O Mieloma Mútiplo é uma doença de evolução heterogênea, na qual a maioria dos pacientes recai muito precocemente após o tratamento. Nesse contexto, o objetivo principal deste trabalho é relatar diferentes estratégias de análise do mieloma por citometria de fluxo e sua importância na associação com citogenética no diagnóstico de doença residual. Entre 2.450 casos de doenças onco-hematológicas estudados, de setembro de 1993 a agosto de 2004, foram diagnosticados 50 (2,0%) Mieloma Múltiplo. Foram feitas análises morfológicas e, até o ano de 2000, as imunofenotipagens foram realizadas no citômetro de fluxo XL-MCL (Coulter) pela estratégia tamanho/complexidade, utilizando os anticorpos monoclonais CD19, CD20, CD38, CD45, CD56, HLA-DR, kappa e lambda de superfície e intracitoplasmáticas. A partir de 2001 passaram-se a utilizar painéis seqüenciais através do histograma CD138/Complexidade e anticorpos monoclonais CD19, CD38, CD56, CD117, kappa e lambda intracitoplasmáticas. Mais recentemente foram incluídos no painel os anticorpos CD45, HLA-DR e CD33. A análise do DNA foi realizada por citometria com auxílio do programa Multicycle em nove amostras, sendo que sete apresentaram população aneuplóide. O cariótipo com banda G foi realizado em 25 casos, e a pesquisa de deleção do 13q por FISH em 15. Alterações cromossômicas foram encontradas em 4 casos, sendo duas deleções de 13q confirmadas por FISH. A mudança na estratégia de gates associada à citogenética e ao estudo da cinética do ciclo do DNA permitem melhor identificação de células plasmáticas anômalas, avaliação do prognóstico e detecção de doença residual.

Multiple myeloma is a disease with variable natural history, but a clinical fact is that most of the transplanted patients relapse early after transplantation. Minimal residual disease should be one prognostic factor of transplanted patients that could judge if such patients are at risk for early relapse. We diagnosed 50 multiple myeloma cases from 2450 oncohematologic cancer diseases studied between September 1993 and August 2004 (2% of all cases). Until 2000 these cases were studied using a Coulter Flow Cytometer XL-MCL with monoclonal antibodies against CD19, CD38, CD45, CD56, intra-cytoplasmatic and surface kappa and lambda in a Forward Scatter x Side Scatter gate strategy. After 2001 we performed sequential studies using CD138 histogram complexity and monoclonal antibodies anti CD19, CD38, CD56, CD117, intra-cytoplasmatic kappa and lambda. More recently we included in the antibody pool anti-CD45, anti-HLA-DR and anti-CD33. DNA cytometric studies were performed with the Multicycle software in 9 cases, 7 of those with aneuploidy. G band karyotyping was made in 25 cases and the 13 q deletion was checked in 15 cases. Chromosomal alterations were found in 4 cases including two 13 q deletions, confirmed by FISH. Gate choice, cytogenetic studies and cycle kinetics of DNA are all data that permit better identification of anomalous plasma cells and therefore detection of minimal residual disease, that probably correlates with relapse prognosis.

A infecciosidade do rotavírus cepa SA-11 foi estudada em cultura de células MA-104 em presença de concanavalina A (ConA). Foi demonstrada a presença de receptores para a ConA nestas células através de ensaio de fluorescência e bloqueio específico dos mesmos através de D-manose. A cinética de replicação viral foi realizada pelo método de plaque e o vírus monitorado, pontualmente, pela microscopia eletrônica de transmissão e eletroforese em gel de poliacrilamida. Concluímos que a ConA não afetou consistentemente a replicação viral, entretanto interferiu no efeito citopático.

Rotavirus (RV) strain SA-11 was studied with respect to its infectivity in MA-104 cell cultures and the effect of concanavalin A (ConA). Receptors for ConA at the surface of MA-104 cell were determined by fluorescence assay and specifically inhibited by D-mannose. The kinetics of virus growth was carried out by plaque assay. Electron microscopy and polyacrylamide gel electrophoresis were used for monitoring the experiments. It was concluded that RV replication was not affected consistently by ConA, however it interfered with the development of cytopathic effect (CPE) without altering virus yields.

A quantificação das células CD34+ em sangue periférico é utilizada para determinar o melhor momento de iniciar a aférese, enquanto que na leucoaférese e no sangue de cordão umbilical determinam a quantidade de células CD34+ para o transplante de células progenitoras. O objetivo deste trabalho foi comparar três diferentes metodologias de quantificação de células CD34+. Foram utilizados três diferentes tipos de amostras: a) 32 amostras de sangue periférico, coletadas de pacientes estimulados com G-CSF 50 µg/Kg/dose total, sem quimioterapia na mobilização. b) 31 amostras de produto de aférese de pacientes estimulados com o mesmo protocolo de G-CSF. c) 20 amostras de sangue de cordão coletadas em CPDA-1, por punção de veia umbilical. As amostras permaneceram à temperatura ambiente no máximo até 24h da análise. O citômetro de fluxo utilizado foi o Epics XL-MCL (Coulter) com os protocolos de dupla plataforma: ISHAGE e Mulhouse modificado para análise de maior numero de eventos, e o citômetro Imagn 2000 (Biometric Imaging) de plataforma única, conforme técnicas recomendadas. Os anticorpos monoclonais utilizados foram: CD45-FITC, CD34-PE, e isotipo IgG1-PE da Immunotech. As análises estatísticas foram: ANOVA e correlação de teste t de Student. Os resultados não apresentaram diferenças estatisticamente significativas nos três métodos.

