Resumo Os óleos essenciais do caule e da folha de Croton doctoris foram analisados por cromatografia gasosa (GC) e espectrometria de massa (GC-MS) resultando em 22 compostos identificados. Os efeitos dos óleos essenciais na germinação, crescimento de raízes e parte aérea, teor total de clorofila, respiração radicular, atividade de peroxidase, catalase e superóxido de dimetase e índice mitótico foram determinados em alface e cebola. Atividade antioxidante, antimicrobiana e citotóxica também foram investigadas. Os resultados revelaram que o óleo do caule é constituído por 15 compostos, dos quais os principais são o óxido de cariofileno (24,5%) e E-cariofileno (13,3%). O óleo foliar apresentou E-cariofileno (39,6%) seguido de α-humuleno (13,2%) como compostos majoritários. Os óleos inibiram a germinação e o crescimento das plântulas de alface e cebola e reduziram o conteúdo de clorofila, a respiração radicular e a divisão celular. Eles também causaram estresse oxidativo, indicado pelo aumento da atividade das enzimas antioxidantes avaliadas. Esses processos fisiológicos anormais contribuem para a inibição do crescimento das plantas. Os efeitos fitotóxicos mais pronunciados foram observados no óleo do caule. Nos testes de citotoxicidade observou-se que o óleo das folhas foi mais ativo, resultante da presença de sesquiterpenos biologicamente ativos que atuam inibindo o crescimento das células cancerígenas.

Abstract Essential oils from the stems and leaves of Croton doctoris were analyzed by gas chromatography and mass spectrometry, resulting in 22 identified compounds. The effects of these essential oils on the germination, root and shoot growth, total chlorophyll content, potential root respiration, peroxidase activity, catalase, superoxide dismutase, and mitotic index in lettuce and onion were determined. Antioxidant, antimicrobial, and cytotoxic activity were also investigated. The results revealed that the stem oil consisted of 15 compounds, of which caryophyllene oxide (24.5%) and E-caryophyllene (13.3%) were the major constituents. The leaf oil contained E-caryophyllene (39.6%) and α-humulene (13.2%) as major compounds. The oils inhibited the germination and growth of lettuce and onion seedlings and reduced chlorophyll content, root respiration, and cell division. They also caused oxidative stress, indicated by the increased activity of the evaluated antioxidant enzymes. These abnormal physiological processes contributed to the inhibition of plant growth. The most pronounced phytotoxic effects were observed in the stem oil. The cytotoxicity tests indicated that leaf oil was more active than stem oil, resulting from the presence of biologically active sesquiterpenes that inhibit the growth of cancer cells.

RESUMO Aleloquímicos são substâncias liberadas por certas espécies vegetais no ambiente que influenciam a germinação e o desenvolvimento de outras plantas. O objetivo desse estudo foi avaliar o potencial fitotóxico de Cleome guianensis Aubl., bem como determinar o grau de estresse oxidativo causado em Senna occidentalis L. Para isso, o óleo das folhas de C. guianensis, nas concentrações 0,5 µg/mL, 1,0 µg/mL, 2,5 µg/mL e 5,0 µg/mL, em solução de 5 ml foi testado em bioensaios de germinação e de crescimento da raiz primária e do hipocótilo de S. occidentalis. Os indivíduos de S. occidentalis foram macerados, homogeneizados e submetidos a ensaios de quantificação da catalase, peroxidase, SOD e de peroxidação lipídica. Os resultados indicam que todas as concentrações do óleo volátil causaram um efeito negativo sobre a germinação e crescimento de S. occidentalis. Na concentração 5,0 µg/mL, houve 56% de inibição da germinação e 83% de inibição de crescimento do hipocótilo. Ainda, o óleo aumentou a atividade das enzimas induzidas pelo estresse oxidativo catalase, peroxidase e superóxido dismutase (SOD). Quanto à peroxidação lipídica, o óleo nas concentrações 1,0 µg/mL, 2,5 µg/mL e 5,0 µg/mL aumentou a produção de malondialdeído. Sendo assim, conclui-se que C. guianensis apresenta aleloquímicos que influenciam na germinação e no crescimento de S. occidentalis, além de aumentar a atividade das enzimas catalase, peroxidase, SOD e a produção de malondialdeído em S. occidentalis. Dessa forma, sugere-se a realização de estudos sobre o perfil químico do óleo a fim de descobrir as substâncias responsáveis por tais resultados e consolidar o potencial fitotóxico de C. guianensis.

