RESUMEN Objetivo Identificar aislamientos de Fusarium en pacientes con micosis por medio de las técnicas moleculares de PCR y secuenciación. Métodos Se tomaron 101 muestras de pacientes con micosis sintomática, entre los años 2004 y 2006. Para la detección de aislamientos como pertenecientes al género Fusarium, se amplificó parcialmente por PCR la región 28S del DNAr; y posteriormente -para la detección de la especie de Fusarium- se utilizaron cebadores específicos para F. oxysporum y F. solani. La verificación de la identidad de la especie de los aislamientos se hizo por secuenciación parcial de los genes 28S DNAr y TEF1-α Resultados El total de 101 aislamientos fueron detectados como pertenecientes al género Fusarium utilizando un cebador universal de la region 28S DNAr; 52 y 29 aislamientos se detectaron como F. oxysporum o F. salani, respectivamente con los cebadores específicos, y la secuenciación parcial de los genes 28S rDNA o TEF1-α confirmó la identidad de las especies. Conclusión La secuenciación parcial del gen TEF1-α es aún el mejor marcador molecular para identificar aislamientos de Fusarium a nivel de especie. Sin embargo, en la mayoría de los casos es posible discriminar entre aislamientos de F. oxysporum y F. solani por PCR con cebadores específicos, lo que proporciona una ventaja importante considerando la simplicidad de la técnica y el rápido diagnóstico.

ABSTRACT Objective Identifying Fusarium isolates from mycosis symptomatic patients through molecular techniques as PCR and sequencing. Methods In this study, samples were taken from 101 mycosis symptomatic patients in-between 2004-2006. To determine isolates belonging to the Fusarium genus, the DNAr 28S region was amplified through PCR and specific PCR primers further confirmed their identity to the species level. Additionally, in order to confirm the identity of the species of the isolates, 75 isolates of these were analyzed by partial sequencing of the 28S rDNA and the TEF1-α gene. Results The 28S rDNA portion detected all 101 isolates as belonging to Fusarium and the PCR specific primers detected 52 and 29 isolates as F. oxysporum and F. solani, respectively; 34 and 41 of these, afterwards studied by partial sequencing of the 28S rDNA and TEF1- α genes respectively, were effectively identified by the technique. Conclusion From all the molecular markers used to identify Fusarium isolates, the sequence of the TEF1-α gene provided the best resolution in the identification of species level; however it is possible to discriminate between F. oxysporum and F. solani isolates by PCR, in most of the cases, what is important considering the simplicity of the technique and a faster diagnosis.

ABSTRACT Objective Identifying Fusarium isolates from mycosis symptomatic patients through molecular techniques as PCR and sequencing. Methods In this study, samples were taken from 101 mycosis symptomatic patients in-between 2004-2006. To determine isolates belonging to the Fusarium genus, the DNAr 28S region was amplified through PCR and specific PCR primers further confirmed their identity to the species level. Additionally, in order to confirm the identity of the species of the isolates, 75 isolates of these were analyzed by partial sequencing of the 28S rDNA and the TEF1-α gene. Results The 28S rDNA portion detected all 101 isolates as belonging to Fusarium and the PCR specific primers detected 52 and 29 isolates as F. oxysporum and F. solani, respectively; 34 and 41 of these, afterwards studied by partial sequencing of the 28S rDNA and TEF1- α genes respectively, were effectively identified by the technique. Conclusion From all the molecular markers used to identify Fusarium isolates, the sequence of the TEF1-α gene provided the best resolution in the identification of species level; however it is possible to discriminate between F. oxysporum and F. solani isolates by PCR, in most of the cases, what is important considering the simplicity of the technique and a faster diagnosis.

RESUMEN Objetivo Identificar aislamientos de Fusarium en pacientes con micosis por medio de las técnicas moleculares de PCR y secuenciación. Métodos Se tomaron 101 muestras de pacientes con micosis sintomática, entre los años 2004 y 2006. Para la detección de aislamientos como pertenecientes al género Fusarium, se amplificó parcialmente por PCR la región 28S del DNAr; y posteriormente -para la detección de la especie de Fusarium- se utilizaron cebadores específicos para F. oxysporum y F. solani. La verificación de la identidad de la especie de los aislamientos se hizo por secuenciación parcial de los genes 28S DNAr y TEF1-α Resultados El total de 101 aislamientos fueron detectados como pertenecientes al género Fusarium utilizando un cebador universal de la region 28S DNAr; 52 y 29 aislamientos se detectaron como F. oxysporum o F. salani, respectivamente con los cebadores específicos, y la secuenciación parcial de los genes 28S rDNA o TEF1-α confirmó la identidad de las especies. Conclusión La secuenciación parcial del gen TEF1-α es aún el mejor marcador molecular para identificar aislamientos de Fusarium a nivel de especie. Sin embargo, en la mayoría de los casos es posible discriminar entre aislamientos de F. oxysporum y F. solani por PCR con cebadores específicos, lo que proporciona una ventaja importante considerando la simplicidad de la técnica y el rápido diagnóstico.

Due to its high added value, vanilla (Vanilla planifolia) is a promising crop for the colombian agroindustry. Unfortunately, there is very little knowledge on the agronomical and phytosanitary management of this plant. One of the main issues concerning this crop is the basal stem rot. The objective of this work was to determine the causal agent of this disease in vanilla plantations under greenhouse shed conditions in western Antioquia. A total of 20 fungal isolates were obtained from infected stems and five of them were used in pathogenicity tests. Our results suggest that Fusarium oxysporum f. sp. vanillae is the causal agent of basal stem rot in Colombia. Phoma sp., Lasiodiplodia sp. and Bionectria sp. were also identified as associated to vanilla crops; future work should address their involvement in disease. This work will serve as the basis of plant disease management programs aimed at increasing the cultivated area of this orchid in Colombia.

El cultivo de vainilla (Vanilla planifolia) es una actividad agroindustrial promisoria, de alto valor agregado para el sector rural colombiano. Sin embargo, el nivel de conocimiento que se tiene sobre su manejo agronómico y en especial fitosanitario es muy incipiente. Uno de los problemas que afecta los planes de expansión de este cultivo, es la pudrición basal del tallo. Por tal razón se planteó la presente investigación con el objetivo de determinar el agente causal de esta enfermedad en plantaciones de vainilla bajo cobertizos de techo sombra en el occidente de Antioquia. A partir de tejido de tallo infectado se obtuvieron 20 aislamientos, cinco de los cuales fueron seleccionados para realizar pruebas de patogenicidad. Los resultados indicaron que el agente causal de la pudrición basal de las plantas de vainilla en Colombia corresponde al hongo Fusarium oxysporum f. sp. vanillae. Adicionalmente, se identificaron los hongos Phoma sp., Lasiodiplodia sp. y Bionectria sp., siendo necesario en el futuro determinar si están asociados a alguna patología de este cultivo. Se espera que los resultados de este estudio sirvan de base para el establecimiento de un programa de manejo integrado de enfermedades que conduzca al aumento del área de siembra de esta orquídea en Colombia.