ABSTRACT Introduction: Treponema pallidum is considered as a monomorphic bacterium with very few genomic differences among isolates and subspecies. The genetic diversity of this pathogen has not been explored in depth; however, this kind of studies potentially has a direct impact on the development of new diagnostic methods and vaccines. The objective of this work was to evaluate the genetic diversity of this pathogen in Cuba (2012-2019). Methods: Five exploratory studies were carried out based on molecular characterization, detection of one-off mutations and whole genome sequencing of T. pallidum. Results: The high level of genetic diversity of T. pallidum in the Cuban context was demonstrated by the detection of 8 subtypes of T. pallidum subsp. pallidum (TPA), 7 genotypes of TPA, the identification of T. pallidum subsp. endemicum in patients diagnosed with venereal syphilis, one-off mutations conferring resistance to macrolides with a high frequency and intra- and inter-strain recombination events in TPA. These findings suggest, as a conclusion, a significant genetic diversity of T. pallidum in the Cuban context with an increased predominance of recombinant genotypes over time, which should be further studied given their potential involvement in the development of this disease.

RESUMEN Introducción: Treponema pallidum es una bacteria monomórfica con muy pocas diferencias genómicas entre aislados y subespecies. La diversidad genética de este patógeno no ha sido explorada a profundidad, sin embargo, estos estudios impactan directamente en el desarrollo de nuevos métodos diagnósticos, vacunas, entre otros. El objetivo de este trabajo fue evaluar la diversidad genética de este patógeno en Cuba (2012-2019). Métodos: Se realizaron 5 estudios moleculares exploratorios basados en caracterización molecular, detección de mutaciones puntuales y secuenciación de genoma completo de T. pallidum. Resultados: Se determinó la presencia de 8 subtipos de T. pallidum subsp. pallidum (TPA), 7 genotipos de TPA, la presencia de T. pallidum subsp. endemicum en pacientes diagnosticados de sífilis venérea, con mutaciones puntuales de resistencia a macrólidos en una elevada frecuencia y eventos de recombinación intra e inter-aislados en TPA aportando significativamente a la diversidad genética de este patógeno en Cuba y en el mundo. Lo anterior, sugiere como conclusión una significativa diversidad genética de T. pallidum en el contexto cubano con un predominio incrementado en el tiempo de genotipos recombinantes, a los que se les debe seguir más de cerca por su potencial implicación en el comportamiento de esta enfermedad.

ABSTRACT Introduction: Hard ticks are hematophagous ectoparasites, vectors of emerging zoonotic pathogens. Until 2011, there was evidence of infection/exposure to Borrelia burgdorferi in humans in Cuba, but the circulation of other agents is unknown. Aim: implement new diagnostic tools, explore infection/exposure of humans to tick-borne pathogens, their presence in vectors and level of knowledge in medical personnel. Methods: Multiplex PCR to detect B. burgdorferi-Anaplasma spp.-Babesia spp., PCR for Borrelia spp., and artificial infection of ticks were implemented. Positivity to infection by B. burgdorferi (2011-2018) was described. Presence of antibodies against borrelias in blood donors from a low-exposure region, antibodies against other zoonotic agents in a population at risk, presence of these agents in ticks, as well as the level of knowledge about Lyme disease in doctors were explored. Results: IPK capabilities for molecular detection of tick-borne pathogens were strengthened. New serological evidence of B. burgdorferi infection was found in patients with suspicion of Lyme disease. Absence of specific antibodies against B. burgdorferi was demonstrated in blood donors. Evidence of antibodies to Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia chaffeensis and Babesia microti were found. The presence of Anaplasma spp., Babesia spp., Rickettsia amblyommii and Coxiella burnetii was demonstrated in ticks. Insufficient knowledge about Lyme disease was found in medical personnel. Conclusions: these results alert the national public health authorities and medical personnel about the risk of infection in individuals exposed to tick bites.

