RESUMO: Este estudo se propôs a isolar Pseudomonas spp. durante o processo de ordenha em dez fazendas com sistemas manuais e mecanizados, durante as estações seca e chuvosa, além de avaliar a homologia do DNA e seus padrões de distribuição entre os isolados, a fim de se determinar as principais fontes de contaminação do leite. Cento e sessenta e sete isolados de Pseudomonas spp. foram obtidos a partir de amostras de água, mãos de ordenhadores, tetos, teteiras, tanques de resfriamento e leite cru armazenado, sendo 85 e 82 pontos de amostragem em fazendas com sistemas de ordenha manual e mecânico, respectivamente. Diferença estatisticamente significativa foi encontrada entre os isolados observados entre a superfície dos tetos antes e após o pré-dipping (p=0,02), mas nenhuma diferença foi encontrada entre sistemas de ordenha ou estações (p>0,05). A possibilidade do mesmo padrão de Pseudomonas spp. estar distribuído em diferentes fazendas ou estações foi avaliada pela técnica de Polimorfismo do Tamanho de Fragmento Amplificado (AFLP). As mãos de ordenhadores, superfície dos tetos das vacas, teteiras e tanques de resfriamento foram associados com a contaminação do leite cru, demonstrando que independente do tipo de ordenha e estação, a higiene adequada de equipamentos, utensílios e mãos dos ordenhadores é essencial para evitar contaminação do leite, e consequentemente aumentar sua qualidade.

ABSTRACT: This study focused on isolating Pseudomonas spp. during milking process in ten dairy farms with manual and mechanical milking systems during dry and rainy seasons, and evaluating DNA homology and patterns of distribution between isolates, in order to identify main sources of milk contamination by Pseudomonas spp. A total of 167 isolates of Pseudomonas spp. were obtained from water, milkers’ hands, cows’ teats, teat cups, cooling tanks and raw milk. Bacteria of Pseudomonas spp. genus were isolated from 85 and 82 sampling points in dairy farms with manual and mechanical milking system, respectively. A significant difference (p=0.02) on Pseudomonas spp. isolation was observed among samples of surface of cows’ teats before and after pre-dipping, but no significant difference (p>0.05) was observed among milking systems or seasons. The possibility of the same Pseudomonas spp. patterns are distributed in different farms and seasons using Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP) technique was demonstrated. Milkers’ hands, surface of cows’ teats, teat cups and cooling tanks were associated with raw milk contamination with Pseudomonas spp. on farms with manual and mechanical milking system, showing that regardless of the type of milking system and season, proper hygiene procedures of equipment, utensils and workers’ hands are essential to avoid contamination of the milk and, therefore, improve milk quality.

Introduction and objective: Vesical tumor T1G3 constitutes the border between the superficial tumor and the infiltrante tumor. Some of these tumors do not respond to BCG and progress, with cystectomy that present poor results, patients who would benefit from a precocious and aggressive treatment if we could identify them in an preinvasive stage. New predictive factors try to select to these tumors, being little the works that consider anatomo- pathological meticulous study (substanding of the T1 in T1a and T1b and percentage of present G3 cells in the tumor). Our objective is to analyze the value of these anatomo-pathological considerations like predictive factors of progression. Material and methods: Retrospective study of a series of 91 patient affection of vesical tumor T1G3 with initial treatment by means of RTU and BCG. We analyzed 12 variables. The new predictive factors: the level of invasion respect to muscularis mucosae and the percentage of G3 cells. By means of logistic regression analisys we establish the independent pronostic factors for tumoral progression. Results: A total of 31 patients presented infiltration of detrusor, passing away 17 of tumoral cause, after an average time of pursuit of 57.8 ± 28.2 months. In 8 cases (9%) the substanding could not be determined. The rate of progression for T1a tumors was of 20% (8/40) and for T1b 53% (23/43). Presented independent predictive value of progression the multiplicity (odds: 7,26), the size (odds: 2,14), the presence of Cis (odds: 1,42) and the subestanding (odds: 6,81). Conclusion: The substanding is a predictive factor of progression clinically useful in vesical tumors T1G3, reason why we considered habitual clinical introduction.

