RESUMO: O estudo foi conduzido para avaliar o desempenho reprodutivo de novilhas Nelore, não imunizadas para herpesvirus bovino tipo 1 (BHV-1), vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e leptospirose bovina (LB), submetidas a diferentes protocolos vacinais em manejo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e repasse com touro em monta natural. Um total de 763 animais foram distribuídos em quatro grupos: T1 - controle sem vacinação; T2 - vacinação contra LB; T3 - vacinação contra BHV-1 e BVDV T4 - vacinação com LB+ BHV-1 e BVDV. A vacinação foi iniciada 30 dias antes da IATF (D-40) com a aplicação da segunda dose em D-10. Verificou-se a taxa de ocorrência de infecção natural por LB, BHV-1 e BVDV realizando-se exames sorológicos. O diagnóstico de gestação inicial foi feito aos 30, 60 e 120 dias. Avaliou-se as taxas de prenhez em função dos grupos, do peso, escore de condição corporal, presença ou ausência de cio, inseminador, touro, ocorrência de abortos ou morte embrionária. Os resultados obtidos revelaram que soropositividade para leptospirose foi de 100% para todos os grupos, variando de 77,0% a 94,0% para BHV-1 e 64,0% a 87,0% para BVDV. O protocolo vacinal não interferiu na taxa de prenhez, de mortalidade embrionária ou fetal. Houve diferença na taxa de prenhez em relação ao peso dos animais no início da estação reprodutiva e a presença de cio no momento da IATF. Concluiu-se que o protocolo vacinal não interferiu no desempenho reprodutivo dos grupos experimentais.

ABSTRACT: This study evaluated the reproductive performance of Nellore heifers without previous vaccination undergoing fixed-time artificial insemination (FTAI) and subsequent natural breeding under different vaccination protocols against infectious bovine herpesvirus 1 (BHV-1), bovine viral diarrhea virus (BVDV), and bovine leptospirosis (BL). A total of 763 animals were included; the group assignment was as follows: T1, control without vaccination; T2, vaccination against BL; T3, vaccination against BHV-1and BVDV; T4,vaccination against combination of BL + BHV-1and BVDV. Vaccination was started 30 days before FTAI (D-40), and a booster dose was administered at D-10. Serological tests were used to verify the occurrence rate of natural infection by BL, BHV-1, and BVDV. Initial pregnancy was diagnosed at D30, D60, and D120 after FTAI. Final pregnancy rates were evaluated by group, weight, body-condition score, occurrence of estrus, inseminator, bull, and occurrence of abortions or embryonic death. In all groups, results indicated seropositivity of 100% for leptospirosis, 77.0-94.0% for BHV-1, and 64.0-87.0% for BVDV. The vaccination protocol was not a significant influencing factor of pregnancy rate and embryonic or fetal mortality; whereas, animal weight at the beginning of the breeding season and presence of estrus at FTAI were significant influencing factors of pregnancy rate. The vaccination protocol had no interference with the reproductive performance of the experimental groups.

RESUMO: Foi realizado um estudo epidemiológico da leptospirose em fêmeas acima de 24 meses, provenientes de 246 rebanhos, e 2.766 animais amostrados aleatoriamente nos nove municípios que compõem a região do Pantanal de Mato Grosso do Sul, bem como identificados os fatores de risco associados à doença. As amostras de sangue foram coletadas no período de setembro a novembro de 2009 e examinadas pelo teste de aglutinação microscópica ante uma coleção de 24 antígenos vivos de Leptospira spp., representantes dos sorovares Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola, Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panamá, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana e Patoc. Adicionalmente, representantes de doze estirpes de leptospiras isoladas no Brasil foram adicionados à coleção de antígenos do teste de soroaglutinação microscópica (SAM). A prevalência aparente foi de 66% e a prevalência real de animais infectados, de 79,80%, com intervalo de confiança (IC) de 95% (78,3-81,3) e 241 rebanhos apresentando pelo menos um animal reagente. Os sorovares mais prováveis foram o Hardjo seguido pelo Wolffi. Os resultados demonstram que a leptospirose bovina continua presente no Pantanal, com alta prevalência tanto em rebanhos quanto em indivíduos, sendo os principais fatores de risco para a doença o tipo de exploração e a raça.

