RESUMO Quarenta e nove ovos embrionados de Psittaciformes com embriões que morreram durante a incubação foram examinados, provenientes de criatório comercial de aves de espécies exóticas ou nativas, ou provenientes de instituição de conservação de espécies da avifauna. Os ovos foram classificados, de acordo com o momento da morte, em mortalidade precoce, intermediária ou tardia. Conforme a idade embrionária, embriões inteiros ou tecidos embrionários foram coletados para extração de DNA e cultivo bacteriológico em ágar contendo acetato de tálio, soro equino e penicilina. Entre os embriões de espécies exóticas, 37,5% (12/32) foram detectados positivos para Mycoplasma spp. Considerando os embriões das espécies nativas, 52,4% foram detectados positivos (11/21). O DNA de Mycoplasma spp. foi detectado em um filhote de Pionus maximiliani morto na eclosão. Testes adicionais dos embriões e das colônias por PCR, com protocolo específico para M. gallisepticum, não revelaram nenhum resultado positivo. As implicações da presença de Mycoplasma na viabilidade embrionária e de filhotes de espécies de aves comerciais ou de conservação são discutidas.

RESUMO Doença de Marek (MD) é uma desordem linfoproliferativa causada pelo Gallid herpesvirus 2 (MDV), que infecta principalmente galináceos domésticos, porém aves silvestres podem ser ocasionalmente afetadas. O presente relato descreve os achados anatomopatológicos e moleculares de um caso de MD em um pavão-branco (Pavo cristatus). Os sinais clínicos incluíram apatia, hiporexia e diarreia. Macroscopicamente, foram observados nódulos macios, de 0,5 a 1,5cm de diâmetro, no músculo esquelético, no pulmão, nos rins, nos sacos aéreos, no intestino delgado, no coração, no ovário, no ventrículo e no proventrículo. Microscopicamente, numerosas células redondas neoplásicas atípicas foram notadas. A detecção molecular do DNA do MDV foi implementada para amplificar parte do gene meq, e os produtos foram sequenciados para análise filogenética. DNA foi obtido de tecidos de aves afetadas e do sangue de todos os galináceos do zoológico. A esperada amplificação de parte do gene meq de MDV amplificado foi ampliada e sequenciada. As sequências obtidas permitiram o agrupamento da cepa (acesso KT768121) com cepas do sorotipo 1 de MDV do GenBank.. O diagnóstico de MD em pavão-branco foi obtido com base nos achados anatomopatológicos e moleculares e, pelo conhecimento dos autores, não há relatos anteriores publicados de MD em Pavo cristatus.

ABSTRACT Marek's disease (MD) is a lymphoproliferative disorder caused by Gallid herpesvirus 2 (MDV) that infects mainly domestic gallinaceous birds although wild birds may occasionally be affected. The current report describes the anatomopathological and molecular findings of a case of MD in a white-peafowl (Pavo cristatus). The signs included apathy, hyporexia, and diarrhea. Grossly, 0.5 to 1.5cm in diameter, yellow, soft nodules were observed in the skeletal muscle, lung, kidney, air sacs, small intestine, heart, ovary, ventriculus, and proventriculus. Microscopically, numerous atypical round neoplastic cells were noted. The molecular detection of MDV DNA was implemented to amplify part of the meq gene and products were sequenced for the phylogenetic analysis. Template DNA was obtained from tissues of the affected bird and from blood of all the gallinaceous birds of the Zoo. The expected amplicon for the partial amplification of MDV meq gene was obtained and the amplicons were sequenced. Sequences obtained enabled grouping the strain (accession no. KT768121) with MDV serotype 1 strains from the GenBank. Based on the anatomopathological and molecular findings, the diagnosis of MD in a white-peafowl was reached, and to the authors' knowledge, no previous report regarding MD was published in Pavo cristatus.

