Abstract Plant growth-promoting rhizobacteria strains from special formulations have been used to optimize eucalyptus cutting production. To undertake quality control for the formulated products, the rhizobacterial strains should be characterized to assess their purity and authentication. In the present study, we characterized nine strains of rhizobacteria, including three Bacillus subtilis (S1, S2 and 3918), two Pseudomonas sp. (MF4 and FL2), P. putida (MF2), P. fulva (Ca), Frateuria aurantia (R1), and Stenotrophomonas maltophilia (CIIb). The strains were differentiated by colony morphology after 24 h of incubation in three different solid state culture media (glucose-nutritive agar, 523 medium and yeast extract-mannitol agar), sensitivity to a panel of 28 antibiotics (expressed according to the formation of inhibition halos of bacterial growth in the presence of antibiotics), and PCR-RFLP profiles of the 16S rDNA gene produced using nine restriction enzymes. It was possible to differentiate all nine strains of rhizobacteria using their morphological characteristics and sensitivity to antibiotics. The molecular analysis allowed us to separate the strains CIIb, FL2 and R1 from the strains belonging to the genera Bacillus and Pseudomonas. By using these three methods concomitantly, we were able to determine strain purity and perform the authentication.

Este trabalho teve como objetivo avaliar a ocorrência, isolar e identificar fungos micorrízicos arbusculares associados à cultura da mandioca (Manihot esculenta). Amostras de solo rizosférico e de várias partes da planta (raízes, tubérculos, manivas e folhas) de locais nos Estados do Rio de Janeiro, São Paulo e Paraná, foram inoculadas nos meios LGI-P, NFb-malato e NFb-GOC, avaliando-se o número mais provável de células e a atividade de redução de acetileno. Bactérias diazotróficas foram isoladas de todas as partes da planta, com exceção das folhas, sendo identificadas como Klebsiella sp., Azospirillum lipoferum e uma bactéria denominada "E", provavelmente pertencente ao gênero Burkholderia. A Bactéria E acumulou de 7,63 mg a 14,84 mg de N/g de C em meio semi-sólido, isento de N, e conseguiu manter a capacidade de fixação biológica de N, mesmo após uma dezena de repicagens consecutivas. A colonização micorrízica variou de 31% a 69%, e a densidade de esporos de 10 a 384 esporos/100 mL de solo, predominando as espécies Entrophospora colombiana e Acaulospora scrobiculata no Rio de Janeiro, A. scrobiculata e Scutellospora heterogama no Paraná e em Piracicaba (São Paulo) e A. appendicula e S. pellucida em Campinas (São Paulo).

This study was performed to evaluate the occurrence and to isolate and identify diazotrophic bacteria and arbuscular mycorrhizal fungi associated with the cassava (Manihot esculenta) crop. Samples from rhizospherical soil, roots, tubers, stems and leaves from several localities of the States of Rio de Janeiro, São Paulo and Paraná, in Brazil, were inoculated in three media specific for diazotrophic associative bacteria, LGI-P, NFb-malate and NFb-GOC, evaluating the most probable number of cells and the acetylene-reducing activity. Diazotrophic bacteria were detected in all plant parts except for the leaves, and were identified as Klebsiella sp., Azospirillum lipoferum and a bacterium called "E", probably belonging to the Burkholderia genus. Bacterium E was able to accumulate, in the N-free semi-solid media, from 7.63 to 14.84 mg of N/g of C and to maintain N fixation capacity after ten consecutive transferences. Mycorrhizal root colonization varied from 31% to 69% and spore density from 10 to 384 spores/100 mL of soil, predominating the species Entrophospora colombiana and Acaulospora scrobiculata in Rio de Janeiro,A. scrobiculata and Scutellospora heterogama in Paraná and in Piracicaba (São Paulo), and A. appendicula and S. pellucida in Campinas (São Paulo).

