ABSTRACT Introduction: Plants are a fundamental part of medicine systems. To have a plant source as a therapeutic alternative, it is essential to demonstrate its usefulness scientifically. The species Clusia minor L., Caesalpinia bahamensis Lam., Murraya paniculata L, Phania matricarioides (Spreng.) Griseb. and Lippia alba Mill, which grow in Cuba, are traditionally used for the treatment of different diseases; however, phytochemical and pharmacological studies that guarantee this utility and permit establishing its quality are limited or null. Objectives: to determine the main pharmacognostic parameters to establish its quality as a vegetal drug, to identify the main metabolites and to evaluate some of its pharmacological properties preliminarily. Methods: the quality requirements of some of the species as a crude drug were determined through pharmacognostic evaluations, phytochemical methods were applied, the main substances isolated were characterized structurally, and the antioxidant, diuretic, antilithic, anti-inflammatory, antimicrobial, and antiparasitic effects of some of its extracts were evaluated. Results: The quality specifications of raw drugs, extracts and designed formulations, as well as the chemical markers were established. Some of the main chemical components could be extracted, isolated, purified and characterized, many of which constituted new reports for the species and genus. The bioactive potential of the plants evaluated and their low toxicity were demonstrated. Conclusions: The species studied constitute a potential resource in the field of phytotherapics. The chemical-pharmacognostic knowledge of the Cuban flora and its real therapeutic usefulness were expanded.

RESUMEN Introducción: Las plantas son una parte fundamental de los sistemas de medicina. Para contar con una fuente vegetal como alternativa terapéutica, es indispensable demostrar científicamente su utilidad. Las especies Clusia minor L., Caesalpinia bahamensis Lam., Murraya paniculata L, Phania matricarioides (Spreng.) Griseb. y Lippia alba Mill, que crecen en Cuba son utilizadas tradicionalmente para el tratamiento de diferentes afecciones, sin embargo, los estudios fitoquímicos y farmacológicos que avalen esta utilidad y que permitan establecer su calidad, son escasos o nulos. Objetivos: determinar los principales parámetros farmacognósticos para establecer su calidad como droga vegetal, identificar los principales metabolitos presentes en las mismas y evaluar preliminarmente algunas de sus propiedades farmacológicas. Métodos: Se determinaron los requerimientos de calidad de algunas de las especies mediante evaluaciones farmacognósticas, se aplicaron métodos fitoquímicos, se caracterizaron estructuralmente los principales compuestos aislados y se evaluaron los efectos antioxidantes, diurético, antilitiásico, antiinflamatorio, antimicrobiano y antiparasitario de algunos de sus extractos. Resultados: Se establecieron las especificaciones de calidad de las drogas crudas, extractos y formulaciones diseñadas, así como los marcadores químicos. Se pudieron extraer, aislar, purificar y caracterizar algunos de los principales componentes químicos, constituyendo muchos de ellos nuevos reportes para las especies y el género. Se demostraron el potencial bioactivo de las plantas evaluadas y su baja toxicidad. Conclusiones: Las especies estudiadas constituyen un recurso potencial en el campo de los fitoterápicos, ampliando el conocimiento químico-farmacognóstico de la flora cubana y la utilidad terapéutica real de las mismas.