ABSTRACT Allelochemicals inhibit the germination and growth of other plants. The purpose of this study was to assess the phytotoxic potential of Cleome guianensis Aubl., as well as determine the degree of oxidative stress caused in Senna occidentalis L. For this purpose, oil from the leaves of C. guianensis in concentrations of 0.5 µg/mL, 1.0 µg/mL, 2.5 µg/mL, and 5.0 µg/mL were tested in bioassays on the germination and growth of S. occidentalis. Specimens of S. occidentalis were macerated, homogenized, and submitted to catalase, peroxidase, superoxide dismutase (SOD), and lipid peroxidation quantification tests. Results showed that all concentrations of the volatile oil had a negative effect on S. occidentalis germination and growth. In the 5.0 µg/mL concentration, the oil inhibited 56% of germination and 83% of hypocotyl growth. In addition, the oil increased the activity of the enzymes induced by oxidative stress: catalase, peroxidase, and superoxide dismutase SOD. For lipid peroxidation, the oil in the 1.0 µg/mL, 2.5 µg/mL and 5.0 µg/mL concentrations increased the production of malondialdehyde. In addition, C. guianensis presents allelochemicals that influence the germination and growth of S. occidentalis, also enhancing activity of the catalase, peroxidase, and SOD enxymes, as well as malondialdehyde production in S. occidentallis. Hence, further studies of the chemical profile of this oil should be performed in order to discover which allelochemicals are responsible for these results and consolidate the phytotoxic potential of C. guianensis.

RESUMO O objetivo desse trabalho foi avaliar a atividade alelopática dos lixiviados das raízes e folhas secas de Asemeia extraaxillaris sobre o crescimento de corda de viola Ipomoea cordifolia em casa de vegetação, para avaliação dos efeitos sobre o estresse oxidativo. Nos bioensaios foram utilizadas três concentrações (0,25 - 5,00 e 10,00 g) e um controle, com quatro repetições de 10 plantas, cultivadas em solo durante 30 dias. Os lixiviados possuem ação alelopática e o maior efeito foi verificado para o pó das raizes. O efeito inibitório foi dose-dependente e o aumento do estresse oxidativo foi observado pelos níveis da catalase, peroxidase, superóxido dismutase, glutationa redutase, peroxidação lipídica e síntese de formazan. Concluiu-se que A. extraaxillaris possui substâncias capazes de afetar a emergência, o crescimento e o estresse oxidativo de I. cordifolia.

ABSTRACT The purpose of this article is to assess the allelopathic activity of leachates from the roots and dried leaves of Asemeia extraaxillaris on the germination and growth of corda de viola (Ipomoea cordifolia) in a greenhouse, and evaluate its effect on oxidative stress. For the bioassays, three concentrations (0.25, 5.00, and 10.00 g) and one control were used, with four replications of 10 plants, cultivated in soil for 30 days. The leachates exhibited allelopathic action, and the greatest effect was found in the root powder. The inhibitory effect was dose-dependent and the increase in oxidative stress was observed by the levels of catalase, peroxidase, superoxide dismutase, glutathione reductase, lipid peroxidation, and formazan synthesis. It was affirmed that A. extraaxillaris contains substances capable of affecting seedling emergence, growth, and oxidative stress in I. cordifolia.

The essential oil of roots of Jatropha ribifolia, obtained by hydrodistillation, was characterized in terms of its chemical composition by chromatographic method with flame ionization detection (GC-FID) and gas chromatography coupled to electron ionization mass spectrometry (GC-MS). The analyses and identification pointed by mass fragmentation pattern and retention index revealed the presence of 49 compounds, representing 91.4% of the total oil, with 39.5% of monoterpenes, 43.0% of sesquiterpenes and 8.5% of phenylpropanoids. The major compounds of the oil were β-pinene (9.2%), isoeugenol methyl ether (8.5%), vatirenene (8.4%), α-gurjunene (7.0%), endo-8-hydroxy-cycloisolongifolene (6.6%), α-pinene (6.4%) and p-menth-1-en-8-ol (5.2%). The fractionation by preparative thin layer chromatography (TLC) allowed obtaining five fractions (F1-F5) with different compound contents from the original oil. Some essential oil components showed a significant increase in their levels after fractionation, as borneol (17.9%, F1), 3-thujopsanone (19.1%, F4), isoeugenol methylether (21.2%, F2), 8-oxo-9H-cycloisolongifolene (21.4%, F4), 8-cis-5(1H)-azulenone,2,4,6,7,8,8a-hexahydro-3,8-dimethyl-4-(1-methylethylidene) (23.1%, F4) e endo-8-hydroxy-cycloisolongifolene (38.6%, F2). These fractions and oil were tested in vitro against nine human cancer cell lines by sulforhodamine B assay. The Jatropha oil was more effective in inhibiting the growth of cells NCI-H460 (drug resistant ovarian; GI50 6.2 µg mL–1) and OVCAR-3 (ovarian; GI508.0 µg mL–1). The cancer cells line PC-3 (prostate) was more sensitive to the effects of the fractions showing significant values of GI50 such as for fraction F1, F2 and F4 (< 0.25 µg mL–1). In general the antiproliferative activity of the fractions was more pronounced than that of crude oil.

