Com o objetivo de investigar a infecção natural por Leishmania em fêmeas de flebotomíneos, em um foco de leishmaniose visceral, no município de Antônio João, Estado de Mato Grosso do Sul, no período de junho a outubro de 2003, dissecou-se o trato digestivo de 81 fêmeas de cinco espécies de flebotomíneos capturadas em três localidades: Aldeia Campestre, Aldeia Marangatu e Povoado Campestre. Após dissecção estas foram divididas em 13 grupos monoespecíficos e armazenadas em etanol 70%. Para identificação das espécies de Leishmania pela técnica de PCR, esses grupos foram analisados por meio da amplificação dos genes de DNA ribossômico e mini-exon. Das fêmeas analisadas, Lutzomyia longipalpis foi a espécie mais freqüente com 95% (77/81) dos espécimes e apenas um exemplar das demais espécies, Brumptomyia avellari, Evandromyia cortelezzii, Evandromyia lenti e Nyssomyia whitmani, foi encontrado. Tripanosomatídeos foram identificados em oito dos nove grupos de L. longipalpis (10,39%), sendo um da Aldeia Campestre, seis do Povoado Campestre e um da Aldeia Mangaratu. Desses, dois (2,6%) foram identificados, por PCR, como Leishmania chagasi sendo um proveniente da Aldeia Mangaratu e outro, que em dissecção apresentou formas promastigotas (1,23%), proveniente de Povoado Campestre. Os demais grupos foram negativos. Esses resultados apontam para um alto risco de transmissão de leishmaniose na área.

The main purpose of this study was to investigate natural infection by Leishmania in phlebotomine females in a visceral-leishmaniasis focus in Antonio João county in Mato Grosso do Sul State, Brazil. Between June and October 2003, the digestive tracts of 81 females captured in Aldeia Campestre, Aldeia Marangatu and Povoado Campestre were dissected. The females were separated by species, location, area and date of capture into 13 groups and kept in ethanol 70%. To identify the Leishmania species using the PCR technique, amplifications of the ribosomal-DNA (rDNA) and mini-exon genes were analyzed. Of the 81 specimens, 77 (95%) were Lutzomyia longipalpis, making this the most common species; only one specimen of each of the species Brumptomyia avellari, Evandromyia cortelezzii, Evandromyia lenti and Nyssomyia whitmani was found. Trypanosomatids were identified in eight of the nine groups of Lutzomyia longipalpis (10.39%) one group from Aldeia Campestre, one from Aldeia Marangatu and six from Povoado Campestre; of the eight groups, one from Aldeia Marangatu and another, with promastigotes forms also confirmed by dissection (1.23%) from Povoado Campestre, were identified by PCR as Leishmania chagasi (2.6%). The other groups gave negative results. These findings indicate that there is a high risk of leishmaniasis transmission in this area.

A correta identificação dos agentes etiológicos em insetos vetores é de crucial importância aos estudos epidemiológicos. A pesquisa de flagelado nesses vetores, pela dissecção de seu trato digestivo, observação microscópica do seu conteúdo ou por isolamento dos parasitas provenientes de insetos em meios de cultura, tem-se mostrado operacionalmente inadequada e com baixa especificidade do diagnóstico, pois fêmeas de flebotomíneos também podem albergar outros flagelados como Trypanosoma e Endotrypanum. Acreditamos que por sua eficiência e especificidade, a amplificação de seqüências-alvo do DNA da Leishmania, por meio da reação em cadeia de polimerase, pode ser aplicada na investigação de sua presença em flebotomíneos, desde que estes estejam devidamente acondicionados e o DNA do parasita extraído a partir de metodologia adequada. Este trabalho descreve metodologias utilizadas na padronização da conservação dos espécimes de flebotomíneos e extração do DNA da Leishmania como uma alternativa mais prática que os métodos tradicionais.

The correct identification of etiological agents in vector insects is crucial for epidemiological studies. Identification of flagellates in such vectors, usually by dissection of the digestive tract and microscopic observation of the contents as well as attempts at parasite isolation from insects in culture media, have proven operationally inadequate and with poor diagnostic specificity, since female sand flies are also hosts for other flagellates like Trypanosoma and Endotrypanum. Due to the efficiency and specificity of DNA target sequence amplification by polymerase chain reaction (PCR), the latter could be used to investigate the presence of Leishmania in sand flies, although the insects need to be properly stored and the Leishmania DNA extracted using appropriate methodology. This paper describes methodologies to standardize sand fly storage and Leishmania DNA extraction in such specimens as a more practical method in field studies.

A correta identificação dos agentes etiológicos em insetos vetores é de crucial importância aos estudos epidemiológicos. A pesquisa de flagelado nesses vetores, pela dissecção de seu trato digestivo, observação microscópica do seu conteúdo ou por isolamento dos parasitas provenientes de insetos em meios de cultura, tem-se mostrado operacionalmente inadequada e com baixa especificidade do diagnóstico, pois fêmeas de flebotomíneos também podem albergar outros flagelados como Trypanosoma e Endotrypanum. Acreditamos que por sua eficiência e especificidade, a amplificação de seqüências-alvo do DNA da Leishmania, por meio da reação em cadeia de polimerase, pode ser aplicada na investigação de sua presença em flebotomíneos, desde que estes estejam devidamente acondicionados e o DNA do parasita extraído a partir de metodologia adequada. Este trabalho descreve metodologias utilizadas na padronização da conservação dos espécimes de flebotomíneos e extração do DNA da Leishmania como uma alternativa mais prática que os métodos tradicionais.

The correct identification of etiological agents in vector insects is crucial for epidemiological studies. Identification of flagellates in such vectors, usually by dissection of the digestive tract and microscopic observation of the contents as well as attempts at parasite isolation from insects in culture media, have proven operationally inadequate and with poor diagnostic specificity, since female sand flies are also hosts for other flagellates like Trypanosoma and Endotrypanum. Due to the efficiency and specificity of DNA target sequence amplification by polymerase chain reaction (PCR), the latter could be used to investigate the presence of Leishmania in sand flies, although the insects need to be properly stored and the Leishmania DNA extracted using appropriate methodology. This paper describes methodologies to standardize sand fly storage and Leishmania DNA extraction in such specimens as a more practical method in field studies.

No Brasil, o principal agente etiológico da leishmaniose, apresentando freqüentemente comprometimento das mucosas, pertence ao subgênero (Viannia). A conduta terapêutica no tratamento da leishmaniose depende de seu diagnóstico parasitológico e os métodos clássicos restringem sua identificação. Neste trabalho, descrevemos uma reação de PCR, utilizando primers desenhados a partir de seqüências repetitivas de mini-exons, que amplificam um fragmento de 177pb e que são capazes de distinguir o subgênero (Viannia) do subgênero (Leishmania), tornando-se uma ferramenta útil no diagnóstico desta doença.

In Brazil, the main etiologic agent of Leishmaniasis that frequently presents with mucosal involvement belongs to the Viannia subgenus. The therapeutic conduct in this disease depends on the parasitological diagnosis, and classical methods are restricted in identifying the agent. In this paper we describe a polymerase chain reaction (PCR), which uses primers designed from mini-exons repetitive sequences. The PCR amplifies a 177bp fragment that can distinguish (Viannia) from (Leishmania) subgenus. This test could be a useful diagnostic tool.