The introduction of highly efficient antiretroviral therapy has brought about a decrease in the frequency of neurotoxoplasmosis among people with HIV. It was demonstrated experimentally that protease inhibitor antiretrovirals may also have a direct action against the parasite, in this case Toxoplasma gondii. The purpose of the study was to evaluate the antitoxoplasma activity in vitro of tipranavir, a third-generation protease inhibitor antiretroviral. To achieve this aim, determination was made of the growth inhibition caused by tipranavir in Toxoplasma gondii intracellular tachyzoites, as well as its cytotoxicity against macrophages living in the peritoneum of OF-1 mice. Additionally, evaluation was conducted of atazanavir, sulfadiazine and pyrimethamine as reference drugs. Tipranavir displayed inhibitory activity against T. gondii tachyzoites, with a IC50 of 21.2 ± 3,0 µM, similar (p> 0.05) to the one obtained with sulfadiazine (IC50= 23.3 ± 3.6 µM) and higher (p< 0.05) than atazanavir (IC50= 2.8 ± 0.7 µM) and pyrimethamine (IC50= 1.2 ± 0.2 µM). However, its CC50 value (105.9 ± 10.0 µM) was higher (p< 0.05) than that of the reference drugs atazanavir (CC50= 25.0 ± 0.5 µM), sulfadiazine (CC50= 25.2 ± 3.2 µM) and pyrimethamine (CC50= 4.4 ± 1.2 µM). This is the first time a description is provided of the in vitro activity of tipranavir against T. gondii tachyzoites.

La introducción de la terapia antirretroviral de alta eficiencia ha conllevado a una disminución en la frecuencia de neurotoxoplasmosis en personas con VIH. Experimentalmente se demostró que los antirretrovirales inhibidores de proteasas pueden tener además una acción directa sobre el parásito, en este caso Toxoplasma gondii. El objetivo es evaluar la actividad antitoxoplasma in vitro del tipranavir, un antirretroviral inhibidor de proteasa de tercera generación. Para ello se determinó la inhibición del crecimiento causada por el tipranavir sobre taquizoitos intracelulares de Toxoplasma gondii, así como su citotoxicidad frente a macrófagos residentes en el peritoneo de ratones OF-1. En paralelo, se evaluaron el atazanavir, la sulfadiazina y pirimetamina como fármacos de referencia. El tipranavir mostró actividad inhibitoria frente a taquizoitos de T. gonddi, con una CI50 de 21,2 ± 3,0 µM, la cual fue similar (p> 0,05) a la obtenida con la sulfadiazina (CI50= 23,3 ± 3,6 µM) y mayor (p< 0,05) que el atazanavir (CI50= 2,8 ± 0,7 µM) y la pirimetamina (CI50= 1,2 ± 0,2 µM). Sin embargo, mostró un valor de CC50 (105,9 ± 10,0 µM) superior (p< 0,05) con respecto a los fármacos de referencia (atazanavir (CC50= 25,0 ± 0,5 µM), sulfadiazina (CC50= 25,2 ± 3,2 µM) y pirimetamina (CC50= 4,4 ± 1,2 µM). En conclusión, este trabajo describe por primera vez la actividad in vitro del tipranavir sobre taquizoitos de T. gondii.

Leishmaniasis is a parasitosis caused by protozoa of the genus Leishmania. It is endemic in 98 countries, where the disease incidence is about two million new cases per year. The drugs used in the disease’s treatment have numerous toxic effects, high cost and a long application period; besides, the emergence of resistance to them is also added. Natural medicine and the use of natural resources are used as alternatives to current therapy. The study aims to evaluate the antileishmanial activity of 15 marine invertebrates extracts. For this, growth inhibition caused by the extracts against Leishmania amazonensis promastigotes and amastigotes was determined, together with its cytotoxicity against BALB/c mice peritoneal macrophages. Among the evaluated products, only four (26.7%) caused parasite growth inhibition, while only the Echinometra lucunter extract showed selectivity (SR=5) and activity against intracellular amastigotes (CI50=28.1±6.0 mg/ml). These promising results provide insights about the possibility of using Echinometra lucunter extract as an antileishmanial agent.

