ABSTRACT The objective of the study was to evaluate the effect of chloroquine (CQ) on human lymphocytes through the Comet Assay. Lymphocytes were isolated from peripheral blood samples obtained from three healthy, non-smoking donors aged 24 to 30 years. The isolated lymphocytes were exposed for one hour to various treatments: hydrogen peroxide 2.5% (positive control), saline buffer phosphate 1X (negative control) and chloroquine at concentrations of 0 µg/ml, 0.25 µg/ml; 5 µg/ml and 300 µg/ml. The averages of the percentage of DNA in the comet tail, moment of tail and moment of Olive’s tail were recorded, with significant differences between the different concentrations of CQ (p<0.01). Also, the magnitude of DNA damage was increased as a function of the CQ concentration. The genotoxic effect of CQ was demonstrated in human lymphocytes exposed in vitro.

RESUMEN El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de cloroquina (CQ) en linfocitos humanos a través del ensayo cometa. Los linfocitos fueron aislados de muestras de sangre periférica obtenidas de tres donantes sanos, no fumadores de 24 a 30 años. Los linfocitos aislados fueron expuestos durante una hora a diversos tratamientos: peróxido de hidrógeno 2,5 % (control positivo), buffer fosfato salino 1X (control negativo) y cloroquina a concentraciones de 0 µg/ml, 0,25 µg/ml; 5 µg/ml y 300 µg/ml. Se registró los promedios del porcentaje de ADN en la cola del cometa, momento de la cola y momento de la cola de Olive, encontrándose diferencias significativas entre las diversas concentraciones de CQ (p<0,01). Asimismo, la magnitud de daño del ADN se incrementó en función de la concentración de CQ. Se demostró el efecto genotóxico de CQ en linfocitos humanos expuestos in vitro.

The aim of the research was to evaluate the chemopreventive effect of Caesalpinia spinosa against the genetic damage induced by cyclophosphamide in polychromatic erythrocytes of Rattus norvegicus Holtzman strain, using the micronucleus (MN) test. We worked with groups of five individuals and randomly applied the treatments: a) negative control, water; b) C. spinosa, aqueous extract 20 mg/ml; c) C. spinosa-cyclophosphamide, 50 mg/kg/bw; d) positive control: cyclophosphamide 50 mg/kg/bw. The individuals were sacrificed and processed to obtain the cytological preparations. The analysis revealed that the frequency of MN in micronucleated polychromatic erythrocytes treated with cyclophosphamide was 8.81 ± 0.52, while the frequency of MN in the C. spinosa- cyclophophamide group was 5.53 ± 0.78. It was demonstrated that the aqueous extract of C. spinosa has a preventive effect by significantly decreasing the frequency of MN in individuals exposed to cyclophosphamide.

La investigación tuvo por finalidad evaluar mediante el ensayo de micronúcleos (MN) el efecto quimiopreventivo de Caesalpinia spinosa frente al daño genético inducido por ciclofosfamida en eritrocitos policromáticos de Rattus norvegicus cepa Holtzman. Se trabajó con grupos de cinco individuos y de manera aleatoria se aplicaron los tratamientos: a) control negativo, agua; b) C. spinosa, extracto acuoso 20 mg/ml; c) C. spinosa- ciclofosfamida, 50 mg/kg/pc; d) control positivo: ciclofosfamida 50 mg/kg/pc. Los individuos fueron sacrificados y procesados para la obtención de los preparados citológicos. El análisis reveló que la frecuencia de MN en eritrocitos policromáticos micronucleados (EPCMN) tratados con ciclofosfamida fue 8,81 ± 0,52, mientras que la frecuencia de MN en el grupo C. spinosa-ciclofosfamida fue 5,53 ± 0,78. Se demostró que el extracto acuoso de C. spinosa presenta efecto preventivo al disminuir significativamente la frecuencia de MN en los individuos expuestos a ciclofosfamida.