Objetivou-se avaliar os efeitos da umidade relativa do ar nas incubadoras (URI) e da idade da matriz leve sobre a eclodibilidade, qualidade dos pintos recém-eclodidos e o desempenho da progênie. Foram incubados 10.840 ovos, sendo os tratamentos definidos pela idade das matrizes Lohmann LSL(r) (26, 41 e 56 semanas) e pelos níveis de URI (48, 56 e 64%). Após a incubação, 1.620 pintos fêmeas foram alojados em galpão experimental convencional, de acordo com os tratamentos, até as 12 semanas de idade. Para a avaliação de eclodibilidade sobre ovos férteis e fêmeas refugos, o delineamento experimental foi em blocos ao acaso no arranjo em parcelas subdivididas. A parcela foi a URI (três níveis) e a subparcela foi a idade da matriz (três idades). Os blocos foram constituídos pelos andares dos carrinhos de incubação, em que cada andar continha uma repetição de cada idade da matriz. Os nove tratamentos foram constituídos por 14 repetições cada. As repetições foram bandejas de incubação, constituindo 1.204 ovos por tratamento. Para a avaliação do desempenho das frangas, o delineamento experimental foi inteiramente ao acaso, constituído por um esquema fatorial 3x3 (três níveis de URI e três idades), com seis repetições de 30 aves em cada tratamento. A eclodibilidade sobre ovos férteis foi maior (P<0,05) com a utilização de 56% de umidade relativa do ar durante a incubação, independentemente da idade da matriz; e ovos de matrizes mais velhas (56 semanas) apresentaram eclodibilidade menor (P<0,05), independentemente do nível de umidade relativa do ar no interior das incubadoras. Não foram constatados efeitos da idade da matriz e URI sobre o percentual de pintos refugos. A URI ou a idade da matriz leve não afetam o desempenho da progênie.

The aim of this study was to evaluate the effects of relative humidity in incubators (RHI) and breeder hen age on hatchability, hatchling quality and performance of progeny. 10,840 eggs were incubated, and the treatments were defined by the Lohmann LSL(r) breeder age (26, 41 and 56 weeks) and the levels of RHI (48, 56 and 64%). After incubation, 1,620 female chicks were raised in a conventional experimental shed, according to the treatments, until 12 weeks of age. To assess the hatchability of fertile eggs and unviable female chicks, the experimental design was randomized blocks in split plots design. The plot factor was the RHI and the subplot was the age of the breeder hens. The blocks were made by the floors of the incubation carriages, where each floor contained a repetition of each breeder age. The nine treatments consisted of 14 repetitions each. The repetitions were trays of incubation, with 1,204 eggs per treatment. To evaluate the performance of the progeny, the experimental design was completely randomized, consisting of a 3x3 factorial scheme with six replicates of 30 birds in each treatment. Hatchability of fertile eggs was higher (P<0.05) with the use of 56% relative humidity during incubation, regardless of breeder age, and the eggs from the oldest breeder hens (56 weeks) had lower hatchability (P<0.05), regardless of the level of relative humidity inside the incubator. No effects of breeder age and RHI on the percentage of unviable chicks were observed. The RHI or the age of the breeder hen does not affect the performance of progeny.

Foram analisados os níveis de pCO2, pO2, pH e HCO3 - de embriões e pintos de corte provenientes de matrizes novas e velhas, nos momentos anteriores à bicagem interna e externa da casca e ao nascimento, submetidos a diferentes períodos de transferência para as condições ambientais dos nascedouros. Os tratamentos foram definidos pela idade da matriz (33 e 63 semanas) e pela transferência para o nascedouro (aos 15, 17 e 19 dias). O delineamento experimental foi em parcelas subdivididas, sendo a parcela os três momentos de transferência e a subparcela as duas idades das matrizes. Foram utilizadas seis repetições para cada tratamento, e o embrião ou o pinto foi considerado uma repetição. Os dados normais e homogêneos foram submetidos às análises de variância, e as médias comparadas pelos testes F, de Tukey e SNK. Embriões cujos ovos foram transferidos aos 15 dias para o nascedouro apresentaram melhor equilíbrio ácido-básico durante as fases pré-natal e perinatal. Durante o último terço da incubação, independentemente das diferentes condições ambientais às quais os embriões são submetidos e da idade da matriz, há capacidade de resposta fisiológica que permite uma estabilidade no equilíbrio ácido-básico dos pintos após a eclosão.