ABSTRACT: This is an epidemiological study of leptospirosis in 24 month-old females from 246 herds. Two thousand, seven hundred and sixty six (2,766) animals were randomly sampled in the nine counties comprising the region of Pantanal of Mato Grosso do Sul, Brazil. The risk factors associated with the disease were also identified. Blood samples were collected from September to November 2009 and examined by the microscopic agglutination test (MAT) against a collection of 24 live antigens of Leptospira spp., representatives of serovars Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panama, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana, and Patoc. Additionally, twelve representatives of Leptospira strains isolated in Brazil were added to the collection of antigens for the microscopic agglutination test (MAT). The apparent prevalence was 66% and the actual prevalence of infected animals was 79.80%, with a confidence interval of 95% (78.3 to 81.3) and 241 herds having at least one reactive animal. The most likely serovars were Hardjo followed by Wolffi. Results show that bovine leptospirosis is still present in Pantanal, with high prevalence both in animals and herds, the main risk factors for the disease being the type of cattle farming and breeding.

Um inquérito sorológico em quatis (Procyonidae: Nasua nasua) e lobinhos (Canidae: Cerdocyon thous) de vida livre foi conduzido na sub-região da Nhecolândia do Pantanal Sulmatogrossense para avaliar a presença de anticorpos anti-Brucella (fenótipo liso). A pesquisa de anticorpos anti-Brucella foi realizada pelo teste do antígeno acidificado tamponado, utilizado como teste de triagem e pelo teste de polarização fluorescente, utilizado como teste confirmatório. A frequência de animais soropositivos para anticorpos anti-Brucella foi de 13,2% (5/38, IC 95%: 4,4% - 28,1%) para lobinhos e de 8,8% (3/34, IC 95%: 1,9% - 23,7%) para coatis. Não foi encontrada associação entre a soropositividade para brucelose e gênero ou idade. Os resultados deste estudo sugerem exposição a ou infecção de lobinhos e quatis do Pantanal Brasileiro por Brucella spp

A serological survey in free-ranging crab-eating foxes (Canidae: Cerdocyon thous) and brown-nosed coatis (Procyonidae: Nasua nasua) was performed in the Nhecolândia sub-region of the Brazilian Pantanal to evaluate the presence of anti-smooth Brucella antibodies on those wild populations. The detection of anti-smooth Brucella antibodies was performed by the Rose Bengal Test (RBT) as screening test and the Fluorescence Polarization Assay (FPA) as a confirmatory test. The frequency of smooth Brucella seropositive animals were 13.2% (5/38, 95% CI: 4.4% - 28.1%) for crab-eating foxes and 8.8% (3/34, 95% CI: 1.9% -23.7%) for brown-nosed coatis. No association was found between seropositivity for brucellosis and gender or age. The results of this study suggest exposure to or infection of crab-eating fox and brown-nosed coati from the Brazilian Pantanal by Brucella spp

Foi realizado um levantamento da infecção por Leptospira spp. em mamíferos silvestres do Pantanal sul-mato-grossense com o emprego da reação de soroaglutinação microscópica (SAM) e da reação em cadeia da polimerase (PCR). Os sorovares de maior frequência nos animais investigados foram Hardjobovis (28%), Icterohemorhagiae (12%), M-110/2006 (isolado de Cerdocyon thous; 16%), Canicola (L014 isolada de Bos taurus, 4%), Whitcombi (4%), Pomona (20%), Autumnalis (12%) e Copenhageni (M9/99 isolada de Rattus norvegicus, 4%). Das 79 amostras examinadas pela PCR, 21 (26,58%) foram positivas, com a amplificação de um fragmento de aproximadamente 331pb. Dois fragmentos amplificados obtidos de amostras de C. thous foram clonados, sequenciados e identificados como L. interrogans por análise filogenética.

