<p>Alguns corpos d’água da Bacia Hidrográfica do Rio dos Sinos (BHRS) vêm sofrendo os efeitos da poluição por efluentes domésticos, industriais e agroindustriais. A presença de compostos citotóxicos e genotóxicos pode comprometer a qualidade da água e o equilíbrio desses ecossistemas. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a genotoxicidade e a citotoxicidade da água em quatro pontos ao longo da BHRS (Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom e Esteio), utilizando bioensaios em peixes e em cultura celular. As amostras de água de superfície foram coletadas e avaliadas <italic>in vitro</italic> utilizando a espécie de peixe <italic>Astyanax jacuhiensis</italic> (teste de micronúcleo e ensaio cometa) e a linhagem celular tipo Vero (ensaio cometa e os testes de citotoxicidade vermelho neutro - VN e tetrazólio MTT). O teste de micronúcleos em peixes não apresentou diferenças significativas entre os pontos de coleta, assim como o ensaio cometa e os testes VN e MTT nas células Vero. O ensaio cometa demonstrou aumento nos danos genéticos em peixes expostos às amostras de água coletadas nos trechos médio e inferior da bacia (Parobé, Campo Bom e Esteio) em relação ao trecho superior da bacia (Santo Antônio da Patrulha). Os resultados indicam contaminação por substâncias genotóxicas a partir do trecho médio da BHRS.</p>

<p>Some water bodies in the Sinos River Basin (SRB) have been suffering the effects of pollution by residential, industrial and agroindustrial wastewater. The presence of cytotoxic and genotoxic compounds could compromise the water quality and the balance of these ecosystems. In this context, the research aimed to evaluate the genotoxicity and cytotoxicity of the water at four sites along the SRB (in the cities of Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom and Esteio), using bioassays in fish and cell culture. Samples of surface water were collected and evaluated <italic>in vitro</italic> using the <italic>Astyanax jacuhiensis</italic> fish species (micronucleus test and comet assay) and the Vero lineage of cells (comet assay and cytotoxicity tests, neutral red - NR and tetrazolium MTT). The micronucleus test in fish showed no significant differences between the sampling sites, and neither did the comet assay and the MTT and NR tests in Vero cells. The comet assay showed an increase in genetic damage in the fish exposed to water samples collected in the middle and lower sections of the basin (Parobé, Campo Bom and Esteio) when compared to the upper section of the basin (Santo Antônio da Patrulha). The results indicate contamination by genotoxic substances starting in the middle section of the SRB.</p>

<p>A preservação dos recursos hídricos está diretamente relacionada ao monitoramento da contaminação fecal, no intuito de possibilitar o desenvolvimento de estratégias apropriadas para a gestão das fontes poluidoras. No presente estudo, vinte e cinco amostras de água de seis pontos de captação de água para abastecimento público foram utilizadas para análise da presença de cafeína, de coliformes totais e de coliformes termotolerantes. Cafeína foi detectada em todas as amostras coletadas nos diferentes locais de amostragem, com intervalo de concentração entre 0,15 ng mL^–1 e 16,72 ng mL^–1. Coliformes totais foram detectados em todas as amostras analisadas, com concentrações variando de 52 NMP/100 mL a concentrações maiores que 24196 NMP/100 mL, enquanto a faixa de variação de concentração de coliformes termotolerantes variou de menos de 1 NMP/100 mL a 7800 NMP/100 mL. Não foi verificada correlação significativa entre coliformes totais e cafeína (rs = 0.35, p = 0.09), no entanto foi observada correlação moderada entre coliformes termotolerantes e cafeína (rs = 0.412, p <0.05), o que pode indicar uma provável fonte humana destas bactérias. A determinação de cafeína em amostras de água pode ser uma ferramenta útil para avaliar a contaminação com resíduos fecais humanos.</p>

