determined. At given moments, the seropositive animals showed morphological changes in red blood cells, with significant decrease in MCV, coupled with a significant increase of MCH and MCHC. There was no significant difference between the groups in the values of red blood cells and packed cell volume. The absolute values of monocytes and eosinophils of the seropositive animals, at certain moments, were significantly higher than the seronegative ones and above the normal range for goats.

Este estudo teve como objetivo produzir um antígeno (Ag) a partir de cultura de células de membrana sinovial caprina (MSC) infectadas com o vírus de artrite encefalite caprina (CAEV), pela técnica de microfiltração seriada, substituindo a ultracentrifugação em colchão de sacarose (UCCS) para utilização em ELISA indireto (ELISA-i). Amostras de 188 soros caprinos, que previamente foram testados pelo Western blot (WB) com Ag UCCS, foram submetidas à análise pelo ELISA-i com o novo antígeno produzido, que mostrou concordância de 92% em relação ao antígeno UCCS. A sensibilidade e a especificidade do ELISA em relação ao WB foram de 95,6% e 88,5%, respectivamente. A nova técnica, criada a partir de microfiltrações, mostrou-se efetiva e de baixo custo para o diagnóstico sorológico de anticorpos para CAEV em comparação ao antígeno ultracentrifugado, e constitui uma alternativa viável para produção de antígeno purificado de lentivírus de pequenos ruminantes.

This study aimed to produce an antigen (Ag) from the culture of goat synovial membrane cells (MSC) infected by CAEV through serial microfiltering technique replacing ultra ultracentrifugation in sacarosis Mattress (UCCS) for the indirect diagnosis ELISA tests (i ELISA). Samples of 188 sera from goats previously examined by Western Blot (WB) with Ag UCCS were submitted to analysis by i ELISA with new antigen produced, demonstrating an accordance of 92% in relation to UCCS antigen. The specificity and sensitivity relating to WB were of 95,65% and 88, 5% respectively. The new technique created from the microfiltering is effective and with low cost for the serological antibodies diagnosis of CAEV comparing to the ultracentrifuged one, presenting, therefore, as a viable alternative for purified antigen of lentivirus in small ruminants.

RESUMO O Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV) e Vírus Maedi-visna (MVV) pertencem ao gênero Lentivírus da família Retroviridae. São considerados geneticamente distintos, mas antigenicamente relacionados. O objetivo desde trabalho foi isolar o vírus da CAE de um animal oriundo de um rebanho do Rio Grande do Norte e positivo pelo teste de Imunodifusão em Gel de Agarose (IDGA) através do co-cultivo de leucócitos infectados do sangue periférico em Membrana Sinovial Caprina (MSC). Dezesseis caprinos da raça Saanen, com suspeitas clínicas para CAE foi testado por IDGA e Western Blotting. Para o isolamento viral, os leucócitos do sangue periférico foram isolados por co-cultivo em MSC. Monócitos/Macrófagos coletados foram inoculados em monocamadas pré-formadas em garrafas A25. O resultado do IDGA foi positivo para um animal, confirmado por Western Blotting. Após 50 dias de co-cultivo, foi realizada a coloração da monocamada com cristal de violeta a 0,1% para visualização do ECP e realizada nested-PCR do sobrenadante do co-cultivo, com confirmação do efeito citopático viral. A cepa isolada, denominada BrRN-CNPC.G1 foi considerada o primeiro isolamento do CAEV no Estado do Rio Grande do Norte. Esse estudo permitirá em breve, realizar a caracterização molecular do genoma do vírus isolado, através da análise de seus diferentes genes estruturais e comparar com outras sequencias virais isoladas para identificar a provável origem da infecção desse animal e estabelecer as possíveis divergências entre cepas padrões de Lentivírus e cepas regionais circulantes.

