Resumo Leucojum aestivum é uma espécie valiosa e ameaçada de extinção com escamas de bulbo mais adequadas como explantes em micropropagação. No presente estudo, a micropropagação foi investigada utilizando dois explantes diferentes e várias concentrações e combinações de reguladores de crescimento de plantas (RCPs). Os bulbos foram primeiro desinfetados com benomyl® por 5 horas. Após atender aos requisitos de resfriamento, explantes de duas e quatro escalas foram fornecidos para organogênese direta e indireta. Os explantes foram expostos a água quente, etanol 70% e hipoclorito de sódio 2,5% para posterior desinfestação. Explantes de quatro escalas foram tratados com diferentes concentrações e combinações de ácido naftalenoacético (NAA), 6-benziladenina (BA) e cinetina (Kin) para a regeneração dos bulbilhos. Para calogênese, foram aplicados 0,5 mg L-1 de BA combinado com 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 mg L-1 de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D). Em relação aos explantes de duas escalas, diferentes combinações e concentrações de BA, ácido indol-3-butírico (IBA) e NAA foram usadas para indução de bulbilhos, e várias combinações de ácido indolacético (IAA), NAA, 2, 4-D e BA foram usados para indução de calo. Nenhum dos explantes em duas escalas respondeu à regeneração bulbilhos e aos meios de indução de calo. Ao contrário, explantes em quatro escalas regeneraram bulbilhos e raízes no meio de controle e meio MS enriquecido com diferentes RCPs. Calos foram gerados em meio MS suplementado com 2,4-D e BA, e regeneração indireta foi observada em alguns casos. No meio de controle, as raízes regeneradas tinham uma forma natural, mas em meio rico em RCPs, eram deformadas. Com relação à porcentagem de regeneração, número e comprimento de bulbilhos e comprimento de raiz, não foram encontradas diferenças significativas entre o controle e o melhor tratamento PGR em cada caso. Portanto, parece lógico sugerir a não utilização de RCPs, o que reduzirá consideravelmente os custos de produção em larga escala.
Abstract Leucojum aestivum is a valuable and endangered plant species with bulb scales best suited as explants in micropropagation. In the current study, its micropropagation was investigated by using two different explants and various concentrations and combinations of plant growth regulators (PGRs). Bulbs were first disinfected with benomyl® for 5 hours. After meeting the chilling requirements, two-scale and four-scale explants were provided for direct and indirect organogenesis. Explants were exposed to hot water, 70% ethanol and 2.5% sodium hypochlorite for further disinfestation. Four-scale explants were treated with different concentrations and combinations of naphthaleneacetic acid (NAA), 6-benzyladenine (BA), and kinetin (Kin) for bulblet regeneration. For callogenesis, 0.5 mg L-1 of BA combined with 1, 2, 3, 4, 5 or 6 mg L-1 of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) were applied. Regarding two-scale explants, different combinations and concentrations of BA, Indole-3-butyric acid (IBA) and NAA were used for bulblet induction, and various combinations of Indoleacetic acid (IAA), NAA, 2, 4-D and BA were used for callus induction. None of the two-scale explants responded to the bulblet regeneration and callus induction media. Unlike, four-scale explants regenerated bulblets and roots in the control medium and MS media enriched with different PGRs. Callus was generated on MS medium supplemented with 2,4-D and BA, and indirect regeneration was observed in some cases. On the control medium, the regenerated roots had a natural form, but in PGRs-rich media, they were deformed. Regarding the regeneration percentage, bulblet number and length and root length, no significant differences were found between the control and the best PGR-treatment in each case. Therefore, it seems logical suggesting not to use PGRs, which will considerably reduce the costs at large-scale production.