<p>The preservation of hydric resources is directly related to fecal contamination monitoring, in order to allow the development of strategies for the management of polluting sources. In the present study, twenty-five water samples from six water public supply collection sites were used for the evaluation of the presence of caffeine, total and fecal coliforms. Caffeine was detected in all samples, with concentrations ranging from 0.15 ng mL^–1 to 16.72 ng mL^–1. Total coliforms were detected in all samples, with concentrations in the range of 52 NMP/100 mL to higher than 24196 NMP/100 mL, whether the concentration range for fecal coliforms was in the range of below 1 NMP/100 mL to 7800 NMP/100 mL. No significant correlation was found between total coliforms and caffeine concentrations (rs = 0.35, p = 0.09). However, a moderate correlation between fecal coliforms and caffeine concentrations was found (rs = 0.412, p <0.05), probably indicating a human source for these bacteria. Caffeine determination in water may be a useful strategy to evaluate water contamination by human fecal waste.</p>

<p>O presente estudo é uma compilação dos dados resultantes das ações de auditoria ambiental da certificação ambiental voluntária empresa amiga do meio ambiente da Associação Comercial e Industrial de Novo Hamburgo, Campo Bom e Estância Velha, os quais são analisados, considerando as premissas mais clássicas da gestão ambiental, quais sejam, o desenvolvimento sustentável e governança corporativa. O objetivo é avaliar o nível de aplicação das concepções de governança corporativa no cotidiano das empresas, empreendimentos ou organizações e verificar o quanto a permeabilidade e imbricação vertical destes conceitos poderia auxiliar na transformação da gestão ambiental burocrática numa ação de gestão ambiental sistêmica, proativa e valorativa, trazendo maior valor agregado para as operações avaliadas. Os resultados demonstram que quando são analisados itens auditados que não estejam diretamente relacionados com legislação e sanções aplicáveis, não ficam claros os possíveis indicativos de melhorias de gestão e processos. A inclusão de indicadores mais avançados significaria a passagem de uma gestão ambiental burocrática, que atende apenas satisfatoriamente normas regulamentadas a uma gestão ambiental sistêmica e proativa, que possa trazer maior valor agregado e perenização aos empreendimentos. Todas as ações que depende mais de redistribuição interna de poder e imbricação vertical ou permeabilidade de atitudes que materializem concepções de governança corporativa não são identificadas pelos dados auditados e analisados.</p>

<p>This study compiled data on environmental auditing and voluntary certification of environment-friendly businesses of the Commercial and Industrial Association of Novo Hamburgo, Campo Bom and Estância Velha and analysed them according to classical environmental management principles: sustainable development and corporate governance. It assessed the level of application of the concepts of corporate governance to everyday business in companies and organisations and estimated how the interconnection and vertical permeability of these concepts might help to make bureaucratic environmental management systemic, proactive and evaluative, changes that may add great value to the operations evaluated. Results showed that, when analysing only audited items not directly defined in legislation, no significant changes were identified. The inclusion of more advanced indices may promote the transition from bureaucratic management, which meets regulated environmental standards only satisfactorily, into proactive and systemic environmental management, which adds value to companies and helps to perpetuate them. Audited and analysed data did not reveal actions that depend on the internal redistribution of power and the interconnection or verticality of attitudes that may materialize concepts of corporate governance.</p>

<p>É amplamente reconhecido que os marcadores biológicos e químicos clássicos para a poluição ambiental não necessariamente indicam a presença ou ausência de ameaças emergentes à saúde pública, tais como vírus transmitidos pela água e genotoxicantes. Este estudo preliminar teve por objetivo detectar material genético de enterovírus (EV), rotavírus (RV) e adenovírus (AdV) e genotoxicidade em amostras de água de pontos de monitoramento de rotina da qualidade da água no curso principal do rio dos Sinos. Os pontos são classificados em níveis diferentes de poluição, de acordo com as normativas federais brasileiras. Genomas virais de EV, RV e RV foram detectados em dois dos quatro pontos de coleta, independente do nível de urbanização das áreas adjacentes. Por outro lado, não foi observada genotoxicidade em alevinos de piava (<italic>Leporinus obtusidens</italic>) cultivados nestas mesmas amostras de água. Os resultados são comparados com marcadores físicos, químicos e microbiológicos clássicos, não há nenhuma evidência clara da associação entre qualquer um dos marcadores clássicos e da presença de genomas virais nas amostras de água testadas.</p>