The aim of this work was to estimate the genetic variation in a crop of red globe variety (Vitis vinifera) by means of the microsatellites VVMD5 and VrZAG79. For this, plant leaves were obtained from San Jose camp at Chavimochic, La Libertad, Peru. Then, we proceeded with the extraction of DNA, the amplification by the polymerase chain reaction (PCR) and electrophoresis for the microsatellites VVMD5 and VrZag79. We observed monomorphic loci for both markers, the sizes of amplified fragments were of 213.6 and 239.7 bp for VVMD5 and of 242.2 bp for VrZAG79. As conclusion, the genotypes show stability during the replicas that were realized by vegetative cloning to obtain the plants from an initial genotype. Nevertheless, the evaluation of the genotypes will be necessary with additional markers.

El objetivo del presente trabajo fue estimar la variación genética en un cultivo de la variedad red globe (Vitis vinifera) mediante los microsatélites VVMD5 y VrZAG79. Para ello, se obtuvieron hojas de plantas del campamento San José de Chavimochic, La Libertad, Perú. Se procedió con la extracción de ADN, la amplificación por PCR y electroforesis para los microsatélites VVMD5 y VrZag79. Se observaron loci monomórficos para ambos marcadores, los tamaños de fragmentos amplificados fueron de 213,6 y 239,7 bp para VVMD5 y de 242,2 bp para VrZAG79. Como conclusión, los genotipos muestran estabilidad durante las réplicas que se realizaron por clonación vegetativa para obtener las plantas a partir de un genotipo inicial. Sin embargo, será necesaria la evaluación de los genotipos con marcadores adicionales.

The objective of the study was to evaluate the effect of chloroquine (CQ) on human lymphocytes through the Comet Assay. Lymphocytes were isolated from peripheral blood samples obtained from three healthy, non-smoking donors aged 24 to 30 years. The isolated lymphocytes were exposed for one hour to various treatments: hydrogen peroxide 2.5% (positive control), saline buffer phosphate 1X (negative control) and chloroquine at concentrations of 0 µg/ml, 0.25 µg/ml; 5 µg/ml and 300 µg/ml. The averages of the percentage of DNA in the comet tail, moment of tail and moment of Olive’s tail were recorded, with significant differences between the different concentrations of CQ (p<0.01). Also, the magnitude of DNA damage was increased as a function of the CQ concentration. The genotoxic effect of CQ was demonstrated in human lymphocytes exposed in vitro.

El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de cloroquina (CQ) en linfocitos humanos a través del ensayo cometa. Los linfocitos fueron aislados de muestras de sangre periférica obtenidas de tres donantes sanos, no fumadores de 24 a 30 años. Los linfocitos aislados fueron expuestos durante una hora a diversos tratamientos: peróxido de hidrógeno 2,5 % (control positivo), buffer fosfato salino 1X (control negativo) y cloroquina a concentraciones de 0 µg/ml, 0,25 µg/ml; 5 µg/ml y 300 µg/ml. Se registró los promedios del porcentaje de ADN en la cola del cometa, momento de la cola y momento de la cola de Olive, encontrándose diferencias significativas entre las diversas concentraciones de CQ (p<0,01). Asimismo, la magnitud de daño del ADN se incrementó en función de la concentración de CQ. Se demostró el efecto genotóxico de CQ en linfocitos humanos expuestos in vitro.

In the present investigation, the in vivo test of C. spinosa extract was carried out as a controller of F. columnare in tilapia individuals. For this, the extract of dried fruits of C. spinosa was obtained and was mixed with the culture water for fish at the final concentration of 0.4 mg/ml in aquariums of 280 l. In the first stage, artificially infected tilapia with F. columnare appeared with the disease symptoms. In the second stage, the diseased fish were treated with the extract dissolved in the water and were kept until their recovery. In the group of sick individuals who did not receive C. spinosa, the percentage of survival was 53,33. Survival percentages of healthy fish with and without C. spinosa extract did not show significant differences between them. It showed antibacterial activity in vivo of C spinosa. These results indicate that it could be used as an alternative effective for the treatment of infections bacteria for other species of bacteria and other aquaculture species, at low cost and friendly to the environment.