A survey of Leptospira spp. in wild mammals from the southern Pantanal of Mato Grosso do Sul was performed by microscopic agglutination test (MAT) and polymerase chain reaction (PCR). The serovars most frequently found were Hardjobovis (28%), Icterohemorhagiae (12%), M110/2006 strain (isolated from Cerdocyon thous, 16%), Canicola (L014 isolated from Bos Taurus, 4%), Whitcombi (4%), Pomona (20%), Autumnalis (12%) and Copenhageni (M9/99 isolated from Rattus norvegicus, 4%). From the 79 samples tested by PCR, 21 (26.58%) were positive, resulting in the amplification fragment of approximately 331pb. Two amplified fragments from C. thous were cloned, sequenced and identified as L. interrogans by phylogenetic analysis.

This work reports a survey of Leptospira spp in pampas deer (Ozotoceros bezoarticus) in the Pantanal wetlands of the state of Mato Grosso do Sul, Brazil by serology and polymerase chain reaction (PCR). Seventy pampas deer were captured in the dry season and surveyed using PCR, microscopic agglutination test (MAT) (n = 51) and by both techniques (n = 47). PCR detected infections in two pampas deer and MAT detected infections in three. Through sequencing and phylogenetic analyses, the PCR-amplified fragment detected in deer was identified as Leptospira interrogans. Serovars Pomona and Butembo were detected using MAT and the highest titre was 200 for serovar Pomona. Epidemiological aspects of the findings are discussed.

As in humans, sub-clinical infection by arboviruses in domestic animals is common; however, its detection only occurs during epizootics and the silent circulation of some arboviruses may remain undetected. The objective of the present paper was to assess the current circulation of arboviruses in the Nhecolândia sub-region of South Pantanal, Brazil. Sera from a total of 135 horses, of which 75 were immunized with bivalent vaccine composed of inactive Eastern equine encephalitis virus (EEEV) and Western equine encephalitis virus(WEEV) and 60 were unvaccinated, were submitted to thorough viral isolation, reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and neutralization tests for Saint Louis encephalitis virus (SLEV), EEEV, WEEV and Mayaro virus (MAYV). No virus was isolated and viral nucleic-acid detection by RT-PCR was also negative. Nevertheless, the prevalence of neutralizing antibodies in horses older than seven months was 43.7% for SLEV in equines regardless of vaccine status, and 36.4% for WEEV and 47.7% for EEEV in unvaccinated horses. There was no evidence of MAYV infections. The serologic evidence of circulation of arboviruses responsible for equine and human encephalitis, without recent official reports of clinical infections in the area, suggests that the Nhecolândia sub-region in South Pantanal is an important area for detection of silent activity of arboviruses in Brazil.

O estudo epizootiológico de Anaplasma marginale em regiões que existem vários reservatórios, co-existência de espécies de riquétsias patógenas e vetores comuns é uma tarefa complicada. Com o objetivo de obter o diagnóstico dessa riquétsia em bovinos e veado campeiro do Pantanal brasileiro foi avaliada uma reação da polimerase em cadeia em tempo real (PCR-TR) com o fluoróforo intercalante de fita dupla de DNA Sybr Green e iniciadores baseados na seqüência do gene msp5 de A. marginale comparando-a a uma PCR convencional (PCR-C) e ao exame parasitológico de esfregaço fino de sangue corado com Giemsa-MayGrunwald. Ambas PCRs apresentaram bom desempenho no diagnóstico de A. marginale nos bovinos, o qual foi superior ao exame parasitológico. O PCR-TR detectou sete veados campeiros positivos (16,3%), o que foi significativamente maior comparado ao PCR-C identificando um animal como positivo (2,3%), e ao exame parasitológico não encontrou nenhum animal positivo. A média da temperatura de dissociação das reações positivas para amostras de bovinos (81,72 ºC ± 0,20) foi idêntica àquelas dos cervídeos ( 81,72 ºC ± 0,12), o que sugere que ambas espécies animais foram infectadas por A. marginale. Concluímos que PCR-TR pode ser utilizada para diagnóstico e estudos epizootiológicos de A. marginale em bovinos e cervídeos. Apesar da pequena amostragem de veado campeiro os resultados indicam que essa espécie de animal selvagem tem importância na epizootiologia do Anaplasma no Pantanal brasileiro.