<p>It is well recognized that the classical biological and chemical markers of environmental pollution do not necessarily indicate the presence or absence of emerging threats to public health, such as waterborne viruses and genotoxicants. The purpose of this preliminary study was to evaluate the presence of material of enteroviruses (EV), rotavirus (RV) and adenovirus (AdV) and genotoxicity in water samples from points of routine monitoring of water quality in the main course of the Sinos River. The points are classified into different levels of pollution in accordance to the Brazilian federal regulations. Viral genomes from EV, AdV were detected in two of the 4 collection points regardless of the level of urbanisation of the surrounding areas. In contrast, genotoxicity was not observed in piava (<italic>Leporinus obtusidens</italic>) fingerlings cultivated on these same water samples. Results were compared with classical physical, chemical and microbiological parameters. There was no clear evidence of association between any of the classical markers and the presence of viral genomes in the water samples tested.</p>

<p>O uso e ocupação do solo não planejados, sem respeitar sua capacidade de assimilação e de purificação ambiental, levam à degradação do ambiente e da água utilizada para consumo humano. Áreas agrícolas, plantas industriais e centros urbanos desenvolvidos sem planejamento e controle de descargas de efluentes são as principais causas de poluição da água em bacias hidrográficas que recebem todos os efluentes líquidos produzidos naqueles lugares. Nas últimas décadas, gestão ambiental tornou-se parte das agendas governamentais em busca de soluções para a preservação da qualidade da água e a restauração de recursos já degradadas. Este estudo avaliou as condições do curso de água principal da bacia do Rio dos Sinos, monitorando o principal físico, químico e microbiológicos parâmetros descritos na Resolução CONAMA n.º 357/2005. O conjunto de parâmetros avaliados em cinco pontos de captação de água para consumo humano revelou um rio que tem características diferentes em cada alcance, como o superior chegar era classe 1, Considerando que o atinge médio e inferior da bacia foram classe 4. monitoramento apontado famílias como as principais fontes de poluentes naqueles atinge, apesar de metais utilizados na produção industrial da região foram encontrados nas amostras analisadas.</p>

<p>Unplanned use and occupation of the land without respecting its capacity of assimilation and environmental purification leads to the degradation of the environment and of water used for human consumption. Agricultural areas, industrial plants and urban centres developed without planning and the control of effluent discharges are the main causes of water pollution in river basins that receive all the liquid effluents produced in those places. Over the last decades, environmental management has become part of governmental agendas in search of solutions for the preservation of water quality and the restoration of already degraded resources. This study evaluated the conditions of the main watercourse of the Sinos River basin by monitoring the main physical, chemical and microbiological parameters described in the CONAMA Resolution no. 357/2005.The set of parameters evaluated at five catchment points of water human consumption revealed a river that has different characteristics in each reach, as the upper reach was class 1, whereas the middle and lower reaches of the basin were class 4. Monitoring pointed to households as the main sources of pollutants in those reaches, although metals used in the industrial production of the region were found in the samples analyzed.</p>

<p>Os ensaios de citotoxicidade utilizando culturas de células constituem uma alternativa para avaliar a toxicidade biológica de águas de superfície e podem auxiliar no controle da qualidade da água. Este estudo comparou dois métodos de preparação dos meios de cultura com amostras de água coletadas no rio Rolante, um importante afluente do Rio dos Sinos, para a exposição de células Hep-2. A toxicidade foi avaliada usando os ensaios do MTT e do vermelho neutro (VN). Dois métodos foram utilizados para preparar os meios de cultura. No método 1, a amostra foi diluída a 1:1, 1:10, 1:100, 1:1000 e 1:10.000 (v/v, amostra/ meio de cultivo) em um meio de cultura padrão; no método 2, as amostras de água foram utilizados como solventes para o meio de cultura, o qual foi preparado em concentração de 100% e nas diluições de 80, 60, 40 e 20%. Culturas semi-confluentes foram então expostas aos meios teste durante 24 horas, e a citotoxicidade foi determinada imediatamente usando os ensaios MTT e VN. A atividade mitocondrial (MTT) foi significativamente menor em todas as concentrações em ambos os métodos, exceto na diluição 1:1000 do método 1. No entanto, os resultados de viabilidade lisossomal (VN) revelaram citotoxicidade apenas no na diluição 1:1 do método 1. Ambos os métodos de preparação do meio cultura foram eficientes e sensíveis para o ensaio do MTT, mas o método 2 foi mais adequado para o ensaio do VN. O rio Rolante possui contaminantes citotóxicos para as células Hep-2, o que pode ser uma das explicações para a baixa qualidade da água da Bacia do Rio dos Sinos.</p>