RESUMEN Introducción: Las garrapatas duras son ectoparásitos hematófagos, vectores de patógenos zoonóticos emergentes. Hasta 2011 en Cuba existían evidencias de infección/exposición a Borrelia burgdorferi en seres humanos, pero se desconoce sobre la circulación de otros agentes. Objetivo: implementar nuevas herramientas diagnósticas, explorar infección/exposición de seres humanos a patógenos transmitidos por garrapatas, presencia de estos en vectores y nivel de conocimientos en personal médico. Métodos: Se implementó PCR múltiple para detección de B. burgdorferi sl-Anaplasma spp. -Babesia spp., PCR para Borrelia spp., e infección artificial de garrapatas. Se describió la positividad a infección por B. burgdorferi (2011-2018), se exploró la presencia de anticuerpos contra borrelias en donantes de sangre de una región de baja exposición, anticuerpos contra otros agentes zoonóticos en población de riesgo, presencia de estos agentes en garrapatas, así como el nivel de conocimientos sobre enfermedad de Lyme en médicos. Resultados: Se fortalecieron capacidades del IPK para detección molecular de patógenos transmitidos por garrapatas. Se encontraron nuevas evidencias serológicas de infección por B. burgdorferi en pacientes con sospechas de enfermedad de Lyme. Se demostró ausencia de anticuerpos específicos contra B. burgdorferi en donantes de sangre. Se encontraron evidencias de anticuerpos contra Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia chaffeensis y Babesia microti. Se demostró presencia de Anaplasma spp., Babesia spp., Rickettsia amblyommii y Coxiella burnetii en garrapatas. Se constataron conocimientos insuficientes sobre enfermedad de Lyme en personal médico. Conclusiones: estos resultados alertan a las autoridades nacionales de salud pública y personal médico sobre el riesgo de infección en individuos expuestos a picaduras de garrapatas.

RESUMO Introdução: No departamento de Periodontia da Clínica Provincial de Estomatologia Mártires del Moncada, em Santiago de Cuba, o nível de auto-estima e higiene bucal dos idosos não foi caracterizado. Objetivo: Caracterizar os níveis de autoestima e higiene bucal em idosos, no período de julho a dezembro de 2017. Método: Foi realizado um estudo descritivo-transversal dos 32 idosos atendidos no Departamento de Periodontia da Clínica de Estomatologia Provincial de Ensino de Santiago de Cuba, que atendiam aos critérios de inclusão: maiores de 60 anos, de ambos os sexos, que consentiram em participar da pesquisa. As variáveis estudadas foram: idade, sexo, escolaridade, nível de autoestima e higiene bucal. Resultados: Grupo de 65 a 69 anos (37,5%), sexo feminino (62,5%), nível de ensino pré-universitário (37,5%), nível médio de auto-estima (56,2%) e falta de higiene bucal (53,1%). Conclusões: O nível médio de autoestima é um dos elementos psicológicos intimamente ligados à falta de higiene bucal nos idosos estudados, sendo necessária atenção especial na avaliação abrangente desses pacientes, dada a sua possível influência no estado de saúde bucal.

ABSTRACT Introduction: In the Periodontics department of the "Mártires del Moncada" Teaching Provincial Stomatology Clinic in Santiago de Cuba, the level of self-esteem and oral hygiene of the elderly has not been characterized. Objective: To characterize the levels of self-esteem and oral hygiene in the elderly, during the period July to December 2017. Method: A descriptive-cross-sectional study was carried out in the 32 older adults who attended the Periodontics Department of the Teaching Provincial Stomatological Clinic from Santiago de Cuba, which met the inclusion criteria: over 60 and older, of both genders, who gave their consent to participate in the research. The variables were studied: age, sex, education, level of self-esteem and oral hygiene. Results: The 65-69 year old group (37.5%), the female sex (62.5%), the pre-university school level (37.5%), the average self-esteem level (56.2%) and poor oral hygiene (53.1%). Conclusions: The level of average self-esteem is one of the psychological elements closely linked to poor oral hygiene in the older adults studied, so special attention is required in the comprehensive assessment of these patients, given its possible influence with the state of health oral.

