Resumo As leishmanioses são zoonoses causadas por mais de 20 espécies de protozoários do gênero Leishmania. As infecções são comumente disseminadas por flebotomíneos e causam um amplo espectro de manifestações clínicas. Portanto, a detecção e diferenciação de espécies de Leishmania são importantes do ponto de vista epidemiológico e terapêutico. O objetivo deste estudo foi combinar estratégias in silico e in vitro para avaliar a especificidade analítica dos primers descritos anteriormente na literatura. De acordo com a PCR eletrônica (e-PCR), 23 dos 141 pares de primers selecionados por meio de pesquisa da literatura estavam de acordo com a especificidade analítica anteriormente relatada. A avaliação in vitro de nove desses pares de primers, por PCR quantitativa (qPCR), confirmou a especificidade analítica de cinco deles ao nível de espécie de Leishmania, do complexo L. mexicana ou dos subgêneros Leishmania e Viannia. Com base nos resultados, sugere-se que a combinação de e-PCR e qPCR é uma abordagem valiosa para a validação e maximização da especificidade de novos pares de primers para o diagnóstico laboratorial de infecções com Leishmania spp.

Abstract Leishmaniasis is a zoonotic disease caused by over 20 species of protozoan parasites of the genus Leishmania. Infection is commonly spread by sandflies and produces a wide spectrum of clinical signs and symptoms. Therefore, from an epidemiological and therapeutic standpoint, it is important to detect and differentiate Leishmania spp. The objective of this study was to combinate in silico and in vitro strategies to evaluate the analytical specificity of primers previously described in the literature. According to electronic PCR (e-PCR) analysis, 23 out of 141 pairs of primers selected through literature search matched their previously reported analytical specificity. In vitro evaluation of nine of these primer pairs by quantitative PCR (qPCR) confirmed the analytical specificity of five of them at the level of Leishmania spp., L. mexicana complex or Leishmania and Viannia subgenera. Based on these findings, the combination of e-PCR and qPCR is suggested to be a valuable approach to maximize the specificity of new primer pairs for the laboratory diagnosis of infections with Leishmania spp.

A leishmaniose visceral é uma doença emergente e negligenciada em processo de expansão para áreas urbanas. A incidência da doença humana está relacionada com a infecção canina. Araçatuba e Birigui são municípios do Estado de São Paulo, Brasil, com soroprevalência da infecção canina de 8 a 10%, que empregam estratégias de controle voltadas ao reservatório canino baseado em inquérito sorológico e eutanásia dos cães soropositivos. Usando dados desses programas de controle para parametrizar modelos matemáticos, este estudo avaliou a eficácia dessas atividades. Estimamos que o controle atualmente empregado é capaz de reduzir em cerca de 20% a incidência de casos de leishmaniose visceral canina (LVC). Considerando-se um controle contínuo e um esforço das atividades de inquérito sorológico igual ao triplo da média do observado em Araçatuba e Birigui, a atividade de eutanásia de cães com diagnóstico positivo seria efetiva para o controle da infecção canina. Embora teoricamente possível, na prática, o controle da LVC com as estratégias preconizadas atualmente é insuficiente, pois exigiria superpor dificuldades enfrentadas por estas atividades como falta de recursos materiais, humanos e financeiros, além das questões éticas e jurídicas associadas.

Visceral leishmaniasis is an emerging and neglected disease that is currently expanding to urban areas. The incidence of human disease is related to canine infection. Araçatuba and Birigui are municipalities (counties) in the state of São Paulo, Brazil, with 8-10% seroprevalence of canine infection and that employ control strategies targeting the canine reservoir, based on serological survey and culling of seropositive dogs. Using data from these control programs to parameterize mathematical models, this study assessed the efficacy of these activities. We estimated that current control is capable of reducing the incidence of canine visceral leishmaniasis (CVL) by approximately 20%. Assuming continuous control and three times the current serological survey activities in Araçatuba and Birigui, culling dogs with a positive CVL diagnosis would be effective for the control of canine infection. Although theoretically possible, in practice the control of CVL with the currently recommended strategies is insufficient, since it would require overcoming the difficulties in these activities, such as lack of material, human, and financial resources, besides associated ethical and legal issues.

La leishmaniasis visceral es una enfermedad emergente y pasada por alto en proceso de expansión hacia áreas urbanas. La incidencia de la enfermedad humana está relacionada con la infección canina. Araçatuba y Birigui son municipios del estado de São Paulo, Brasil, con una seroprevalencia de infección canina de un 8 a un 10% que emplean estrategias de control dirigidas al reservorio canino, basado en una encuesta serológica y eutanasia de los perros seropositivos. Usando datos de esos programas de control para proporcionar parámetros en modelos matemáticos, este estudio evaluó la eficacia de esas actividades. Estimamos que el control actualmente empleado es capaz de reducir cerca de un 20% la incidencia de casos de leishmaniasis visceral canina (LVC). Si se considera un control continuo y un esfuerzo de las actividades de encuesta serológica igual al triple de la media de lo observado en Araçatuba y Birigui, la actividad de eutanasia de perros con diagnóstico positivo sería efectiva para el control de la infección canina. A pesar de que teóricamente es posible, en la práctica el control de la LVC con las estrategias preconizadas actualmente es insuficiente, puesto que exigiría superar dificultades a las que se enfrentan estas actividades como la falta de recursos materiales, humanos y financieros, además de las cuestiones éticas y jurídicas asociadas.