We analyzed the levels of pCO2, pO2, pH and HCO3 - in embryos and chicks from young and older breeders, in the moments before internal pipping, external pipping and at hatch and submitted to different periods in the environmental conditions of hatchers. The treatments were defined by breeder age (33 and 63 weeks) and transfer to the hatcher (at 15, 17 and 19 days). The experimental design was split plots with three periods in the hatcher and the plots were the two breeder ages. We used six replicates per treatment and the embryo or chick was considered a repetition. The normal data forms were submitted to analysis of variance and means were compared by F, Tukey and SNK tests. Embryos transferred at 15 days to the hatcher had better acid-base balance during the pre-and perinatal phases. During the last third of incubation, regardless of the different environmental conditions which the embryos are subjected and breeder age, there is physiological responsiveness that allows for stability in acid-base balance of the chicks after hatching.

Descreve-se a ocorrência de Aviadenovirus (FAdV) na avicultura mineira. Foram amostrados fígados de poedeiras jovens (n=25) e velhas (n=25) e de frangos de corte (n=300). Em matrizes pesadas foram amostrados fígados (n=25) e fezes (n=25). O estudo envolveu as principais regiões avícolas do Estado de Minas Gerais. O DNA de FAdV foi pesquisado por PCR universal, descrito para a amplificação do gene que codifica o hexon de Aviadenovirus, usando FAdV Phelps como referência. Foi demonstrada a presença do DNA de FAdV em 100% (25/25) das poedeiras velhas (78 semanas de idade) e em 36% (9/25) das jovens (18 dias). Em frangos de corte, a detecção variou entre 24 e 86%. Embora as fezes das matrizes tenham sido negativas, foi obtido o amplicon específico em 4/25 dos fígados dessas mesmas aves, indicando menor sensibilidade para detecção nas fezes. Em amostras da avicultura familiar (fígado), colhidas de uma das regiões de avicultura intensificada, foi detectado o genoma de FAdV em 100% das galinhas (n=12). A constatação de alta disseminação de FAdV em aves da avicultura industrial e familiar de Minas Gerais contribui para o entendimento da epidemiologia de Aviadenovirus. As sequências nucleotídicas dos produtos de PCR alinharam com FAdV da espécie D de Aviadenovirus. A demonstração de FAdV em reprodutores indica risco de transmissão vertical e reforça a necessidade de biosseguridade estrita nesses plantéis. A presença de FAdV em diversos setores avícolas, incluindo poedeiras comerciais, frangos de corte, reprodutores e galinhas da avicultura familiar, recomenda a biosseguridade estrita entre as criações de mesmo tipo e de tipos diferentes de aves. A detecção em matrizes pode indicar a continuada geração de progênies infectadas.

The occurrence of Aviadenovirus (FAdV) was investigated in chickens from the poultry industry of Minas Gerais state, Brazil. The investigation was conducted due to the scarcity of recent data in the country and its description in neighboring countries. For this purpose, livers were collected from layer chicks (n=25), older layers (n=25), broilers (n=300), and livers (n=25) and stool (n=25) samples from broiler breeders, representing the major poultry regions of the state. FAdV DNA was demonstrated using a previously described PCR protocol for amplifying part of the hexon gene encoding sequence. FAdV was found in layer chicks (36%), widespread (100%) in older layers, and with regional differences in broilers (24-86%). Although all broiler breeder stools were negative, FAdV DNA was detected in livers (16%, 4/25) of stool-negative birds. In order to obtain additional information on the circulation of the infection, livers of subsistence chickens collected from one poultry intensive region, were evaluated (n = 12), with FAdV being detected in all samples. FAdV was found in young and old layers, broilers, broiler breeders and free-range chickens, and results suggest the circulation of FAdV among different types of chickens. The detection in older layer chickens may indicate an extended risk of horizontal transmission in regions of Minas Gerais with mixed activity of egg and meat type chickens and poor biosecurity strategies. The infection in breeders may indicate vertical transmission and the continuous production of infected progenies. The hexon-gene-targeted PCR amplicon sequences aligned with FAdV of species D of Aviadenovirus. Results indicate the necessity for biosecurity, especially for breeders, separating flocks according to origin, age and health status, which will be an advantage regarding any pathogen.