La leishmaniasis es una parasitosis causada por protozoos del género Leishmania, la cual es endémica en 98 países donde incide con alrededor de 2 millones de nuevos casos por año. Los fármacos utilizados en su tratamiento, presentan numerosos efectos tóxicos, elevado costo y un largo período de aplicación, se añade también la emergencia de la resistencia a los mismos. La medicina natural y el empleo de los recursos naturales se utilizan como alternativas a la terapia actual. El objetivo del trabajo, evaluar la actividad antileishmanial de 15 extractos de invertebrados marinos. Para ello, se determinó la inhibición del crecimiento causada por los extractos frente a promastigotes y amastigotes de Leishmania amazonensis, así como su citotoxicidad frente a macrófagos peritoneales de ratón BALB/c. De los productos evaluados solo 4 (26,7 %) causaron inhibición del crecimiento de los parásitos, mientras que solo el extracto de Echinometra lucunter mostró selectividad (IS = 5) y actividad frente a amastigotes intracelulares (CI50 de 28,1 ± 6,0 µg/mL). Estos resultados promisorios brindan conocimientos acerca de la posibilidad de utilizar el extracto de E. lucunter como agente anti-leishmanial.

Introduction: leishmaniasis is a parasitic disease caused by several species of the genus Leishmania. The disease presents in a great variety of clinical forms. Psoriatic leishmaniasis has occasionally been reported among the cutaneous forms of the disease. Diagnostic certainty of the condition is indispensable, given the toxicity and side effects of the first line drugs used to treat it. Several methods are applied to reach an accurate diagnosis. These range from identification of the parasite in the tissue to detection of its DNA. Methods: data from a clinical case with suspected leishmaniasis were collected and analyzed. Various laboratory methods were applied to define the diagnosis, among them direct parasitological examination, histopathological examination, culture and polymerase chain reaction (PCR-18S and PCR-hsp70). Results and discussion: the tests performed to confirm the diagnosis of leishmaniasis were all negative. Histological examination diagnosed the dermatological lesion as psoriasis. Conclusions: very few cases of psoriatic leishmaniasis have been reported in the scientific literature. Comprehensive examination of the case by various methods ruled out the presence of leishmaniasis, allowing the application of the appropriate treatment and thus avoiding the inappropriate use of antimonials.

Introducción: la leishmaniasis es una enfermedad parasitaria causada por varias especies del género Leishmania, que se presenta en formas clínicas muy diversas. Entre las formas cutáneas, se ha notificado ocasionalmente la leishmaniasis psoriasiforme. Es imprescindible tener la certeza diagnóstica de leishmaniasis dada la toxicidad y los efectos colaterales que tienen las drogas de primera línea para tratarla. Se emplean varios métodos para llegar al diagnóstico, como son desde la identificación del parásito en el tejido hasta la detección de su ADN. Métodos: se realizó la recopilación y análisis de la información de un caso clínico con supuesta leishmaniasis, y se aplicaron distintos métodos de laboratorio para definir el diagnóstico, tales como examen parasitológico directo, examen histopatológico, cultivo y reacción en cadena de la polimerasa (PCR-18S y PCR-hsp70). Resultados y discusión: los exámenes realizados para confirmar el diagnóstico de leishmaniasis fueron negativos. Al estudio histológico, la lesión dermatológica se concluye como psoriasis. Conclusiones: aunque la literatura científica notifica casos de leishmaniasis de tipo psoriasiforme estos son escasos. El estudio integral del caso por diferentes métodos descartó la supuesta leishmaniasis en este paciente, lo cual permitió la aplicación del tratamiento adecuado y evitó el uso indebido de antimoniales para su tratamiento.

Introduction: infections caused by protozoa of the genus Leishmania are a global health problem with a high prevalence in underdeveloped countries. There is no vaccine against this disease at present and the treatment used is poor, so the search for more effective and safe medicines is an urgent need. Objective: to assess the in vitro antileishmanial activity of six aqueous and hydroalcohol extracts from marine organisms. Methods: the activity of six extracts against Leishmania amazonensis promastigots and amastigots as well as their toxicity against peritoneal macrophages in BALB/c mice. Results: in the promastigot assay, the extracts from Bryothamnion triquetrum, Bunodosoma granulifera, Halimeda opuntia and Physalia physalis showed growth inhibition at concentrations lower than 100 µg/mL whereas in amastigots, these last two extracts were the most active and least toxic with a selectivity index of 6 and 8 respectively. Conclusions: taking these results into account, it was considered that the H. opuntia and P. physalis extracts showed a promising activity, so it is suggested that further studies on its in vivo activity be conducted.