A leishmaniose visceral é uma doença emergente e negligenciada em processo de expansão para áreas urbanas. A incidência da doença humana está relacionada com a infecção canina. Araçatuba e Birigui são municípios do Estado de São Paulo, Brasil, com soroprevalência da infecção canina de 8 a 10%, que empregam estratégias de controle voltadas ao reservatório canino baseado em inquérito sorológico e eutanásia dos cães soropositivos. Usando dados desses programas de controle para parametrizar modelos matemáticos, este estudo avaliou a eficácia dessas atividades. Estimamos que o controle atualmente empregado é capaz de reduzir em cerca de 20% a incidência de casos de leishmaniose visceral canina (LVC). Considerando-se um controle contínuo e um esforço das atividades de inquérito sorológico igual ao triplo da média do observado em Araçatuba e Birigui, a atividade de eutanásia de cães com diagnóstico positivo seria efetiva para o controle da infecção canina. Embora teoricamente possível, na prática, o controle da LVC com as estratégias preconizadas atualmente é insuficiente, pois exigiria superpor dificuldades enfrentadas por estas atividades como falta de recursos materiais, humanos e financeiros, além das questões éticas e jurídicas associadas.

Visceral leishmaniasis is an emerging and neglected disease that is currently expanding to urban areas. The incidence of human disease is related to canine infection. Araçatuba and Birigui are municipalities (counties) in the state of São Paulo, Brazil, with 8-10% seroprevalence of canine infection and that employ control strategies targeting the canine reservoir, based on serological survey and culling of seropositive dogs. Using data from these control programs to parameterize mathematical models, this study assessed the efficacy of these activities. We estimated that current control is capable of reducing the incidence of canine visceral leishmaniasis (CVL) by approximately 20%. Assuming continuous control and three times the current serological survey activities in Araçatuba and Birigui, culling dogs with a positive CVL diagnosis would be effective for the control of canine infection. Although theoretically possible, in practice the control of CVL with the currently recommended strategies is insufficient, since it would require overcoming the difficulties in these activities, such as lack of material, human, and financial resources, besides associated ethical and legal issues.

La leishmaniasis visceral es una enfermedad emergente y pasada por alto en proceso de expansión hacia áreas urbanas. La incidencia de la enfermedad humana está relacionada con la infección canina. Araçatuba y Birigui son municipios del estado de São Paulo, Brasil, con una seroprevalencia de infección canina de un 8 a un 10% que emplean estrategias de control dirigidas al reservorio canino, basado en una encuesta serológica y eutanasia de los perros seropositivos. Usando datos de esos programas de control para proporcionar parámetros en modelos matemáticos, este estudio evaluó la eficacia de esas actividades. Estimamos que el control actualmente empleado es capaz de reducir cerca de un 20% la incidencia de casos de leishmaniasis visceral canina (LVC). Si se considera un control continuo y un esfuerzo de las actividades de encuesta serológica igual al triple de la media de lo observado en Araçatuba y Birigui, la actividad de eutanasia de perros con diagnóstico positivo sería efectiva para el control de la infección canina. A pesar de que teóricamente es posible, en la práctica el control de la LVC con las estrategias preconizadas actualmente es insuficiente, puesto que exigiría superar dificultades a las que se enfrentan estas actividades como la falta de recursos materiales, humanos y financieros, además de las cuestiones éticas y jurídicas asociadas.

RESUMO OBJETIVO Estimar a cobertura das atividades de controle da leishmaniose visceral e relacioná-las com a ocorrência de leishmaniose visceral em humanos em área urbana endêmica. MÉTODOS Foram considerados como população de estudo os casos de leishmaniose visceral em humanos e em cães avaliados por inquérito sorológico censitário realizado em Araçatuba, SP, de 2007 a 2015. Os casos de leishmaniose visceral em humanos foram geocodificados pelo endereço de residência dos pacientes e, os cães, pelo endereço de residências dos respectivos tutores. Foram calculadas as coberturas do inquérito sorológico, da eutanásia e de borrifação de inseticida, as soroprevalências caninas e as taxas de incidência de leishmaniose visceral em humanos. A relação entre a leishmaniose visceral em humanos e as medidas de controle, bem como a soroprevalência foram avaliadas por comparação de mapas e por meio de regressão linear. A relação entre a doença canina e a humana também foi avaliada por meio da função K de Ripley . RESULTADOS As taxas de incidência de leishmaniose visceral em humanos apresentaram um período de declínio (2007 a 2009) e um período de estabilidade (2010 a 2015), comportamento semelhante ao das soroprevalências caninas. Em geral, a cobertura das medidas de controle foi baixa e a não associação com a incidência de leishmaniose visceral em humanos pode ser consequência do período analisado e do número pequeno de unidades analisadas (setores da Superintendência de Controle de Endemias). A distribuição dos casos humanos apresentou dependência espacial com a distribuição dos cães soropositivos de 2007 a 2009. CONCLUSÕES Este trabalho reafirmou a relação entre a ocorrência da doença no homem e no cão, verificou a diminuição das taxas de leishmaniose visceral em humanos e em cães em Araçatuba ao longo do tempo, mesmo em baixa cobertura das atividades de controle. Entretanto, novos estudos são necessários para averiguar se fatores além das atividades de vigilância e controle estariam envolvidos na diminuição das incidências.