En la presente investigación se realizó el ensayo in vivo del extracto de C. spinosa como un controlador de F. columnare en individuos de tilapia. Para lo cual, se obtuvo el extracto de frutos secos de C. spinosa y se mezcló con el agua de cultivo para peces a la concentración final de 0.14 mg/ml en acuarios de 280 l. En la primera etapa, los peces de tilapia infectados artificialmente con F. columnare manifestaron los síntomas de la enfermedad. En la segunda etapa, los peces enfermos fueron tratados con el extracto de C. spinosa disuelto en el agua de cultivo y se mantuvieron hasta su recuperación. En el grupo de individuos enfermos que no recibieron C. spinosa, el porcentaje de sobrevivencia fue 53,33. Los peces criados con y sin C. spinosa no mostraron diferencias en el porcentaje de sobrevivencia entre ellos. Se demostró la actividad antibacteriana in vivo de C. spinosa y puede usarse como una alternativa efectiva para el tratamiento de infecciones de otras bacterias y en otras especies acuícolas, a bajo costo y amigable con el medio ambiente.

The influence of sex-related chromosomal arrangement in an YY and XY population of Oreochromis niloticus males was investigated in this study. A better spermatic mobility, motility, viability, confluence and less abnormality were found in double Y-chromosome males (YY-males), compared to XY-males; however, this better spermatic quality did not correlate with the body weight of individuals which was significantly better in XY-males. This study establishes the influence of YY-related sequences over spermatic quality and indicates the usefulness of the YY technology as a strategy to obtain better fish breeders and genetically male individuals for a tilapia farming program.

The aim of the present study was to report new molecular markers for real-time PCR associated with X and Y sex chromosomes, and perform analysis of the synapsis of the smallest bivalent in pachytene spermatocytes of XY male Oreochromis niloticus. Four pairs of primers were designed and were tested by endpoint PCR and real-time PCR using SYBR Green detection system in DNA samples from XX females, XY males and YY supermales. In order to assess the smallest bivalent synapsis, testicular samples from XY males were used to make chromosomal spreads in pachytene. Size range of fragments amplified by endpoint PCR was concordant with the expected values. Real-time PCR assay showed equal specificity but speed advantage in amplification detection of markers associated with X and Y chromosomes according to the established PCR conditions. Genetic differences between regions of the X and Y chromosomes (smallest bivalent) proven with specific markers were not cytological perceptible in pachytene spermatocytes from XY O. niloticus. A model of XY bivalent synapse was suggested based on the DNA sequences homologies and differences between KC710223 and KC710224 accessions from X and Y chromosomes.

El objetivo de la presente investigación fue dar a conocer nuevos marcadores moleculares para la PCR en tiempo real asociados a los cromosomas sexuales y el análisis de la sinapsis del bivalente más pequeño en espermatocitos en paquiteno de Oreochromis niloticus. Se diseñaron cuatro pares de cebadores y se pusieron a prueba por PCR punto final y por PCR en tiempo real utilizando el fluorescente SYBR® Green en muestras de ADN de hembras XX, machos XY y supermachos YY. Los tamaños de los fragmentos amplificados por PCR punto final fueron concordantes a los valores esperados y por PCR en tiempo real se demostró igual especificidad pero con ventaja en rapidez en la detección de amplificación de marcadores asociados a los cromosoma X y Y, de acuerdo con las condiciones de la PCR establecidas. Las diferencias genéticas entre las regiones de los cromosomas X y Y demostradas con los marcadores específicos no fueron perceptibles citológicamente en los espermatocitos en paquiteno de O. niloticus XY. En base a las diferencias y homologías de las secuencias de ADN entre las accesiones KC710223 y KC710224 de los cromosomas X y Y se propone un modelo de sinapsis del bivalente XY.

The aims of this work was to develop a standardized molecular protocols, to differentiate red and gray tilapia lineages using DNA microsatellites and to evaluate SCAR-5F-X/5R and SCAR-5F/5RY markers associated with the phenotypic sex of O. niloticus. The UNH106 microsatellite allowed differentiating genetically the lineages of red tilapia from gray. The markers UNH136, UNH115 and UNH995 presented monomorphic loci in both the red and gray tilapia in the population stock of the Centro Experimental de Genética of the Universidad Nacional de Trujillo. Fragment sizes for microsatellites and the reference gene β actin are described. The effectiveness of SCAR markers as informative in the determination of the genetic sex in XX and YY females and XY y YY males of red tilapia and XX females and XY males of gray tilapia was also confirmed.