Epizootiological study of Anaplasma marginale in regions that contain various reservoir hosts, co-existence of rickettsia pathogens, and common vectors is a complicated task. To achieve diagnosis of this rickettsia in cattle and campeiro deer of Brazilian Pantanal, a comparison was made between a real time polymerase chain reaction (RT-PCR) with intercalating Sybr Green fluorochrome and primers based on msp5 gene of A. marginale; a conventional PCR (C-PCR); and parasitological examination using thin blood smear stained with Giemsa-MayGrunwald. Both PCRs showed good performance in the diagnosis of A. marginale in cattle, and were superior to the parasitological exam. The RT-PCR detected seven positive campeiro deer (16.3%). This rate was significantly higher compared to C-PCR, which identified one animal as positive (2.3%), and also compared to parasitological diagnosis, which did not find any positive animals. The dissociation temperature average of positive reactions in cattle (81.72 ºC ± 0.20) was identical to dissociation temperature found in the cervids (81.72 ºC ± 0.12), suggesting that both animal species were infected with A. marginale. We concluded that RT-PCR can be used for A. marginale diagnosis and in epizootiological studies of cattle and cervids; in spite of the small number of campeiro deer samples, the results indicated that this wildlife species has importance in the Anaplasma epizootiology in the Brazilian Pantanal.

Regiões como o Pantanal brasileiro, que apresentam fatores como riqueza de fauna silvestre incluindo circulação de aves migratórias e condições ambientais e climáticas favoráveis à proliferação de artrópodes estão potencialmente sujeitas à circulação de arbovírus. Entretanto, poucos trabalhos foram realizados acerca da presença de arbovírus em potenciais vetores no Pantanal. Neste sentido o principal objetivo deste trabalho foi conduzir uma investigação preliminar para presença de arbovírus em amostragens de culicídeos capturados na Sub-região da Nhecolândia no Pantanal Sul. Um total de 3684 mosquitos foi capturado, dos quais 78 grupos compondo uma amostragem de 1789 espécimes foram submetidos às técnicas de isolamento viral e RT-PCR para os mais importantes arbovírus no Brasil. Simultaneamente, 70 espécimes de carrapatos capturados durante hematofagia em cavalos também foram submetidos à pesquisa viral. Não houve isolamento viral em nenhuma amostra analisada e os resultados de detecção de ácido nucléico viral foram também negativos. Entretanto, foram identificadas 22 espécies de culicídeos, dez das quais previamente reportadas como vetores de importantes arbovírus. A competência vetorial de espécies capturadas durante hematofagia em humanos e cavalos aliada ao relato prévio de circulação de arbovírus sugerem a Sub-região da Nhecolândia como uma importante área de vigilância para arbovírus no Centro-Oeste do Brasil.

In view of the high circulation of migratory birds and the environmental and climatic conditions which favor the proliferation of arthropods, the Brazilian Pantanal is susceptible to circulation of arboviruses. However, the amount of data concerning arbovirus vectors in this area is scarce; therefore the aim of this study was to conduct a preliminary investigation of Culicidae species in the Nhecolândia Sub-region of South Pantanal, Brazil and their potential importance in the arbovirus transmission. A total of 3684 specimens of mosquitoes were captured, 1689 of which caught in the rainy season of 2007, were divided into 78 pools and submitted to viral isolation, Semi-Nested RT-PCR and Nested RT-PCR, with a view to identifying the most important arboviruses in Brazil. Simultaneously, 70 specimens of ticks found blood-feeding on horses were also submitted to the same virological assays. No virus was isolated and viral nucleic-acid detection by RT-PCR was also negative. Nevertheless, a total of 22 Culicidae species were identified, ten of which had previously been reported as vectors of important arboviruses. The diversity of species found blood-feeding on human and horse hosts together with the arboviruses circulation previously reported suggest that the Nhecolândia Sub-region of South Pantanal is an important area for arbovirus surveillance in Brazil.