O ensaio foi efetuado durante dois anos consecutivos na Estação Experimental de Ribeirão Preto, em latossolo roxo cultivado com soja IAC-11. O experimento foi em parcelas subdivididas com os tratamentos das parcelas principais dispostos em blocos ao acaso, com quatro repetições, sendo estudados os tratamentos seguintes: linuron, nas doses 1,00 e 2,00 kg/ha; orizalina, nas doses 1,875 e 3,75 kg/ha e duas testemunhas sem herbicidas; nas subparcelas, estudaram-se as épocas de amostragem. As sementes de todas as parcelas tratadas com herbicida e uma das testemunhas foram inoculadas com Bradyrhizobium japonicum estirpe SMS-443 (= 29W). Foi feita a comparação quanto à sensibilidade dos bioensaios usando os métodos de Parker e Santelman. Verificou-se que, para a detecção de orizalina, o método de Parker foi o mais sensível, ocorrendo o inverso para o linuron. Em condições de campo, a perda da atividade da orizalina, nas doses de 1,875 e 3,75 kg/ha, foi lenta, tendo persistido no primeiro ano até 112 dias após a aplicação, enquanto, no segundo ano, as mesmas doses ainda reduziam 50% o crescimento da planta-teste até 84 e 145 dias respectivamente. Neste segundo ensaio, o final da persistência no solo para ambas as doses de orizalina ocorreu aos 390 dias da aplicação. Quanto ao linuron, embora sua fitotoxicidade inicial fosse bastante elevada, no primeiro ano, aos 42 dias, não havia mais sintoma de fitotoxicidade devido a qualquer uma das doses. No segundo ano, na aplicação de 1,00 kg/ha, aos 28 dias, o produto havia-se degradado em nível não detectado pela planta-teste, o que ocorreu para a dose de 2,00 kg/ha somente aos 70 dias.

The trial was carried out during two sequential years in Ribeirão Preto Experimental Station, State of São Paulo, Brazil, in a Dusky Red Latosol cultivated with soybean IAC-11. Using a split-plot design; two dosages of linuron (1.00 and 2.00 kg/ha) and oryzalin (1.875 and 3.75 kg/ha) were compared with two control treatments: one inoculated with Bradyrhizobium japonicum strain SMS-443 (= 29W), and the other without inoculation. The experimental design was a randomized complete block-design with four replicates. The subplots were sampled on different days. The sensibility of Parker's and Santelman's methods for lab biossay was compared. The Parker's method performed more responsible for oryzalin while Santelman's for linuron. Under field conditions, the loss of activity of oryzalin was slow, persisting in the first year up to 56 and 84 days, for 1.875 and 3.75 kg/ha, respectively. In the second year, these dosages still decreased the plant-test growth in more than 50% at 84 and 145 days, respectively. Only after 390 days post applications oryzalin stopped affecting the plant growth. Although the initial phytotoxicity of linuron was very high, in the first year, there were no phytotoxicity symptom at 45 days in both dosages. In the second year, linuron was not detected at 28 days for the dosage of 1.0 kg/ha and at 70 days for the dosage of 2.0 kg/ha.

Em ensaio de herbicidas na cultura do amendoim (Arachis hypogaea L.), realizado em Ribeirão Preto, SP, em 1984/85, sem o uso de inoculante, não foram encontrados nódulos nos diferentes tratamentos. Como é comum sua presença em amendoim nessa região, suspeitou-se que os herbicidas utilizados pudessem ter efeito inibitório na nodulação. Avaliou-se, então, o efeito de alachlor, linuron, oxadiazon, pendimetalin e trifluralin aplicados na dose recomendada, na nodulação e na atividade da nitrogenase, durante dois anos consecutivos, usando-se sementes inoculadas e não inoculadas. Foram feitas amostragens aos 28, 42, 63, 84 e 105 dias após a semeadura, observando-se nodulação abundante, em todos os tratamentos, e reduções ocasionais na nodulação e na fixação do nitrogênio, porém não consistentes nas diversas amostragens. A atividade da população nativa de Rhizobium em geral permaneceu num nível maior do que nos tratamentos com inoculação. Embora alguns herbicidas tenham afetado a nodulação e a fixação do nitrogênio, não houve influência na produção de grãos.