ABSTRACT OBJECTIVE Estimate the coverage of control measures of visceral leishmaniasis and relate them with the occurrence of human visceral leishmaniasis in endemic urban area. METHODS Cases of human and canine visceral leishmaniasis were considered as study population and evaluated by a serological survey conducted in Araçatuba, state São Paulo, from 2007 to 2015. The cases of human visceral leishmaniasis were geocoded by the address of the patients and the canine disease by the address of the dogs’ owners. The coverage of serological survey, euthanasia, and insecticide spraying was calculated, as well as the canine seroprevalence and the incidence rates of human visceral leishmaniasis. The relationship between human visceral leishmaniasis and control measures was evaluated, as well as the seroprevalence by comparing maps and by linear regression. The relationship between the canine and the human disease was also evaluated by the Ripley’s K function. RESULTS The incidence rates of human visceral leishmaniasis showed a period of decline (2007 to 2009) and a period of stability (2010 to 2015), a behavior similar to that of canine seroprevalence. In general, the coverage of control measures was low, and the non-association with the incidence of human visceral leishmaniasis can be a result of the period analyzed and of the small number of analyzed units (sectors of the Superintendence for the Control of Endemic Diseases). The distribution of human cases showed spatial dependence with the distribution of seropositive dogs from 2007 to 2009. CONCLUSIONS This study reaffirmed the relationship between the occurrence of the disease in humans and dogs, it verified a decrease in the rates of visceral leishmaniasis in Araçatuba over time, even at low coverage of control activities. However, further studies are needed to determine if factors beyond monitoring and control measures are involved in the reduction of incidences.

RESUMO OBJETIVO Estimar a cobertura das atividades de controle da leishmaniose visceral e relacioná-las com a ocorrência de leishmaniose visceral em humanos em área urbana endêmica. MÉTODOS Foram considerados como população de estudo os casos de leishmaniose visceral em humanos e em cães avaliados por inquérito sorológico censitário realizado em Araçatuba, SP, de 2007 a 2015. Os casos de leishmaniose visceral em humanos foram geocodificados pelo endereço de residência dos pacientes e, os cães, pelo endereço de residências dos respectivos tutores. Foram calculadas as coberturas do inquérito sorológico, da eutanásia e de borrifação de inseticida, as soroprevalências caninas e as taxas de incidência de leishmaniose visceral em humanos. A relação entre a leishmaniose visceral em humanos e as medidas de controle, bem como a soroprevalência foram avaliadas por comparação de mapas e por meio de regressão linear. A relação entre a doença canina e a humana também foi avaliada por meio da função K de Ripley . RESULTADOS As taxas de incidência de leishmaniose visceral em humanos apresentaram um período de declínio (2007 a 2009) e um período de estabilidade (2010 a 2015), comportamento semelhante ao das soroprevalências caninas. Em geral, a cobertura das medidas de controle foi baixa e a não associação com a incidência de leishmaniose visceral em humanos pode ser consequência do período analisado e do número pequeno de unidades analisadas (setores da Superintendência de Controle de Endemias). A distribuição dos casos humanos apresentou dependência espacial com a distribuição dos cães soropositivos de 2007 a 2009. CONCLUSÕES Este trabalho reafirmou a relação entre a ocorrência da doença no homem e no cão, verificou a diminuição das taxas de leishmaniose visceral em humanos e em cães em Araçatuba ao longo do tempo, mesmo em baixa cobertura das atividades de controle. Entretanto, novos estudos são necessários para averiguar se fatores além das atividades de vigilância e controle estariam envolvidos na diminuição das incidências.

ABSTRACT OBJECTIVE Estimate the coverage of control measures of visceral leishmaniasis and relate them with the occurrence of human visceral leishmaniasis in endemic urban area. METHODS Cases of human and canine visceral leishmaniasis were considered as study population and evaluated by a serological survey conducted in Araçatuba, state São Paulo, from 2007 to 2015. The cases of human visceral leishmaniasis were geocoded by the address of the patients and the canine disease by the address of the dogs’ owners. The coverage of serological survey, euthanasia, and insecticide spraying was calculated, as well as the canine seroprevalence and the incidence rates of human visceral leishmaniasis. The relationship between human visceral leishmaniasis and control measures was evaluated, as well as the seroprevalence by comparing maps and by linear regression. The relationship between the canine and the human disease was also evaluated by the Ripley’s K function. RESULTS The incidence rates of human visceral leishmaniasis showed a period of decline (2007 to 2009) and a period of stability (2010 to 2015), a behavior similar to that of canine seroprevalence. In general, the coverage of control measures was low, and the non-association with the incidence of human visceral leishmaniasis can be a result of the period analyzed and of the small number of analyzed units (sectors of the Superintendence for the Control of Endemic Diseases). The distribution of human cases showed spatial dependence with the distribution of seropositive dogs from 2007 to 2009. CONCLUSIONS This study reaffirmed the relationship between the occurrence of the disease in humans and dogs, it verified a decrease in the rates of visceral leishmaniasis in Araçatuba over time, even at low coverage of control activities. However, further studies are needed to determine if factors beyond monitoring and control measures are involved in the reduction of incidences.

