Objectives. Determine the genetic diversity of Peruvian isolations of Leptospira spp. through Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Materials and methods. The PFGE methodology proposed by Galloway and Levett (2008) was standardized. A database including the PFGE profiles of 65 reference strains was prepared, and the technique was applied in 111 isolates of Leptospira spp. obtained in Peru between 2002 and 2010. Results. A great generic diversity of serovars of circulating Leptospira spp. was determined in our country. 57 serovars were identified, 47 out of 97 pathogen isolates. Most frequent serovars were Icterohaemorrhagiae/Copenhageni (n=24) and Canicola (n=7). The most frequent species were L. santarosai (49,5%) and L. interrogans (37,1%). The distribution of species, clusters and serovars changed according to the source of isolate, the environmental context and the origin. Conclusions. There is great diversity of circulating serovars in Peru. There are genetic and epidemiological relations among isolates of different sources, and this is related to species, reservoir, environmental context and the origin of the isolate.

Objetivos. Determinar la diversidad genética de aislamientos peruanos de Leptospira spp. mediante electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE). Materiales y métodos. Se estandarizó la metodología de PFGE propuesta por Galloway y Levett (2008). Se elaboró una base de datos con los perfiles de PFGE de 65 cepas de referencia y se aplicó la técnica en 111 aislamientos de Leptospira spp. obtenidos en Perú entre 2002 y 2010. Resultados. Se determinó gran diversidad genética de serovares de Leptospira spp. circulantes en nuestro país. Se identificaron 57 serovares, 47 en 97 aislamientos patógenos. Los serovares más frecuentes fueron Icterohaemorrhagiae/Copenhageni (n=24) y Canicola (n=7). Las especies más frecuentes fueron L. santarosai (49,5%) y L. interrogans (37,1%). La distribución de especies, clusters y serovares varió según la fuente del aislamiento, el contexto ambiental y la procedencia. Conclusiones. Existe gran diversidad de serovares circulantes en el Perú, la cual está relacionada a la especie, el reservorio, el contexto ambiental y la procedencia del aislamiento. Se evidencia las relaciones genéticas y epidemiológicas entre aislamientos de diferentes fuentes, lo cual está relacionada a la especie, el reservorio, el contexto ambiental y la procedencia del aislamiento.

Objectives. Determine the genetic diversity of Peruvian isolations of Leptospira spp. through Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Materials and methods. The PFGE methodology proposed by Galloway and Levett (2008) was standardized. A database including the PFGE profiles of 65 reference strains was prepared, and the technique was applied in 111 isolates of Leptospira spp. obtained in Peru between 2002 and 2010. Results. A great generic diversity of serovars of circulating Leptospira spp. was determined in our country. 57 serovars were identified, 47 out of 97 pathogen isolates. Most frequent serovars were Icterohaemorrhagiae/Copenhageni (n=24) and Canicola (n=7). The most frequent species were L. santarosai (49,5%) and L. interrogans (37,1%). The distribution of species, clusters and serovars changed according to the source of isolate, the environmental context and the origin. Conclusions. There is great diversity of circulating serovars in Peru. There are genetic and epidemiological relations among isolates of different sources, and this is related to species, reservoir, environmental context and the origin of the isolate.

Objetivos. Determinar la diversidad genética de aislamientos peruanos de Leptospira spp. mediante electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE). Materiales y métodos. Se estandarizó la metodología de PFGE propuesta por Galloway y Levett (2008). Se elaboró una base de datos con los perfiles de PFGE de 65 cepas de referencia y se aplicó la técnica en 111 aislamientos de Leptospira spp. obtenidos en Perú entre 2002 y 2010. Resultados. Se determinó gran diversidad genética de serovares de Leptospira spp. circulantes en nuestro país. Se identificaron 57 serovares, 47 en 97 aislamientos patógenos. Los serovares más frecuentes fueron Icterohaemorrhagiae/Copenhageni (n=24) y Canicola (n=7). Las especies más frecuentes fueron L. santarosai (49,5%) y L. interrogans (37,1%). La distribución de especies, clusters y serovares varió según la fuente del aislamiento, el contexto ambiental y la procedencia. Conclusiones. Existe gran diversidad de serovares circulantes en el Perú, la cual está relacionada a la especie, el reservorio, el contexto ambiental y la procedencia del aislamiento. Se evidencia las relaciones genéticas y epidemiológicas entre aislamientos de diferentes fuentes, lo cual está relacionada a la especie, el reservorio, el contexto ambiental y la procedencia del aislamiento.

