ABSTRACT The present research evaluated the seroprevalence of anti-zika virus (anti-ZIKV) antibodies by virus neutralization test (VNT) in 529 bovines from Andradina city, São Paulo state, Brazil. The reading was performed in an inverted optical microscope, considering reagents when the antibodies were capable to neutralize the ZIKV. Of the 529 samples, 53 (10.01%) were reagents. The animals were healthy at the time of collection. The samples were collected in February 2018, a favorable period for the multiplication of the vector and the highest risk of disease transmission. None of the animals showed anti-bovine viral diarrhea virus (anti-BVDV) antibodies, ruling out a possible cross-reaction, reinforcing the possible contact of the bovine with the ZIKV. In the herd, 88 pregnant females were evaluated; of these, 12 cows were reactive, with no history of reproductive problems or fetal malformations. This is the first research on the seroprevalence of ZIKV in cattle in Brazil, and studies should continue to evaluate cattle as a possible host of this arbovirus and its possible consequences for unique health and agribusiness.

RESUMO: Entre as doenças que acometem os equídeos, as enfermidades bacterianas assumem um papel importante do ponto de vista sanitário e econômico, destacando-se a leptospirose e a brucelose. O estudo teve como objetivo fornecer informações sobre a ocorrência de anticorpos anti-Leptospira spp. e anti-Brucella abortus em jumentos no estado de São Paulo. Estimou-se que 62,4% (53/85) dos animais apresentavam anticorpos anti-Leptospira spp. Os jumentos estudados não foram sororreagentes contra a Brucella spp.

ABSTRACT: Among the diseases that affect equines, bacterial diseases play an important role from a health and economic point of view, especially leptospirosis and brucellosis. The study aimed to provide information on the occurrence of anti-Leptospira spp. and anti-Brucella abortus antibodies in donkeys of São Paulo state. We found a frequency of 62.4% (53/85) antibodies against Leptospira spp. The donkeys were not seropositive for Brucella spp.

RESUMO: Vaccinia bovina (VB) é uma doença vesicular induzida pelo Vaccinia virus (VACV) que afeta a produção de leite e é uma zoonose ocupacional. Este trabalho teve os seguintes objetivos: (i) detecção de VACV por qPCR em bovinos com suspeita clínica de doença vesicular; (ii) caracterização dos sintomas apresentados por animais e ordenhadores com suspeita clínica da doença e detecção do vírus em humanos; e (iii) identificação de fatores de risco para infecção por VACV em rebanhos de vários estados brasileiros. Um total de 471 amostras de epitélio bovino de fazendas leiteiras, em 15 estados brasileiros, foram avaliados entre 2007 e 2012. As amostras foram testadas por PCR quantitativa (qPCR) usando reagentes SYBR Green®, validados com um limite inferior de detecção de 100TCID50/50μL (1,7x100 partículas virais) e 45,1% das amostras positivas de VACV foram detectadas. Usando formulários oficiais de investigação epidemiológica (FORM-IN), os fatores de risco para infecções por VACV em bovinos foram determinados como fazendas com falta de instalações tecnológicas (P=0,029) e presença de roedores (P=0,001). Houve um efeito da sazonalidade no gado com maior ocorrência de VB durante a estação seca. Um total de 420 questionários epidemiológicos foram aplicados nos centros públicos de saúde, onde 100% dos ordenhadores apresentaram lesões vesiculares nas mãos (98,1%) e nos braços (6,9%). Os sintomas clínicos mais frequentes em humanos foram: inchaço local (74,2%), cefaleia (20,7%), febre (10,4%) e linfadenopatia inguinal (74,2%). Apenas 19,98% dos produtores de leite com idade entre 39 e 58 anos foram sororreagentes ao VACV e foram imunizados com a vacina contra a varíola humana. Houve um aumento na frequência de BV em indivíduos mais velhos devido à sua diminuição natural na imunidade específica. Demonstrou-se que a implementação de técnicas de gestão zootécnica e planejamento sanitário são importantes para a prevenção da VB em animais e seres humanos.