Resumo: É importante conhecer a estrutura etária da população canina para melhor planejar e avaliar os programas de controle de zoonoses. Os autores analisaram os dados de um censo de cães com donos para caracterizar, pela primeira vez, a estrutura etária de uma população canina sujeita à eliminação compulsória numa área endêmica de leishmaniose visceral (Panorama, Estado de São Paulo, Brasil) que registrou uma taxa de eliminação canina de 28% no ano do estudo. Os dados para 1.329 domicílios e 1.671 cães com donos mostraram uma razão de cães para humanos de 1:7. A média de idade dos cães foi estimada em 1,73 anos; a pirâmide etária indicou altas taxas de natalidade e de mortalidade no primeiro ano de vida, com uma estimativa de mortalidade cumulativa de 78% aos três anos de idade, e uma expectativa de vida de 2,75 anos. Apesar da alta mortalidade, uma simulação de projeção de crescimento sugeriu que a população tem o potencial de crescer numa escala logarítmica ao longo dos anos. Os parâmetros estimados podem ser aplicados também a modelos para maximizar o impacto e minimizar os insumos financeiros de medidas de controle da leishmaniose visceral.

Abstract: The age structure of the dog population is essential for planning and evaluating control programs for zoonotic diseases. We analyzed data of an owned-dog census in order to characterize, for the first time, the structure of a dog population under compulsory culling in a visceral leishmaniasis endemic area (Panorama, São Paulo State, Brazil) that recorded a dog-culling rate of 28% in the year of the study. Data on 1,329 households and 1,671 owned dogs revealed an owned dog:human ratio of 1:7. The mean age of dogs was estimated at 1.73 years; the age pyramid indicated high birth and mortality rates at the first year of age with an estimated cumulative mortality of 78% at the third year of age and expected life span of 2.75 years. In spite of the high mortality, a growth projection simulation suggested that the population has potential to grow in a logarithmic scale over the years. The estimated parameters can be further applied in models to maximize the impact and minimize financial inputs of visceral leishmaniasis control measures.

Resumen: El conocimiento de la estructura etaria de una población de perros es esencial para la planificación de programas de control de zoonosis. Se analizaron datos de un censo de población canina domiciliada, con el objetivo de caracterizar, por primera vez, la estructura de una población de perros domiciliados en un área donde la eutanasia de perros positivos en leishmaniasis visceral es obligatoria (Panorama, São Paulo, Brasil), y que registró un 28% de casos de eutanasia en el año en que el censo fue realizado. Los datos de 1.329 domicilios y 1.671 perros resultaron en una razón perro:hombre de 1:7. La edad media de los perros fue estimada en 1,73 años; la pirámide de edad indica altas tasas de nacimiento y mortalidad hasta 1 año de vida, con tasa de mortalidad acumulada de un 78% en el tercer año de vida, y expectativa de vida de 2,75 años. A pesar de la alta tasa de mortalidad, la simulación de crecimiento poblacional sugiere que esta población tiene potencial de crecimiento en escala logarítmica a lo largo de los años. Los parámetros estimados pueden ser utilizados en modelos para maximizar el impacto y minimizar los costes de las medidas de control de la enfermedad.

Resumo: É importante conhecer a estrutura etária da população canina para melhor planejar e avaliar os programas de controle de zoonoses. Os autores analisaram os dados de um censo de cães com donos para caracterizar, pela primeira vez, a estrutura etária de uma população canina sujeita à eliminação compulsória numa área endêmica de leishmaniose visceral (Panorama, Estado de São Paulo, Brasil) que registrou uma taxa de eliminação canina de 28% no ano do estudo. Os dados para 1.329 domicílios e 1.671 cães com donos mostraram uma razão de cães para humanos de 1:7. A média de idade dos cães foi estimada em 1,73 anos; a pirâmide etária indicou altas taxas de natalidade e de mortalidade no primeiro ano de vida, com uma estimativa de mortalidade cumulativa de 78% aos três anos de idade, e uma expectativa de vida de 2,75 anos. Apesar da alta mortalidade, uma simulação de projeção de crescimento sugeriu que a população tem o potencial de crescer numa escala logarítmica ao longo dos anos. Os parâmetros estimados podem ser aplicados também a modelos para maximizar o impacto e minimizar os insumos financeiros de medidas de controle da leishmaniose visceral.

Abstract: The age structure of the dog population is essential for planning and evaluating control programs for zoonotic diseases. We analyzed data of an owned-dog census in order to characterize, for the first time, the structure of a dog population under compulsory culling in a visceral leishmaniasis endemic area (Panorama, São Paulo State, Brazil) that recorded a dog-culling rate of 28% in the year of the study. Data on 1,329 households and 1,671 owned dogs revealed an owned dog:human ratio of 1:7. The mean age of dogs was estimated at 1.73 years; the age pyramid indicated high birth and mortality rates at the first year of age with an estimated cumulative mortality of 78% at the third year of age and expected life span of 2.75 years. In spite of the high mortality, a growth projection simulation suggested that the population has potential to grow in a logarithmic scale over the years. The estimated parameters can be further applied in models to maximize the impact and minimize financial inputs of visceral leishmaniasis control measures.

