RESUMEN Introducción: A finales de 2019, se detectó un nuevo coronavirus en China que provocó una enfermedad respiratoria aguda conocida como COVID-2019. Objetivo: Evaluar siete sistemas comerciales para la detección rápida de anticuerpos para determinar su sensibilidad, especificidad y robustez en nuestras condiciones para ser utilizados por el Sistema Nacional de Salud. Métodos: Se evaluaron siete sistemas para la detección de anticuerpos IgM/IgG. Se conformó un panel de evaluación con muestras de individuos negativos, sueros de otras afecciones previas a la pandemia y de pacientes positivos con la enfermedad. Resultados: Las cifras de sensibilidad general oscilan entre el 25 % y el 88 %, siendo los sistemas Realy Tech y Deep Blue los que mostraron los mejores resultados. La especificidad para ambos fue del 100 %. La tasa de IgM positiva según Realy Tech o Deep Blue aumentó a 94,1 % o 81,8 % en la etapa tardía de la enfermedad. Conclusiones: Los sistemas Realy Tech y Deep Blue detectaron IgM/IgG en suero y en sangre total con adecuada sensibilidad y especificidad. La reactividad cruzada no parece ser un problema. La serología en el caso de COVID-19 no puede utilizarse como diagnóstico pero permite a la vigilancia epidemiológica conocer el estado inmunológico de las poblaciones. Es fundamental analizar la respuesta inmune frente a la infección para realizar la caracterización epidemiológica y potencialmente informar el riesgo individual de futuras enfermedades y el estudio de posibles vacunas.

ABSTRACT Introduction: In late 2019, a new coronavirus was detected in China causing an acute respiratory illness known as COVID-2019. Objective: Evaluate seven commercial systems for the rapid detection of antibodies to determine their sensitivity, specificity and robustness in our conditions to be used by the National Health System. Methods: Seven systems were evaluated for the detection of IgM/IgG antibodies. Evaluation panel with samples from negative individuals, sera from other pathologies prior to the pandemic and from positive patients with the disease were conformed. Results: General sensitivity figures range between 25 and 88%, with the Realy Tech and Deep Blue systems showed the best results. The specificity for both was 100%. The IgM positive rate according to Realy Tech or Deep Blue increased to 94.1 or 81.8% in the late stage of the disease. Conclusions: Realy Tech and Deep Blue systems detected IgM/IgG in serum and in whole blood with adequate sensitivity and specificity. Cross-reactivity does not seem to be a problem. Serology in the case of COVID-19 cannot be used as a diagnostic but it allows epidemiological surveillance to know the immune status of populations. It’s essential to analyze the immune response against the infection to carry out epidemiological characterization and potentially inform individual risk of future disease and the study of potential vaccines.

ABSTRACT Arboviruses are one of the leading causes of health emergencies due to their morbidity and mortality and the sanitary stress they bring about. Cuba has not been free from risk, and the response first to dengue fever and then to other arboviruses has been and still is a priority for the country's top authorities. Laboratory surveillance of dengue fever was implemented in the 1970s, though its aims and strategies have evolved in keeping with the national and regional epidemiological situation, and the available diagnostic technology. Four stages stand out in the development of dengue laboratory surveillance. The present paper summarizes the strategies developed for laboratory surveillance of dengue fever and other arboviruses in the period 1970-2017. A description is also provided of the role played by Pedro Kourí Tropical Medicine Institute (IPK) as a national reference laboratory.

RESUMEN Los arbovirus constituyen una de las principales causas de emergencia en salud por la morbilidad y mortalidad que producen y el estrés sanitario que conllevan. Cuba no ha estado excenta de riesgo, y el enfrentamiento del dengue inicialmente y de otros arbovirus después, ha sido, y es, una prioridad de las máximas autoridades del país. La vigilancia de laboratorio de dengue se estableció desde inicios de la década del 70 aunque sus objetivos y estrategias han cambiado según la situación epidemiológica nacional y regional y la tecnología de diagnóstico disponible. Se destacan cuatro etapas en su desarrollo. En este trabajo se resumen las estrategias desarrolladas para la vigilancia de laboratorio de dengue y de otros arbovirus en el periodo de 1970 a 2017. Se describe además el papel desempeñado por el Instituto de Medicina Tropical, ¨Pedro Kouri¨ (IPK) como Laboratorio Nacional de Referencia.