Foram avaliados os efeitos do momento de transferência dos ovos da incubadora para o nascedouro e da idade da matriz pesada sobre o rendimento de incubação. Os tratamentos foram definidos pela idade das matrizes Cobb®, sendo considerados ovos de matrizes novas (33 semanas) e ovos de matrizes velhas (63 semanas), e pelos momentos de transferência da câmara de incubação para os nascedouros (aos 15, 17 e 19 dias). O delineamento experimental foi inteiramente ao acaso em parcelas subdivididas, sendo o fator da parcela os três momentos das transferências e as subparcelas as duas idades das matrizes, com 18 repetições por tratamento. A bandeja com 96 ovos foi considerada a repetição, totalizando 1.728 ovos para cada tratamento. Ovos de matrizes velhas são mais pesados, perdem mais peso durante a incubação e têm percentual de fertilidade menor (P<0,05), qualquer que seja o momento de transferência dos ovos. Independentemente da idade das matrizes, a transferência dos ovos da incubadora para o nascedouro aos 15, 17 ou 19 dias de incubação não interfere na mortalidade embrionária, eclodibilidade e peso dos pintos ao nascimento. É possível adaptar o manejo de transferência à necessidade logística do incubatório ou reduzir o período dos ovos na máquina de incubação para aumentar o fluxo de produção, sem prejuízo ao rendimento de incubação.

We evaluated the effects of the moment of egg transfer to the hatcher and broiler breeder age on the incubation yield. The treatments were defined by Cobb ® broiler breeder age, separating young breeders (33 weeks old) from older breeders (63 weeks old) and the moment of transfer from incubation chamber to the hatcher (at 15, 17 and 19 days). The experimental design was completely randomized split plot. The plots factor was the three times of transfers and the subplots the two breeder ages, with 18 replicates per treatment. A tray of 96 eggs was considered replay, totaling 1728 eggs for each treatment. Eggs from older breeders are heavier, lose more weight during incubation and fertility rate is lower (p<0.05), regardless of the moments of eggs transfer. Regardless of the breeder age, the transfer of eggs from the incubator to the hatcher at 15, 17 or 19 days of incubation does not interfere in embryonic mortality, hatchability and chick weight at hatch. You can adapt the transfer management to the logistic needs of the hatchery or reduce the period of egg incubation in the machine to increase the flow of production with no losses in incubation yield.

