Resumo Felinos são hospedeiros definitivos do Toxoplasma gondii e podem eliminar oocistos nas fezes, contaminando o meio ambiente. Oocistos esporulados são altamente resistentes ao meio ambiente com elevada infectividade, sendo atribuído a muitos surtos de toxoplasmose. O objetivo do estudo foi avaliar a reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) para a detecção de oocistos de T. gondii eliminados por gatos. Doze gatos de um experimento prévio de vacina foram desafiados por via oral com 600 cistos da cepa TgDoveBr8 no dia 72. Amostras fecais foram coletadas diariamente pela técnica de centrifugo-flutuação seguida de exame microscópico (técnica de Sheather) e qPCR por 20 dias após desafio. Gatos de todos os grupos eliminam oocistos nas fezes. Cinco gatos negativos na técnica Sheather foram positivos de acordo com a qPCR no 3º dia pós-inoculação (dpi). Oocistos foram detectados no 4º dpi no Sheather; entretanto, não houve diferença estatística entre os dois métodos (p=0,1116). Não houve diferença estatisticamente significativa na eliminação de oocistos entre os grupos de acordo com a técnica de Sheather (p = 0,6534) e qPCR (p = 0,9670). Em conclusão, esses resultados demonstram que qPCR pode ser usada como uma alternativa ao Sheather para detectar e quantificar oocistos de T. gondii.

Abstract Felines are definitive hosts of Toxoplasma gondii and can shed oocysts in their feces, contaminating the environment. Sporulated oocysts are highly resistant to the environment and have higher infectivity, which are attributed to many toxoplasmosis outbreaks. The aim of the present study was to evaluate a quantitative polymerase chain reaction (qPCR) technique for the detection of T. gondii oocysts shed by cats. Twelve cats from a previous vaccine experiment were challenged orally with 600 cysts of the TgDoveBr8 strain on day 72. Fecal samples were collected daily using the centrifugal flotation technique, with microscopic examination (Sheather technique) and qPCR for 20 days after the challenge. Cats from all groups shed oocysts in their feces. Five negative cats in the Sheather were positive according to qPCR on the 3rd day post-inoculation (dpi). Oocysts were detected on the 4th dpi using the Sheather; however, there was no statistical difference between the two methods (p=0.1116). In addition, there was no statistically significant difference in oocyst shedding between the groups according to the Sheather technique (p=0.6534) and qPCR (p=0.9670). In conclusion, these results demonstrate that qPCR can be used as an alternative to the Sheather to detect and quantify T. gondii oocysts.

Resumo Neospora caninum é um parasita intracelular obrigatório que pode infectar vários animais domésticos e silvestres, incluindo as aves. Esses animais são importantes fontes para o monitoramento da contaminação ambiental, uma vez que eles podem se infectar por meio da ingestão de oocistos. Porém, o real papel das aves no ciclo biológico do N. caninum ainda é incerto. Este estudo teve como objetivos determinar a prevalência de anticorpos anti-N. caninum, avaliar fatores associados, detectar o parasita por meio de teste molecular em galinhas de vida livre do Brasil e avaliar diferentes técnicas para o diagnóstico sorológico. Amostras de sangue de 366 galinhas de 25 fazendas foram coletadas para testes sorológicos. A reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) foram utilizados para detectar anticorpos anti-N. caninum. As amostras de tecidos (cérebro, coração, pulmão e fígado) de galinhas soropositivas na RIFI foram coletadas e submetidas à PCR para detecção molecular do parasita. Das 366 galinhas, 65 (17,8%) e 163 (44,6%) foram soropositivas pela RIFI e ELISA, respectivamente. Nenhuma amostra foi positiva na PCR. Esses resultados demonstram uma elevada prevalência de anticorpos em galinhas de vida livre e que a RIFI é uma técnica mais sensível para a detecção de anticorpos anti-N. caninum.

Abstract Neospora caninum is an obligate intracellular parasite that can infect many domestic and wild animals, including birds. These animals are important sources for monitoring of environmental contamination, as they could become infected through sporulated oocysts; however, the real role of birds in the biological cycle of N. caninum remains uncertain. This study aimed to determine the prevalence of anti-N. caninum antibodies, evaluate associated factors, detect the parasite by molecular testing of free-range chickens from Brazil, and evaluate different techniques for its serological diagnosis. Blood samples of 366 chickens from 25 farms were collected for serological assays. The indirect fluorescent antibody test (IFAT) and the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were used to detect anti-N. caninum antibodies. Chickens that tested seropositive by IFAT had their brain tissues and a pool of organs (heart, lung, and liver) submitted to PCR for molecular detection of the parasite. Out of 366 chickens, 65 (17.8%) and 163 (44.6%) were seropositive by IFAT and ELISA, respectively. Brain tissues (n=60) and the pools of organs (n=65) were negative in the PCR. Our results showed a high prevalence of antibodies in free-range chickens and that IFAT is the more sensitive technique for the detection of anti-N. caninum antibodies.