RESUMEN Introducción: En el departamento de Periodoncia de la Clínica Estomatológica Provincial Docente "Mártires del Moncada" de Santiago de Cuba, no se ha caracterizado el nivel de autoestima e higiene bucal de los adultos mayores. Objetivo: Caracterizar los niveles de autoestima e higiene bucal en los adultos mayores, durante el periodo julio a diciembre del 2017. Método: Se realizó un estudio descriptivo-transversal en los 32 adultos mayores que acudieron al departamento de Periodoncia de la Clínica Estomatológica Provincial Docente de Santiago de Cuba, que cumplieron con los criterios de inclusión: mayores de 60 y más años, de ambos géneros, que dieron su consentimiento para participar en la investigación. Se estudiaron las variables: edad, sexo, escolaridad, nivel de autoestima e higiene bucal. Resultados: Predominó el grupo de 65-69 años (37,5 %), el sexo femenino (62,5 %), el nivel escolar pre-universitario (37,5 %), el nivel de autoestima medio (56,2 %) y la higiene bucal deficiente (53,1 %). Conclusiones: El nivel de autoestima medio es uno de los elementos psicológicos estrechamente vinculado con la higiene bucal deficiente en los adultos mayores estudiados, por lo que se requiere especial atención en la valoración integral de estos pacientes, dada su posible influencia con el estado de salud bucal.

ABSTRACT Introduction: Rickettsia is a genus of Gram-negative obligate intracellular bacteria that cause several epidemics around the world and are transmitted mainly by ticks, fleas, lice and mites. Rickettsiosis is a re-emergent infectious disease without epidemiological surveillance in Colombia. Until few years ago, Rickettsia rickettsi was the only tick-borne Rickettsioses in America; however, new species are being described, and although their pathogenicity has not been confirmed, they should be considered as potential pathogens. Objective: The aim of this study was to determine the presence of rickettsial agents in ticks in the state of Meta, Colombia. Material and Methods: A descriptive cross-sectional study was conducted; ticks were collected and, after their taxonomic identification, gltA,ompAand ompB genes were amplified and sequenced. Results: A total of 169 pools were obtained to which PCR were carried out, of which 2 PCR were amplified for the gltA, ompA and ompB genes. Conclusions: These results demonstrate the presence of Rickettsia spp in ticks in the State of Meta.

RESUMEN Introducción: Las Rickettsias son un género de bacterias Gram negativas intracelulares obligadas causantes de muchas epidemias en el mundo y son transmitidas principalmente por garrapatas, pulgas, piojos y ácaros. Las rickettsiosis son enfermedades infecciosas reemergentes sin vigilancia epidemiológica en Colombia. Hasta hace pocos años Rickettsia rickettsi era la única Rickettsia transmitida por garrapatas presente en América; sin embargo, nuevas especies están siendo descritas, y aunque su patogenicidad no ha sido confirmada pueden ser consideradas patógenos potenciales. Objetivo: Determinar la presencia de rickettsias en garrapatas del departamento del Meta, Colombia. Material y Métodos: Se realizó un estudio descriptivo de corte transversal, fueron colectadas garrapatas y después de su identificación taxonómica, los genes gltA, ompA y ompB fueron amplificados y secuenciados. Resultados: Se obtuvieron un total de 169 grupos a los que se les realizó PCR de los cuales 2 grupos amplificaron para los genes gltA, ompA y ompB. Conclusiones: Los resultados demuestran la presencia de Rickettsia spp en garrapatas del departamento del Meta.

ABSTRACT Introduction: Lyme borreliosis has not been officially reported in Cuba but there are clinical-epidemiological suspicions and serological evidence that are suggestive of its causal agent: the infection by Borrelia burgdorferi sensu lato. Objective: To describe clinical and epidemiological aspects of patients who suffered from the disease and to explore the level of knowledge about it in medical personnel. Methods: A documentary review of the Diagnostic Records of B. burgdorferi sensu lato infection that are preserved in the National Reference Laboratory of Pedro Kourí Institute of Tropical Medicine was carried out from 2007 to 2016, and it was combined with an exploratory study of the knowledge´s level about the disease in medical personnel. Results: There was a slight increase in the number of samples received. Serum and cerebrospinal fluid were the samples chosen for a diagnosis that was performed by enzyme immunoassay. Infection was confirmed in 10.9 % of the serum samples received. Skin lesions, regional lymphadenopathy, facial paralysis, difficulty for walking and others led to the clinical suspicion of this disease. It was predominant the antecedent of insect or tick bites. Seventy percent of the doctors surveyed said they knew about Lyme disease, but only 46 % of them acknowledged at least one of its clinical manifestations. Conclusions: B. burgdorferi sensu lato infection should be taken into account in patients with symptoms compatible with Lyme disease. Educational interventions are required in the medical personnel for a better clinical recognition of this infectious entity and to promote a better diagnosis.