Resumen: El conocimiento de la estructura etaria de una población de perros es esencial para la planificación de programas de control de zoonosis. Se analizaron datos de un censo de población canina domiciliada, con el objetivo de caracterizar, por primera vez, la estructura de una población de perros domiciliados en un área donde la eutanasia de perros positivos en leishmaniasis visceral es obligatoria (Panorama, São Paulo, Brasil), y que registró un 28% de casos de eutanasia en el año en que el censo fue realizado. Los datos de 1.329 domicilios y 1.671 perros resultaron en una razón perro:hombre de 1:7. La edad media de los perros fue estimada en 1,73 años; la pirámide de edad indica altas tasas de nacimiento y mortalidad hasta 1 año de vida, con tasa de mortalidad acumulada de un 78% en el tercer año de vida, y expectativa de vida de 2,75 años. A pesar de la alta tasa de mortalidad, la simulación de crecimiento poblacional sugiere que esta población tiene potencial de crecimiento en escala logarítmica a lo largo de los años. Los parámetros estimados pueden ser utilizados en modelos para maximizar el impacto y minimizar los costes de las medidas de control de la enfermedad.

Resumo Uma das medidas de controle da leishmaniose visceral (LV) no Brasil se baseia na identificação e eliminação do reservatório canino. Existe considerável controvérsia relativa a esta estratégia incluindo a correta identificação dos cães positivos e a variação temporal da relação hospedeiro-parasita, o que torna esta medida ainda mais desafiadora. Uma coorte dinâmica de 62 cães foi acompanhada trimestralmente utilizando-se métodos sorológicos, parasitológicos e a PCR. A taxa de positividade por PCR foi maior em comparação à dos métodos sorológicos e parasitológicos, e mostrou tendência à diminuição com o passar do tempo, enquanto que a positividade sorológica apresentou tendência a aumento, após seis meses. Observou-se positividade concomitante em todos os testes em 10,4% das amostras e, negatividade concomitante, em 29,1%. A sensibilidade geral variou de 43,6% a 64,1%, não sendo uniforme ao longo do estudo. A proporção de cães com e sem sinais clínicos que foram positivos ao exame parasitológico ou à PCR não foi estatisticamente diferente. Contudo, foi possível identificar como positivos um maior número de animais assintomáticos por meio da técnica de PCR, em comparação aos testes ELISA e imunocromatográfico. A PCR pode ser bastante útil para a vigilância epidemiológica de áreas onde casos de LV canina ainda não tenham sido descritos e onde estratégias de controle podem ser implantadas para limitar a disseminação da doença. Não obstante o avanço nas ferramentas diagnósticas, diagnosticar a LVC continua um desafio.

Abstract One of the measures to control visceral leishmaniosis (VL) in Brazil is the identification and culling of the canine reservoir. There is much controversy concerning this strategy, including the proper identification of positive dogs and the fact that the host-parasite relationship changes over time make it more challenging. A dynamic cohort of 62 dogs was followed every three months using serological and parasitological examinations and PCR. Positivity by PCR was higher than by serology and by parasitological examinations and showed a tendency to decrease over time, while serology tended to increase after six months. Concomitant positivity in all tests was observed in 10.4% of the samples, and negativity in 29.1%. Overall sensitivity ranged from 43.6 to 64.1%, and was not uniform over time. The proportion of dogs with or without clinical signs was not different by cytology or PCR but PCR was able to identify a larger number of asymptomatic dogs compared to ELISA and immunochromatography. PCR can be useful for surveillance of areas where cases of canine VL have not yet been detected and in which control strategies can be implemented to limit the spread of the disease. Despite the advance in diagnostic tools CVL diagnosis remains a challenge.

A cisticercose bovina, uma doença cosmopolita causada pelaTaenia saginata, resulta em perdas econômias devido á desvalorização de carcaças durante o abate. A inspeção sanitária nos frigoríficos, método de diagnóstico de rotina no Brasil, não possui sensibilidade necessária para detectar animais levemente infectados, os quais são tipicamente encontrados no Brasil. Neste estudo testou-se soro de animais diagnosticados positivos e negativos pela inspeção veterinária por (1) anticorpos anti-parasita usando antígenos de metacestóides (fluido vesicular deT. solium e secreções de T. saginata) e (2) antígeno secretado de metacestóides viáveis. Os pontos de corte foram calculados pela curva ROC, considerando condições de intensa e leve infeção, e pelo método clássico ( das amostras negativas). A sensibilidade e a especificidade dos testes diagnósticos foram diferentes dependendo do valor de ponto de corte assumido e, sobretudo, se a infecção era intensa ou leve. Apesar destas observações, no entanto, tanto o ensaio ELISA para anticorpos séricos quanto para antígeno de parasita constituem importante ferramenta para propósitos epidemiológicos e no estabelecimento de prioridades no controle da cisticercose bovina.