ABSTRACT Caprine Arthritis Encephalitis virus (CAEV) and Visna/maedi virus (VISNA), belong to the genus Lentivirus family Retroviridae. The aim of the present study was to isolate the CAE virus from a positive goat when tested by agarose gel immunodifusion (AGID) by cocultivation techniques of infected peripheral blood leukocytes in goat synovial membrane (GSM). In this study, one flock of 16 goats, obtained from a flock of Rio Grande do Norte, Brazil, with clinical suspicions for CAEV, was screened using agar-gel immunodiffusion (agid) and Western blotting. The result was positive for one animal, confirmed by Western blotting. For virus isolation, peripheral blood leukocytes (PBL) were isolated from the blood for co-culture on goat sinovial membrane (GSM) cells. Monocytes/macrophages collected were inoculated in a monolayer of 90% semiconfluent cells in the A25 culture bottles. After 50 days of co-culture, the monolayer was stained with crystal violet 0.1% for viewing viral cytopathic effects (CPE) characteristic of viruses, and nested-PCR was performed with the supernatant of co-culture for confirmation of CPE. The isolate, named BrRN-CNPC.G1, was considered the first isolation of small ruminant lentivirus from a naturally infected goat in a flock in Rio Grande do Norte, Brazil. This study will soon allow for the molecular characterization of the isolated virus genome, by analysis of its different structural genes and their comparison with other isolated viral sequences to identify the likely source of infection of that animal and establish the possible differences between strains of lentiviruses and circulating regional strains.

RESUMO Inibidores da enzima transcriptase reversa e da protease foram avaliados quanto ao seu efeito inibitório na replicação do Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV) cepa CAEV Cork e do vírus Maedi-Visna (MVV) cepa K1514 cultivados em células fibroblásticas de caprinos. Os fármacos utilizados foram: lamivudina, didanosina, estavudina, zidovudina, efavirenz, atazanavir e lopinavir/ritonavir. A maior concentração utilizada para lamivudina, estavudina, zidovudina e efavirenz foi 500 ?M, para atazanavir foi 50 ?M e 5,0 ?M para lopinavir/r e didanosina. A atividade antiviral in vitro foi pesquisada por meio da avaliação da viabilidade celular através da redução do MTT e pela pesquisa de inibição dos efeitos citopáticos (CPE) dos vírus. A replicação dos vírus só não foi completamente bloqueada pelos inibidores de protease (IP) atazanavir e lopinavir/r enquanto os demais apresentaram eficácia antiviral significativa em diferentes concentrações. Os IP juntamente com o efavirenz, não mostraram atividade antiviral quando foram avaliados pela técnica de redução do MTT. Esses dados indicam que os fármacos inibidores da transcriptase reversa lamivudina, didanosina, estavudina e zidovudina são eficazes na inibição in vitro dos lentivírus de pequenos ruminantes.

ABSTRACT Inhibitors of the reverse transcriptase and protease enzymes were evaluated for their inhibitory effect on the replication of caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) strain CAEV Cork and of the Maedi-Visna virus (MVV) strain K1514 cultured in fibroblastic cells. The drugs lamivudine, didanosine, stavudine, zidovudine, efavirenz, atazanavir and lopinavir/ritonavir were used. The highest concentration used for lamivudine, stavudine, zidovudine and efavirenz was 500 ?M, for atazanavir it was 50 ?M and 5.0 ?M for lopinavir/r and didanosine. The in vitro antiviral activity was investigated by evaluating the cell viability by the MTT method and testing for inhibition of cytopathic effects (CPE) of the virus. The replication of the virus was not completely inhibited by the protease inhibitors atazanavir and lopinavir/r in the test for CPE, while the others drugs showed significant antiviral efficacy in different concentrations. The protease inhibitors together with the efavirenz did not show antiviral activity when they were assessed by the reduced MTT technique. These data showed that the reverse transcriptase inhibitor drugs lamivudine, didanosine, stavudine and zidovudine were effective in the in vitro inhibition of small ruminant lentivirus.

RESUMO O objetivo do presente estudo foi determinar a susceptibilidade dos folículos ovarianos, espermatozoides e embriões caprinos ao Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV). Para isto, foram analisados espermatozoides e folículos ovarianos pelas técnicas de imunohistoquímica e microscopia eletrônica de transmissão, antes e após protocolos de infecção in vitro com o CAEV. Foram submetidos à análise ultraestrutural, embriões caprinos produzidos in vivo, oriundos de cabras negativas e positivas para o CAEV. Nas amostras seminais, provenientes de animais tanto com infecção natural quanto dos artificialmente infectados, foi observada imunomarcação positiva dos espermatozoides, assim como alterações degenerativas na sua análise ultraestrutural. Já nas amostras de tecido ovariano, a imunomarcação foi mais discreta e identificada na região do estroma. No tocante à análise ultraestrutural, folículos e embriões se apresentaram íntegros. De acordo com esses resultados, pode-se concluir que os espermatozoides caprinos apresentaramse infectados, assinalando a susceptibilidade dessas células ao vírus, bem como a potencialidade do CAEV ser carreado ao cerne do oócito, originando embriões infectados.