At present it is not clear if male fertility is affected by intermittent hypobaric hypoxia (IHH). This is an important issue since a large human population works over 3000 masl. This study analyzes epididymal sperm, in adult Sprague Dawley rats after five cycles of IHH (7 days exposure to 4200 masl in a hypobaric chamber / 7 days at 500 masl). The animals were separated into groups of 8, one group was exposed to hypoxia (7 days), and the others to IHH for one to five cycles. Controls (500 masl) were examined at the beginning and at the end of the 70 experimental days. A duplicate set of rats treated with melatonin (supposedly protecting from hypoxia) was also examined, as were their controls, injected with 0,03% ethanol (melatonin solvent). Epididymal sperm parameters, were evaluated. Damage caused by IHH increases with time. Sperm counts drop, while sperm chromatin swelling, DNA instability (metachromasia with acridine orange epifluorescence) and comet (+) tests increase. Melatonin counteracts all this damage, possibly due to its high efficiency as a reactive oxygen species scavenger. In conclusion, IHH exposure damages sperm quality and therefore male reproductive function.

En la actualidad no está claro si la fertilidad masculina se ve afectada por la hipoxia hipobárica intermitente (HHI). Esta es una cuestión importante, ya que una gran población humana trabaja a más de 3000 metros sobre el nivel del mar (msnm). Este estudio analiza los espermatozoides del epidídimo, en ratas Sprague Dawley adultas, después de cinco ciclos de HHI (7 días de exposición a 4200 msnm en una cámara hipobárica / 7 días a 500 msnm). Los animales fueron separados en grupos de 8, un grupo fue expuesto a la hipoxia (7 días), y los otros a HHI de uno a cinco ciclos. Los controles (500 msnm) se examinaron al comienzo y al final de los 70 días de experimentación. Un grupo duplicado de ratas tratadas con melatonina (supuestamente protegiendo de la hipoxia) también fue examinado, al igual que los controles, inyectados con 0,03% de etanol (solvente de melatonina). Los parámetros espermáticos del epidídimo fueron evaluados. Los daños causados por la HHI aumentaron con el tiempo. Se evaluó el conteo espermático en gota, mientras la cromatina espermática esta hinchada, la inestabilidad del ADN (metacromasia epifluorescente con naranjo de acridina) y la prueba de aumento (+) de cometas. La melatonina neutralizó todo el daño, posiblemente debido a su alta eficacia como un eliminador de especies reactivas de oxígeno. En conclusión, la exposición a HHI daña la calidad espermática y por lo tanto la función reproductora masculina.

Objectives: To standardize and optimize a PCR assay to detect rrs gene (rRNA 16S) from Leptospira spp. to use it with samples of suspected patients of febrile syndrome, in endemic areas from Peru. Methods: We standardized and validated a PCR assay for rapid diagnostic of leptospirosis from blood and urine samples. The PCR assay was optimized with DNA samples from different species of Leptospira. Sensitivity and specificity was determined in comparison with serological test: MAT and IgM ELISA in 180 clinical samples of patients with suspect of leptopirosis. Results: The PCR assay amplified DNA of twenty five serovars of six pathogenic species of Leptospira spp. No amplification was detected with DNA from other pathogens. Sensitivity and specificity was 100% in vitro (culture samples). In blood samples, sensitivity was 100% (95CI: 97,9 - 100) in patients on the first 8 days of disease; and 30% (95CI: 16,3 - 43,7) when the time of disease was greater. In urine samples the PCR assay showed a low sensitivity. Conclusions: The standardized PCR assay for Leptospira was more sensitive than serological tests in the first days of disease. On the other hand, it has low sensitivity when bacterial population is poor.