Avaliou-se a ocorrência de Orthoreovirus (ARV) e Rotavirus (AvRV) aviários na avicultura industrial de Minas Gerais. Foram colhidas cinquenta e quatro amostras de fezes de frangos de corte entre um e 45 dias e de frangas de postura de 10 a 13 semanas de idade. Para análise de ARV, o RNA foi imediatamente extraído (Trizol), transcrito em cDNA e avaliado em uma PCR com oligonucleotídeos iniciadores específicos para ARV. Para a investigação de AvRV, os extratos de RNA foram obtidos por fenol-clorofórmio e submetidos à eletroforese em gel de poliacrilamida. Todas as amostras foram também avaliadas para o DNA do vírus da anemia das galinhas (CAV) em uma nested-PCR específica. Em frangos de corte, a positividade encontrada para ARV foi de 5,55% e para AvRV de 9,25%. CAV foi detectado em coinfecção em um plantel com refugagem, claudicação e prostração. Nenhuma amostra de poedeiras foi positiva para ARV ou AvRV. Material de plantel com sinais clínicos foi purificado e inoculado em ovos SPF embrionados, sendo obtidas lesões hemorrágicas e focos brancos na membrana cório-alantóide. O sequenciamento dos produtos de PCR e de embrião agrupou os isolados de ARV com a estirpe S1133, historicamente usada como vacina viva. Os resultados sugerem a continuada circulação da infecção por estirpes assemelhadas a ARV S1133 nas regiões de avicultura industrial. Os índices de detecção de ARV, AvRV e CAV indicam que a intensificação nas regiões produtoras tem resultado em falhas de biosseguridade.

Fifty-four fecal samples taken from broiler chickens from 1 to 45 days of age, and of pullets from 10 to 13 weeks of age, original from eight different poultry regions in the state of Minas Gerais, Brazil, were collected from March 2008 to January 2010 for avian Orthoreovirus (ARV) and avian Rotavirus (AvRV) analyses. For the assay of ARV, RNA was immediately extracted (Trizolâ) and transcribed into cDNA for assaying in a nested-PCR with ARV-specific primers. For AvRV, polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) was performed with RNA extracts obtained by phenol-chloroform extraction. CAV was additionally investigated through a nested-PCR of thymus and spleen. Results found 5.55% positive for ARV and 9.25% for AvRV. Also, CAV and ARV genomes were detected in co-infection, in a highly prostrated and claudicating chicken flock. No ARV or AvRV infections were detected in pullets. Material of a clinically affected flock was inoculated into SPF embryos, resulting in embryonic hemorrhage, whitish foci in the chorio-allantoic membrane and death. Sequencing of ARV amplicons and isolate cDNA grouped local strains with the ARV S1133 strain, historically used in live vaccines, suggesting the continued circulation of this vaccine virus strain in intensive poultry regions. Detection rates for ARV and AvRV, as well as the presence of CAV, were additionally indicative of failing biosecurity strategies for the intensive poultry regions examined.

Foi realizado um estudo sobre qualidade da casca dos ovos incubáveis provenientes de matrizes pesadas com diferentes idades, por meio da avaliação da relação entre peso da casca e peso do ovo e análises de peso específico, espessura, porosidade, resistência e microscopia eletrônica. Os dois tratamentos foram definidos pela idade da matriz, sendo considerados ovos de matrizes novas - 33 semanas - e de matrizes velhas - 63 semanas. Os ovos de matrizes com 33 semanas foram mais leves, e o número de poros por cm² foi menor que o de ovos das aves mais velhas. Ovos de aves com 63 semanas apresentaram menor percentual de casca em relação ao peso do ovo, menor peso específico e menores resistência e espessura da casca. A proporção das membranas da casca em relação à sua espessura total foi maior nas matrizes mais novas. Concluiu-se que ovos de matrizes velhas têm qualidade de casca inferior aos ovos das matrizes novas e que as membranas da casca nos ovos de matrizes novas desempenham papel relevante em sua estrutura.

We conducted a study on eggshell quality from Cobb® broiler breeders at different ages by assessing the relationship between eggshell weight and egg weight and analysis of specific weight, thickness, porosity, strength and electron microscopy. Both treatments were defined by broiler breeder age, considering eggs from young breeders (33 weeks) and eggs from old breeders (63 weeks). It was observed that eggs from breeders at 33 weeks have lower weight and number of pores per cm² compared with eggs from older birds. 63 weeks broiler breeders had lower percentage of eggshell in relation to egg weight, lower specific weight, strength and thickness, when compared with eggs from young breeders. The proportion of shell membranes in relation to its total thickness was significantly higher in young breeders. It was concluded that eggs from older broiler breeders have lower eggshell quality than the young breeders. The shell membranes in young breeder's eggs play a significant role in its structure, making it necessary to focus on this layer in future studies on eggshell quality and their relationship between breeder age and incubation yield.