No nodules were found in a peanut herbicide trial held at Ribeirão Preto, State of São Paulo, Brazil, during the growing season 1984/85. Since spontaneous nodulation is commom in this region, a hypotheses was raised that herbicides could have an inhibitory effect on nodulation. To test the effect of herbicides on nodulation and nitrogenase activity an experiment was carried out on two consecutive years, using a factorial design with two factors: a) five herbicides (alachior, linuron, oxadiazon, pendimethalin and trifluralin) applied in usual dosages and a control without herbicide and b) with and without Bradyrhizobium inoculation. Samples were collected at 28, 42, 63, 84 and 105 days after planting. The results showed that nodulation was abundant in all treatments. Nitrogenase activity in the non inoculated treatments persisted for a longer period than in the inoculated ones. Although some herbicides reduced nodulation and nitrogen fixation, peanut grain production was not affected.

Foram realizados testes em meio de cultivo acidificado para avaliar a tolerância de 59 estirpes de Bradyrhizobium sp. isolados de Mimosoideae. As culturas, por via de regra, apresentaram crescimento rápido e alcalinização do meio. Das estirpes testadas, dez apresentaram crescimento em meio com valor de pH 4,6 (três, crescimento rápido; um, médio e seis, lento). Destas, oito não induziram alteração visual na cor do indicador bromotimol-azul incluído no meio. A estirpe SMS-513, uma entre essas oito, promoveu acidificação no meio com valor de pH 6,2, sendo considerada tolerante à acidez. Algumas estirpes cresceram em meio de cultura acidificado, somente com alta concentração inicial de células.

Fifty-nine Bradyrhizobium sp. strains isolated from Mimosoideae subfamily of Leguminosae were tested on acidified agar medium. Most strains were found to be fast growing and alcalinized the medium. Ten strains grew on pH 4.6; out of them, three were fast growing, six were slow growing and one was intermediate. Eight of the tested strains did not induce visual changes in the bromothymol-blue indicator. The strain SMS-513 acidified the medium with pH 6.2, and was considered acid tolerant.

Conduziu-se um experimento para testar a compatibilidade dos fungicidas captã, PCNB e tirã com a inoculação de sementes de amendoim, cujo tratamento se efetuou simultaneamente com a inoculação ou dez dias antes desta. No momento da inoculação e quatro horas após, fez-se uma contagem de Rhizobium nas sementes, pelo método da diluição e inoculação de gotas em placas, mantendo-se um controle sem aplicação de fungicida. Para se estudar o efeito dos tratamentos na nodulação e fixação, plantaram-se as sementes em solo esterilizado, avaliando-se a nodulação e o teor de ureídeos nas folhas. Somente o captã aplicado simultaneamente à inoculação foi prejudicial à sobrevivência bacteriana nas sementes. De maneira geral, a aplicação dos fungicidas simultaneamente à inoculação mostrou-se prejudicial em relação à antecipada.

An experiment was carried out to test the compatibility between peanut seed treated with the fungicides captan, PCNB and thiram with rhizobia inoculation. The application of the fungicides was done either simultaneously or ten days before the inoculation of the seeds. A control, without inoculation, was included. Countings of rhizobia on the seed were made immediately after inoculation and four hours after, by dilution and drop plating technique. In order to study the effect of treatments on nodulation and nitrogen fixation, treated and untreated seeds were planted in gamma irradiated soil and nodulation and leaf ureid content were later evaluated. It was observed that only captan applied to the seed simultaneously with inoculation was significantly deleterious to survival of the rhizobia. In general the application of the fungicide ten days before inoculation caused no significant harmfull effect to survival of rhizobia on the seed.