Bovine cysticercosis, a cosmopolitan disease caused by Taenia saginata, leads to economic losses due to carcass devaluation at slaughter. Sanitary inspection at slaughterhouses, the routine diagnostic method in Brazil, lacks the necessary sensitivity to detect the mildly infected cattle that are typically encoutered in Brazil. In this study we have tested cattle sera from animals diagnosed as positive and negative by veterianry inspection for (1) anti-parasite antibodies using metacestodes antigens (T. solium vesicular fluid and T. saginata secretions) and (2) the HP10 secreted antigen of viable metacestodes. The cut-off values were calculated by ROC curve for intense and mild infections conditions, and by the classical method ( for negative samples). The sensitivity and specificity of these diagnostic tests were different depending on the assumed cut-off value and, importantly, whether the infection was mild or intense. In spite of these observations, however, such ELISA assays for serum antibodies and parasite antigens constitute an important tool for epidemiological porposes, and in establishing priorities for the control of bovine cysticercosis.

O objetivo deste estudo foi produzir um conjugado contendo anticorpos policlonais anti-Cryptosporidium parvum e padronizar a Reação de Imunofluorescência Direta (RID), para detecção de oocistos de C. parvum em amostras fecais de bezerros. Para produção de anticorpos policlonais anti-C. parvum, dois coelhos da raça Nova Zelândia foram imunizados com uma solução purificada de oocistos de C. parvum e adjuvante de Freund. A purificação da fração de imunoglobulina G (IgG) foi realizada por meio de precipitação em sulfato de amônio e cromatografia em coluna de DEAE celulose. A titulação dos anticorpos policlonais anti-C. parvum foi determinada por meio de ensaio imunoenzimático (ELISA). A fração IgG de coelho anti-C. parvum foi conjugada com isotiocianato de fluoresceína, e a padronização da RID foi feita utilizando-se várias diluições do conjugado, em lâminas positivas para C. parvum. Foi pesquisada também a presença de reatividade cruzada do conjugado anti-C. parvum com C. serpentis, C. andersoni, Escherichia coli, Eimeria sp. e Candida sp.. A produção do conjugado anti-C. parvum foi bem sucedida, sendo possível a padronização da RID para detecção de oocistos em fezes. Foi também observada reatividade cruzada dos anticorpos policlonais anti-C. parvum, com C. andersoni e C. serpentis.

The aim of this study was to produce a conjugate containing anti-Cryptosporidium parvum polyclonal antibodies and standardize a Direct Immunofluorescence Assay (DIF) for detecting C. parvum oocysts in fecal samples from calves. In order to obtain anti-C. parvum polyclonal antibodies, two New Zealand rabbits were immunized with a purified solution of C. parvum oocysts and Freund's adjuvant. Purification of the immunoglobulin G (IgG) fraction was performed by means of precipitation in ammonium sulfate and chromatography using a DEAE-cellulose column. The anti-C. parvum polyclonal antibody titer was determined by means of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The rabbit anti-C. parvum IgG fraction was conjugated with fluorescein isothiocyanate and standardization of the DIF was performed using various dilutions of conjugate on slides positive for C. parvum oocysts. The cross-reactivity of the anti-C. parvum conjugate was tested using oocysts of Cryptosporidium serpentis, Cryptosporidium andersoni, Escherichia coli, Eimeria sp., and Candida sp. An anti-C. parvum conjugate was successfully produced, thus allowing standardization of DIF for detection of Cryptosporidium oocysts in fecal samples. Cross-reactivity of anti-C. parvum polyclonal antibodies with C. andersoni and C. serpentis was also observed.

This study aimed to compare the direct immunofluorescence assay (DIF) and the phase contrast microscopy in Sheather solution (PCM) for detection of Cryptosporidium oocysts in fecal samples from calves. The determination of the thresholds of detection of DIF and PCM was performed using five aliquots of a fecal sample from a calf negative for Cryptosporidium spp. oocysts, spiked with different amounts of Cryptosporidium parvum oocysts. The screening of the five aliquots revealed that the DIF and MCF showed respectively, detection thresholds of 3.3x104 (2 positive aliquots) and 3.3x105 (1 positive aliquot) oocysts per gram of fecal sample. Further analyses were accomplished in order to compare the positivity results and to determine semi-quantitatively the number of oocysts per field of microscopy, in both methods, in 300 fecal samples from calves. Among the 300 samples, 19.7% (59/300) were positive by DIF, result that was statistically significant (P=0.0098) when compared with the positivity obtained by the PCM, which was 11.7% (35/300). The positive samples were submitted to the nested-PCR assay for amplification of fragments of the 18S subunit of rRNA, following sequencing of amplified fragments, allowing the identification of Cryptosporidium andersoni in 11.9% (7/59) and C. parvum in 88.1% (52/59) of the samples. The present results indicate that the DIF was more effective than PCM in the detection of Cryptosporidium in fecal samples from calves.