El objetivo del trabajo fue realizar la estandarización de los protocolos moleculares, diferenciar los linajes de la tilapia roja y gris mediante microsatélites de ADN y evaluar los marcadores SCAR5F-X/5R y SCAR-5F/5R-Y como indicadores del sexo genético de O. niloticus. El microsatélite UNH106 permitió diferenciar genéticamente los linajes de la tilapia roja de la gris. Los microsatélites UNH136, UNH115 y UNH995 presentaron loci monomórficos tanto en la tilapia roja como en la gris en el lote poblacional del Centro Experimental de Genética de la Universidad Nacional de Trujillo. Se describen los tamaños de fragmentos para los microsatélites y del gen de referencia β actin. También se confirmó la efectividad de los marcadores SCAR como informativos en la determinación del sexo genético evaluados en hembras XX y YY y machos XY y YY de O. niloticus roja y hembras XX y machos XY de O. niloticus gris.

Understanding the spatial organization of the chromosomes in meiotic nuclei is crucial to our knowledge of the genome's functional regulation, stability and evolution. This study examined the nuclear architecture of Mus domesticus 2n=40 pachytene spermatocytes, analyzing the associations among autosomal bivalents via their Centromere Telomere Complexes (CTC). The study developed a nuclear model in which each CTC was represented as a 3D computer object. The probability of a given combination of associations among CTC was estimated by simulating a random distribution of 19 indistinguishable CTC over n indistinguishable "cells" on the nuclear envelope. The estimated association frequencies resulting from this numerical approach were similar to those obtained by quantifying actual associations in pachytene spermatocyte spreads. The nuclear localization and associations of CTC through the meiotic prophase in well-preserved nuclei were also analyzed. We concluded that throughout the meiotic prophase: 1) the CTC of autosomal bivalents are not randomly distributed in the nuclear space; 2) the CTC associate amongst themselves, probably at random, over a small surface of the nuclear envelope, at the beginning of the meiotic prophase; 3) the initial aggregation of centromere regions occurring in lepto-zygotene likely resolves into several smaller aggregates according to patterns of preferential partitioning; 4) these smaller aggregates spread over the inner face of the nuclear envelope, remaining stable until advanced stages of the meiotic prophase or even until the first meiotic division.

ABSTRACT Due multiple reports of the genotoxic and carcinogenic effect of chromium VI and the permanent exposure of the human beings to this element. Objective. Contributing new evidence of the genotoxicity of potassium dichromate using the biological system Oreochromis niloticus "tilapia" through the micronucleus test and the nuclear quantification of buds in erythrocytes of peripheral blood. Material and methods. The individuals were exposed to increasing concentrations (0.0, 0.2, 0.4 and 0.8 ppm) of potassium dichromate. Peripheral blood samples of the branchial arc of each individual were taken at 3th and 7th day of treatment which were processed and colored with Giemsa 5%, erythrocytes in peripheral blood with micronuclei and nuclear buds were quantified. Results. A significant increase of frequencies of micronucleus and nuclear buds in the exposed individuals were registered which were directly proportional to the potassium dichromate concentration (p<0.05). Conclusions. Potassium dichromate caused genetic damage in the cells of O. niloticus.

Existen múltiples reportes del efecto genotóxico y cancerígeno del cromo VI, los seres humanos tenemos una permanente exposición a este elemento. Objetivos. Evidencias la genotoxicidad del dicromato de potasio utilizando como sistema biológico a Oreochromis niloticus "tilapia", mediante el test de micronúcleos y la cuantificación de nuclear buds, en eritrocitos de sangre periférica. Materiales y métodos. Los individuos fueron expuestos a concentraciones crecientes (0,0, 0,2, 0,4 y 0,8 ppm) de dicromato de potasio. Se obtuvieron muestras de sangre periférica, del arco branquial de cada individuo (cuatro por grupo), a los tres y siete días de tratamiento, las cuales fueron procesadas y coloreadas con Giemsa 5% y se cuantificaron eritrocitos con micronúcleos y nuclear buds en sangre periférica. Resultados. Se encontró un incremento significativo de las frecuencias de micronúcleos y nuclear buds directamente proporcional a la concentración del dicromato de potasio en los individuos expuestos (p<0,05). Conclusiones. El dicromato de potasio produce daño genético en los eritrocitos de O. niloticus.