A adição de vinhaça na cultura canavieira tem sido praticada em áreas próximas às usinas de cana. Seria de interesse a avaliação do efeito da vinhaça no Rhizobium presente no solo (autóctone), uma vez que leguminosas têm sido indicadas para cultivo intercalar com a cana. Um experimento foi conduzido em casa de vegetação, com o objetivo de verificar a influência da aplicação contínua, durante três anos, de concentrações crescentes de vinhaça (0, 100 e 1.000 m³/ha/ano), com intervalos de seis meses entre aplicações, na população autóctone de Rhizobium que nodula amendoim, soja, feijão e crotalária. Em cada cultura, foram usados controle com solo sem adição da vinhaça e um tratamento inoculado com uma estirpe de Rhizobium de conhecida eficiência, recomendada para a cultura. Uma análise do efeito de uma dose adicional de 1,5 ppm do herbicida 2,4-D no tratamento com 100 m³/ha/ano foi também efetuada. Apesar de os resultados serem variados entre as culturas, ocorreram efeitos da vinhaça sobre a população de Rhizobium, causando aumentos de nodulação na crotalária e diminuição no amendoim. Não foram observados efeitos na nodulação do feijoeiro em nenhum dos tratamentos com a vinhaça, nem na soja, que nodulou somente com a dose mais elevada, sugerindo que o Rhizobium japonicum no solo estudado estava presente em baixo número. O tratamento com herbicida mostrou tendência de favorecer a nodulação e, conseqüentemente, a fixação biológica de N2, medida através do N na planta.

The addition of vinasse on sugar cane plantations nearby alcohol fermentation plants is a common practice. Legumes are recommended to be intercropped with sugar cane. A greenhouse experiment was carried out with the objective of verifying the influence of continuous application of vinasse (0; 100 and 1000 m³/ha/year) at six month interval during three years on soil rhizobia which nodulate peanuts, soybeans, dry-beans and crotalaria. Controls without vinasse and with efficient Rhizobium sp. strain were maintained. The effect of 2,4 D application on the 100 m³ vinasse/ha treatment was also studied. Although results were variable and dependent on crop, the addition of vinasse influenced the rhizobia population, causing for instance, reductions on nodulation of peanuts and increases on that of crotalaria; no effects were observed either on drybeans or soybeans. Indigenous population of soybean Rhizobiun was inexpressive. The herbicide treatment showed tendency to favour nodulation and consequently N2 fixation.

Um experimento foi instalado a campo num Latossolo Vermelho-Escuro distrófico textura argilosa, da Estação Experimental de Limeira, em Cordeirópolis, SP, do Instituto Agronômico, para avaliar a atividade respiratória desse solo, quando enriquecido com vinhaça e tratado com o herbicida 2,4D. A vinhaça fora aplicada por quatro vezes, de seis em seis meses, em doses de 0, 100 e 1.000 m³/ha, sendo as determinações feitas seis meses após a última aplicação. O herbicida foi aplicado imediatamente antes do início das determinações das atividades respiratórias e, o solo, mantido livre de vegetação. A atividade respiratória foi avaliada, medindo-se o CO2 coletado em solução de KOH, em câmaras cilíndricas de PVC, em turnos de doze horas, durante quatro dias. As maiores taxas de CO2 (77,5 mg CO2/m².h) foram observadas no período diurno, e estiveram relacionadas com as temperaturas mais elevadas. Mesmo aos seis meses da aplicação da vinhaça, observou-se maior atividade respiratória nos tratamentos com o resíduo. O herbicida 2,4D, na dose de 3,0 litros /hectare, não influenciou a atividade respiratória.

A field experiment was carried out on a clayey dystrophic Dark-Red Latosol at the Limeira Experimental Station of the Instituto Agronômico (Cordeirópolis, State of São Paulo, Brazil), to evaluate the respiratory activity of the soil when enriched with stillage and treated with the herbicide 2,4D. Stillage was applied three times with a six month interval at 0, 100, and 1,000 m³/ha, and the CO2 evolution measurements began six months after the last application. The soil was maintained free from vegetation all over the experiment. The CO2 was trapped by KOH in PVC cilindric chambers, and collected every 12 hours for analysis, during four days. Highest CO2 evolution rates (77.5mg CO2/m².h) were observed in daytime. Even six months after stillage application, the rate of CO2 evolution was higher in treated soils. The herbicide, applied at 3,0 l/ha, showed no significant influence on soil respiratory activity.