Objective. To confirm an epidemic outbreak of Dengue virus in the city of Santa Cruz, Bolivia, and to determine the serotype of the virus, to estimate the rate of attack and the proportion of symptomatic infections. Material and methods. In March 1997, a seroepidemiological survey was conducted with random sampling in a central district of the city of Santa Cruz, Bolivia. Information on recent acute illness and febrile episodes was gathered, and venous blood samples were obtained. Levels of antidengue IgM were determined by MAC Elisa and the virus was tipified with RT-PCR. Results. IgM antibodies were detected in 6.5% of adults (CI 95% 3.4-9.6) and 5.1% of children (CI 95% 2.0-8.2). Circulating virus was identified as Dengue serotype 2, subgroup Jamaica. Less than half of the infected children experienced a symptomatic infection compared to almost 90% of adults. Conclusions. The estimated attack rates are compatible with a Dengue epidemic outbreak in Santa Cruz. The introduction of the serotype 2/ subgroup Jamaica virus into the country increases the risk of hemorrhagic Dengue.

Objetivo. Confirmar la presencia de brote de dengue en la ciudad de Santa Cruz, Bolivia, así como identificar el denguevirus causal, estimar la tasa de ataque y determinar la proporción de infecciones sintomáticas. Material y métodos. En marzo de 1997 se realizó una encuesta seroepidemiológica con muestreo aleatorio en un distrito céntrico de la ciudad. Se obtuvo información sobre episodios de enfermedad aguda, antecedentes de cuadro febril reciente y muestras de sangre venosa. Se determinó la presencia de IgM antidengue con el método MAC ELISA y se procedió a la tipificación del virus con tecnología de reacción en cadena de la polimerasa. Resultados. Se detectaron anticuerpos IgM en 6.5% de los adultos (IC95% 3.4-9.6) y 5.1% de los niños (IC 95% 2.0-8.2). El virus circulante fue identificado como dengue serotipo 2, genotipo Jamaica. Menos de la mitad de los niños infectados tuvieron una infección sintomática, contra casi 90% de los adultos. Conclusiones. La tasa de ataque estimada es compatible con una epidemia de dengue en Santa Cruz. La introducción del serotipo 2 - Jamaica en el país aumenta el riesgo de dengue hemorrágico.

Up to 1993, Panama was the only country in Central America where the autoctonous transmission of dengue virus had been detected without experimenting an explosive epidemic despite being reinfected with the Aedes aegypti mosquitoe since 1985. The characteristics of this first outbreak reported on November 19, 1993, are described in this paper. It is shown that even when there is a Program for the Surveillance and Control of Dengue, which considers low levels of Aedes aegypti infection and a system for the early detection of the virus, the epidemics appear if the community does not take an active part as it happened in 1994, 1995, and 1996. The 14 cases reported were located in an area under the responsibility of the Health Center in San Isidro, Belisario Porras, Special District of San Miguelito, in Panama City (13 cases in 4 blocks of the sector of Santa Librada and 1 case in San Isidro Valley). 3 patients were under 15 and 8 over 36, the other 3 were between 15 and 24,9 were females. The dengue type 2 virus was isolated in 3 patients. The presence of IgM and IgG antibodies to dengue was demonstrated in 11 patients, whereas in 8 over 20 it was observed a secondary type answer. According to the clinical picture, the epidemic was classified as dengue fever. The seroepidemiological survey carried out in the sector of Santa Librada and its sorroundings 5 months after the appearance of the symptoms in the first case showed a prevalence of antibodies to dengue of 5.7 % (46/802), mainly among individuals over 44. These results confirmed that the outbreak was geographically limited.

Hasta 1993, Panamá era el único país de Centroamérica que había detectado transmisión autóctona de virus dengue sin experimentar una epidemia explosiva, pese a estar reinfestado con el mosquito Aedes aegypti desde 1985. En este trabajo se describen las características de este primer brote reportado el 19 de noviembre de 1993 y se demuestra que las epidemias se presentan a pesar de mantener un Programa de Vigilancia y Control para Dengue -que contempla bajos niveles de infestación del Aedes aegypti y un sistema de detección temprano del virus- si la comunidad no participa activamente como ocurrió posteriormente durante 1994, 1995 y 1996. Los 14 casos reportados se localizaron en un área bajo la responsabilidad del Centro de Salud de San Isidro, en el corregimiento Belisario Porras, Distrito Especial de San Miguelito, en la Ciudad de Panamá (13 casos en 4 manzanas del sector de Santa Librada y 1 caso en el Valle de San Isidro). Tres pacientes eran menores de 15 años y 8 eran mayores de 36, la edad de los 3 restantes fluctuó entre 15 y 24 años, 9 eran del sexo femenino. En 3 pacientes se aisló el vius dengue tipo 2. En otros 11 se demostró la presencia de anticuerpos IgM e IgG para dengue. En 8 mayores de 20 años, se observó una respuesta de tipo secundaria. De acuerdo con el cuadro clínico, la epidemia se clásificó como de fiebre del dengue. La encuesta seroepidemiológica realizada en el sector de Santa Librada y sus alrededores, 5 meses después del inicio de los síntomas del primer caso, demostró una prevalencia de anticuerpos para dengue de 5,7 % (46/802), principalmente en individuos mayores de 44 años de edad. Estos resultados confirmaron que el brote estuvo limitado geográficamente.