ABSTRACT: Bovine vaccinia (BV) is a vesicular disease induced by the Vaccinia virus (VACV) that affects milk production and is an occupational zoonosis. This research had the following objectives: (i) detection of VACV by qPCR in cattle with clinical suspicion of vesicular disease; (ii) symptoms characterization in animals and milkers with clinical suspicion of the disease and virus detection in humans; and (iii) identification of risk factors for infections of VACV in herds from several Brazilian states. A total of 471 bovine epithelial samples from dairy farms, in 15 Brazilian states, were evaluated between 2007 and 2012. The samples were tested by quantitative PCR (qPCR) using SYBR Green® reagents, validated with a lower limit of detection of 100 TCID50/50µL (1.7x100 viral particles), and 45.1% of VACV positive samples were detected. Using official forms for epidemiological investigation (FORM-IN), the risk factors for VACV infections in cattle were determined to be farms with a lack of technological facilities (P=0.029) and the presence of rodents (P=0.001). There was an effect of seasonality in cattle with a higher occurrence of BV during the dry season. A total of 420 epidemiological questionnaires were applied at public health care centers, where 100% of the milkers had vesicular lesions on their hands (98.1%) and on their arms (6.9%). The most frequent clinical symptoms in humans were: local swelling (74.2%), headache (20.7%), fever (10.4%) and inguinal lymphadenopathy (74.2%). Only 19.98% of milkers aged between 39 and 58 years were seroreactive to VACV and were immunized with the human anti-smallpox vaccine. There was an increase in the frequency of BV in older individuals due to their natural decrease in specific immunity. It has been shown that the implementation of zootechnical management techniques and health planning are important for the prevention of BV in animals and humans.

RESUMO: Vaccinia bovina (VB) é uma doença vesicular induzida pelo Vaccinia virus (VACV) que afeta a produção de leite e é uma zoonose ocupacional. Este trabalho teve os seguintes objetivos: (i) detecção de VACV por qPCR em bovinos com suspeita clínica de doença vesicular; (ii) caracterização dos sintomas apresentados por animais e ordenhadores com suspeita clínica da doença e detecção do vírus em humanos; e (iii) identificação de fatores de risco para infecção por VACV em rebanhos de vários estados brasileiros. Um total de 471 amostras de epitélio bovino de fazendas leiteiras, em 15 estados brasileiros, foram avaliados entre 2007 e 2012. As amostras foram testadas por PCR quantitativa (qPCR) usando reagentes SYBR Green®, validados com um limite inferior de detecção de 100TCID50 / 50μL (1,7x100 partículas virais) e 45,1% das amostras positivas de VACV foram detectadas. Usando formulários oficiais de investigação epidemiológica (FORM-IN), os fatores de risco para infecções por VACV em bovinos foram determinados como fazendas com falta de instalações tecnológicas (P= 0,029) e presença de roedores (P= 0,001). Houve um efeito da sazonalidade no gado com maior ocorrência de VB durante a estação seca. Um total de 420 questionários epidemiológicos foram aplicados nos centros públicos de saúde, onde 100% dos ordenhadores apresentaram lesões vesiculares nas mãos (98,1%) e nos braços (6,9%). Os sintomas clínicos mais frequentes em humanos foram: inchaço local (74,2%), cefaleia (20,7%), febre (10,4%) e linfadenopatia inguinal (74,2%). Apenas 19,98% dos produtores de leite com idade entre 39 e 58 anos foram sororreagentes ao VACV e foram imunizados com a vacina contra a varíola humana. Houve um aumento na frequência de BV em indivíduos mais velhos devido à sua diminuição natural na imunidade específica. Demonstrou-se que a implementação de técnicas de gestão zootécnica e planejamento sanitário são importantes para a prevenção da VB em animais e seres humanos.