Vacinas avícolas vivas comerciais produzidas entre 1991 e 2005 foram examinadas para a presença de genomas dos vírus da anemia infecciosa das galinhas (Gyrovirus CAV), da hepatite por corpúsculo de inclusão (Aviadenovirus FAdV) e da artrite viral/síndrome da má absorção (Orthoreovirus aviário ARV). Vinte e seis partidas de vacinas vivas liofilizadas de oito fabricantes com lacre original foram examinadas. As extrações de DNA e PCR de CAV e FAdV, e de RNA e RT-PCR para ARV, foram descritas previamente. Contaminações triplas de ARV, CAV e FAdV foram detectadas em vacinas de mesmo fabricante, produzidas em 1991 e 1992 contra a doença de Newcastle (DN), e para a encefalomielite aviária, produzida em 1994. ARV e CAV em co-infecção foram encontrados em vacinas contra a doença de Marek liofilizadas produzidas em 1996 por dois fabricantes diferentes. Genoma de ARV foi detectado em vacinas contra a bronquite infecciosa de setembro e dezembro de 1998, doença infecciosa bursal, de dezembro de 1998 e DN de janeiro de 1998. Três dos oito fabricantes apresentaram vacinas com contaminação e cinco nunca apresentaram vacinas contaminadas. Nenhuma vacina produzida a partir de 2001 apresentou contaminação. Cogita-se um papel epidemiológico para vacinas vivas, como fonte de infecção para ARV, CAV e FAdV e, potencialmente determinante da atual alta disseminação destes.

Clostridium perfringens é um habitante normal da microbiota intestinal de frangos, sendo um agente potencialmente patogênico, causador de enterite necrótica e colangio-hepatite. A concentração inibitória mínima (CIM) de sete drogas utilizadas na terapêutica, como agentes promotores de crescimento ou na prevenção de coccidiose foi determinada pelo método de diluição em ágar para 55 estirpes de C. perfringens isoladas do intestino de frangos de corte. Todas as estirpes revelaram alta sensibilidade à penicilina, avilamicina, narasin e monensina, apenas 7,3% demonstraram CIM intermediário para lincomicina e 89.1% foram consideradas sensíveis. Para tetraciclina e bacitracina, 41,8% e 47.3% das amostras, respectivamente, foram consideradas resistentes.

Clostridium perfringens is a normal inhabitant of the intestinal tract of chickens as well as a potential pathogen that causes necrotic enteritis and colangio hepatitis. The minimum inhibitory concentration (MIC) of seven different compounds used for therapy, growth promotion or prevention of coccidiosis was determined by agar dilution method for 55 C. perfringens strains isolated from the intestines of broiler chickens. All strains showed high susceptibility to penicillin, avilamycin, monensin and narasin. Only 7.3% of the strains showed an intermediated sensitivity to lincomycin, and 49 (89.1%) were considered susceptible. For tetracycline and bacitracin, 41.8% and 47.3% of strains, respectively, were considered resistant.

A técnica de imunoperoxidase em monocamada de células (IPMC) para demonstração de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (CVS2) foi empregada para a investigação sorológica em oito granjas de suínos destinadas à produção comercial. Das 240 amostras de soros testadas, 229 (95,4%) foram reagentes com títulos que variaram de 20 até 10.240. Títulos de anticorpos foram detectados nas faixas etárias de duas a três semanas até animais acima de 24 semanas e encontrados em granjas com e sem a síndrome multissistêmica do definhamento (SMD). A média dos títulos de anticorpos revelou diferenças estatísticas (P<0,05) nas faixas etárias de 11 a 13 e 14 a 22 semanas nos animais oriundos de granjas com e sem a SMD. Os resultados refletem a importância de conhecer o perfil sorológico do rebanho e assegurar a implantação de um efetivo cronograma de vacinação contra o CVS2.

