RESUMO Objetivo Avaliar o desempenho das metodologias de ensaio imunoenzimático e imunofluorescência indireta para a detecção de anticorpos anticitoplasma de neutrófilos em um contexto de laboratório clínico de rotina. Métodos Foram testadas 227 amostras pelas metodologias de imunofluorescência indireta e ensaio imunoenzimático com especificidades para anticorpos antiproteinase-3 e antimieloperoxidase. As proporções de amostras positivas foram comparadas por hipóteses de McNemar, e a concordância foi descrita pelo coeficiente Kappa de Cohen. Resultados A concordância dos testes foi 96,5%, e o coeficiente Kappa obtido foi 0,70 (IC95%: 0,50-0,90; p<0,001). Utilizando a imunofluorescência indireta como padrão-ouro, a sensibilidade do ensaio imunoenzimático foi de 0,62 e a especificidade, 0,99, com acurácia diagnóstica em 96% dos casos. Algumas amostras apresentaram resultados negativos por ensaio imunoenzimático e positivos por imunofluorescência. Isso ocorreu em amostras com vários padrões de fluorescência, mas particularmente nos casos com padrões atípicos. Duas amostras com positividade antiproteinase 3 foram consideradas negativas por imunofluorescência. Conclusão Os métodos de ensaio imunoenzimático tiveram alta especificidade, mas sensibilidade inferior. A realização da imunofluorescência indireta aumenta a sensibilidade diagnóstica, ao mesmo tempo que a pesquisa de antiproteinase 3 por ensaio imunoenzimático também pode agregar poder diagnóstico.

ABSTRACT Objective To evaluate the performance of enzyme-linked immunosorbent assay and indirect immunofluorescence methods for the detection of antineutrophil cytoplasmic antibodies in a routine clinical laboratory setting. Methods A total of 227 samples were tested by indirect immunofluorescence and enzyme-linked immunosorbent assay with antigen specificity for antiproteinase 3 and antimyeloperoxidase. The proportions of positive samples were compared by McNemar hypotheses and agreement was described by Cohen’s Kappa coefficient. Results The agreement of the tests was 96.5%, and the Kappa coefficient obtained was 0.70 (95%CI: 0.50-0.90; p<0.001). Considering indirect immunofluorescence as the gold standard, the sensitivity of the enzyme-linked immunosorbent assay was 0.62 and the specificity was 0.99, with diagnostic accuracy in 96% of cases. Some samples were negative in enzyme-linked immunosorbent assay and positive in indirect immunofluorescence. This situation occurred in all immunofluorescence patterns, but particularly in atypical patterns. Two samples with antiproteinase 3 positivity were considered negative in indirect immunofluorescence. Conclusion The enzyme-linked immunosorbent assay had high specificity but lower sensitivity. The performance of indirect immunofluorescence increases diagnostic sensitivity, while the search for antiproteinase 3 by enzyme-linked immunosorbent assay may also add diagnostic power.

As neoplasias mamárias são as mais frequentes em cadelas, representando 25 a 30% do total das afecções neoplásicas das fêmeas caninas. Durante a carcinogênese ocorrem várias modificações na expressão de proteínas, como a Cyr61, envolvida na proliferação celular e na angiogênese. Assim, este estudo teve por objetivo determinar o perfil de expressão dessa proteína, por meio da técnica de imunoistoquímica, em glândulas mamárias normais e neoplásicas de cadelas. Para tal, foram selecionados 10 casos de cada um dos diagnósticos: adenoma simples, carcinoma complexo e carcinoma simples sólido, além de 10 fragmentos de glândulas mamárias normais, perfazendo o total de 40 fragmentos. O anticorpo policlonal anti-Cyr61 apresentou marcação em células epiteliais mamárias normais, evidenciando seu papel nos mecanismos de apoptose e proliferação celular. Houve ainda acentuada imunomarcação em tecidos mamários normais e com adenomas, e marcação discreta em carcinomas, diferente do padrão de expressão observado no tecido mamário de mulheres. A expressão constitutiva da proteína Cyr61 foi demonstrada no tecido mamário canino, constituindo uma alternativa de investigação neoplásica para as alterações mamárias de cadelas.

Mammary glands are the most usual sites of tumors in bitches, representing 25 to 30% of all types of cancer. During cancer genesis, several genetic changes alter the expression of different proteins like Cyr61, a peptide involved in cell proliferation and angiogenesis. This work aimed to determine through immunohistochemistry the expression profile of Cyr61 in normal and neoplastic mammary glands from bitches. So, 10 cases of each diagnose were selected: simple adenoma, complex carcinoma, simple solid carcinoma and fragments of normal mammary glands, in a total of 40 cases. Sections were subjected to immunohistochemistry, employing primary antibodies directed Cyr61. Cyr61 labeling of normal mammary epithelial cells is probably linked to its role in apoptosis and cellular proliferation. The labeling was more intense in normal and adenoma fragments and was discrete in the labeling malignant tumor sections, a different feature of expression from previously reports in human breast cancer. Immunohistochemical analysis with polyclonal antibody Cyr61 demonstrated the constitutive expression of the protein and contributed to neoplastic research alternative for tumors in bitches.