<p>Cytotoxicity assays using cell cultures may be an alternative to assess biological toxicity of surface waters and may help to improve the control of water quality. This study compared two methods to prepare culture media for the exposure of Hep-2 cells to water samples collected from the Rolante River, an important affluent of the Sinos River. The toxicity was evaluated using the MTT and neutral red assays. Two methods were used to prepare culture media. In method 1, the sample was diluted at 1:1, 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10.000 (v/v, sample/medium) in a standard culture medium; in method 2, water samples were used as the solvent for the culture medium, which was prepared at concentrations of 100, 80, 60, 40 and 20%. Semi-confluent cultures were then exposed to the media test for 24 hours, and cytotoxicity was determined immediately using the MTT and NR assays. Mitochondrial activity (MTT) was significantly lower at all concentrations in both methods, except at 1:1000 in method 1. However, the lysosome viability (NR) results revealed cytotoxicity only in the 1:1 sample of method 1. Both culture preparation methods were efficient and sensitive to the MTT assay, but method 2 seemed to be more adequate for the NR assay. The Rolante River has cytotoxic contaminants to Hep-2 cells, which may be one of the explanations for the poor water quality of the Sinos River basin.</p>

<p>A disseminação de vírus entéricos de animais domésticos e seres humanos para espécies selvagens pode ser facilitada pela resistência desses vírus no ambiente e sua capacidade de ser transmitida por água e alimentos contaminados. O estado de saúde das populações de Graxains-do-campo (<italic>Lycalopex gymnocercus</italic>) e Cachorros-do-mato (<italic>Cerdocyon thous</italic>) é em grande parte desconhecida e as paisagens ocupadas por estes animais no sul do Brasil têm sido ameaçadas pela ocupação humana e a expansão da agricultura. Neste trabalho, utilizou-se a pesquisa de genomas de adenovírus humanos (HAdV ) e caninos (CAV-1 e -2) em amostras fezes desses carnívoros selvagens com vistas a diagnosticar a disseminação de patógenos de animais domésticos e seres humanos às populações de vida livre em uma reserva de vida selvagem, localizado no sul do Brasil. Foram realizadas reações em cadeia da polimerase diferenciais e em tempo real (qPCR) de adenovírus específicos em amostras de fezes, evitando a captura e estresse adicional para os animais. PCRs gênero-específicas convencionais com transcrição reversa prévia (RT-PCR) foram ainda realizadas visando a detecção de enterovírus (EV) e rotavírus (RV) nestas mesmas amostras. Genomas de HAdV foram encontrados em 14 a 17 amostras de fezes (82.35%) analisados, Considerando que o CAV foi encontrado coinfectando 5 destas amostras. Genomas de RV foram detectados em 7 das 17 amostras (41.18%) e todas as amostras foram negativas para EV. Os resultados apontam para a dispersão de HAdV e RV em uma taxa elevada para estas espécies de carnívoros selvagens sul-americanas, que podem ser um efeito da crescente antropização do habitat desses animais.</p>

<p>The spread of enteric viruses of domestic animals and human beings to wild species can be facilitated by the resistance of these viruses on the environment and their ability to be transmitted by water and contaminated food. The health status of the populations of pampas foxes (<italic>Lycalopex gymnocercus</italic>) and crab-eating foxes (<italic>Cerdocyon thous</italic>) is largely unknown and the landscapes occupied by these animals in southern Brazil have been threatened by human occupation and expansion of agriculture. In this work, the search of genomes of human and canine adenoviruses in feces from these wild carnivores was used to track the dissemination of domestic animals and human pathogens to the free-living populations in a wildlife reserve located in southern Brazil. This was performed by virus-specific differential real-time polymerase chain reactions (qPCR) on stool specimens, avoiding capture and additional stress to the animals. Genus-specific conventional reverse-transcriptase PCR (RT-PCR) was complementarily performed aiming the detection of enteroviruses (EV) and rotaviruses (RV) on these same samples. HAdV genomes were found on 14 out of the 17 (82.35%) stool samples analysed, whereas CAV was found co-infecting 5 of these samples. RV genomes were detected on 7 of the 17 samples (41.18%) and all samples were negative for EV. The results point to the dispersion of HAdV and RV at a high rate to these species of South American wild carnivores, which can be an effect of growing anthropisation of the habitat of these animals.</p>