ABSTRACT: Bovine vaccinia (BV) is a vesicular disease induced by the Vaccinia virus (VACV) that affects milk production and is an occupational zoonosis. This research had the following objectives: (i) detection of VACV by qPCR in cattle with clinical suspicion of vesicular disease; (ii) symptoms characterization in animals and milkers with clinical suspicion of the disease and virus detection in humans; and (iii) identification of risk factors for infections of VACV in herds from several Brazilian states. A total of 471 bovine epithelial samples from dairy farms, in 15 Brazilian states, were evaluated between 2007 and 2012. The samples were tested by quantitative PCR (qPCR) using SYBR Green® reagents, validated with a lower limit of detection of 100TCID50/50µL (1.7x100 viral particles), and 45.1% of VACV positive samples were detected. Using official forms for epidemiological investigation (FORM-IN), the risk factors for VACV infections in cattle were determined to be farms with a lack of technological facilities (P= 0.029) and the presence of rodents (P= 0.001). There was an effect of seasonality in cattle with a higher occurrence of BV during the dry season. A total of 420 epidemiological questionnaires were applied at public health care centers, where 100% of the milkers had vesicular lesions on their hands (98.1%) and on their arms (6.9%). The most frequent clinical symptoms in humans were: local swelling (74.2%), headache (20.7%), fever (10.4%) and inguinal lymphadenopathy (74.2%). Only 19.98% of milkers aged between 39 and 58 years were seroreactive to VACV and were immunized with the human anti-smallpox vaccine. There was an increase in the frequency of BV in older individuals due to their natural decrease in specific immunity. It has been shown that the implementation of zootechnical management techniques and health planning are important for the prevention of BV in animals and humans.

RESUMO: A ocorrência do rato de telhado, Rattus rattus , nas grandes cidades brasileiras aumentou nos últimos anos. A fim de investigar se os esforços do controle público de roedores têm atingido essa espécie, foi conduzido um levantamento em áreas com risco de inundação na cidade de São Paulo, com armadilhas para captura viva dos roedores, antes e depois do controle público. O estudo foi realizado entre 2009 e 2011, e os animais capturados foram estudados para identificar seu risco como transmissores de zoonoses. O número de R. rattus capturados após o controle não diferiu entre o número de animais capturados antes do programa de controle, no período de primavera/verão, mas, no período de outono/inverno, foi observada efetividade do controle. Foram registradas infestações baixas de Ctenocephalides felis (Siphonaptera) e Echinolaelaps echidninus (Acarina). Anticorpos contra Leptospira spp. foram detectados em apenas 1 das 65 amostras de soro. Dez entre 18 amostras de soro foram sororeativas para o vírus Vaccinia , sugerindo o contato entre R. rattus e o patógeno Calodium hepaticum (Nematoda) foi encontrado no fígado de 73,4% dos R. rattus capturados. Concluiu-se que R. rattus pode não ser controlado pelas ações propostas pelo Programa de Controle de Roedores na cidade de São Paulo e representa uma ameaça para a saúde humana, justificando permanentes programas de gestão ambiental e programas educacionais.

ABSTRACT: The occurrence of the black rat, Rattus rattus , in major Brazilian cities has increased in the recent years. To evaluate if the efforts of public rodent control have been reaching the species in the city of São Paulo, a survey was conducted in flooding areas using live trapping before and after implementation of the control program. Captures were carried out from 2009 to 2011, and animals were evaluated for their risk of zoonosis transmission. The number of R. rattus captured after control did not differ from the number of animals captured before the control program in the Spring/Summer season, but, in the Autumn/Winter season, effective control was observed. Low infestations of Ctenocephalides felis (Siphonaptera) and Echinolaelaps echidninus (Acarina) were observed, and antibodies against Leptospira spp. were detected in just 1 of 65 serum samples. Ten out of 18 serum samples were sororeactive for Vaccinia virus, suggesting contact between R. rattus and the pathogen Calodium hepaticum (= Capillaria hepaticum ) (Nematoda) was found in the liver of 73.4% of captured R. rattus. In conclusion, R. rattus may not be effectively controlled by the rodent Control Program in the city of São Paulo, and represents a threat to human health, justifying permanent environmental management and educational programs.