Introducción: las infecciones causadas por protozoos del género Leishmania constituyen un problema de salud mundial con una alta prevalencia en países subdesarrollados. En la actualidad no existe una vacuna contra esta enfermedad y el tratamiento utilizado es deficiente, por lo que la búsqueda de medicamentos más efectivos y seguros constituye una urgente necesidad. Objetivo: evaluar la actividad antileishmanial in vitro de 6 extractos acuosos e hidroalcohólicos de organismos marinos. Métodos: se determinó la actividad frente a promastigotes y amastigotes de Leishmania amazonensis, así como su toxicidad frente a macrófagos peritoneales de ratones BALB/c. Resultados: en el ensayo de promastigotes los extractos de Bryothamnion triquetrum, Bunodosoma granulifera, Halimeda opuntia, y Physalia physalis mostraron una inhibición del crecimiento a concentraciones menores de 100 µg/mL; mientras que frente a amastigotes, estos 2 últimos extractos fueron los más activos y menos tóxicos con un índice de selectividad de 6 y 8, respectivamente. Conclusiones: teniendo en cuenta estos resultados se consideró que los extractos de H. opuntia y P. physalis mostraron una promisoria actividad, por lo que se sugiere continuar los estudios de su actividad in vivo.

Neste estudo descreve-se o efeito de um extrato metanólico de Echinaster echinophorus spp. no parasita Leishmania amazonensis. Em testes com as formas promastigotas e amastigotas, o IC50 do extrato foi 62,9 e 37,5 μg.mL-1, respectivamente. O extrato também tem toxicidade moderada em macrófagos de camundongos BALB/c. O tratamento de camundongos BALB/c infectados com L. amazonensis com doses diárias de 100 mg/kg/dia via intraperitoneal durante 15 dias mostrou-se relativamente efetivo no controle da infecção. Esta investigação confirma a importância de produtos naturais como fonte para a descoberta de fármacos com funções anti-Leishmania.

In this study, a methanolic extract from Echinaster (Othilia) echinophorus was evaluated for activity against Leishmania amazonensis. The extract showed activity against the promastigote and amastigote forms with IC50 values of 62.9 and 37.5 μg.mL-1 respectively. This extract showed a moderate toxicity on macrophages from BALB/c mice. A dose of 100 mg/kg/day was effective when administered during 15 days by intraperitoneal route to BALB/c mice infected experimentally.

INTRODUCTION: Artemia salina lethality assay is considered a useful tool to determine preliminary toxicity of plant extracts. In our labs some plant species are studied because of their antiparasitic potentials. OBJECTIVE: to evaluate A. salina nauplii mortality caused by ethanol extracts of Cuban medicinal plants. METHODS: A. salina larvae were exposed to four concentrations of 35 ethanol extracts from 34 plant species, for 24 hours. Mean Lethal Concentration (LC50) was determined to classify each extract into the categories of extremely toxic, highly toxic, mildly toxic or non toxic. RESULTS: out of the tested extracts, only 5 (Artemisia absinthium, Luffa cylindrica, Melia azedarach, Melaleuca leucadendron and Simarouba glauca) were classified as extremely or highly toxic, 13 as mildly toxic whereas 17 extracts (48,5 %) were non toxic exhibiting LC50 values over 1 000 µg/mL. CONCLUSIONS: most of the evaluated extracts showed low toxicity, which is a positive result. The five extremely toxic extracts will not be included in further studies.