The immunoperoxidase in monolayer cells (IPMC) technique for the demonstration of antibodies against type 2 porcine circovirus (PCV2) was used for the serological investigation in eight industrial swine farms. Out of the 240 tested sera, 229 (95,4%) were reactive with titers which varied from 20 up to 10.240. Titers of antibodies were detected in pigs from two to three weeks of age up to above 24 weeks of age, and were observed in farms with and without clinical signs indicative of the post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). Analysing the mean titers, statistical differences (P<0.05) were evidentiated in two age intervals, of 11 to 13 and 14 to 22 weeks of age. The results indicate the importance of determining the serological profiles of commercial swine herds, in order to enable the implantation of effective hygiene and vaccination protocols for PCV2 prevention.

An indirect ELISA for the detection of japanese quail IgG specific to Newcastle disease virus (NDV) was developed. The secondary anti-quail IgG was produced in Balb/c mice, by inoculating Freund's complete adjuvant emulsified japanese quail-IgG extract. The purification of IgG was achieved using the caprilic acid method. The ELISA was compared to the haemagglutination-inhibition (HI) test for antibodies to NDV. ELISA cut-off point was established through TG-ROC analysis. Total correlation was observed between the ELISA and the HI, being the ELISA efficient in the identification of positive and negative sera, with high sensitivity and specificity (100%). These results validate the use of the indirect ELISA as an alternative for the detection of NDV-specific IgG in japanese quail sera, with the advantage of high sensitivity and automation.

Vinte e nove pintos SPF de um dia foram inoculados com o vírus da doença infecciosa da bursa de Fabricius (VDIB) para avaliar a ocorrência precoce de apoptose e a expressão da proteína viral 2 (VP2) e da enzima gliceraldeído fosfato dehidrogenase (GAPDH). Os animais foram distribuídos em cinco grupos: 1-controle; e 2 a 5- com 24, 48, 72 e 96 horas pós-inoculação, respectivamente. Fragmentos da bursa de Fabricius foram colhidos para processamento histológico e extração de RNA. Lâminas coradas em HE e TUNEL (marcação in situ da fragmentação do genoma com transferase terminal de deoxinucleotídeo) foram utilizadas na morfometria do índice apoptótico. Amostras de mRNA foram testadas para a expressão dos genes VP2 e GAPDH utilizando-se transcrição reversa e RT-PCR. Utilizou-se um kit SYBR GREEN PCR, e a reação foi desenvolvida em ABI Prism 7000 SDS. Os índices apoptóticos cresceram progressivamente indicando uma relação na atrofia bursal causada pelo VDIB. Paralelamente, os resultados da PCR em tempo real demonstraram queda da carga viral nas células linfóides da bursa nos diferentes intervalos de tempo do experimento. Esses resultados sugerem um papel protetor da apoptose na diminuição da replicação viral.

Twenty-nine SPF 1-day-old chicks were inoculated with infectious bursal disease virus (IBDV) to evaluate early apoptosis and the expression of viral protein 2 (VP2) and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenease (GAPDH). Five groups were formed: G1-control -and G2 to G5, - 24, 48, 72 and 96 hours post inoculation, respectively. Half of each BF was fixed and processed by routine techniques. To quantify apoptosis, 5µm-thick sections were stained with HE and submitted to TUNEL (terminal transferase UDP nick end labeling) technique. mRNA was extracted from pooled samples of 3 animals/group and used for the expression of VP2 and GADPH genes using the reverse transcription and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). A SYBR GREEN PCR kit was used and the reaction was carried out in an ABI Prism 7000 SDS. Apoptotic indexes progressively increased indicating a role of IBDV in inducing hypotrophy of the BF. Also, it was showed that as long as apoptosis increased, viral protein expression decreased, which suggests that apoptosis plays a role as a defense mechanism against viral replication.