RESUMO O objetivo do trabalho foi avaliar a diminuição da replicação viral (BoHV-1 Colorado) em embriões murinos após tratamento do extrato etanólico da casca de Punica granatum (EEPg). Camundongos fêmeas Swiss com idade entre 6 e 8 semanas foram superovuladas com 0,2 mL a 5 UI de hormônios (eCG e hCG), e acasaladas com machos da mesma idade. Após 18 horas, as fêmeas sofreram eutanásia em câmara de CO2 e, através de abertura no peritônio, os zigotos foram coletados e lavados com solução de pronase 0,5%.Os zigotos foram divididos em quatro grupos: G1 (controle), G2 (expostos aos vírus BoHV-1 Colorado a 108 TCID50/mL), G3 (expostos ao EEPg) e G4 (expostos aos vírus e ao EEPg). Os grupos foram mantidos a 37,5ºC em meio TCM199 (100µL) com 10% de soro fetal bovino em estufa a 5% de CO2 e 95% de umidade. Após 24 h, analisamos a taxa de clivagem (teste exato de Fisher; p<0,05), a morfologia (por microscopia óptica), a nested-PCR e a titulação dos embriões em cocultura com células MDBK após mais 72 h do tratamento (teste de Mann-Whitney; p<0,05) e microscopia eletrônica de transmissão (ME). Os embriões murinos tratados com EEPg apresentaram resultados satisfatórios: sem alterações morfológicas, taxa de clivagem semelhante ao controle e, apesar da detecção da presença do vírus pela nested-PCR e ME, houve diminuição do título viral após tratamentos com esse extrato, o que sugere interferência desse tratamento no ciclo viral do BoHV-1 Colorado sem alterar o desenvolvimento dos embriões.

ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the reduction of viral replication (Colorado BoHV-1) in murine embryos after the treatment of ethanol extract of Punica granatum peel (PgEE). Swiss female mice aged 6 to 8 weeks were superovulated with 0.2 mL of the 5 UI hormones (eCG and hCG) and mated with males of the same age. After 18 hours, the females were euthanized in a CO2 chamber, and through the opening in the peritoneum, zygotes were collected and washed with 0.5% pronase solution. The zygotes were divided into four groups: G1 (control), G2 (exposed to the virus Colorado BoHV -1 to 108 TCID50/mL), G3 (exposed to PgEE) and G4 (exposed to the virus and to PgEE). The groups were maintained at 37.5ºC in TCM199 (100 mL) with 10% fetal bovine serum in an incubator at 5% CO2 and 95% humidity. After 24 h, we analyzed the cleavage rate (Fisher's exact test; p<0.05), the morphology (by light microscopy), the nested-PCR and the titration of embryos in co-culture with MDBK cells after over 72 h of treatment (Mann-Whitney test; p<0.05) and transmission electron microscopy (TEM). The murine embryos treated with PgEE showed satisfactory results: no morphological changes, cleavage rate similar to controls, despite the detection of the presence of virus by nested PCR and TEM, there was a decrease of the viral titer after the treatment with this extract, which suggests interference of this treatment in the viral cycle BoHV-1 Colorado without altering the embryo development.

Aoudads (Ammotragus lervia) têm o potencial para atuar como hospedeiros de importantes doenças infecciosas, em particular as zoonoses. Amostras de sangue de 17 aoudads do zoológico de Curitiba foram coletadas para avaliar ocorrências de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora caninum, testados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Anticorpos anti-T. gondii e anti-N. caninum foram detectados em 4/17 (23,5%) e 4/17 (23,5%) das amostras dos aoudads, respectivamente. O presente estudo revelou que os aoudads no zoológico de Curitiba estão expostos a T. gondii eN. caninum e, portanto, podem atuar como hospedeiros intermediários e fatores de difusão da toxoplasmose e da neosporose intra e interespécies em áreas compartilhadas.

Barbary sheep (Ammotragus lervia) have the potential to act as hosts of important infectious diseases, particularly zoonoses. Blood samples from 17 Barbary sheep at the Curitiba zoo were collected to evaluate occurrences of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies, tested using the indirect immunofluorescence antibody test (IFAT). Anti-T. gondii and anti-N. caninum antibodies were detected in 4/17 (23.5%) and 4/17 (23.5%) samples, respectively. The present study has shown that Barbary sheep at Curitiba zoo were exposed to T. gondii andN. caninum and therefore may act as intermediate hosts, spreading toxoplasmosis and neosporosis within and between species in shared areas.