Os óleos voláteis extraídos das raízes de Polygala extraaxillaris foram analisados para avaliar se aumentam o estresse oxidativo em Brachiaria decumbens var. Piatã e, posteriormente, estimar o seu efeito na divisão celular e citotoxicidade em laboratório. Foram utilizadas seis concentrações (0%, 0,35%, 0,65%, 1,25%, 0,65% e 5,0%), com quatro repetições de 25 sementes. A substância 1 - (2-hidroxifenil) - etanona foi identificado como o principal constituinte dos óleos voláteis. Os resultados mostraram que as concentrações mais elevadas dos óleos causaram aumento no estresse oxidativo em B. decumbens e também alteraram a germinação e o crescimento, com consequente redução no processo de divisão celular, levando alterações no padrão de crescimento e defesa antioxidante.

The volatile oils extracted from the roots of Polygala extraaxillaris were analyzed to assess whether they increase oxidative stress in Brachiaria decumbens var. Piatã, as well as to assess their effect on cellular division and cytotoxicity in laboratory. Six concentrations were used (0%, 0.35%, 0.65%, 1.25%, 0.65%, and 5.0%) with four repetitions of 25 seeds. The substance 1-(2-hydroxyphenyl) - ethanone was identified as the major constituent of the volatile oils. The results showed that the highest concentrations of the oils resulted in an increase in the oxidative stress in B. decumbens, as well as alteration in germination and growth, with a consequent reduction in the process of cellular division, causing changes in the growth standard and antioxidant defense.

The essential oils obtained by hydrodistillation from samples of propolis manufactured in three regions of Rio Grande do Sul State at Brazil, were analyzed through CG, CG-MS and chiral phase gas chromatography (CPGC). These analyses display the presence of samples with elevated essential oil purport, when compared with plants. The yields obtained were until 3.8%. The samples exhibited similar composition, with predominance of the monoterpenes α-pinene (5763%), β-pinene (12.5-30.8%) and limonene (1.5-11.2%). In chiral analysis ofthese constituents were observed modifications in the enantiomeric excess of isomers of α-pinene and limonene in relation with source location of the sample, already in the chiral analysis of β-pinene were detected only elevated excess of the enantiomer with the (-) configuration. The antimicrobial activity of the crude essential oil was assayed against five bacteria. The best result was obtained against Staphylococcus aureus.

Utilizando o método de difusão em ágar, este estudo avaliou in vitro a atividade antimicrobiana dos cimentos endodônticos comerciais: Acroseal e Epiphany, um cimento experimental à base do polímero da mamona, Polifil, e um agente primer (primer auto-adesivo do sistema Epiphany), contra Enterococcus faecalis. O cimento de óxido de zinco e eugenol (OZE) serviu como controle. Cinco poços por placa foram feitos em pontos eqüidistantes e imediatamente preenchidos com os materiais testados e controle. Após a incubação das placas aos 37ºC por 24 e 48 h foram medidas as zonas de inibição do crescimento bacteriano ao redor dos poços (em mm) com uma régua milimetrada. Após 48 h, os diâmetros das zonas de inibição do crescimento bacteriano foram os mesmos observados às 24 h, apenas as substâncias continuaram a se difundir. Epiphany e Polifil não apresentaram atividade antibacteriana (não ocorreu a formação das zonas de inibição do crescimento bacteriano). Os maiores halos de inibição foram atribuídos ao primer (17,62 mm), seguido do Acroseal (7,25 mm) e OZE (7,12 mm). E. faecalis foi resistente ao Epiphany e Polifil, enquanto que o primer e o cimento Acroseal foram eficientes contra esse microrganismo nas condições testadas.

Using the agar diffusion method, this study evaluated the in vitro antimicrobial activity of the commercial endodontic sealers Acroseal and Epiphany, a castor-oil based experimental sealer, Polifil, and a primer agent (Epiphany self-etching primer), against Enterococcus faecalis. Zinc oxide and eugenol cement (ZOE) served as control. Five wells per dish were made at equidistant points and immediately filled with the test and control materials. After incubation of the dishes at 37ºC for 24 h and 48 h, the diameter of the zones of microbial growth inhibition produced around the wells was measured (in mm) with a millimeter rule. After 48 h, the diameters of the zones of microbial growth inhibition were the same as those observed at 24 h, only the substances continued to diffuse. Epiphany and Polifil did not show antibacterial activity (no formation of zones of microbial growth inhibition). The primer produced the largest zones of inhibition (17.62 mm) followed by Acroseal (7.25 mm) and ZOE (7.12 mm). E. faecalis was resistant to Epiphany and Polifil, while the primer and Acroseal sealer were effective against this microorganism under the tested conditions.