O presente estudo teve como objetivo comparar as técnicas de imunofluorescência direta (IFD) e a microscopia de contraste de fase em solução de Sheather (MCF), para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bezerros. A determinação dos limiares detecção da IFD e da MCF foi realizada utilizando cinco alíquotas de uma amostra fecal de bezerro, comprovadamente negativa para Cryptosporidium spp., adicionadas com diferentes quantidades de oocistos de Cryptosporidium parvum. Ao exame das 5 alíquotas, a IFD e a MCF apresentaram, respectivamente, limiares de detecção de 3,3x104 (duas alíquotas positivas) e 3,3x105 oocistos (1 alíquota positiva) por grama de fezes. Foram também realizadas a comparação entre a positividade obtida e uma análise semiquantitativa do número de oocistos observados por campo de microscopia, em ambos os métodos, em 300 amostras fecais de bezerros. Entre as 300 amostras, 19,7% (59/300) foram positivas pela IFD, com diferença estatisticamente significante (P=0,0098) quando comparada com a positividade obtida pela MCF, que foi de 11,7% (35/300). As amostras positivas foram submetidas à reação em cadeia da polimerase para amplificação de fragmentos da subunidade 18S do rRNA, com posterior sequenciamento dos fragmentos amplificados, o que permitiu a identificação de Cryptosporidium andersoni em 11,9% (7/59) e de C.parvum em 88,1% (52/59) das amostras. Os resultados observados comprovam que a IFD foi mais eficiente que a MCF para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bezerros.

A inspeção sanitária da carne bovina e suína tem sido a principal forma diagnóstica da cisticercose animal e da prevenção da teníase no Brasil. As aldeias indígenas Jaguapirú e Bororó estão localizadas próximo à área urbana do município de Dourados-MS, com condições precárias de saneamento básico, onde bovinos e suínos são criados como fonte de alimento para consumo próprio, bem como para comercialização externa, geralmente sem inspeção sanitária oficial. Neste estudo, 96 carcaças bovinas e 117 amostras de soro de suínos, criados nas aldeias indígenas, foram avaliadas para a presença de formas metacestóides à inspeção sanitária e de anticorpos anti-Taenia sp. ao teste ELISA, respectivamente. Observaram-se 18,75% de positividade para cisticercose bovina e 9,4% para cisticercose suína. A ocorrência do complexo teníase-cisticercose nas aldeias pode favorecer a ocorrência desta zoonose na população indígena. Condições adequadas de abate e inspeção sanitária dos animais destas aldeias se fazem urgente para o controle do complexo teníase-cisticercose na população indígena.

Sanitary inspection of beef and pork meat has been the major tool for diagnosing animal cysticercosis and for preventing taeniasis in Brazil. The indigenous villages Jaguapiru and Bororo are located close to the urban area of the municipality of Dourados in the State of Mato Grosso do Sul, Brazil, where precarious basic sanitation conditions are observed. Both cattle and pigs are raised for self-consumption of meat and milk as well as for sale on the external market, generally without official sanitary inspection. In this study, 96 bovine carcasses and 117 pig blood serum samples from animals raised in these indigenous villages were evaluated for the presence of metacestodes by postmortem evaluation, and anti-Taenia sp. antibodies were investigated using the indirect ELISA test. Metacestode forms were observed in 18.7% of the bovine carcasses, and 9.4% of the pig serum samples were positive for anti-Taenia sp. antibodies. The occurrence of animal cysticercosis in the villages may favor the occurrence of this zoonosis in the indigenous populations. Enforcement of proper slaughter and sanitary inspection conditions are urgently needed for controlling the taeniasis-cysticercosis complex among the indigenous population.

Introdução: Recentemente o papilomavírus humano (HPV) tem sido associado à carcinogênese oral. A metodologia empregada na detecção do vírus é uma das maiores causas observadas da grande variabilidade nas taxas de detecção do HPV. Objetivo: Este estudo comparou a sensibilidade de detecção do DNA do HPV em casos de carcinoma epidermoide de lábio utilizando a amplificação do DNA viral por reação em cadeia da polimerase (PCR) ou nPCR. Material e método: Foram utilizadas 33 amostras provenientes de casos de carcinoma epidermoide de lábio. Para as extrações do DNA utilizou-se o sistema QIAamp DNA Mini Kit. Como controle interno utilizou-se o gene da b-globina. Das 33 amostras iniciais, 30 foram positivas para o gene b-globina, sendo utilizadas para detectar o DNA viral. Comparou-se a amplificação do DNA viral pelos métodos da PCR com os oligonucleotídeos MY09/MY11 e nPCR, empregando-se os pares de oligonucleotídeos iniciadores MY09/MY11 e, na segunda etapa, o par GP5+/GP6+. O controle positivo para a presença do DNA do HPV utilizado foi a linhagem de células HeLa e, como controle negativo, a mistura de amplificação sem DNA. A análise dos produtos de PCR e nPCR para HPV foi realizada por eletroforese em gel de poliacrilamida a 8%. Resultados: Utilizando-se o método da PCR, a amplificação do DNA do HPV foi constatada em dois casos. Com a nPCR foi verificada presença de DNA viral em 13 das 30 amostras. Conclusão: Com a utilização da nPCR, a detecção do HPV nos casos estudados aumentou mais de seis vezes.