ABSTRACT The aim of this study was to determine the susceptibility of goat ovarian follicles, spermatozoa and embryos to caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV). Spermatozoa and ovarian follicles were analyzed, before and after in vitro infection with CAEV, through immunohistochemistry and transmission electron microscopy techniques. Goat embryos, produced in vivo from infected and non-infected goats, were submitted to ultrastructural analysis. Immunohistochemical examination of seminal samples from goats naturally and artificially infected with CAEV revealed viral antigens in spermatozoa, while the ultrastructural analysis showed degenerative changes in these cells. Ovarian tissue samples presented a more discreet immunohistochemical positive reaction situated in the stroma region. Ultrastructural analysis revealed that the embryos and ovarian follicles were intact. These results indicate that the spermatozoa were infected, confirming the susceptibility of these cells to the virus, as well as the potential of CAEV entering the oocyte, giving rise to infected embryos.

RESUMO A Maedi-Visna é uma doença persistente, progressiva e debilitante em ovinos causada por lentivírus que resulta primariamente em pneumonia intersticial e pode estar associada a mamite e encefalite. Este trabalho teve como objetivo produzir antígeno a partir do vírus Maedi-Visna total para utilização em ensaios imunoenzimáticos. Na produção do antígeno foram utilizados cultivos primários de células de membrana sinovial caprina, infectados com amostra padrão (MVVK1514). As suspensões virais foram tituladas e o antígeno semipurificado pela precipitação em PEG (polietilenoglicol) e ultracentrifugação. Foram realizadas eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e Western Blotting (WB). A SDS-PAGE de origem viral e do meio de cultivo resultou em várias bandas protéicas. No WB constatou-se a presença de sete proteínas imunogênicas de pesos moleculares aproximados de 16, 27, 35, 50, 42, 63 e 123 kDa. Destas, três proteínas (16, 27 e 50 kDa) apresentaram boa reação imunogênica. O trabalho abre perspectivas da utilização de testes imunoenzimáticos com maior sensibilidade para lentivírus ovino.

ABSTRACT Maedi-Visna is a persistent, progressive and debilitating disease in sheep caused by lentivirus which results primarily in interstitial pneumonia and may be associated with mastitis and encephalitis. This study aimed to produce antigen from the Maedi-Visna virus for use in immunosorbent assay. The antigen was produced using secondary cultures of cells from sheep synovial membrane, infected with the standard sample (MVV-K1514). The suspensions were titered and the viral antigen was semipurified by precipitation in PEG (polyethylene) and ultracentrifugation. The isolates were then submitted to polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE) and the western blot (WB) technique. The SDS-PAGE of viral origin and of the culture medium resulted in several protein bands. The WB revealed the presence of 7 immunogenic proteins of approximate molecular weights of 16, 27, 35, 50, 42, 63 and 123 kDa. Of these, 3 proteins (16, 27 and 50 kDa) showed good immunogenic reaction. This work opens up prospects of using enzyme immunoassay with greater sensitivity to lentivirus-infected sheep.

RESUMO A artrite encefalite caprina (CAE) é uma doença infecciosa específica dos caprinos. Geralmente apresenta-se de forma crônica, caracterizando-se por um longo período de incubação e uma evolução clínica lenta e progressiva. O objetivo deste trabalho foi avaliar os parâmetros clínicos e hematológicos de reprodutores caprinos naturalmente infectados pelo vírus da CAE, bem como verificar a influência da transição das estações seca e chuvosa no Ceará nestes parâmetros. O trabalho foi conduzido na Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, Embrapa Caprinos, no Município de Sobral, CE. Foram utilizados oito reprodutores caprinos positivos para CAE, mantidos em um sistema semi-intensivo de criação, submetidos a exames clínicos quinzenais e a hemograma completo mensal, durante o período de setembro de 2006 a fevereiro de 2007. Os dados foram expressos na forma de média e analisados pelo software Staview a 5% de probabilidade. Observou-se um aumento significativo da freqüência cardíaca durante a estação chuvosa (90,09 ± 16,21 bpm). O índice articular clínico superior a sete, considerado indicativo de um quadro clínico de artrite, foi verificado em três animais durante todo o experimento, todavia a estação climática não interferiu neste parâmetro. Foi observado um aumento significativo na contagem absoluta de eosinófilos (90,09 ± 16,21/µL) e monócitos (100,91 ± 21,12/µL) durante a estação chuvosa. Conclui-se que a estação climática não altera os parâmetros físicos de reprodutores caprinos infectados pelo CAEV explorados na região norte do Estado do Ceará. Todavia, a estação chuvosa propicia condições climáticas e ambientais que alteram a contagem de monócitos e eosinófilos desses reprodutores.