The present study aimed to detect BoHV-1 and BoHV-5 latent infections in Uruguayan beef cattle. Trigeminal ganglia (TG) were collected from 62 cattle heads in a slaughterhouse. Viral genomes were detected by a type-differential nested PCR (nPCR) targeting the UL44 gene of BoHV-1 and BoHV-5. Viral DNA was detected in 64.5% (40/62) of the animals. Thirty cattle heads (48.4%) contained only BoHV-1 DNA, whereas nine (14.5%) contained DNA of both BoHV-1 and BoHV-5. One cattle head (1.6%) contained BoHV-5 DNA only. Detection of neutralising antibodies was performed on sera of the examined cattle heads by a standard serum neutralization test. Neutralising antibodies were detected in 16 of the viral DNA-carrying animals, corresponding to 40% of the samples from which viral genomes were identified. The type-specific genomic prevalence was substantially different from that reported in a similar study carried out in Brazil and may be associated to the predominant European type of breeds farmed in Uruguay, as opposed to Brazilian cattle which is often crossbred (Bos Taurus x Bos indicus). Therefore, despite both BoHV-1 and BoHV-5 do circulate in Uruguay and sometimes both viruses can co-infect cattle, BoHV-5 infections seem less frequent than BoHV-1 infections.

El presente estudio tuvo como objetivo detectar la presencia de BoHV-1 y BoHV-5 en infecciones latentes de ganado vacuno en el Uruguay. Se analizaron 62 muestras de ganglios trigéminos (TG) de cabezas de bovinos colectados en un frigorífico. Utilizando un tipo diferencial de PCR (nPCR) focalizando en el gen UL44 de BoHV-1 y BoHV-5 se detectaron los diferentes genomas virales. ADN viral fue detectado en 64,5% (40/62) de los animales. Treinta muestras (48,4%) contenían solo el ADN de BoHV-1, mientras que nueve (14,5%) contenían ADN de ambos BoHV-1 y BoHV-5. Una sola muestra (1,6%) contenía apenas ADN de BoHV-5. La detección de anticuerpos neutralizantes se realizó en los sueros mediante la técnica de seroneutralización in vitro. Anticuerpos neutralizantes fueron encontrados en 16 de los animales portadores de ADN viral, lo que corresponde a 40% de las muestras con genoma viral identificado. La prevalencia genómica específica del tipo viral fue sustancialmente diferente de la que se informó en un estudio similar llevado a cabo en Brasil y puede estar asociada con el tipo de razas europeas predominante criadas en Uruguay, en contrapartida a los bovinos brasileños que son cruzados (Bos taurus x Bos indicus). Sin embargo, y a pesar de que tanto BoHV-1 y BoHV-5 pueden ser causas de coinfecciones ocasionales en Uruguay, BoHV-5 mostró una significativa menor prevalencia comparado con BoHV-1.

Adenovírus (AdV), enterovírus (EV), rotavírus (GARV) e Torque teno vírus (TTV) são vírus não envelopados, excretados nas fezes, podendo, assim, contaminar corpos hídricos. No presente estudo, a detecção molecular desses agentes foi realizada em amostras de águas superficiais provenientes do Arroio Dilúvio, o qual cruza a cidade de Porto Alegre-RS, Brasil. As amostras foram coletadas em três meses diferentes (janeiro, abril e setembro) do ano de 2009. A maior taxa de detecção viral foi observada para EV (64,28%), seguida por TTV (28,57%) e AdV (21,43%). Rotavírus não foi detectado. Foi verificada presença simultânea de dois grupos virais em cinco (35,71%) das 14 amostras analisadas. Janeiro foi o mês com a maior taxa de detecção viral, sendo todas as amostras, coletadas nesse mês, positivas para, no mínimo, um grupo viral em estudo. A correlação entre a detecção desses diferentes agentes virais e os fatores ambientais é discutida. Conforme conhecimento dos autores, essa é a primeira descrição de genomas virais em amostras de água provenientes do Arroio Dilúvio, Porto Alegre, Brasil.