The immunohistochemical techniques may be very useful for the detection of antigens of the dengue virus in infected tissues. The results obtained with the use of 2 IHC methods: one direct and another indirect amplified with a biotin universal antibody and a streptavidin peroxidase system (LSAB) (the peroxidase enzyme is used in both) are shown in this paper. These methods were applied on paraffin-embedded tissues from mice that were inoculated with the dengue virus intracerebrally. Our objective is to have a technique at the laboratory allowing to identify these antigens in the tissues in order to apply them on the diagnosis and on the studies connected with the obtention of immunogens.

Las técnicas inmunohistoquímicas (IHQ) pueden ser de gran utilidad para la detección de antígenos del virus del dengue en tejidos infectados. En este trabajo se muestran los resultados obtenidos con el empleo de 2 métodos IHQ: uno directo y otro indirecto amplificado con un anticuerpo universal biotinilado y un sistema estreptavidina peroxidasa (LSAB) (en ambos se utiliza la enzima peroxidasa). Estos métodos fueron aplicados en tejidos embebidos en parafina procedentes de ratones inoculados intracerebralmente con el virus del dengue. El objetivo es contar con una técnica en el laboratorio que permita identificar estos antígenos en los tejidos para ser aplicados en el diagnóstico y los estudios relacionados con la obtención de inmunógenos.

Serological studies were carried out using the haemagylutination inhibition and neutralization tests so as to hnow the circulation dynamics of some arboviruses with the use of Western and Eastern equine encephalitis antigens and St Louis encephalitis antigens in human serum from sound and symptomatic individuals, as well as from sentinel birds, between 1987 and 1991, and during 1994. 1,7 % of he asymptomatic subjects tested presented neutralizing antibodies to to Eastern equine and 4,8 % to St Louis encephalitis. 16 patients with seroconversion by haemagglutination inhibition to St Louis virus were detected. Survellance of sentinel birds showed that during 1988, 1989, and 1994. St. Louis circulated in the municipalities of Morón, Bolivia and Chambas; whereas in the latter the Eastern equine encephalitis circulated in 1988 and 1989. Antibodies to Western equine encephalitis were detected in sound individuals by haemagglutination inhibition due seemengly to heterologous antibodies, since there were no neutralizing antibodies against this virus.

Se realizaron estudios serológicos utilizando las técnicas de inhibición de la hemaglutinación y neutralización con el objetivo de conocer la dinámica de circulación de algunos Arbovirus, con el empleo de los antígenos de encefalitis equina del este, equina del oeste y San Luis en sueros humanos de personas sanas y sintomáticas, así como de aves centinelas, en el período de 1987 a 1991 y durante el año 1994. El 1,7 % de las personas asintomáticas testadas presentaron anticuerpos neutralizantes a equina del este y un 4,8 % a encefalitis de San Luis. Se detectaron 16 pacientes con seroconversión por inhibición de la hemaglutinación al virus de San Luis. La vigilancia con aves centinelas demostró que durante los años 1988, 1989 y 1994 circuló San Luis en los municipios de Morón, Bolivia y Chambas, mientras que en este último municipio en los años 1988 y 1989 circuló la encefalitis equina del este. Se detectaron en personas sanas anticuerpos por inhibición de la hemaglutinación a encefalitis equina del oeste, al parecer por anticuerpos heterólogos, ya que no hubo presencia de anticuerpos neutralizantes contra este virus.

Se estandarizó un ELISA para la detección de anticuerpos monoclonales a las proteínas E y NS1 del virus dengue. Se aplicó un ELISA indirecto utilizando como fuente de antígeno células C6/36 inoculadas con la cepa A-15 aislada durante la epidemia de dengue 2 en 1981. Estas células fueron fijadas en placas ELISA a una concentración de 200 000 células/pozo. Se utilizó un control celular en condiciones similares. Para normalizar el sistema se emplearon anticuerpos monoclonales específicos a ambas proteínas. Se realizaron estudios a diferentes tiempos de incubación para determinar el momento de mayor expresión de estas proteínas en la membrana celular. Los resultados muestran una respuesta máxima a las 72 horas posinoculación para ambas proteínas, se obtuvo una sensibilidad para la detección de NS1 de 14,7 ng/mL y para la E de 1,43 ng/mL. Este sistema permite el tamizaje primario de anticuerpos monoclonales a las proteínas E y NS1 del virus dengue 2.