INTRODUCCIÓN: el ensayo de letalidad de Artemia salina es considerado una herramienta útil para la determinación preliminar de toxicidad de extractos de plantas. En nuestros laboratorios se estudian las potencialidades antiparasitarias de varias especies de plantas. OBJETIVO: evaluar la mortalidad causada por extractos etanólicos de plantas medicinales cubanas sobre larvas de A. salina. MÉTODOS: las larvas de A. salina se expusieron durante 24 h a 4 concentraciones de los 35 extractos etanólicos, pertenecientes a 34 especies de plantas. Se determinó la concentración letal media (CL50), lo cual permitió asignar cada extracto a las categorías de extremadamente tóxico, muy tóxico, moderadamente tóxico y no tóxico. RESULTADOS: del total de extractos evaluados solo 5 (Artemisia absinthium, Luffa cylindrica, Melia azedarach, Melaleuca leucadendron y Simarouba glauca) resultaron extremadamente tóxicos o muy tóxicos, 13 moderadamente tóxicos, mientras que 17 extractos (48,5 %) se clasificaron como no tóxicos al exhibir valores de CL50 superiores a 1 000 µg/mL. CONCLUSIONES: la mayoría de los extractos evaluados mostraron baja toxicidad en este modelo, lo cual resulta favorable. Los 5 extractos de mayor toxicidad no serán incluidos en estudios posteriores.

INTRODUCTION: leishmaniosis has been regarded by the World Health Organization as one of the most important tropical diseases. It is very difficult to control such parasitosis because there are not vaccines, and therapy is generally toxic and unsatisfactory. It is of vital importance to set prompt diagnostic method along with identification of the parasite in order to select the suitable treatment and to design the most convenient control measures. Recently, the advances in molecular biology have made it possible to characterize Leishmania species by different methods. The random amplified polymorphic DNA technique is a simple method to detect the genetic polymorphic DNA. OBJECTIVE: to standardize the random amplified polymorphic DNA technique for its use in New World Leishmania species typing. METHODS: by using 5 pmol primer concentration, 75 ng of template DNA, 2 mM of magnesium chloride and 2 U of polymerase DNA Taq in 25µL reaction, two reproducible amplification patters were obtained. The optimized random amplified polymorphic DNA technique served to determine the genetic differences among ten reference strains of Leishmania, with 6 sets of randomly designed conventional primers. The UP GMA method-based grouping strategy determined the phylogenetic relation among the studied species. RESULTS: OPA primers -3, 4 and 8 allowed distinguishing the ten reference strains of Leishmania under study. Two well defined genetic groups including species of Leishmania and Viannia subgenres were obtained; these 2 subgenres showed genetic differences. CONCLUSIONS: in this way, our laboratory has the optimized random amplified polymorphic DNA for the identification of Leishmania species.

INTRODUCCIÓN: la leishmaniosis ha sido clasificada por la Organización Mundial de la Salud como una de las enfermedades tropicales más importantes. El control de esta parasitosis es muy difícil, porque no existen vacunas y el tratamiento es tóxico e insatisfactorio. Es de crucial importancia establecer un método de diagnóstico oportuno junto a la identificación del parásito, lo cual incide en la selección del tratamiento adecuado y en el diseño de las medidas de control apropiadas. Recientemente, los avances en biología molecular han permitido la caracterización de especies de Leishmania por diferentes métodos. La técnica de ADN polimórfico amplificado al azar es una técnica simple para detectar el polimorfismo genético del ADN. OBJETIVO: estandarizar la técnica de ADN polimórfico amplificado al azar para su utilización en la tipificación de especies de Leishmania del Nuevo Mundo. MÉTODOS: empleando una concentración de cebador de 5 pmol, 75 ng de ADN molde, 2 mM de cloruro de magnesio y 2 U de Taq ADN polimerasa en 25 mL de reacción, se obtuvieron patrones de amplificación reproducibles. La técnica optimizada de ADN polimórfico amplificado al azar se empleó para determinar las diferencias genéticas entre 10 cepas de referencia de Leishmania, con la utilización de 6 juegos de cebadores comerciales diseñados al azar. La relación filogenética entre las especies estudiadas se determinó utilizando la estrategia de agrupaciones mediante el método de UPGMA. RESULTADOS: los cebadores OPA 3, 4 y 8 permitieron diferenciar las 10 cepas de referencia de Leishmania estudiadas. Se obtuvieron 2 grupos genéticos bien definidos donde se agrupan las especies del subgénero Leishmania y Viannia, respectivamente; los 2 subgéneros mostraron diferencias genéticas. CONCLUSIONES: de esta forma se cuenta en el laboratorio con la técnica del ADN polimórfico amplificado al azar optimizada para la identificación de especies de Leishmania.

