Resumen Los pacientes en estado crítico con COVID-19 sufren hiperglucemias sostenidas de difícil manejo. A esto se suma el desafío de minimizar la exposición al contagio. En el presente artículo analizamos la evolución metabólica de dos pacientes pediátricos con COVID-19 admitidos en unidad de cuidados intensivos (UCI) para pacientes COVID-19 del Hospital “Prof. Dr. Juan P. Garrahan” de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina, que requirieron tratamiento con insulina endovenosa y cuya glucemia fue monitoreada de manera remota con la plataforma InsuMate® desarrollada en la Universidad Nacional de La Plata. Los pacientes requirieron tasas de infusión de insulina en dosis marcadamente mayores que las de otros pacientes críticos que impresionaron relacionadas con los valores de marcadores de inflamación. La infusión pudo ajustarse con cuatro monitoreos diarios de glucosa y las métricas obtenidas con el monitor de glucosa. El uso del sistema de monitoreo remoto continuo de glucosa permitió disminuir la frecuencia de monitoreo glucémico durante el tratamiento.

Abstract Critically ill patients with COVID-19 suffer from sustained hyperglycemia that is difficult to manage. Added to this is the challenge of minimizing exposure to contagion. In this article we analyze the metabolic evolution of two pediatric patients with COVID-19 admitted to the intensive care unit (ICU) for COVID-19 patients at the Hospital “Prof. Dr. Juan P. Garrahan ”from the Autonomous City of Buenos Aires, Argentina, who required treatment with intravenous insulin and whose blood glucose was remotely monitored with the InsuMate® platform developed at the National University of La Plata. The patients required insulin infusion rates in doses markedly higher than those of other critically ill patients, who were impressively related to the values of inflammation markers. The infusion could be adjusted with four daily glucose monitors and the metrics obtained with the glucose monitor. The use of the continuous remote glucose monitoring system made it possible to decrease the frequency of glycemic monitoring during treatment.

Introduction: dengue is considered to be the most important arthropod-borne human disease worldwide, with an estimated 100 million new cases per year and more than 20 000 deaths. The pathogenesis of severe dengue is not fully understood. However, certain studies have associated it with sequential infections by different viral serotypes, memory T cell activation and cytokine hyperproduction. Objectives: determine the qualitative expression of genes of cytokines IFNγ and TNFα in spleen and liver tissues from dengue 3 and 4 fatal cases, detecting RNAm and verifying their role in the pathogenesis of the disease. Methods: the study was conducted by retrotranscription and polymerase chain reaction (RT-PCR) using specific primers. Results: expression of IFNγ predominated over that of TNFα, and was more evident in spleen than in liver tissues. Conclusions: results support the pathogenic role of the Th1 response pattern in severe dengue. This is the first study of its type about dengue infection.

Introducción: el dengue es considerada la enfermedad viral transmitida por artrópodos de mayor importancia en el humano a nivel global, con un estimado de 100 millones de infecciones anuales y más de 20 000 muertes. La patogénesis de la enfermedad grave por dengue no está totalmente esclarecida. Sin embargo, existen estudios que la asocian con infecciones secuenciales por diferentes serotipos virales, activación de células T de memoria e hiperproducción de citocinas. Objetivos: determinar la expresión cualitativa de genes de las citoquinas IFNγ y TNFα en tejidos de bazo e hígado de casos fatales por dengue 3 o dengue 4 mediante la detección de ARNm y comprobar su papel en la patogénesis de la enfermedad. Métodos: El estudio se realizó a través de un método de retro-transcripción y reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) con el uso de cebadores específicos. Resultados: la expresión de IFNγ predominó a la de TNFα, y fue más evidente en los tejidos de bazo que del hígado. Conclusiones: los resultados obtenidos apoyan el papel patogénico del patrón de respuesta Th1 en el dengue grave y constituye el primer estudio realizado de este tipo en la infección por dengue.