Este estudo foi realizado no Pantanal brasileiro: região que apresenta importante biodiversidade. As condições de clima, hidrologia e geomorfologia dessa região, bem como a existência de grande variedade de espécies animais silvestres, favorecem a manutenção da Leptospira no meio ambiente. O objetivo desse estudo foi avaliar o ELISA IgG com proteína recombinante LipL32 em comparação com a soroaglutinação microscópica (SAM) para o diagnóstico sorológico de Leptospira. Adicionalmente, contribuir para o conhecimento da distribuição da leptospirose bovina, uma das mais importantes zoonoses mundialmente distribuída. Foi avaliada a soropositividade para essa bactéria em rebanhos bovinos de corte da região do Pantanal, uma área onde o bovino constitui não apenas o recurso econômico mais importante, como também a principal atividade econômica compatível com a conservação dos recursos naturais da região. Das 282 amostras de soro bovino analisadas, 143 (50,71%) foram positivas na SAM. O sorovar Hardjo (genótipos Hardjoprajitno e Hardjobovis), Wolffi e Ballum apresentaram freqüências altas de amostras reativas. No IgG ELISA rLipL32, 161 amostras (57,09%) foram positivas, apresentando esse teste uma maior soropositividade em relação à SAM (p<0,001). A Sensibilidade do ELISA em comparação com a SAM foi de 99,30% e a especificidade de 86,33%. O IgG ELISA rLipL32 mostrou ser um teste sensível, específico e de alta acurácia para o diagnóstico de leptospirose bovina.

This investigation was carried out in Brazilian Pantanal: region with important biodiversity. This region's climatic conditions, hydrology and geomorphology as well as the existence of great variety of wild species favor the maintenance of the Leptospira in the environment. The aim of this study was to evaluate IgG ELISA with recombinant protein LipL32 in comparison with microscopic agglutination test (MAT) and additionally contribute to the knowledge of the distribution of the one of most important worldwide zoonotic infection, assessing the seropositivity of bovine leptospirosis in beef cattle herds of Brazilian Pantanal, an important ecological preserved area, where cattle constitute not only the most important economic resource but also the major activity compatible of the conservation of natural resource of the region. Out of 282 samples of cattle serum analyzed, 143 (50.71%) were positive in MAT. The serovar Hardjo (genotypic Hardjoprajitno and Hardjobovis), Wolffi and Ballum showed the largest frequency of reactive samples. In the IgG ELISA rLipL32, 161 samples (57.09%) were positive. This result was higher than obtained by MAT (p<0.001). The sensitivity of the ELISA test was 99.30% and the specificity was 86.33%, based on the MAT. This test was shown to be a more sensitive, specific and accurate test for the diagnosis of bovine leptospirosis compared to the MAT.

The objective of this work was to estimate the age and live weight at the first breeding in the Nelore (N), Pantaneira (P), and crossbreeding Pantaneira x Nelore (PxN) heifers. A total of 98 females was used for treatments, 51, 24 and 23 from N, P and PxN heifers, respectively. The statistical analysis did not show any significant difference (P = 0.3595) to live weight in the first breeding among breeds. The variance analysis did not show any significant difference (P = 0.307) of age among breeds, showing 3.5, 3.4 and 3.2 years to P, N and ½PxN heifers, respectively.

Esto trabajo tuvo como objetivo estimar la edad y peso a la primera monta de novillas de las razas Nelore (N), Pantaneira (P) y Mestizas Pantaneira x Nelore (PxN). Se utilizó un total de 98 hembras, siendo 51, 24 y 23 pertenecientes a las razas N, P y PxN, respectivamente. El análisis estadístico de los datos no reveló diferencia significativa (P = 0,3595) para el peso a la primera monta entre las razas estudiadas. El análisis de varianza no reveló diferencia significativa (P = 0,307) entre las edades a la primera monta entre razas, mostrando 3,5, 3,4 y 3,2 años para las novillas P, N y ½PxN, respectivamente.