INTRODUÇÃO: Durante a histoplasmose, os antígenos solúveis de Histoplasma capsulatum (CFAg) podem ser liberados naturalmente pelas células leveduriformes. Considerando que os CFAg constituem um alvo específico durante a infecção, no presente estudo nós investigamos a liberação de CFAg durante a histoplasmose murina experimental, e avaliamos a resposta imune humoral do hospedeiro contra antígenos de alta MM (hMMAg; >150 kDa), altamente imunogênicos. MÉTODOS: Camundongos foram infectados com 2.2x10(4) leveduras de H. capsulatum, cepa IMT/HC128. Os níveis de CFAg solúveis, IgG anti-CFAg, IgG anti-hMMAg, e também de imunocomplexos circulantes (CIC) IgG-hMMAgs foram determinados por ELISA nos dias 0, 7, 14 e 28 após a infecção. RESULTADOS: Após a infecção por H. capsulatum, observamos um aumento progessivo de CFAg circulantes, IgG anti-CFAg, IgG anti-hMMAg, e também de CIC IgG-hMMAgs. Os hMMAg apresentaram alta porcentagem de carboidratos e, pelo menos, dois componentes imunogênicos. CONCLUSÕES: Mostramos pela primeira vez que os hMMAg de H. capsulatum cepa IMT/HC128 induzem resposta imune humoral e levam à formação de CIC durante a histoplasmose experimental.

INTRODUCTION: During histoplasmosis, Histoplasma capsulatum soluble antigens (CFAg) can be naturally released by yeast cells. Because CFAg can be specifically targeted during infection, in the present study we investigated CFAg release in experimental murine histoplasmosis, and evaluated the host humoral immune response against high-molecular-mass antigens (hMMAg. >150 kDa), the more immunogenic CFAg fraction. METHODS: Mice were infected with 2.2x10(4) H. capsulatum IMT/HC128 yeast cells. The soluble CFAg, IgG anti-CFAg, IgG anti-hMMAg, and IgG-hMMAg circulating immune complexes (CIC) levels were determined by enzymelinked immunosorbent assay, at days 0, 7, 14, and 28 post-infection. RESULTS: We observed a progressive increase in circulating levels of CFAg, IgG anti-CFAg, IgG anti-hMMAg, and IgG-hMMAg CIC after H. capsulatum infection. The hMMAg showed a high percentage of carbohydrates and at least two main immunogenic components. CONCLUSIONS: We verified for the first time that hMMAg from H. capsulatum IMT/HC128 strain induce humoral immune response and lead to CIC formation during experimental histoplasmosis.

INTRODUÇÃO: Diferentes níveis sorológicos de IgG/IgE contra a fração de alta massa molecular (hMM) (~366kDa) de Paracoccidioides brasiliensis têm sido encontrados na PCM aguda e crônica. Considerando a inexistência de investigação sobre esta fração em isolados clínicos de P. brasiliensis, o objetivo deste estudo foi investigar a presença da fração hMM (~366kDa) no preparado livre de células (CFA) de P. brasiliensis obtidos de isolados clínicos. MÉTODOS: CFA de 10 isolados e de cepa de referência (Pb18) foram submetidas à eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE) seguida de captura de imagem e análise por densitometria. Adicionalmente, CFA de 20 isolados e de Pb18 foram analisados por ELISA captura (cELISA) utilizando anticorpos policlonal (polAb) ou monoclonal (mAb) para fração hMM. RESULTADOS: A presença do componente de hMM foi observada em todas as amostras analisadas por SDS-PAGE/densitometria e por cELISA. Adicionalmente, o teste de correlação de Pearson demonstrou forte relação entre os níveis de fração hMM usando pAb e mAb (R = 0.853) no cELISA. CONCLUSÕES: Conclui-se que a fração hMM está presente em todos os isolados clínicos de P. brasiliensis analisados e no isolado referencial, sugerindo a possibilidade dos mesmos serem utilizados como fonte desta fração antigênica. Este trabalho também introduz pela primeira vez o método de cELISA para detecção da fração hMM de P. brasiliensis, sugerindo que detecção utilizando anticorpos polAb ou mAb é viável e essa metodologia poderá ser útil para investigação futura desta fração solúvel (~366kDa) em soros de pacientes com PCM.

INTRODUCTION: Different serum levels of the IgG/IgE for Paracoccidioides brasiliensis high mass molecular (hMM) fraction (~366kDa) in the acute and chronic forms of the disease have been reported. Considering the nonexistence of hMM fraction investigation involving clinical isolates of P. brasiliensis, the present study aimed to investigate the presence of the hMM fraction (~366kDa) in cell free antigens (CFA) from P. brasiliensis clinical isolates. METHODS: CFA from 10 clinical isolates and a reference strain (Pb18) were submitted to SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) followed by gel image capturing and densitometer analysis. Additionally, CFA from 20 isolates and Pb18 were analyzed by capture ELISA (cELISA) using polyclonal (polAb) or monoclonal (mAb) antibodies to the hMM fraction. RESULTS: The presence of the hMM component was observed in CFA of all samples analyzed by SDS-PAGE/densitometry and by cELISA. In addition, Pearson's correlation test demonstrated stronger coefficients between hMM fraction levels using pAb and mAb (R = 0.853) in cELISA. CONCLUSIONS: The soluble hMM fraction was present in all the P. brasiliensis clinical isolates analyzed and the reference strain Pb18, which could be used as a source of this antigen. The work also introduces for first time, the cELISA method for P. brasiliensis hMM fraction detection. Analysis also suggests that detection is viable using polAb or mAb and this methodology may be useful for future investigation of the soluble hMM fraction (~366kDa) in sera from PCM patients.