Existe, nas nossas condições, uma população autóctone de Rhizobium capaz de nodular o amendoim (Arachis hypogaea L.), mas pouco se sabe da contribuição do nitrogênio fixado para esta planta. Foram conduzidos dois ensaios no campo, em solo de baixa fertilidade, um no período "da seca" e outro no "das águas", comparando o crescimento e a produção de plantas de amendoim inoculado com Rhizobium selecionado, com o de plantas noduladas pela população autóctone, adubadas ou não com nitrogênio. A nodulação das plantas inoculadas foi semelhante à observada nos tratamentos não inoculados, com ou sem nitrogênio. Na fase final do ciclo das plantas, houve maior acúmulo e maior taxa de absorção diária de nitrogênio nos tratamentos inoculados ou com adubação nitrogenada, do que no controle sem inoculação e sem nitrogênio. No ensaio da seca, não houve aumento de produção devido à adubação nitrogenada, ou à inoculação. No ensaio das águas, houve resposta à aplicação de nitrogênio no plantio. Os resultados de produção não foram coerentes com os da marcha de absorção de N. A produção de ensaio das águas foi equivalente a 3.400 kg/ha para o tratamento sem nitrogênio e sem inoculação.

Two field experiments were carried out with peanut in the same area on a limed and fertilized "cerrado soil" (originally acidic and low fertility). The first experiment was carried out in the autumn/winter (dry season), and the second one in the subsequent spring/summer (wet season), in Campinas, State of São Paulo, Brazil. Plant development and production of inoculated (three Rhizobium strains) and nitrogen fertilized treatments (at planting 25 and 45 days after planting) were compared with non-inoculated and non-N-fertilized control. Nodulation of inoculated plants was similar to those of non-inoculated, with or without nitrogen. Greater accumulations, and rates for average daily uptake of nitrogen were observed for inoculated as well as for nitrogen fertilized plants, as compared to the control. In the autumn/winter experiment there was no increase in pod production neither due to nitrogen or to inoculation. In the spring/summer experiment however, the pod production was higher with nitrogen (30kg/N/ha) at planting, although higher nitrogen accumulations in plant shoots (sampled 84 days after planting) were observed treatments with two of the three inoculated strains.

Um ensaio foi conduzido em casa de vegetação, com solução nutritiva isenta de N, com o objetivo de selecionar estirpes de Rhizobium eficientes fixadoras de N2, quando associadas com amendoim (Arachis hypogaea L.) cultivar Tatu. Foram testadas 35 estirpes de Rhizobium sp., isoladas de quinze diferentes espécies de leguminosas tropicais, e incluído um tratamento de inoculação com solo previamente cultivado com amendoim. Das 35 estirpes testadas, doze formaram nódulos e, entre essas, sete foram eficientes fixadoras de nitrogênio. Das doze estirpes que nodularam, sete foram isoladas de leguminosas da tribo Hedysareae (à qual pertence o género Arachis) e, destas, apenas quatro foram eficientes fixadoras de nitrogênio. O peso e o número de nódulos não se mostraram como critérios adequados para avaliação da eficiência.

An experiment was carried out in Leonard jars, in the greenhouse, with nitrogen-free nutrient solution to test the efficiency of 35 strains of rhizobia isolated from 15 species of tropical legumes. Twelve of the tested strains were capable of nodule formation in peanut. Seven of those strains were isolated from the trible Hedysareae, which includes the genus Arachis. Only four of the rhizobia strains with inducing nodulation were effective. Dry weight and number of nodules were not good criteria for evaluating effectiveness.

Foi conduzido um ensaio em solução nutritiva sem nitrogênio, com condições assépticas, usando-se como inoculantes para as plantas amostras de solos LR e LB coletadas em locais já cultivados e não com soja, com o objetivo de verificar a presença de Rhizobium capaz de nodular o cultivar santa-rosa. Verificou-se que solos ainda não cultivados com a leguminosa são desprovidos de Rhizobium japonicum, e também que essa bactéria é encontrada em solos previamente cultivados, fixando nitrogênio em quantidades equivalentes à de uma estirpe selecionada.

An experiment was carried out in Leonard jars using Latosolic B Terra Roxa and Dark Red Latosol soil samples as inoculum to detect the presence and efficiency of rhizobia able to nodulate cultivar Santa-Rosa of soybean (Glycine max. (L) Merrill). Results have shown that no rhizobia were present in those soils. Rhizobium japonicum with efficiency comparable to a selected strain survived in the same soils, when they were previously cropped with inoculated soybeans.