Este estudo contribuiu para o programa de vigilância epidemiológica de encefalite bovina no Brasil realizando o diagnóstico diferencial de Neospora caninum no sistema nervoso central (SNC) por análise histológica (coloração HE), imunohistoquímica (IHC) e nested-PCR utilizando-se primers da região Nc5 do DNA genômico e da região ITS1 do DNA ribossomal. Um total de 302 amostras de bovinos com síndrome neurológica, negativos para raiva, na faixa etária de zero a 18 anos, provenientes de rebanhos de 10 estados brasileiros foi avaliada para N. caninum no período de janeiro/2007 a abril/2010. Todas as amostras foram negativas na IHC e na nested-PCR usando-se primers da região ITS1 do DNA ribossomal, enquanto dois casos (0,66%) foram positivos à nested PCR, usando-se primers da região Nc5 do DNA genômico: um macho de 20 meses de idade e uma fêmea de 72 meses de idade, ambos do Estado de São Paulo. Apenas o macho apresentou severa encefalite multifocal necrotizante associada com infiltrado inflamatório mononuclear, lesão patognomônica causada por parasitas da família Sarcocystidae, mostrando que apenas este caso de encefalite foi associado à infecção por N. caninum, representando 0,33% de positividade. Sugere-se em estudos futuros utilizar também a PCR em tempo real para detecção do parasito.

For supporting the Brazilian bovine encephalitis surveillance program this study examined the differential diagnosis of Neospora caninum in central nervous system (CNS) by histological analysis (HE staining), immunohistochemistry (IHC), and nested-PCR using a set of primers from the Nc5 region of the genomic DNA and ITS1 region of the ribosomal DNA. A sample of 302 cattle presenting neurological syndrome and negative for rabies, aged 0 to 18 years, from herds in 10 Brazilian states was evaluated for N. caninum from January 2007 to April 2010. All specimens tested negative with IHC and nested-PCR using primers from the ITS1 region of ribosomal DNA, while two positive cases (0.66%) were found using primers from the Nc5 region of genomic DNA: a 20 month-old male and a 72 month-old female, both from São Paulo State. Only the male presented severe multifocal necrotizing encephalitis associated with mononuclear cell infiltration, a pathognomonic lesion caused by parasites of the family Sarcocystidae, and only this case was associated with N. caninum thus representing 0.33% positivity. Future studies should explore the association of IHC and nested-PCR with real-time PCR, a quantitative method that could be standardized for improving the detection of N. caninum in bovine CNS specimens.

A neosporose é uma doença parasitária que acomete os ovinos e está associada a perdas reprodutivas. O objetivo deste estudo foi verificar a prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em 12 rebanhos de ovinos do município de Uberlândia, MG, utilizando a Técnica de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Foram analisadas 334 amostras de sangue e, em cada propriedade, aplicou-se um questionário epidemiológico para avaliar os fatores de risco envolvidos na transmissão desse protozoário: sexo, idade, raça, problemas de aborto, contato com bovinos e caninos e presença de canídeos silvestres. A prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em ovinos foi de 8,1%, com títulos variando de 50 a 3200 e 83,3% das propriedades apresentaram pelo menos um ovino reagente. Houve diferença estatística significativa para rebanhos com problemas de aborto associados à presença de anticorpos anti-Neospora caninum (p < 0,05).

Neosporosis is a parasitic disease that occurs in sheep and is associated with reproductive failure. The aim of this study was to verify seroprevalence of Neospora caninum antibodies in 12 sheep flocks in Uberlândia county, Minas Gerais, Brazil, using Indirect Immunofluorescence Assay (IFA). A total of 334 sheep blood samples were analyzed and an epidemiologic questionnaire was applied for each farm in order to correlate with risk factors of neosporosis: gender, age, breed, abortion problems, contact with cattle and dogs, and presence of wild canids. The prevalence of Neospora caninum antibodies in sheep was 8.1%, with titers ranging from 50 to 3200 and 83.3% of farms detected at least one ovine reactive. There was statistically significant difference in flocks with abortion problems associated with the presence of Neospora caninum antibodies (p < 0.05).