Dengue is considered the most important arthropod-borne viral disease in humans and is caused by any of the four dengue virus (DENV-1-4) serotypes. DENV may cause the potentially fatal disease named dengue hemorrhagic fever/dengue shock syndrome (DHF/DSS). Although apoptosis has been implicated in DHF/DSS pathogenesis, the in vivo mechanisms have not been largely explored yet. In this study, formalin fixed and paraffin embedded tissues of eight fatal DHF/DSS cases from two Cuban dengue epidemics were examined, in 1997 by DENV-2 and 2001 by DENV-3. We detected DENV antigens by an immunohistochemistry assay and apoptotic cells by the TUNEL, (Terminal deoxynucleotydil Transferase-mediated dUTP nick-end labelling) technique in sections from different organs. Apoptosis was demonstrated in six out of the eight studied fatal cases. Apoptotic cells were observed in brain, intestine, liver and lung. This is the first report in literature demonstrating apoptosis in white blood cells, brain cells, and endothelial cells from the intestinal and pulmonary microvasculature from DENV infected individuals. Interestingly, it is likely that apoptotic microvascular endothelial cells were associated to plasma leakage manifested by the studied subjects. These results suggest that apoptosis may contribute to DHF/DSS pathophysiology. More studies are necessary to clarify the apoptotic cell death implications in DHF/DSS pathogenesis.

OBJECTIVE: To determine the action of nitric Oxide (NO) in serum samples of dengue 2 inoculated Macacus irus monkeys as primary infection and in dengue 4 -dengue 2 inoculated monkeys as secondary infection, taking into account that preexisting antibodies in secondary dengue infection elicit the action of antiviral molecules such as nitric oxide. METHODS: NO levels referred as nitrite levels were detected by Griess colorimetric reaction. RESULTS: The highest nitric oxide levels were detected in those animals with primary infection seven days after inoculation monkeys whereas those monkeys with secondary infection did not show NO levels over 100 µM. CONCLUSIONS: Our results suggest that there seems to be a relationship between secondary infection and NO production inhibition.

OBJETIVO: partiendo de que los anticuerpos preexistentes en la infección secundaria por dengue suprimen la acción de moléculas con acciones antivirales como el óxido nítrico, se determinó el comportamiento de esa molécula en suero de monos Macacus irus inoculados con virus dengue 2 como infección primaria y en monos con una infección secuencial dengue 4-dengue2. MÉTODOS: los niveles de óxido nítrico referidos como niveles de nitritos fueron detectados mediante la reacción de Griess. RESULTADOS: los niveles máximos de óxido nítrico se detectaron en los animales que sufrieron una infección primaria a partir del séptimo día posinoculación, a diferencia de los monos con infección secundaria en que no se obtuvieron niveles mayores de 100 µM. CONCLUSIONES: al parecer existe una asociación entre la infección secundaria y la inhibición de la producción del óxido nítrico.

A dengue epidemic that Cuba reported in 1997 registered more than 500 000 cases of dengue fever produced by viral serotype 1. In 1981, there was an epidemic of dengue hemorrhagic fever produced by serotype 2 of the virus. This time 344 203 clinical cases were reported, 10 312 of which were severe cases of hemorragic fever that led to 158 fatalities (101 of them among children). The reintroduction of dengue, and specifically of dengue viral serotype 2 (Jamaica genotype), was quickly detected in January 1997 through an active surveillance system with laboratory confirmation of cases in the municipality of Santiago de Cuba, in the province of the same name. The main epidemiological features of this outbreak are reported in this paper. A total of 3 012 cases were reported and serologically confirmed. These included 205 cases classified as dengue hemorrhagic fever/dengue shock syndrome (DHF/DSS), 12 of which were case fatalities (all among adults). Secondary infection with dengue virus was one of the most important risk factors for DHF/DSS. Ninety-eight percent of the DHF/DSS cases and 92% of the fatal cases had contracted a secondary infection. It was the first time dengue hemorrhagic fever was documented as a secondary infection 16 to 20 years after initial infection. Belonging to the white racial group was another important risk factor for DHF/DSS, as had been observed during the 1981 epidemic. During the most recent epidemic it was demonstrated that the so called “fever alert” is not useful for early detection of an epidemic. Measures taken by the country’s public health officials prevented spread of the epidemic to other municipalities plagued by Aedes aegypti.