BACKGROUND: leishmaniosis covers a group of infectious diseases caused by Leishmania genus hemoflagellate organisms. At present, this disease is prevailing in 88 tropical countries worldwide; it is estimated that 1.5 to 2 million new cases will occur every year. The control of the disease is deficient, mainly because there is no effective vaccine available. Although several drugs for treatment exist, all of them require parenteral way of administration, delayed and costly therapies and cause high toxicity. The tropical disease program of the World Health Organization considers plant research as an essential priority for Leishmania treatment. OBJECTIVE: to evaluate the antileishmanial action of extracts from Citrus limetta, Cucurbita maxima y Rhoeo spathacea. METHODS: aLeishmania amazonensis strain, the causative agent of cutaneous leishmaniosis, was used in this paper. The extract effect on the stagings of promastigot and amastigot of the parasite as well as on the peritoneal macrophages from BALB/c mouse was determined to assess its possible toxicity. RESULTS: Curcubita maxima y Rhoeo spathacea showed higher percentage of growth inhibition in promastigots. Good anti-leishmanial activity was also observed against amastigots, whereas its citotoxicity was moderate, with a selectivity index of 3. CONCLUSIONS: Curcubita maxima y Rhoeo spathacea extracts were the only ones that had anti-leishmanial activity.

INTRODUCCIÓN: la leishmaniosis comprende un grupo de enfermedades infecciosas causadas por organismos hemoflagelados del género Leishmania. Hoy día, esta enfermedad prevalece en 88 países tropicales alrededor del mundo y existe un estimado de 1,5 a 2 millones de nuevos casos por año. Su control es deficiente, principalmente al no contar con una vacuna eficaz. Aunque existen varios fármacos para su tratamiento, todos requieren una administración parenteral, tratamientos muy largos, costosos, y causan una alta toxicidad al organismo. El programa de enfermedades tropicales de la Organización Mundial de la Salud considera la investigación de plantas como una esencial prioridad para el tratamiento de Leishmania. OBJETIVO: evaluar la actividad antileishmanial de extractos provenientes de Citrus limetta, Cucurbita maxima y Rhoeo spathacea. MÉTODOS: en este trabajo se utilizó una cepa de Leishmania amazonensis agente causal de la leishmaniosis cutánea. Se determinó la actividad de los extractos frente a los estadios de promastigote y amastigote del parásito, así como frente a macrófagos peritoneales de ratón BALB/c, para valorar su posible toxicidad. RESULTADOS: los extractos provenientes de Curcubita maxima y Rhoeo spathacea fueron los que mostraron un mayor porcentaje de inhibición del crecimiento frente a promastigotes. Frente a amastigotes también mostraron una buena actividad antileishmanial, mientras que su citotoxicidad fue moderada con un índice de selectividad de 3. CONCLUSIONES: solo los extractos de Curcubita maxima y Rhoeo spathacea fueron los que mostraron una actividad antileishmanial.

The one-generational metric changes occurring in Triatoma flavida (Hemiptera: Triatominae) when carried from its wild habitat (caves) to laboratory, were examined using traditional morphometric techniques. As for other species of Triatoma, Rhodnius or Panstrongylus studied in similar conditions, a significant reduction of head, thorax and wing size was observed. Sexual dimorphism of the wings, while present in the wild sample, was not detected anymore in the laboratory individuals. Biological significance and epidemiological importance are discussed.