Introducción y Objetivos: El tumor vesical T1G3 constituye la frontera entre el "tumor superficial" y el "tumor infiltrante". Algunos de estos tumores no responden a BCG y progresan, con cistectomías que presentan pobres resultados, pacientes que se beneficiarían de un tratamiento precoz mas agresivo si pudiéramos identificarlos en una etapa preinvasiva. Nuevos factores predictivos intentan seleccionar estos tumores, siendo escasos los trabajos que consideran un estudio anatomopatológico mas minucioso (subestadiaje del T1 en T1a y T1b y porcentaje de células G3 presentes en el tumor). Nuestro objetivo es analizar el valor de estas consideraciones anatomo-patológicas como factores predictivos de progresión. Material y Métodos: Estudio retrospectivo de una serie de 91 pacientes afectos de tumor vesical T1G3 sometidos a tratamiento inicial mediante RTU e instilaciones de BCG. Analizamos 12 variables; entre los nuevos factores predictivos: el nivel de invasión respecto de la muscularis mucosae y el porcentaje de células G3. Mediante análisis de regresión logística establecemos las variables pronósticas independientes para progresión tumoral. Resultados: Un total de 31 pacientes presentaron infiltración del detrusor, falleciendo 17 de causa tumoral, tras un tiempo medio de seguimiento de 57,8 ± 28,2 meses. En 8 casos (9%) no se pudo determinar el subestadiaje. La tasa de progresión para tumores T1a fue del 20% (8/40) y para T1b 53% (23/43). Presentaron valor predictivo independiente de progresión la multiplicidad (odds: 7,26), el tamaño (odds: 2,14), la presencia de Cis (odds: 1,42) y el subestadiaje (odds: 6,81). Conclusión: El subestadiaje es un factor predictivo de progresión clínicamente útil en tumores vesicales T1G3, por lo que consideramos fundamental su introducción en la práctica clínica habitual.

Introduction and objective: Bladder tumor T1G3 constitutes the group of superficial tumors more aggressive. New prognostic factors in the field of the cytogenetics and molecular biology have been analyzed, with often contradictory results, being little the specific works in tumors T1G3. Our objective is to determine if in this group of tumors the immunohistochemical markers present predictive value of clinically useful progression, and therefore with validity to indicate more suitable a precocious therapeutic attitude Material and methods: Retrospective study of a series of 83 patients affected of bladder tumor T1G3, on which we analyzed a total of 14 variables; between the new predictive factors: the immunohistochemical determination of regulating proteins of the cellular cycle: p53, p21 and bcl-2, as well as the Ki-67 protein like marker of cellular proliferation. By means of logistic regression analisys we establish the independent prognostic variables for tumorlike progression. Results: The cut point established for Ki67 and p53 was 40% of inmmunomarked cells, 20% for p21 and 10% for Bcl-2. The univariant analysis showed different rates from progression and free times of progression based on the immunohistochemistry of Ki67 and p53; nevertheless, the logistic regression demonstrated that single the immunohistochemistry of p53 presented independent predictive value. Conclusions: The determination of p53 presents predictive value of clinically useful progression in bledder tumors T1G3, so that its determination can constitute a essential factor in the strategies of treatment of these tumors.