Introduction: Human papillomavirus (HPV) has been currently associated with oral carcinogesis. The methodology applied in virus detection is one of the main reasons for the great variability observed in HPV detection. Objectives: This study compared HPV DNA detection efficiency in lip squamous cell carcinoma samples (SCC) using viral DNA amplification by PCR or nPCR. Methods: Thirty three samples of lip squamous cell carcinoma were selected. DNA extractions were performed with QIAamp DNA minikit. The internal control was b-globin gene. Thirty out of 33 initial samples were positive for b-globin gene, which were employed to detect viral DNA. The amplification of viral DNA was compared by PCR method through MY09/MY11 oligonucleotides and nPCR through MY09/MY11 oligonucleotides in the first stage and GP5+/GP6+ in the second stage. HeLa cells were used as positive control for HPV DNA presence and the amplification mixture without DNA as negative control. The analysis of PCR and nPCR products for HPV DNA was performed through gel electrophoresis in polyacrylamide at 8%. Results: HPV DNA amplification was verified in two cases by the use of PCR method. HPV DNA presence was verified in 13 out of 30 samples by the use of nPCR. Conclusion: HPV DNA detection of lip SCC increased sixfold in the studied cases with the employment of nPCR.

O objetivo da presente pesquisa foi avaliar comparativamente os métodos diagnósticos da Leishmaniose Visceral Canina (LVC), utilizando-se o ensaio imunoenzimático indireto (ELISA), a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), a histoquímica (HE) e a imunoistoquímica (IMIQ) em tecidos de órgãos, como o baço, linfonodo e fígado. Além disso, a Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) das amostras de sangue e dos tecidos foi utilizada para comparar e confirmar os diagnósticos negativos e não conclusivos pelos métodos acima. Para esse estudo, foram utilizados 34 cães com diferentes sintomas da LVC, classificados em polissintomáticos, oligossintomáticos e assintomáticos e eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Ilha Solteira, SP. Os índices de positividade para os testes ELISA, IMIQ, RIFI e HE foram de 65,0, 62,0, 56,0 e 56,0%, respectivamente, sendo a maior positividade detectada nos cães polissintomáticos (92,0%), seguida pelos oligossintomáticos (57,0%) e assintomáticos (12,5%). A PCR confirmou os resultados positivos pelas outras técnicas e ainda detectou DNA do parasita nos tecidos de 100% dos cães negativos e em 89,0% dos suspeitos, elevando para 97,0% a positividade. Em conclusão, a PCR demonstrou ser o método mais sensível e preciso para o diagnóstico definitivo da LVC.

The purpose of the present work was a comparative study of diagnostic methods for Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) using serological methods, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect fluorescent antibody test (IFAT), histochemical (HE) and immunohistochemical (IMHC) tests using spleen, lymph node and liver canine tissues. In addition, Polymerase Chain Reaction (PCR) was done in blood and in tissues in order to compare and confirm no conclusive and negative diagnosis by the methods above. For this study, 34 dogs were divided according to clinical signs in asymptomatic, oligosymptomatic and polisymptomatic Leishmania-infected dogs euthanized by Zoonotic Disease Control Center (CCZ) from Ilha Solteira, SP, Brazil. The positivism indexes of ELISA, IMHC, IFAT and HE were 65.0, 62.0, 56.0 and 56.0%, respectively with the highest numbers of positive dogs in polisymptomatic (92.0%) followed by oligosymptomatic (57.0%) and asymptomatic dogs (12.5%). Furthermore, PCR confirmed the positive results and detected DNA in tissues from 100% of negative dogs and 89.0% suspects raising the animal positivism index up to 97.0%. In conclusion, PCR was the most sensitive and a valuable method for a definitive CVL diagnosis.

As pesquisas relativas a agressões por animais baseiam-se em dados de registros de pacientes atendidos nos serviços de vigilância epidemiológica da raiva. Analisaram-se as características de animais agressores, obtidas a partir de dados de 10.616 fichas de envio de amostras para diagnóstico da raiva na região noroeste do Estado de São Paulo, Brasil, entre 1993-2007. Desse total de fichas, 61,5% continham informações sobre agressão e, dentre os animais agressores (25%), a maioria foi de cães (67%), seguidos por gatos (21,8%) e quirópteros (8,1%). Em 92,1% dos relatos as vítimas eram pessoas e 82,3% dos animais eram domiciliados. A maioria dos cães agressores tinha até um ano de idade. Houve associação significante (p < 0,0001) entre agressividade e sexo, sendo os machos mais agressores do que as fêmeas. Dos animais positivos para raiva, 75,9% (183/241) eram agressores. Os dados obtidos são importantes para a instituição de programas de prevenção de mordeduras, baseados no perfil não só da vítima, mas também do animal agressor, além de permitirem estabelecer fatores de risco para ocorrência de agressões.

Epidemiological factors related to animal bites in humans and other animals were obtained from a database with 10,616 records of animal specimens sent for rabies diagnosis in northwest São Paulo State, Brazil, from 1993 to 2007. Of this total, 61.5% contained information on the bites, and among the biting animals (25%), the majority were dogs (67%), followed by cats (21.8%), and bats (8.1%). In 92.1% of the reports the victims were humans, and 82.3% of the animals were home pets. The majority of the biting dogs were less than a year old. There was a significant association (p < 0.0001) between aggressiveness and gender (with male animals more aggressive than females). Of the rabies-positive animals, 75.9% (183/241) were biters. The data are important for establishing bite prevention programs based on the profile of both victims and biting animals, besides identifying risk factors for animal bites.