ABSTRACT Caprine arthritis encephalitis (CAE) is a specific infectious disease of caprines. It usually leads to a chronic disease, being characterized by a long incubation period and a slow and progressive clinical evolution. The aim of this work was to evaluate the clinical and hematologic parameters of bucks naturally infected by the CAE virus, as well to verify the influence of the transition from the dry to rainy season in the state of Ceará, Brazil, on these parameters. The work was carried out at the Brazilian Agricultural Research Corporation – Goats in Sobral, state of Ceará. A total of 8 bucks positive for CAE were used, maintained in a semi-intensive raising system and submitted to biweekly clinical exams and complete blood count monthly, from September 2006 to February 2007. The data were expressed as means and analyzed using the software Staview with 5% of probability. A significant increase of the heart rate was observed during the rainy station (90.09 ± 16.21 bpm). An articular clinical index superior to 7, considered as a clinical indication of arthritis, was verified in 3 animals during the experiment, although the climatic season did not influence this parameter. A significant increase was observed in the absolute count of eosinophiles (90.09 ± 16.21 /µL) and monocytes (100.91 ± 21.12 /µL) during the rainy season. We conclude that the climatic season did not alter the physical parameters of the CAEV-infected bucks studied in this experiment in the north of the state of Ceará, Brazil. However, the rainy station provides climatic and environmental conditions that alter the monocyte and eosinophile count of these bucks.

RESUMO A artrite encefalite caprina (CAE) doença vírica comum em cabras leiteiras. A introdução de animais infectados no rebanho é uma das formas de disseminação mais importantes, especialmente, pela dificuldade de diagnóstico nos estágios iniciais. Objetivou-se verificar o risco de disseminação da CAE através da comercialização de animais jovens soronegativos. Foram utilizados 46 animais da raça Saanen de aproximadamente 1 ano de idade, sendo todos filhos ou netos de animais soropositivos para CAE. Estes animais foram acompanhados clinicamente por 1 ano, sendo submetidos a 2 testes de imunodifusão em Gel de Agarose (IDGA), para a detecção de anticorpos anti-caev, feitos com intervalo de 6 meses. Ao final deste período os mesmos foram submetidos ao teste de Reação em Cadeia de Polimerase-Nested (PCR-Nested) para a detecção do DNA proviral em monócitos. Nos testes sorológicos apenas um animal apresentou resultado positivo no segundo exame, enquanto que no PCR-nested 35 mostraram-se positivos (76,08 %). Pode-se concluir que a aquisição de animais jovens, oriundos de propriedades com histórico de CAE, representa um alto risco na disseminação desta enfermidade, especialmente, quando se utiliza o teste de IDGA como único método de diagnóstico da infecção no momento da aquisição destes animais.

ABSTRACT Caprine arthritis encephalitis is a rather commom viral disease affecting dairy goats. The introduction of infected animals in the herd is an important form of dissemination, especially due to difficulties in getting an infection diagnosis in its early stages. The objective this study was to evaluate the risks of CAE dissemination through sales of young animals soronegative to the infection. Forty-six animals of the Saanen breed, approximately one year old, were used in the test, all of them either sons or grandsons of the CAE soropositive animals. The animals were clinically monitored for a 1 years period, and submitted to 2 agarose gel immunodifusion (IDGA) tests for detection of antiCAEV antibodies, performed at 6-month intervals. At the end of that period, the animals were submitted to the nested polymerase chain reaction (PCR-nested) test for detection of proviral DNA in monocitys. In the serological tests, only 1 animal showed a positive result in the second exam, while in the PCR-nested 35 animals (76.08%) were positive. The present results support the suspicion that the acquisition of young animals from property with a history of CAE poses a high risk for dissemination of the disease, particularly when the AGID test is the only method used to diagnose the infection when animals are purchased.