Um experimento foi conduzido em casa de vegetação, em vasos de Leonard com solução nutritiva sem nitrogênio, em condições assépticas, com os objetivos de pré-selecionar treze estirpes de Rhizobium japonicum e verificar o grau e especificidade das variedades santa-rosa, viçoja e IAC-2 (Glycine max (L.) Merril.). Pela observação do nitrogênio total fixado aos 58 dias, verificou-se que as estirpes SMS-64 (= 513 Re, RS), SMS-65 (= 519 Re, RS), SMS-68 (= 532c, RS = PR-G3, IBPT, PR) SMS-309 e SMS-310, são igualmente eficientes nas três variedades. Houve correlação entre o peso seco das plantas e o nitrogênio fixado, porém a diferenciação das estirpes pelo peso seco das plantas perdeu em sensibilidade. A nodulação não foi critério satisfatório para separar estirpes eficientes. Para o conjunto de estirpes eficientes em pelo menos uma das variedades estudadas, verificou-se que viçoja apresentou menor especificidade, estabelecendo simbiose eficaz com nove das estirpes testadas.

An experiment was carried out with "santa-rosa, "viçoja", and "IAC-2" soybean varieties (Glycine max (L.) Merril), in nutrient solution (Leonard jars) with the objectives of pre-selection of thirteen Rhizoblum japonicum strains, and verification of the degree of specificity of the soybean varieties. After a fifty eight days growth period it was observed, from the nitrogen fixed, that strains n.° SMS-64, SMS-65, SMS-68, SMS-309, and SMS-310 were equally efficient on the three varieties. Some strains were efficient in two, and others in only one variety. Strain SMS-333 did not form nodules on "IAC-2", but was efficient on the other varieties. The total plant dry weight was not as good criteria as the total nitrogen, for the strain differentiation, although total nitrogen and dry weight were correlated. Nodulation (nodule number, or dry weight) was not a good criterion for strain selection.

Um experimento para estudar efeitos da calagem e da adubação mineral sobre o desenvolvimento da cultura de soja (Glycine max (L.) Merrill) foi conduzido em solo de várzea, rico em matéria orgânica, localizado na Estação Experimental do Serviço do Vale do Paraíba, em Pindamonhangaba. Foram aplicadas doses crescentes de calcário, combinadas com diferentes niveis de fósforo e potássio, sendo também incluídos molibdênio e boro (micronutrientes), em alguns tratamentos. Verificou-se efeito favorável da calagem na produção de matéria seca e no teor de nitrogênio total da parte aérea das plantas. Não se observaram, todavia, diferenças nesses valores, por influência de dosagens do corretivo. A resposta favorável ao fósforo verificou-se apenas para o maior nível de adubação fosfatada, quer na ausência de calcário, quer dentro do menor nível de calcário, quando o fósforo foi aplicado junto ao potássio. As aplicações de potássio, molibdênio e boro não afetaram o desenvolvimento da cultura. A análise química do solo, feita periodicamente para todos os tratamentos, mostrou variações significativas nos valores de pH, em função do tempo, mesmo nas áreas que não receberam calcário. Verificou-se, ainda, que até aos 162 dias após a calagem não houve neutralização de todo o alumínio trocável.

A field experiment was carried out on a soil rich in organic matter to study the influence of lime and fertilizers on the production of soybean dry matter and on the soil chemical properties. Three rates of lime (2.3, 4.6 and 6.9 t/ha), combined with two rates of superphosphate and one rate of potassium chloride were employed. Molybdenum and boron were also applied in some treatments. Neutralization of Al3+ was not completed 162 days after liming. A time dependent pH variation was observed in the absence and presence of liming. Dry matter and total nitrogen were increased by liming, but no differences were observed among liming rates. In the presence of lime the response to phosphorus was observed at the higher rate but only when potassium was also applied and for the lower liming rate; in the absence of lime only the higher rate of P application was effective, irrespective of the presence of potassium. Applications of K, Mo, and B did not increase the production.