Adenovirus (AdV), enterovirus (EV), genogroup A rotaviruses (GARV) and Torque teno virus (TTV) are non-enveloped viral agents excreted in feces and so may contaminate water bodies. In the present study, the molecular detection of these viruses was performed in samples of surface water collected from the Arroio Dilúvio, a waterstream that crosses the city of Porto Alegre, RS, Brazil, receiving great volumes of non-treated sewage from a large urban area. Sampling was performed during 2009, in three different occasions (January, April and September). The highest detection rate was observed for EV (64.28%), followed by TTV (28.57%) and AdV (21.43%). Rotaviruses were not detected. More than on kind of tested virus was detected in five (35. 71%) of 14 samples. January was the month with the highest viral detection rate, being all samples, collected in this month, positive for at least one group of tested virus. The correlation between the detection of these different viral agents and environmental factors is discussed. To the knowledge of the authors, this is the first description of viral genomes in water samples taken from the Arroio Dilúvio, Porto Alegre (Brazil).

Several health organizations have classified diabetes mellitus, a metabolic syndrome, as the epidemic of the century, since it affects millions of people worldwide and is one of the top ten causes of death. Type 1 diabetes is considered to be an autoimmune disease, in which autoaggressive T cells infiltrate the islets of Langerhans in the pancreas, leading to the destruction of insulin producing beta cells. The risk of the disease is modulated by genetic factors, mainly genes coding for human leukocyte antigens (HLA). However, the incidence of this disease has increased significantly during the recent decades, which cannot be explained only by genetic factors. Environmental perturbations have also been associated to the development of diabetes. Among these factors, viral triggers have been implicated; particularly enteroviruses, which have been associated to the induction of the disease. Supporting the hypothesis, numerous lines of evidence coming from mouse models and patients with this type of diabetes have shown the association. The present review aims to provide some understanding of how type 1 diabetes occurs and the possible role of enterovirus in this pathology.

A bacia hidrográfica do rio dos Sinos está localizada na região leste do Estado do Rio Grande do Sul e inclui 32municípios. Esses municípios desenvolvem diferentes atividades econômicas diversas, como a agricultura e a pecuária ao longo dos 190 km de extensão do rio dos Sinos, um dos rios com qualidade de água mais baixa no Brasil. A região também é caracterizada pela crescente urbanização e intensa industrialização. A principal atividade econômica é a indústria do couro e do calçado. Esta ocupação diversificada coloca a bacia do rio dos Sinos em risco de uma vasta gama de potenciais impactos ambientais. O objetivo do presente artigo é discutir o processo socioeconômico implementado atualmente na bacia hidrográfica do rio dos Sinos e os efeitos dessas ações humanas sobre a qualidade ambiental descrita ao longo desta edição especial da Revista Brasileira de Biologia.

The Rio dos Sinos watershed is located in the eastern region of the state of Rio Grande do Sul and includes 32municipalities. These municipalities develop several different economic activities such as farming and livestock along the 190 km length of the Rio dos Sinos, one of the rivers with the worst quality of water in Brazil. The region is also characterised by growing urbanisation and heavy industrialisation. The main economic activity is the leather and footwear industry. This diversified land use puts the Rio dos Sinos watershed at risk of a wide range of potential environmental impacts. The aim of the present article is to discuss the socioeconomic process currently implemented in the Rio dos Sinos watershed and the effect of these human actions on the environmental quality described throughout this special issue of the Brazilian Journal of Biology.

Intracerebral pathogenicity index (ICPI) and mean death time (MDT) were determined using commercial live vaccines against Newcastle disease available in Brazil. The ICPI profiles obtained for B1 vaccine strains were nonvirulent and varied from 0 to 0.19, and their MDT was 104-116 hours. The LaSota strains had an ICPI varying between 0.02 and 0.37 and MDT from 92 to 116 hours. ICPI and MDT for the Clone 30 were 0.11 and 104 hours, respectively. For Ulster vaccines, ICPI and MDT were 0 and >150 hours; for VG-GA was 0.03 and 140 hours; and for C2, 0.04 and >144 hours. Eye drop vaccination and IM challenge, at the 1st week and the 4th week, respectively, resulted in highest protection for B1 (95-100%) and LaSota (90-100%) strains. The variability in vaccine ICPI did not interfere with immune response and all vaccines provided similar protection. All vaccines were considered non virulent and were classified as lentogenic according to the immunobiological product standards.