RESUMEN Introducción: La borreliosis de Lyme no ha sido notificada oficialmente en Cuba pero existen sospechas clínico-epidemiológicas y evidencias serológicas sugestivas de la infección por Borrelia burgdorferi sensu lato, su agente causal. Objetivo: Describir aspectos clínicos y epidemiológicos de pacientes que padecieron la enfermedad y explorar el nivel de conocimientos en personal médico. Métodos: Se realizó revisión documental de los Registros de Diagnóstico de la infección por B. burgdorferi sensu lato, entre 2007-2016, conservados en el Laboratorio Nacional de Referencia del Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí” y se combinó con un estudio exploratorio del nivel de conocimientos sobre la enfermedad en personal médico. Resultados: Hubo incremento discreto en el número de muestras recepcionadas. El suero y el líquido cefalorraquídeo, fueron las muestras de elección para el diagnóstico, realizado por ensayos inmunoenzimáticos. Se confirmó la infección en 10,9 % de las muestras de sueros recibidas. Las lesiones en piel, adenopatías regionales, parálisis faciales, dificultad para la marcha y otras, motivaron la sospecha clínica de esta enfermedad. Predominó el antecedente de picaduras por insectos o garrapatas. El 70 % de los médicos encuestados plantearon conocer sobre la enfermedad de Lyme, pero de ellos solo el 46 % reconoció al menos una de sus manifestaciones clínicas. Conclusiones: Los aspectos clínicos y epidemiológicos descritos, deben ser tomados en cuenta en pacientes con sintomatologías compatibles con la infección por B. burgdorferi sensu lato. Se requieren intervenciones educativas en el personal médico para un mejor reconocimiento clínico de esta entidad infecciosa y propiciar un mejor diagnóstico.

ABSTRACT Introduction: Lyme borreliosis has not been officially reported in Cuba but there are clinical-epidemiological suspicions and serological evidence that are suggestive of its causal agent: the infection by Borrelia burgdorferi sensu lato. Objective: To describe clinical and epidemiological aspects of patients who suffered from the disease and to explore the level of knowledge about it in medical personnel. Methods: A documentary review of the Diagnostic Records of B. burgdorferi sensu lato infection that are preserved in the National Reference Laboratory of Pedro Kourí Institute of Tropical Medicine was carried out from 2007 to 2016, and it was combined with an exploratory study of the knowledge´s level about the disease in medical personnel. Results: There was a slight increase in the number of samples received. Serum and cerebrospinal fluid were the samples chosen for a diagnosis that was performed by enzyme immunoassay. Infection was confirmed in 10.9 % of the serum samples received. Skin lesions, regional lymphadenopathy, facial paralysis, difficulty for walking and others led to the clinical suspicion of this disease. It was predominant the antecedent of insect or tick bites. Seventy percent of the doctors surveyed said they knew about Lyme disease, but only 46 % of them acknowledged at least one of its clinical manifestations. Conclusions: B. burgdorferi sensu lato infection should be taken into account in patients with symptoms compatible with Lyme disease. Educational interventions are required in the medical personnel for a better clinical recognition of this infectious entity and to promote a better diagnosis.