O presente estudo investigou a prevalência de C. dubliniensis em uma família brasileira com uma criança infectada pelo vírus HIV. Um total de 42 isolados orais foram obtidos de 8 membros da família. A identificação de C. dubliniensis foi realizada por polymerase chain reactions (PCR) usando primers contra a sequência específica para o gene C. dubliniensis cytochrome b. Apenas a criança infectada pelo vírus HIV e a avó estavam colonizados por C. dubliniensis. Neste estudo C. dubliniensis isolado da criança infectada pelo vírus HIV exibiu alta susceptibilidade para azoles com concentração mínima inibitória de 0.125 and 0.5 µg/mL para voriconazole and fluconazole respectivamente. Acúmulo de [³H] fluconazol intra-celular foi ligeiramente reduzido em C. dubliniensis isolado da criança infectada pelo vírus HIV em comparação com a cepa referência sensível ao fluconazole. Isolados de C. dubliniensis neste estudo apresentaram níveis significantemente reduzidos de ergosterol da membrane celular em comparação com C. albicans.

This study investigated the prevalence of C. dubliniensis in a Brazilian family with an HIV - infected child. A total of 42 oral isolates were obtained from eight family members. The identification of C. dubliniensis was performed by polymerase chain reactions (PCR) using primers against a specific sequence of the C. dubliniensis cytochrome b gene. Only the HIV-infected child and his grandmother were colonized by C. dubliniensis. In this study C. dubliniensis isolated from the HIV-infected child exhibited high susceptibility for azoles tested with MICs of 0.125 and 0.5 µg/mL for voriconazole and fluconazole, respectively. Accumulation of [³H] fluconazole in C. dubliniensis isolated from the HIV-infected child was slightly reduced in comparison to the reference susceptible strain. C. dubliniensis isolates had significantly lower ergosterol levels in comparison to C. albicans reference strains.

O papel do conteúdo nutritivo do meio de cultura e de oxigênio na produção de clamidósporos pela fase micelial do Paracoccidioides brasiliensis foi investigado. Quatro cepas do fungo (18, Bt4, 1183, Pb9) foram cultivadas, a 25°C, em meio sólido rico e pobre em nutrientes. As cepas 18 e 1183 foram também cultivadas em anerobiose em atmosfera de nitrogênio. A cepa 18 produziu grande número de clamidósporos terminais e intercalares após 7-10 dias de cultura em meio sólido pobre em nutrientes (agar 2%, com dextrose e polipeptona 0,1%). As outras três cepas produziram número significativamente menor de esporos. A cepa 18 não produziu clamidósporos quando cultivada em dois meios ricos em nutrientes (infusão de cérebro e coração, e agar dextrose de batata). A incubação anaeróbica da cepa 18 em atmosfera de nitrogênio apresentou pequeno crescimento micelial com a presença de numerosos clamidósporos. À nivel ultraestrutural, os clamidósporos apresentaram um ou mais núcleos e numerosas mitocôndrias, indicativos de potencial para posterior desenvolvimento. Assim, os esporos produziram gemulação múltipla 1 dia após incubação a 35°C. Os resultados demonstraram que, sob condições ambientais adversas, a fase micelial do P. brasiliensis produz clamidósporos em curto período de tempo. É possível que o fungo encontre condições semelhantes no solo, produzindo os esporos, que poderiam desempenhar papel na propagação da paracoccidioidomicose.

To investigate the role of some adverse environmental conditions in chlamy-dospore formation by the mycelial form of P. brasiliensis, we cultured four P. brasiliensis isolates (18, Bt4, 1183, Pb9) at 25°C within solid agar medium either rich or poor in nutrients. Isolates 18 and 1183 were also cultured under anaerobiosis in a nitrogen atmosphere. Isolate 18 produced great number of terminal and intercalary chlamydospore after 7-10 days of culture in a medium poor in nutrients (2% agar with 0.1% dextrose and polypepton). The three other isolates also produced chlamydospores under the same conditions, but in lower numbers. Chlamydospore production by isolate 18 was abolished when the fungus was cultured in two agar media rich in nutrients (brain heart infusion and potato dextrose agar). Anaerobic incubation of isolate 18 under an atmosphere of N2 showed small mycelial outgrowth with numerous chlamydospores. At the electron microscopical level, the chlamydospores showed one or various nuclei and numerous mitochondria, indicating great potential for further development. Accordingly, chlamydospores produced multiple budding after only 24 h incubation at 35°C. The results demonstrate that under adverse environmental conditions P. brasiliensis mycelial form produces chlamydospores within a short period of time.