Objetivos: Estandarizar y optimizar la prueba de PCR dirigida al gen rrs (16S) de Leptospira spp., para luego validar su uso en muestras de pacientes con síndrome febril captados en zonas endémicas del Perú. Material y métodos: Se estandarizó y validó una prueba de PCR para el diagnostico rápido de leptospirosis en muestras de sangre y orina. Se optimizó la prueba con muestras de ADN de Leptospira de diferentes especies, y se determinó en 180 muestras clínicas de pacientes con sospecha de leptospirosis su sensibilidad y especificidad en comparación con la prueba de aglutinación microscópica (MAT) y ELISA IgM. Resultados: El PCR estandarizado amplificó el ADN de 25 serovares de seis especies de Leptospira spp. No amplificó las muestras de ADN de otros microorganismos patógenos. La sensibilidad y especificidad del método fue 100% in vitro. Su sensibilidad fue de 100% (IC95: 97,9 - 100%) en muestras de sangre antes de los ocho primeros días de enfermedad y de 30% (IC95: 16,3 - 43-,7) cuando el tiempo de enfermedad fue mayor. El PCR en orina tiene una baja sensibilidad. Conclusiones: El PCR estandarizado es más sensible que las pruebas serológicas en los primeros días de enfermedad y es poco sensible cuando la carga bacteriana es baja en sangre.

Objective: To determine the frequency of antibodies against leptospira in asymptomatic persons in people working in commerce and agriculture in Coronel Portillo province in Ucayali department, Peru. We also aimed at determining the prevalence of leptospirosis in domestic animals. Material and Methods: In this analytic cross-sectional study, serum samples from 364 people in 4 sites were taken, and we measured serum total antibodies against leptospira using an ELISA test and a microagglutination assay. A statistical analysis was performed in order to determine the degree of association between the population general characteristics and the data collected in the survey with being positive for antibodies against leptospira. Simultaneously we took 374 serum samples from domestic animals (dogs), and we performed microagglutination test in these samples. Results: 364 persons were enrolled, and 227 (62.4%) female and 137 (37.6%) male. 114 (31.3%) persons had antibodies against leptospira, and most frequent serovars were Bratislava and Georgia. Factors likely to be associated with having positive antibodies against leptospira in the population studied were: to keep food at the household (OR= 2.221), being a farmer (OR= 3.418), being a manual workers and a farmer (OR= 2.088), and to throw rubbish in the field (OR= 2.348). Amongst dogs, 181 (52.2%) has positive serological tests for leptospira. Conclusions: There is a high prevalence of positive serological tests for leptospira in the general asymptomatic population, and there are favorable conditions for the development of Leptospira infections in the sites studied. We recommend to frequently perform educational and preventive activities, taking into account the results from our study.

Objetivo: Determinar la prevalencia de anticuerpos para leptospiras en personas asintomáticas en las localidades dedicadas al comercio y la agricultura de la provincia de Coronel Portillo, del departamento de Ucayali. Asimismo determinar la prevalencia de leptospirosis en animales domésticos. Material y Métodos: En este estudio transversal analítico, se tomó muestras de suero de 364 pobladores de 4 localidades, en quienes se evaluó la presencia de anticuerpos totales contra leptospiras en suero por el método de ELISA y la prueba de microaglutinación (MAT). Se realizó el análisis estadístico para ver el grado de asociación entre las características generales de la población y la información recopilada en la encuesta con la positividad para anticuerpos para leptospiras. De la misma manera, se tomó muestras de suero de 374 animales domésticos (canes) a los que se realizó MAT. Resultados: Se enrolaron 364 personas de las cuales 227 (62,4%) fueron mujeres y 137 (37,6%) varones, 114 (31,3%) pobladores tuvieron anticuerpos contra leptospiras y los serovares más frecuentes fueron Bratislava y Georgia según MAT, los probables factores asociados a la positividad a anticuerpos para leptospiras en los pobladores fueron: guardar alimentos en el hogar (OR=2,221), ser agricultor (OR=3,418), ser obrero y agricultor (OR=2,088), eliminar basura en el campo (OR=2,348). En canes, 181 (52,2%) tuvieron serología positiva a leptospiras. Conclusiones: Existe una alta prevalencia de serología positiva para leptospiras en población general asintomática y condiciones favorables para la presencia de leptospiras en las localidades estudiadas. En estas zonas se recomienda realizar actividades educativas preventivas frecuentes, tomando en cuenta los resultados de este estudio.