Pesquisou-se Neospora caninum como causador de abortamento e natimortalidade em bovinos, por meio de exame histopatológico (hematoxilina-eosina), imunoistoquímica (IHQ) e nested-PCR, utilizando primers da região Nc5 do DNA genômico (PCR PLUS) e primers da região ITS1 do DNA ribossomal (PCR JB). Foram avaliadas 105 amostras de abortamento bovino entre janeiro de 2006 a maio de 2008, encaminhadas ao Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal do Instituto Biológico para diagnóstico diferencial de causas infecciosas. Observou-se em 71,4% das amostras lesões histológicas (HE) caracterizadas pela presença de células inflamatórias mononucleares no coração, pulmão, fígado, rim, placenta e cérebro. A IHQ detectou 8,57% de positividade, sendo maior no cérebro, placenta e coração. A nested-PCR JB revelou 6,66% de casos positivos, enquanto que a nested-PCR PLUS apresentou maior taxa de positividade (20,95%), principalmente no cérebro, placenta e no pool fígado/coração. Houve baixo grau de concordância entre as três técnicas pelo índice kappa. A taxa de positividade para qualquer uma das técnicas (IHQ, nested-PCR PLUS e nested-PCR JB) foi de 24,8%, devendo ser consideradas conjuntamente pelo fato de possuírem características distintas e serem, portanto, complementares no diagnóstico definitivo da neosporose.

Neospora caninum, a cause of abortion and stillbirth in cattle, was studied by histology, immunohistochemistry, and nested-PCR, using primers from the Nc5 region of the genomic DNA (PCR PLUS) and primers from the ITS1 region of the ribosomal DNA (PCR JB). A total of 105 fetal samples sent to the Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal do Instituto Biológico from January 2006 to May 2008 were examined for evidence of N. caninum. Histological examination revealed 71.4% with non-suppurative inflammation in the heart, lung, liver, kidney, placenta, and brain. Immunohistochemistry detected infections in 8.6% of the samples, mainly in the brain, placenta, and heart. Nested-PCR JB revealed 6.7% with infections, while nested-PCR PLUS returned 20.9% positive results, mainly in brain and placenta, and in the pooled liver and heart. Kappa statistics demonstrated little agreement among the three techniques. The three methods are complementary, since they have distinct diagnostic characteristics and were combined to give a positivity rate of 24.8%.

Com o objetivo de erradicar o BHV-1 de um rebanho bovino leiteiro de alto valor genético sem a utilização de vacina, foi realizado um exame sorológico prévio em 154 animais, onde constatou-se 15,6% de reagentes ao BHV-1. A técnica utilizada foi a soroneutralização em microplacas. Dentre os animais soropositivos, as vacas vazias foram descartadas imediatamente e as prenhes isoladas e descartadas após o parto. Os bezerros apresentaram anticorpos colostrais até os seis meses de idade, motivo pelo qual não foram descartados; nos bezerros de 6 a 12 meses de idade e nas novilhas não foram diagnosticados animais soropositivos. Os animais foram examinados trimestralmente, por 21 meses, seguido de mais duas coletas semestrais. As vacas secas, prenhes e em lactação, soropositivas, revelaram ser a fonte de infecção do BHV-1. A manutenção de rebanho livre é possível, desde que sejam adotadas medidas como a utilização de sêmen livre de BHV-1, realização de quarentena no ingresso de animais e exames sorológicos anuais visando impedir a reintrodução do vírus. Com o conjunto destas medidas adotadas, a fazenda encontra-se há 18 meses livre do BHV-1.

To eradicate the BHV-1 from a dairy cattle herd without vaccination, a preliminary serological survey was performed in 154 animals, that revealed 15.6% seropositives for BHV-1. The test used was serum neutralization with the microtitration technique. The seropositive nonpregnant cows were immediately eliminated from the herd and the pregnant cows were isolated and eliminated after parturiation. The calves with colostral antibodies were kept in the herd. There were no seropositive animals between the 6 to 12 months old calves and the heifers. The animals were monitored serologically every 3 months for 21 months and afterwords in 2 semestral intervals. The seropositive nonpregnant, pregnant and the nursing cows were the source of BHV-1 infecction. In order to maintain a BHV-1 free herd, measurements of control had been taken, as the utilization of virus-free semen, quarantine when animals were introduced into the herd, and semestral serological surveys. Through these measurements the farm has been BHV-1 free for 18 months.