RESUMO As enzimas fibrinolíticas podem ser obtidas de micro-organismos por meio de processos fermentativos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a produção e extração integrada da protease fibrinolítica de Mucor subtilissimus UCP 1262 usando sistema de duas fases aquosas (SDFA). O processo integrado foi realizado para avaliar a produção, partição e recuperação da protease fibrinolítica, segundo planejamento experimental 23, utilizando como variáveis independentes a massa molar do polietileno glicol (PEG), a concentração do PEG e a concentração do sulfato de sódio. A maior atividade fibrinolítica (15,40U/mL) foi obtida na fase rica em sulfato de sódio no ensaio composto por 10% de sal e 18% de PEG 8000 (g/mol). Recuperações superiores a 80% foram obtidas. A protease fibrinolítica apresentou pH ótimo 7,0, estabilidade entre os pH 6,0 e 8,5, temperatura ótima 50°C, sendo estável de 10°C a 50°C. A enzima foi classificada como uma serino protease, com massa molecular de 52kDa. Como resultado, o processo é notavelmente eficaz para pré-purificar a protease fibrinolítica com baixo custo e rapidez significativa. Quando comparada a outras técnicas de produção e purificação isoladas, a fermentação extrativa é um processo digno a ser substituto das etapas iniciais de separação convencionais

ABSTRACT Fibrinolytic enzymes can be obtained from microorganisms through fermentative processes. The study aimed to evaluate the fibrinolytic protease production and integrated extraction from Mucor subtilissimus UCP 1262 by extractive fermentation using Aqueous Two-Phase Systems (ATPS). The integrated process was carried out to assess the production, partition and fibrinolytic enzyme recovery, according to a 2 3 -experimental design, using as independent variables Polyethylene glycol (PEG) molar mass, PEG and sodium sulphate concentration, concentration. The highest fibrinolytic activity (15.40U/mL) was obtained in sodium sulfate rich phase in the assay comprising of 10% of salt and 18% of PEG 8000 (g/mol). Yield greater than 80% was obtained. The fibrinolytic protease presented optimum pH 7.0 and stability between pH 6.0 and 8.5, and optimum temperature 50°C, stable between 10°C to 50°C. The enzyme was classified as a serine-protease with 52kDa of molecular weight. As a result, the process is remarkably effective to pre-purify the fibrinolytic protease with a low cost and significantly faster processing time. When compared to other isolated production and purification techniques the extractive fermentation is worthy of being a candidate to replace the initial stages of conventional separation processes.

O herbicida glifosato tem afetado os bioindicadores de qualidade do solo, aspectos morfofisiológicos e nutricionais das plantas de soja RR®. Contudo, não se sabe o impacto desses efeitos fisiológicos na qualidade das sementes de soja RR®. A expressão de enzimas está relacionada a qualidade das sementes de soja por ocasião dos genótipos e ambientes de produção. Foi objectivo neste trabalho, avaliar a qualidade fisiológica e a atividade enzimática de sementes de soja RR® em dois ambientes de produção em função de doses do herbicida glifosato. As sementes foram produzidas na safra 2014/15 nos municípios de Lavras e Patos de Minas em esquema fatorial 3 x 6, sendo três cultivares comercias de soja RR® (CD 250, TMG 1174, V-MAX) e seis doses do herbicida glifosato (0, 960, 1920, 2880, 3840, 4800 g e.a. ha-1). As sementes colhidas foram analisadas em laboratório quanto a expressão enzimática, bem como o teor de água, germinação em areia, germinação em papel, emergência de plântulas, índice de velocidade de emergência, condutividade elétrica, envelhecimento acelerado e o vigor e viabilidade de sementes, adotando-se delineamento inteiramente casualizado. A aplicação de doses crescentes de glifosato até 4800 g e.a. ha-1 não influencia a qualidade fisiológica de sementes de soja. Não houve efeito do aumento das doses de glifosato sobre a expressão enzimática para esterase, álcool desidrogenase, malato desidrogenase e catalase. A cultivar V-MAX RR apresentou percentagem de germinação em areia 80%, estando nos padrões de comercialização de sementes no Brasil.

The herbicide glyphosate affects soil quality bio indicators and morph physiological and nutritional aspects of RR® soybean plants. However, to the best of our knowledge, the impact of these physiological effects on the quality of RR® soybean seeds is not known. The expression of enzymes is related to quality of soybean seeds according to the genotype and production environment. The aim of this study was to evaluate the physiological quality and the enzymatic activity of RR® soybean in two production environments as a function of glyphosate doses. The seeds were produced in the 2014/15 crop in Lavras and Patos de Minas in a factorial 3 x 6, three soybean RR® cultivars a function (CD 250, TMG 1174, V-MAX) and six doses of the herbicide glyphosate (0, 960, 1920, 2880, 3840, 4.800 g e.a. ha-1). The harvested seeds were analyzed in the laboratory and enzyme expression as well as water content, germination (in sand and in paper), seedling emergence, emergence speed index, electrical conductivity, accelerated aging and vigor and seed viability. A completely randomized design was adopted. The application of increasing doses of glyphosate up to 4.800 g a.e. ha-1 do not affect the physiological quality of soybean seeds. There was no effect of increasing rates doses of glyphosate on the enzymatic expression of esterase, alcohol dehydrogenase, malate dehydrogenase and catalase. Cultivar V-MAX RR presented 80% of germination in sand with the seed marketing standards in Brazil.