En 1977, Cuba informó de su primera epidemia de dengue, durante la cual se registraron más de 500 000 casos de fiebre del dengue causados por el serotipo 1 del virus. En 1981, se produjo una gran epidemia de dengue hemorrágico causada por el serotipo 2. Esa vez se notificaron 344 203 casos en total, 10 312 casos clínicos de dengue hemorrágico y 158 defunciones, de las cuales 101 correspondieron a niños. Por medio de una búsqueda activa con confirmación de laboratorio, en el municipio de Santiago de Cuba de la provincia del mismo nombre se detectó precozmente en enero de 1997 la reintroducción del dengue, específicamente del virus del tipo 2, genotipo Jamaica. En este trabajo se presentan los aspectos epidemiológicos de mayor interés referentes a esa epidemia. Se notificaron 3 012 casos confirmados por serología, 205 clasificados como fiebre hemorrágica del dengue/síndrome de choque del dengue, de los cuales 12 fallecieron (todos adultos). La infección secundaria por virus del dengue fue uno de los principales factores de riesgo en el desarrollo de dengue hemorrágico y 98% de los casos, así como 92% de los fallecidos, manifestaron una respuesta de tipo secundario. Por primera vez se observó la posibilidad de contraer dengue hemorrágico en personas con una infección secundaria de 16 a 20 años después de la primera infección. Pertenecer a la raza blanca fue otro factor de riesgo de importancia, tal como se había observado desde la epidemia de 1981. En la última epidemia se demostró que la llamada “alerta de fiebre” no es útil para la detección temprana de una epidemia. Las medidas tomadas por las autoridades sanitarias del país evitaron la extensión de la epidemia a otros municipios que estaban infestados por Aedes aegypti.

This study describes the benefits of using reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) for the rapid detection and typing of dengue virus in clinical samples. Twenty-seven serum specimens from patients with dengue fever and dengue hemorrhagic fever in Colombia, Nicaragua, and Panama were directly subjected to RT-PCR for the detection of dengue virus. The resulting double-stranded DNA product was typed by a second round of PCR amplification (nested PCR) with type specific primers, viral culture/indirect immunofluorescence (IIF), and enzyme-linked electroimmunoassay for IgM anti-dengue antibodies. The amplified virus genome was detected and typed within 8 hours. Nested RT-PCR, using viral culture and IIF as the gold standard, showed 100% sensitivity; 78% specificity; 69% positive predictive value, and 100% negative predictive value. It is noteworthy that two of the specimens whose results were positive with nested RT-PCR and negative with viral culture showed specific IgM antibodies. The results of the RT-PCR were in close agreement with those obtained through viral culture. This suggests PCR can greatly facilitate the rapid and early diagnosis of dengue infection.

El trabajo que aquí se presenta describe las ventajas de usar la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RCP-TI) para detectar e identificar con rapidez virus del dengue en muestras clínicas. Se sometieron directamente a RCP-TI 27 muestras obtenidas de pacientes con fiebre de dengue y fiebre hemorrágica de dengue durante epidemias en Colombia, Nicaragua y Panamá. El ADN de cadena doble obtenido con la RCP-TI se identificó mediante una segunda amplificación (RCP de anidación) utilizando cebadores específicos para cada tipo de virus, aislamiento vírico e inmunofluorescencia indirecta (IFI) y con electroinmunoensayo enzimático detector de anticuerpos IgM contra el virus del dengue. El genoma vírico amplificado se detectó e identificó en un máximo de 8 horas. Los parámetros calculados para hacer el diagnóstico por RCP-TI, usando el aislamiento vírico y la IFI como estándar de oro, fueron una sensibilidad de 100%; una especificidad de 78%; un valor predictivo positivo de 69% y un valor predictivo negativo de 100%. Cabe notar que dos de los especímenes que dieron resultados positivos a la prueba de RCP-TI anidada y negativos al aislamiento vírico mostraron anticuerpos específicos de tipo IgM. Los resultados de la RCP-TI en general mostraron una estrecha concordancia con los del aislamiento vírico, lo cual sugiere que la RCP es un procedimiento que facilita enormemente el diagnóstico rápido y temprano del dengue.