CD34+ cell quantification in peripheral blood is useful to determinate the best moment to begin apheresis while, when applied in leukapheresis products and umbilical cord blood it is important to establish the total number of CD34+ in stem cell transplantation. We aimed at comparing three different methodologies of CD34+ cell quantification. Three different blood products were analyzed: a) peripheral blood samples from 32 patients collected using EDTA, mobilized without previous chemotherapy and with G-CSF 50 mcg/Kg/total. b) 31 leukapheresis samples obtained using a CS 3000 (Baxter) cell separator. c) 20 cord blood samples collected using umbilical venipuncture. All samples were maintained at room temperature and analyzed until 24h after collection by three different methods: double platform protocols ISHAGE, a Mulhouse modified (for analysis of a higher number of events) applied in a Epics XL flow cytometer (Coulter) and a single platform for a fixed volume cytometer IMAGN 2000 (Biometric Imaging) according to manufacturer instructions. Monoclonal antibodies used were: CD 45-FITC, CD 34-PE and IgG1-PE isotype control (Immunotech, Marseille, FR). Statistical analysis was made using ANOVA and T Student test. Results showed no statistical differences (p< 0.05) among the three methods used to quantify CD34+ cells from any sample source.

OBJECTIVE: To assess by Doppler echocardiography the structural and functional alterations of rat heart with surgical induced extensive myocardial infarction. METHODS: Five weeks after surgical ligature of the left coronary artery, 38 Wistar-EPM rats of both sexes, 10 of them with extensive infarction, undergone anatomical and functional evaluation by Doppler echocardiography and then euthanized for anatomopathological analysis. RESULTS: Echocardiography was 100% sensible and specific to anatomopathological confirmed extensive miocardial infarction. Extensive infarction lead to dilatation of left ventricle (diastolic diameter: 0.89cm vs.0.64cm; systolic: 0.72cm vs. 0.33cm) and left atrium (0.55cm vs. 0.33cm); thinning of left ventricular anterior wall (systolic: 0.14cm vs. 0.23cm, diastolic: 0.11cm vs. 0.14cm); increased mitral E/ A wave relation (6.45 vs. 1.95). Signals of increased end diastolic ventricle pressure, B point in mitral valve tracing in 62.5% and signs of pulmonary hypertension straightening of pulmonary valve (90%) and notching of pulmonary systolic flow (60%) were observed in animals with extensive infarction. CONCLUSION: Doppler echocardiography has a high sensitivity and specificity for detection of chronic extensive infarction. Extensive infarction caused dilatation of left cardiac chambers and showed in Doppler signals of increased end diastolic left ventricular pressure and pulmonary artery pressure.

É apresentado neste trabalho um caso clínico de diarréia aguda prolongada em uma criança subnutrida e desidratada de 5 meses de idade. O estudo virológico por microscopia eletrônica mostrou que a criança eliminava, pelas fezes aquosas, vírus semelhante, morfologicamente, ao astrovírus e rotavírus. A presença destes vírus foi observada 12 dias após o início da diarréia. A imunomicroscopia eletrônica realizada com o soro da criança mostrou agregados de ambos os vírus. Não foram detectadas bactérias ou parasitas enteropatogênicos. Os Autores sugerem que este pode ser um caso de infecção mista de vírus semelhante ao astrovírus e rotavírus.

A clinical case is described in this paper in that a 5-month old baby girl severely malnourished and dehydrated presented a prolonged acute diarrhoea. No enteropathogenic bacteria or parasites were demonstrated. Virological study by electron microscopy (EM) showed that the patient shed both astrovirus-like and rotavirus in the watery stool as long as 12 days after the onset. Immune electron microscopy (IEM) performed with the patient serum revealed clumps of both viruses. It is suggest that this may be a case of mixed infection due to astrovirus-like and rotavirus.

Experimentos preliminares da permissividade de cultura de leucócitos humanos estimulados com mitógeno frente a infecção pelo rotavirus humano foram realizados por microscopia eletrônica. Observamos que, células mo-nonucleadas, mantidas em cultura, após estimulação com fitohemaglutinina (PHA) colhidas 36 horas pós-infecção apresentavam muitas partículas virais no citoplasma. Verificamos, também, muitas partículas virais associadas a fragmentos celulares, várias células em degeneração e alguns linfócitos pequenos intactos. Não presenciamos partículas virais em células colhidas previamente (12 e 24 horas p.i.) e nas culturas controle (sem tratamento com PHA). Sugerimos que o rotavirus humano pode se replicar em culturas de leucócitos humanos estimulados com PHA.