Introducción y Objetivos: El tumor vesical T1G3 constituye el grupo de tumores superficiales más agresivo. Nuevos factores pronósticos en el campo de la citogenética y la biología molecular han sido analizados, con resultados a menudo contradictorios, siendo escasos los trabajos específicos en tumores T1G3. Nuestro objetivo es determinar si en este grupo de tumores los marcadores inmunohistoquímicos presentan valor predictivo de progresión clínicamente útil, y por tanto con validez para indicar una actitud terapéutica precoz más idónea. Material y Métodos: Estudio retrospectivo de una serie de 83 pacientes afectos de tumor vesical T1G3, sobre los que analizamos un total de 14 variables; entre los nuevos factores predictivos: la determinación inmunohistoquímica de las proteínas reguladoras del ciclo celular: p53, p21 y bcl-2, así como la proteína Ki-67 como marcador de proliferación celular. Mediante análisis de regresión logística establecemos las variables pronósticas independientes para progresión tumoral. Resultados: El punto de corte establecido para Ki67 y p53 fue el 40% de células inmunomarcadas, 20% para p21 y 10% para Bcl-2. El análisis univariante puso de manifiesto diferentes tasas de progresión y tiempos libres de progresión en función de la inmunotinción de Ki67 y p53; sin embargo, la regresión logística demostró que solo la inmunohistoquímica de p53 presentaba valor predictivo independiente. Conclusiones: La determinación inmunohistoquímica de p53 presenta valor predictivo de progresión clínicamente útil en tumores vesicales T1G3, de manera que su determinación puede constituir un factor fundamental en las estrategias de tratamiento de estos tumores.

INTRODUCTION AND OBJECTIVES: Angiogenic activity has been considered like prognostic factor in several solid tumors. This activity can be analysed by two ways: immunohistochemical determination of molecules that activate/inhibit angiogenesis or quantitive measure of microvascular density (MD). Our objective is to determine the prognostic value of Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) and Microvascular Density (MD) in pT1G3 bladder tumours. MATERIAL AND METHODS: We have studied retrospectively 83 patients with pT1G3 tumors treated by TUR + endovesical instillations with a follow up of 3 years at least. We analysed VEGF expression monoclonal antibody Nº 360P. To determine MD we have marked vessels with FVIII antibody and detected "hot spots" areas. The number of microvessels is quantited by a digital image analyser excluding those that have more than 50 micras of diameter. We established the correlation of these findings with recurrence, progression and survival by using Chi-square test and Kaplan-Meier curves (log-rank). RESULTS: Average follow up was 58 ± months. We have established like cut-off 50% of tumor cells (VEGF) and 30 microvessels/fields (MD). Chi-square test did not show correlation with survival neither recurrence but it was positive for progression p(VEGF) 0.048 and p(DM) 0.021. Kaplan Meier curves determined significative differences only for free of progression time respect to MD (p 0.038). CONCLUSIONS: We did not find statistically significant value for recurrence nor survival. Just MD reached prognostic value for progression. More studies and multivariant analysis are required to determine the clinical utility of MD, specially in order to make more aggressive therapeutic options in this kind of patients.

INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS: La actividad angiogénica ha sido considerada como factor pronóstico en diversos tumores sólidos. Podemos analizarla de dos formas: determinación inmunohistoquímica de moléculas activadoras/ inhibidoras de la angiogénesis y cuantificación de la densidad microvascular (DM). Nuestro objetivo es determinar en tumores vesicales pT1G3, el valor de la inmunohistoquímica del Vascular Endotelial Growth Factor (VEGF) y de la DM como factores pronóstico. MATERIAL Y MÉTODOS: Estudio retrospectivo de 83 tumores vesicales pT1G3 con un seguimiento mínimo de 3 años. Analizamos la expresión del VEGF utilizando el Ac. monoclonal AbNo.360P. Para determinar la DM, marcamos los vasos (Ac.-FVIII) y cuantificamos el número de microvasos mediante un analizador digital de imagen, excluyendo aquellos que sobrepasan las 50 micras de diámetro. Correlacionamos los hallazgos con la recidiva, progresión y supervivencia, mediante tablas de contingencia (Chi-cuadrado) y curvas de Kaplan-Meier (Log-rank). RESULTADOS: El tiempo medio de seguimiento ha sido de 58 ± 28 meses. El análisis Chi-cuadrado no muestra correlación ni con la recidiva ni con la supervivencia, pero si con la progresión: p(VEGF): 0,048, p(DM): 0,021. Las curvas de Kaplan-Meier determinan diferencias significativas únicamente en el tiempo libre de progresión respecto de la DM (p:0,038). CONCLUSIONES: La DM podría considerarse como factor pronóstico de progresión en base a estos resultados. No obstante son necesarios más estudios y un análisis multivariante que determine su aplicación clínica en este grupo de tumores de alto riesgo.