RESUMEN Introducción: La borreliosis de Lyme no ha sido notificada oficialmente en Cuba pero existen sospechas clínico-epidemiológicas y evidencias serológicas sugestivas de la infección por Borrelia burgdorferi sensu lato, su agente causal. Objetivo: Describir aspectos clínicos y epidemiológicos de pacientes que padecieron la enfermedad y explorar el nivel de conocimientos en personal médico. Métodos: Se realizó revisión documental de los Registros de Diagnóstico de la infección por B. burgdorferi sensu lato, entre 2007-2016, conservados en el Laboratorio Nacional de Referencia del Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí” y se combinó con un estudio exploratorio del nivel de conocimientos sobre la enfermedad en personal médico. Resultados: Hubo incremento discreto en el número de muestras recepcionadas. El suero y el líquido cefalorraquídeo, fueron las muestras de elección para el diagnóstico, realizado por ensayos inmunoenzimáticos. Se confirmó la infección en 10,9 % de las muestras de sueros recibidas. Las lesiones en piel, adenopatías regionales, parálisis faciales, dificultad para la marcha y otras, motivaron la sospecha clínica de esta enfermedad. Predominó el antecedente de picaduras por insectos o garrapatas. El 70 % de los médicos encuestados plantearon conocer sobre la enfermedad de Lyme, pero de ellos solo el 46 % reconoció al menos una de sus manifestaciones clínicas. Conclusiones: Los aspectos clínicos y epidemiológicos descritos, deben ser tomados en cuenta en pacientes con sintomatologías compatibles con la infección por B. burgdorferi sensu lato. Se requieren intervenciones educativas en el personal médico para un mejor reconocimiento clínico de esta entidad infecciosa y propiciar un mejor diagnóstico.

Introduction: human leptospirosis is an acute infectious disease which can lead to death if the patient is not early diagnosed and treated. In Cuba the research studies on the molecular detection of Leptospira in samples from fatal cases are uncommon. Objective: to evaluate a Polymerase Chain Reaction (PCR) methodology for detection of pathogenic Leptospira DNA in fresh tissue samples from deceased persons with suspected leptospirosis. Methods: this study evaluated and applied a polymerase chain reaction (PCR) method for detection of pathogenic Leptospira spp. DNA in the period 2012-2013. The PCR was evaluated using leptospire cultures and in human tissues artificially infected with pathogenic leptospires. Besides, PCR was applied to fresh organ samples from dead people with suspected leptospirosis. The final results were compared with those of other reported PCR that had been used for fresh post-mortem samples. Results: the evaluated PCR was more sensitive than PCR used as reference. It allows confirming pathogenic leptospiral infection in 34.2 % (42/123) of clinical samples from fresh organs whereas the reference one reached 17.9 % (22/123). The aforementioned showed the usefulness of this new tool. Conclusions: the evaluated polymerase chain reaction represents a useful and sensitive tool in leptospirosis confirmation in dead people.

Introducción: la leptospirosis humana es una enfermedad infecciosa aguda que sin diagnóstico y tratamiento temprano puede conllevar a la muerte del paciente. En Cuba son escasos los estudios relacionados con la detección molecular de Leptospira en muestras de fallecidos. Objetivo: evaluar una metodología de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para la detección de ADN de leptospiras patógenas en muestras frescas de tejidos de fallecidos con sospecha de leptospirosis. Métodos: se evaluó y aplicó una PCR para la detección de ADN de Leptospira spp. patógenas en el período 2012-2013. Esta PCR se estimó utilizando cultivos de leptospiras y en tejidos humanos infectados artificialmente con leptospiras patógenas. Además la PCR se aplicó a muestras de órganos frescos de fallecidos con sospecha de leptospirosis, comparando los resultados con otra PCR reportada y usada para muestras frescas post-mortem. Resultados: la PCR evaluada resultó más sensible que la PCR empleada como referencia, y permitió confirmar la infección por leptospiras patógenas en el 34,2 % (42/123) de las muestras clínicas de órganos frescos, mientras la de referencia en el 17,9 % (22/123), lo que demuestra la utilidad de esta nueva herramienta. Conclusión: la PCR evaluada constituye una herramienta sensible y útil para la confirmación de leptospirosis en fallecidos.