Fueron examinados los cambios morfométricos que ocurrieron en la primera generación de Triatoma flavida cuando fueron llevados desde su hábitat selvático (cuevas) al laboratorio, mediante el uso de técnicas morfométricas tradicionales. Se observó una reducción significativa del tamaño de la cabeza, tórax y alas, como ocurre en otras especies de Triatoma, Rhodnius o Panstrongylus estudiados en condiciones similares. El dimorfismo sexual de tamaño en las alas, aunque presente en los individuos selváticos, no se detectó en los de laboratorio. La significación biológica y la importancia epidemiológica son discutidas.

The antiprotozoan activity of the essential oil extracted from Artemisa abrotanum, Chenopodium ambrosioides, Pinus caribaea, Piper aduncum and Piper auritum, was evaluated. The evaluated oils did not show activity against L. amozonensis; however, the oil extracted from C. ambrosoides showed a promising activity against Trichomonas vaginalis with a minimum inhibitory concentration of 25 mg/mL.

Se evaluó la actividad antiprotozoaria del aceite esencial extraído de Artemisia abrotanum, Chenopodium ambrosioides, Pinus caribaea, Piper aduncum y Piper auritum. Los aceites evaluados no mostraron actividad contra L. amazonensis; sin embargo, frente a Trichomonas vaginalis el aceite extraído de C. ambrosioides mostró una actividad promisoria con una concentración mínima inhibitoria de 25 mg/mL.

A genomic library of Leishmania amazonensis in expression vector of eukaryote cells (pEF1HisA, pEF1HisB, pEF1HisC) was prepared. Also two subgenomic libraries having each 500 clones approximately were created and BALB/c mice were immunized with 50 mg/0,1 mL of DNA from each. Two immunizations were administered intramuscularly at 15-day interval. Groups of control mice were immunized with DNA from empty plasmid pEF1His, with soluble parasite antigen (100 mg/0,1 mL) and saline solution. The size of lesions was measured for 12 weeks and at the end of the experiment, the parasite load at lesion sites was determined by plaque microtitration method. In mice immunized with subgenomic library DNA1 and with soluble antigens,the size of lesions was controlled, which reached an statistical difference (p< 0,05) in relation to the rest of groups whose lesions increased. The parasite load found in lesion sites confirmed the previous results; the number of promastigots was significantly lower in those mice already protected. It was concluded that in subgenomic library DNA1 there should be genes or gene fragments whose in vivo expression induces protective immune response against the challenge in the murine model used

Se construyó una genoteca de Leishmania amazonensis en vector de expresión en células eucariotas (pEF1HisA, pEF1HisB, pEF1HisC). Se prepararon 2 subgenotecas con un número aproximado de 500 clones cada una y ratones BALB/c fueron inmunizados con 50 mg/0,1 mL de ADN de cada una; 2 inmunizaciones por vía IM, con 15 d de intervalo fueron realizadas. Grupos de ratones controles fueron inmunizados con ADN del plásmido vacío, con antígeno soluble del parásito (100 mg/0,1 mL) y solución salina fisiológica. Se midió el tamaño de las lesiones durante 12 semanas y al final del experimento, la carga parasitaria en los sitios de lesión fue determinada por el método de microtitulación en placas. Los ratones inmunizados con ADN 1, controlaron el tamaño de las lesiones, así como también los inmunizados con antígenos solubles, lo que alcanzó diferencia estadística (p< 0,05) en relación con el resto de los grupos, cuyas lesiones aumentaron de manera creciente. La carga de parásitos encontrada en los sitios de lesión corroboró los resultados anteriores, encontrando un número de promastigotes significativamente menor en aquellos que habían sido protegidos. Se concluyó que en la subgenoteca ADN1 deben existir genes, o fragmentos de genes, cuya expresión in vivo resulta protectora contra el reto, en el modelo murino empleado