The results obtained in the study of an aoutbreak of fever and reash ocurred in Havana City in March, 1995, are reported. Dengue, measles, rubella, herpes simplex, and Epstein Barr were discarded as causal agents of the outbreak in the samples of 35 patients. Parvovirus B19 was identified as the causing agent of the outbreak by the detection of IgM antibodies and the polymerase chain reaction technique (PCR). The infection produced by this agent was confirmed in 14/18 samples (77,7 %) by some of the techniques used. This study makes reference to the first outbreak of Parvovirus B19 that was proved in Cuba.

Se reportan los resultados obtenidos en el estudio de un brote de fiebre y rash ocurrido en Ciudad de La Habana en marzo de 1995. En las muestras de 35 pacientes se descartaron dengue, sarampión, rubéola, herpes simple y Epstein Barr como agentes causales del brote. Mediante la detección de anticuerpos IgM y la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (RCP) se identificó al Parvovirus B19 como agente causal del brote. En 14/18 muestras (77,7 %) se comprobó la infección por este agente por alguna de las técnicas empleadas. Este estudio se refiere al primer brote confirmado de Parvovirus B19 en Cuba.

4 primer sets, were used to allow the amplification of a nucleotide sequence with unique size for each of the dengue virus serotypes by polymerase chain reaction (PRC). The method consisted in the extraction of ribonucleic acid from supernatant of infected cell cultures, reverse transcription - polymerase chain reaction (RT-PCR). This was completed in approximately 7 hours in a simple tube. The size of the amplified sequence was evidenced by electrophoresis in Agarose gel stained with ethidium. The method showed a sensitivity of at least 2.5 plate forming units (pfu) per tube of reaction. It es useful for the detection and simultaneous identification of the 4 serotypes, starting from supernatants of infected strains cultures from different countries of the Caribbean, Central America, and South America.

Se emplearon 4 juegos de cebadores que permitieron la amplificación de una secuencia nucleotídica con talla única para cada uno de los serotipos del virus del dengue mediante la reacción en cadena de la polimerasa (RCP), con un método que consistió de extracción del ácido ribonucleico (ARN) de sobrenadante de cultivos celulares infectados, transcripción reversa - reacción en cadena de la polimerasa (TR-RCP), todo lo cual pudo ser completado en aproximadamente 7 horas, en un simple tubo. La talla de la secuencia amplificada se evidenció por electroforesis en un gel de agarosa, teñido con bromuro de etidio. El método demostró una sensibilidad de al menos 2,5 unidades formadoras de placa (ufp) por tubo de reacción, siendo útil para la detección e identificación simultánea de los 4 serotipos, a partir de sobrenadante de cultivos infectados de cepas provenientes de varios países del Caribe, América Central y del Sur.

It is reported the isolation of 2 dengue strains, 3 in samples from Nicaraguan patients suffering from dengue with hemorrhagic manifestations, which showed the reintroduction of this serotype in the region after being 17 years out of circulation. It is also reported the genetic characterization of the isolated strain, which, according to its classification, belongs to the group of dengue 2 strains isolated in Southeast Asi and which have been associated to hemorrhagic dengue. These results suggest the origin of this strain.

Se reporta el aislamiento de 2 cepas de dengue, 3 en muestras de pacientes nicaragüenses con dengue con manifestaciones hemorrágicas, lo que significaba la reintroducción de este serotipo en la región después de 17 años sin circulación. Se reporta la caracterización genética de la cepa aislada la que se clasifica como perteneciente al grupo de cepas de dengue 3 aisladas en el sudeste asiático y que se han asociado a casos de dengue hemorrágico. Estos resultados sugieren el origen de esta cepa.

Se reporta la secuencia nucleotída y aminoacídica de una zona de gran variabilidad en el genoma del virus dengue 2 a partir del ARN del virus original sin pase en ningún sistema de aislamiento y se compara con la primera cepa de dengue 2 aislada durante la epidemia de 1981 con 4 pases en ratón lactante. Los resultados demuestran que la secuencia nucleotídica del suero y de la cepa A15 son iguales.