This study describes the development and application of a new PCR assay for the specific detection of pathogenic leptospires and its comparison with a previously reported PCR protocol. New primers were designed for PCR optimization and evaluation in artificially-infected paraffin-embedded tissues. PCR was then applied to post-mortem, paraffin-embedded samples, followed by amplicon sequencing. The PCR was more efficient than the reported protocol, allowing the amplification of expected DNA fragment from the artificially infected samples and from 44% of the post-mortem samples. The sequences of PCR amplicons from different patients showed >99% homology with pathogenic leptospires DNA sequences. The applicability of a highly sensitive and specific tool to screen histological specimens for the detection of pathogenic Leptospira spp. would facilitate a better assessment of the prevalence and epidemiology of leptospirosis, which constitutes a health problem in many countries.

El presente estudio describe el desarrollo y aplicación de un nuevo ensayo de PCR para la detección específica de leptospiras patógenas y su comparación con un protocolo reportado previamente. Se diseñaron nuevos cebadores para la optimización y evaluación de la PCR en tejidos embebidos en parafina infectados artificialmente. La PCR se aplicó además a muestras de tejidos embebidos en parafina y se realizó la secuenciación del amplicón resultante. La PCR diseñada fue más eficiente que el protocolo reportado, permitiendo la amplificación del fragmento de ADN esperado en las muestras infectadas artificialmente y del 44% de las muestras post mortem. Se secuenciaron 10 amplicones provenientes de pacientes diferentes. La aplicabilidad de una herramienta altamente sensible y específica en la búsqueda de leptospiras patógenas en especímenes histopatológicos podría facilitar una mejor valoración de la prevalencia y la epidemiología de la leptospirosis, la que constituye un problema de salud en disímiles países.

Four variants of the potassium acetate procedure for DNA extraction from ixodid ticks at different stage of their life cycles were evaluated and compared with phenol-chloroform and ammonium hydroxide methods. The most rapid and most efficient variant was validated in the DNA extraction procedure from the engorged ticks collected from bovine, canine as well as from house ticks for the screening of Borrelia burgdorferi sensu lato, Anaplasma spp. and Babesia spp. The ammonium hydroxide procedure was used for non-engorged ticks. All the variants were efficient and allowed obtaining PCR-quality material according to the specific amplification of 16S rRNA gene fragment of the original tick. DNA extracted from the ticks under the study was tested by multiplex PCR for the screening of tick-borne pathogens. Anaplasma spp. and Babesia spp. amplification products were obtained from 29/48 extracts. Ammonium hydroxide protocol was not efficient for two extracts. Detection of amplification products from the PCR indicated that DNA had been successfully extracted. The potassium acetate procedure could be an alternative, rapid, and reliable method for DNA extraction from the ixodid ticks, mainly for poorly-resourced laboratories.

The diagnosis of M. genitalium infections by bacteriological culture is not feasible due to slow growth and that is time-consuming. Consequently, molecular methods using DNA amplification are widely used in the infection diagnosis procedure. There are no reports in Cuba of the implementation and use of quantitative Polymerase Chain Reaction methods for the detection and quantification of this pathogen. The aim of this study was to implement a qPCR method for the detection of M. genitalium by the amplification of the mgpBadhesin gene using two LightCycler® (Roche) protocols, SYBR Green I and TaqMan. The specifity and sensitivity were evaluated by using DNA of M. genitalium as well as other mycoplasms of human origin. In both qPCR-protocols, a limit of detection of 3.6 genome equivalents per µL template (geq/µL) was reached. The TaqMan protocol showed better efficiency than the SYBR Green assay. Both protocols showed a high specificity for the detection of M. genitalium, without cross-reactions with other mycoplasmas of human origin. For the first time in Cuba, a qPCR for detection of M. genitalium was implemented. The TaqMan method showed a better performance than the SYBR method and should be used for future applications in clinical samples. The present work will allow performing future studies of genetic and antigenic characterization of the circulating strains in Cuba, useful as vaccine immunogen.