Colibacilose suína causada por Escherichia coli enterotoxigênica continua sendo um dos principais problemas sanitários na criação de suínos. A tecnologia do DNA recombinante proporciona a possibilidade de desenvolvimento de novas estratégias de imunização. Neste trabalho é descrito o desenvolvimento de uma vacina de subunidade através da produção e purificação da proteína FaeC da fímbria de E. coli K88. O gene que codifica este antígeno foi amplificado por PCR e clonado em um vetor de expressão em E. coli, fusionado a uma cauda de histidinas. A proteína recombinante expressa por esta bactéria foi purificada, e depois de quantificada foi utilizada para imunizar camundongos. Paralelamente a isso, o mesmo gene foi clonado no vetor de expressão em célula eucariótica, introduzindo a seqüência de Kozak para favorecer a tradução deste gene em células musculares. O plasmídio resultante, denominado pUP310, foi produzido em larga escala e também utilizado na imunização de camundongos. A resposta imune induzida por ambas formas de imunizações foi monitorada por ELISA, onde o antígeno utilizado foi a proteína FaeC purificada. Houve indução de resposta imune nos camundongos inoculados com pUP310 e FaeC purificada. Foi possível detectar anticorpos anti-FaeC 42 dias após a primeira inoculação e este título foi aumentando, sendo ainda detectável 7 meses após a primeira inoculação. Conclui-se que pUP310 e FaeC recombinante são candidatos potenciais para imunização de suínos contra E. coli K88.

Swine colibacillosis caused by enterotoxigenic Escherichia coli remains one of the main sanitary problems in pig farms. The recombinant DNA technology offers the possibility of developing new immunization strategies. This paper describes the development of a subunit vaccine through the expression and purification of the E. coli K88 FaeC fimbrial protein. The gene that codes for this antigen was amplified by PCR and cloned into an E. coli expression vector fused to a 6X histidine tag. The recombinant protein was purified by affinity chromatography and used for mice immunization. In parallel, the same gene was cloned into an eucariotic expression vector with the addition of the Kozak sequence for improving translation of this gene in muscle cells. The resulting plasmid named pUP310 was purified in large scale and used to immunize mice. The immune response afforded by both forms of immunization was monitored by ELISA. There was an immune response in mice inoculated with pUP310 and purified FaeC. It was possible to detect anti-FaeC antibodies 42 days after the first inoculation. The antibody titer increased with time, being still detectable 7 months after the first inoculation. It is concluded that recombinant FaeC and pUP310 are potential tools for immunization of swine against E. coli K88.

A diarréia neonatal em suínos causada por Escherichia coli produtora de enterotoxinas (ETEC) é responsável por alta mortalidade e baixa taxa de crescimento de leitões. A habilidade de tais cepas causar doença é dependente principalmente da capacidade de E. coli aderir-se a mucosa do intestino delgado, que é mediada por fímbrias. Neste estudo o gene faeC, que codifica a subunidade menor da fímbria de E. coli K88ab, foi clonado no vetor de expressão em eucariotos pcDNA3, associado ou não à seqüência de KozaK. DNA plasmidial das duas versões da vacina foi inoculado em camundongos via intra-muscular, em duas doses, nos dias 0 e 21. Os animais que receberam a vacina de DNA contendo o faeC associado a seqüência de Kozak apresentaram soroconversões significativamente maiores (p<0,05) que os vacinados com pcDNA3/faeC sem a seqüência de Kozak.

The neonatal diarrhea in swine caused by enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) is responsible for high mortality and low growth rate in pigs and it is mainly dependent on the capacity of E. coli to attach to the surface of the small intestine, a property mediated by fimbria. In this study the faeC gene, which codes for the minor fimbrial subunit of E. coli K88ab, was cloned in the eukaryotic expression vector pcDNA3, associated or not to the Kozak sequence. Plasmid DNA of the two versions of the vaccine candidate was inoculated in mice by the intramuscular route, in two doses, at 0 and 21 days. The animals that received the DNA vaccine containing faeC associated to the Kozak sequence presented seroconversion significantly higher (P<0.05) than the one vaccinated with pcDNA3/faeC without the Kozak sequence.