Resumo O objetivo deste estudo foi relatar um surto de toxoplasmose humana em uma instituição de pesquisa em Londrina, Paraná, no período de dezembro de 2015 a fevereiro de 2016. Amostras de sangue de 26 indivíduos sintomáticos foram coletadas e o imunoensaio de quimioluminescência de micropartículas foi realizado para detectar IgM, IgG e teste de avidez de IgG específica em laboratório oficial. Um total de 20 pessoas com sintomas e sorologia compatíveis com toxoplasmose aguda (IgM positiva e IgG com baixa avidez) foi selecionado como casos, enquanto 45 funcionários assintomáticos que trabalhavam nas mesmas equipes e durante os mesmos turnos foram utilizados como controles. Todos os participantes da investigação responderam a um questionário epidemiológico. Foram coletadas três amostras de água e uma de lodo das cisternas de abastecimento da instituição, 10 de solo, 11 de vegetais, três amostras de fezes de gato e um cadáver de filhote felino doméstico para detecção de T. gondii pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Após análise dos dados epidemiológicos, o consumo de hortaliças no restaurante da instituição foi a única variável associada à ocorrência da doença. Em resultados laboratoriais, todas as amostras apresentaram resultados negativos a PCR. O rápido reconhecimento do surto, notificação e investigação prematura poderia ter quebrado a cadeia de transmissão, evitando assim o surgimento de novos casos. Além disso, a adoção de boas práticas de manipulação de alimentos poderia ter impedido a ocorrência do surto.

Abstract The objective of this study was to report an outbreak of human toxoplasmosis at a research institution in Londrina, Paraná, from December 2015 to February 2016. Blood samples from 26 symptomatic individuals were collected and the microparticle chemiluminescence immunoassay was performed to detect IgM, IgG and specific IgG avidity test in the official laboratory. A total of 20 people with symptoms and serology compatible with acute toxoplasmosis (IgM positive and IgG with low avidity) were selected as cases, while 45 asymptomatic employees working in the same teams and during the same shifts were selected as controls. All the participants of the investigation answered an epidemiological questionnaire. Three samples of water and one sludge from the institution's supply cisterns, 10 soil samples, 11 plant samples, three cat fecal samples and one domestic feline cadaver were collected for analysis of the polymerase chain reaction (PCR) for T. gondii. After analyzing the epidemiological data, the consumption of vegetables in the restaurant of the institution was the only variable associated with the occurrence of the disease. In laboratory results, all the samples showed negative results to PCR. The rapid recognition of the outbreak, early notification and investigation could have broken the chain of transmission early, thus preventing the emergence of new cases. In addition, the adoption of good food handling practices could have prevented the occurrence of the outbreak.

RESUMO: A presença de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos de corte, abatidos na região norte do estado do Paraná, Brasil, foi avaliada. Foram coletadas 401 amostras de sangue, sendo 281 amostras no município de Rolândia e 120 no municipio de Borrazopolis, entre os meses de abril de 2015 e novembro de 2016. Do total de amostras, 289 eram de fêmeas e 112 amostras de machos, na faixa etária de um ano e meio até oito anos de idade. Foi realizada a reação da imunofluorescência indireta (RIFI) utilizando ponte de corte de 1:100. Em seguida, foram tabulados as variáveis para análise estatística (testes exato de Fisher e do qui-quadrado, p≤0,05). A análise mostrou que das 401 amostras, 37 foram positivas para N. caninum, indicando uma prevalência de 9,2 % e os títulos observados foram 1:100 (16), 1:200 (14) e 1:400 (7). As variáveis sexo, idade e local não diferiram estatisticamente (p>0,05). Nossos resultados demonstram uma soro-ocorrência de N. caninum em bovinos abatidos na região norte do Paraná.

ABSTRACT: The presence of anti-Neospora caninum antibodies in beef cattle slaughtered in the northern region of the state of Paraná, Brazil, was evaluated. A total of 401 blood samples were collected; 281 samples from the municipality of Rolândia and 120 from the municipality of Borrazópolis, between April 2015 and November 2016. Of the total samples, 289 were from females and 112 from males, aged one and a half to eight years. Indirect fluorescent antibody test (IFAT) was performed, using a cut-off of 1:100. Variables were tabulated for statistical analyses (Fisher’s exact test and chi-square tests, p≤0.05). The analysis showed that of the 401 samples, 37 were positive for N. caninum, indicating a prevalence of 9.2 %, and observed titers were 1:100 (16), 1:200 (14), and 1:400 (7). The variables sex, age, and location did not differ statistically (p>0.05). Our results showed a sero-occurrence of N. caninum in cattle slaughtered in the northern region of the state of Paraná.