El diagnóstico de las infecciones por Mycoplasmagenitalium mediante métodos bacteriológicos tradicionales resulta laborioso y poco práctico. Es por ello que los métodos moleculares basados en la amplificación del ADN se utilizan con fines diagnósticos de infecciones causadas por este microorganismo. En Cuba no existen informes de la implementación y utilización de los métodos de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) para la detección y cuantificación de este patógeno. En este trabajo se implementó una qPCR para la detección y cuantificación de M. genitalium mediante la amplificación de un fragmento del gen mgpB que codifica para la proteína adhesina celular, mediante la tecnología LightCycler®(Roche), utilizando los métodos de qPCRSYBR Green I y TaqMan. Se evaluó la especificidad y sensibilidad de dicha PCR utilizando ADN de M. genitalium y de otros micoplasmas de origen humanos. Se logró la implementación de ambos métodos de qPCR con un límite de detección de 3,6 geq/µL, siendo la plataforma TaqManla que mostró mejor eficiencia. Ambos métodos mostraron una alta especificidad para la detección de M. genitalium y no se detectaron reacciones cruzadas con otros micoplasmas de origen humano. Se implementó por primera vez en Cuba una qPCR para la detección de M. genitalium. El método TaqMan mostró mejor desempeño parala futura aplicación de esta metodología en muestras clínicas. El presente trabajo permitirá realizar estudios de caracterización genética y antigénica de las cepas circulantes en Cuba, útiles para conformar un inmunógenovacunal.

The diagnosis of Mycoplasma genitalium infections by bacteriological culture is not feasible due to slow growth and that is time-consuming. Consequently, molecular tools using DNA amplification are widely used in the infection diagnosis. There are few reports in Cuba on infections caused by this pathogen. The aim of this study was to detect M. genitalium in clinical samples from sexually active individuals, by two PCR assays. PCR-methods were implemented and evaluated on clinical samples for the detection of M. genitalium using fragments of the 16S rRNA (427 pb) and mgpB adhesion genes (281 pb) as targets. The PCR assays were used on 300 endocervical swabs from female patients with urogenital symptoms and on 49 first-void-urine samples from asymptomatic males. The limit of detection of 16S PCR and MgPa PCR-assays were of 5 and 50 geq/µL, respectively. For the analyzed clinical samples, 3% (10/300) of female swabs and 24.5% (12/49) of urine samples from asymptomatic men were positive for M. genitalium by the two PCR assays. In contrast to the anticipated results, male urine samples had the highest positive rate. Two PCR assays for the detection of M. genitalium were implemented and successfully used on clinical samples, with the unexpected finding of a high positive rate in specimens from asymptomatic men. The current work will allow performing future studies of genetic and antigenic characterization of the circulating Mycoplasma genitalium-strains in Cuba, useful as vaccine immunogen.

El diagnóstico de las infecciones por Mycoplasma genitalium mediante métodos bacteriológicos tradicionales resulta laborioso y poco práctico. Es por ello que los métodos moleculares basados en la amplificación del ADN se utilizan con fines diagnósticos de las infecciones causadas por este microorganismo. En Cuba se han realizado pocos estudios sobre la presencia de M. genitalium en el tracto urogenital. El objetivo de la presente investigación fue detectar M. genitalium en individuos cubanos sexualmente activos mediante la implementación de métodos de PCR simple. Se implementaron dos PCR simples para la detección de fragmentos de 427 pb del gen ARN ribosomal 16S y 281 pb del gen de la adhesina celular MgPa de M. genitalium, que se evaluaron en muestras de exudado endocervical provenientes de 300 mujeres con sintomatología urogenital y muestras de orina de 49 hombres asintomáticos sexualmente activos. Se logró un límite de detección de la PCR del ARNr 16S de aproximadamente 5 copias de genoma por reacción, mientras que para la PCR MgPa se logró la amplificación de solo 50 copias de genoma por reacción. El 3% (10/300) de los exudados endocervicales y el 24,5% (12/49) de las muestras de orina de hombres asintomáticos resultaron positivas mediante ambas PCR. El mayor porcentaje de muestras positivas correspondió a las muestras de orina provenientes de hombres asintomáticos, que resultó superior a lo esperado. El presente trabajo permitirá realizar estudios futuros de caracterización genética y antigénica de las cepas de Mycoplasma genitalium circulantes en Cuba, útiles para conformar un inmunógeno vacunal.