Resumo A toxoplasmose é uma doença de distribuição mundial com importantes implicações em saúde pública. Os objetivos deste estudo foram determinar e identificar fatores associados à soroprevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em humanos e cães de Jataizinho, Paraná, Brasil. Amostras de soro de 280 humanos e 766 cães, de áreas rural e urbana, foram testadas pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foram consideradas positivas diluições ≥1:16. Informações epidemiológicas foram obtidas por meio de questionário individual e a tabulação dos dados foi realizada com EpiInfo 3.5.3 (CDC, Atlanta). A significância estatística foi avaliada por Chi-quadrado (ᵪ2) ou Exato de Fisher com nível de significância de 5,0 %. A soroprevalência em humanos foi como segue: 70,00% (196/280), 69,08% (143/207) em área rural e 72,60% (53/73) em uma comunidade urbana carente. Em cães, foi 52,35% (401/766), na área rural 71,74% (99/138) e na área urbana 48,08% (302/628). Nas áreas rurais não houve fator estatisticamente associado ao risco de toxoplasmose. Na área urbana, visualizar mais do que quatro ratos em casa foi fator associado à soropositividade para toxoplasmose em humanos. A soropositividade em cães urbanos apresentou associação à idade, ao contato com cães errantes ou roedores e com acesso livre à rua. Os resultados indicaram semelhante possibilidade de contato com Toxoplasma gondii entre cães e humanos residentes em áreas rurais ou urbanas carentes de pequenos municípios.

Abstract Toxoplasmosis is a worldwide zoonosis with important public health implications. The aims of this study were to determine and identify factors associated to the seroprevalence of anti-Toxoplasma gondii antibodies in humans and dogs from Jataizinho, Parana State, Brazil. Serum samples from 280 humans and 766 dogs, from rural and urban areas, were tested by indirect immunofluorescent antibody test. Positive dilutions were ≥ 1:16. Epidemiological informations were obtained through an individual questionnaire and data tabulation was performed using EpiInfo 3.5.3 (CDC, Atlanta). Statistical significance was evaluated by chi-square (ᵪ2) or Fisher's exact tests with a 5.0 % significance level. The seroprevalence in humans was 70.00% (196/280), as follows: 69.08% (143/207) in rural and 72.60% (53/73) in a slum urban community. The seroprevalence in dogs was 52.35% (401/766), as follows: 71.74% (99/138) in rural and 48.08% (302/628) in urban area. In rural areas, there was no factor associated to risk of infection. In urban slum community, visualizing more than four rats at home was a factor statistically associated to seropositivity for human toxoplamosis. Infection of urban dogs was associated to age, contact with stray dogs or rodents, and free access to street. The results indicated a similar possibility of contact with Toxoplasma gondii between dogs and humans living in rural or slum urban areas of small municipalities.

O objetivo do estudo foi investigar anticorpos anti-Toxoplasma gondii e isolar o parasita do cérebro de equídeos abatidos em matadouros-frigoríficos no Brasil. Colheram-se amostras de 398 cérebros e sangue de equídeos machos e fêmeas de idades variadas, provenientes de seis estados brasileiros. As amostras de soro foram avaliadas pelo teste de imunofluorescência indireta (IFI) para T. gondii (ponto de corte ≥ 64), e os fragmentos de cérebros foram submetidos ao bioensaio em camundongos. Por meio da IFI, 46 (11,6%) equídeos foram soropositivos. Pelo bioensaio em camundongos, 14 (3,5%) cérebros de equídeos testados foram positivos. Em doze dos bioensaios, os camundongos foram positivos somente pela IFI (ponto de corte ≥ 16) e T. gondii foi isolado nos outros dois bioensaios. A PCR-RFLP com base em 18S rDNA para diferenciar entre T. gondii, Neospora caninum, e Sarcocystis neurona foram feitas em todos os 14 cérebros e dois foram positivos apenas para T. gondii. De dois isolados positivos para T. gondii e do cérebro positivo à PCR em que realizou-se a PCR-RFLP, com base em 13 marcadores e SAG2, a genotipagem mostrou ser o T. gondii tipo I para todas as amostras. A IFI de soros de equídeos e do bioensaio em camundongos identificaram positividade em 60 (15%) amostras testadas. Os resultados mostram que alguns cavalos enviados para abate foram expostos ao T. gondii.

This study aimed to investigate anti-Toxoplasma gondii antibodies and to isolate the parasite from the brains of horses processed at slaughterhouses in Brazil. We collected brain and blood samples from 398 horses of various ages, from six Brazilian states. Serum samples were evaluated by indirect fluorescent antibody test (IFAT cut-off titre ≥ 1:64), and brains were submitted to mouse bioassay. Among the 398 horses, positivity for T. gondii was identified in 46 (11.6%) by IFAT and in 14 (3.5%) by mouse bioassay. In 12 of those 14 bioassays, mice were positive only by IFAT (cut-off titre ≥ 1:16), T. gondii being isolated in the remaining two. Using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis of 18S rDNA to differentiate among T. gondii, Neospora caninum, and Sarcocystis neurona, we found that two of the 14 brains were positive for T. gondii only. For genotyping of the two isolates and the PCR-positive brain, we performed PCR-RFLP based on 13 markers, and SAG2 all samples were Toxoplasma gondii type I. Collectively, IFAT of horse sera and mouse bioassay identified positivity in 60 (15%) of the samples. Our results show that some horses sent to slaughter in Brazil have been exposed toT. gondii.