RESUMEN Lutzomyia intermedia (Diptera: Psychodidae) es uno de los principales vectores que participan en la transmisión de leishmaniasis cutánea americana (LCA) en la región Neotropical. A pesar de que aún los estudios genéticos que involucran a este taxón son incipientes, tienen una gran importancia para comprender el nivel de variabilidad de las diferentes poblaciones y sus implicaciones en su papel vectorial. El objetivo de este estudio fue determinar el nivel de diversidad genética de L. intermedia presente en el Valle del Río Ribeira, área de transmisión de LCA en el estado de Paraná, Brasil, mediante RAPD (ADN polimórfico amplificado aleatoriamente). Los flebótomos fueron recolectados en los municipios Cerro Azul (nueva área de transmisión de LCA) y Adrianópolis (área endémica de LCA), donde fueron capturados en ambientes residenciales, en el peridomicilio y en el bosque. Dos de los marcadores utilizados permitieron estimar el polimorfismo en las poblaciones estudiadas con la obtención de 40 genotipos, la mayoría de ellos en el peridomicilio. El dendrograma generado por el análisis con el cebador A10 mostró diferentes grados de similitud, lo que sugiere que puede haber flujo gènico en las poblaciones. El Análisis de Coordenadas Principales (PCO) con el cebador A2 fue útil para agrupar L. intermedia según su origen ecológico y geográfico. No hubo distinción entre los linajes que componen el complejo L. intermedia. Los resultados de este estudio, con el registro de gran diversidad genotipica en L. intermedia, pueden contribuir a explicar el mantenimiento del ciclo biológico de Leishmania braziliensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) en la región.

ABSTRACT Lutzomyia intermedia (Diptera: Psychodidae) features as one of the main vectors that are involved in the transmission of American cutaneous leishmaniasis (ACL) in the Neotropical region. However, genetic studies involving this taxon are still incipient and important for understanding the level of variability of different populations, their role, and implications as vectors. The aim of this study was to determine the level of genetic diversity of L. intermedia present in the Ribeira River Valley, an area of ACL transmission in the state of Paraná, Brazil, through the Random amplified polymorphic DNA (RAPD). Two municipalities were chosen to collect sand flies: Cerro Azul (new transmission area of the ACL) and Adrianópolis (endemic area of the ACL). The insects were captured in the house, in the peridomicile and in the wild (forest). Two of the used markers made it possible to estimate the polymorphism of the studied populations, resulting in 40 genotypes, most of them from peridomicile. The dendrogram generated by the analysis with the primer A10 showed different degrees of similarity, suggesting that there may be gene flow in the studied populations. The Principal Coordinate Analysis (PCO) with the A2 primer, was useful in grouping L. intermedia according to its ecological and geographical origin. There was no distinction between the lineages composing the L. intermedia complex. The results of this study, with the record of great genotypic diversity in L. intermedia, may contribute to explain the maintenance of the life cycle of Leishmania braziliensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) in the region.

Resumo O objetivo deste estudo foi confirmar a emergência da leishmaniose visceral canina em Foz do Iguaçu próximo à fronteira com a Argentina e ao Paraguai, por meio do isolamento e identificação molecular de Leishmania infantum. Em um primeiro estágio de coleta de animais (2012), três amostras de aspirados de linfonodos e 46 camadas leucocitárias foram obtidas de cães soropositivos para leishmaniose. Em um segundo estágio de coleta (2013), foram coletadas amostras de camada leucocitária de 376 cães de 20 localidades próximas à fronteira com o Paraguai, rio Paraná, centro e periferia da cidade. Seis isolados foram obtidos, quatro da primeira etapa (4/49) e dois da segunda etapa (2/376); estes isolados foram submetidos à amplificação com iniciadores K26F/R, e a análise de sua sequência confirmou a espécie como L. infantum. A autoctonia dos casos foi confirmada, pois 100% dos cães nunca haviam saído da cidade. O estudo confirma a emergência de leishmaniose visceral canina no Paraná com identificação de L. infantum em cães da cidade de Foz do Iguaçu. Assim, medidas de controle devem ser elaboradas e implementadas por órgãos públicos e instituições de pesquisa do Brasil, Argentina e Paraguai em parceria com o objetivo de controlar a disseminação de zoonoses e os casos humanos de LV.

Abstract The aim of this study was to confirm the emergence of canine visceral leishmaniasis among dogs in Foz do Iguaçu. The disease was diagnosed through the isolation and molecular identification of Leishmania infantum. In the first sample collection stage (2012), three lymph node aspirates and 46 buffy coat samples were obtained mostly from the dogs that were seroreagents for leishmaniasis. In the second sample collection stage (2013), the buffy coat samples were collected from 376 dogs located close to Paraguay, Paraná river, center and peripheral parts of the city. The DNA from the six isolates, four from the first sampling stage (4/49) and two from the second sampling stage (2/376), was subjected to polymerase chain reaction using the K26F/R primers. The isolate was confirmed as L. infantum by sequencing. As none of the dogs had ever left the city, the isolates were confirmed as autochthonous. Further, the study confirmed the emergence of canine visceral leishmaniasis in Paraná through the identification of L. infantum among dogs in Foz do Iguaçu city. Hence, collaborative control measures should be designed and implemented by the public agencies and research institutions of Brazil, Argentina, and Paraguay to control the spread of visceral leishmaniasis.

Resumo O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de anticorpos anti- Leishmania spp. em cães da cidade de Foz do Iguaçu, estado do Paraná, Brasil, fronteira com a Argentina e o Paraguai. Amostras de sangue de cães foram coletadas para realização dos seguintes testes sorológicos: teste rápido imunocromatográfico DPP®, ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e ensaio de imunofluorescência indireta (IFI). Em 2012, 285 cães foram analisados na fronteira com Argentina e, em 2013, amostras de soro de 396 cães na fronteira com o Paraguai. Utilizando ELISA para triagem e IFA para o teste confirmatório, os resultados mostraram uma prevalência de anticorpos de 1,8% (5/285) na fronteira da Argentina e 3,0% (12/396) na fronteira com o Paraguai. Ao usar o DPP® para triagem e ELISA como uma análise confirmatória, observou-se uma prevalência de cães sororreagentes de 2,5% (7/285) na fronteira com a Argentina e 5,1% (20/396) na fronteira com o Paraguai. A não coleta pública de lixo doméstico (p = 0,0004) mostrou-se associada à leishmaniose. Este estudo demonstra a presença de leishmaniose e sugere a emergência da leishmaniose visceral canina no estado do Paraná devido à ocorrência de cães sororreagentes na fronteira Argentina e Paraguai, que possuem características ambientais e geográficas que favorecem a disseminação do parasito.

Abstract The aim of this study was to investigate the occurrence of anti-Leishmania spp. antibodies in dogs from localities in the city of Foz do Iguaçu, Paraná state, Brazil, on the border with Argentina and Paraguay. Blood samples dogs were collected to perform the following serologic tests: immunochromatographic DPP® rapid test, indirect immunoenzymatic assay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA). In 2012, 285 dogs were analyzed on Argentina border, and in 2013, serum samples from 396 dogs on the border of Paraguay were collected. Using ELISA for screening and IFA for the confirmatory test, the results showed that the antibody prevalence was 1.8% (5/285) on the border of Argentina and 3.0% (12/396) on Paraguay border. When using the DPP® for screening and ELISA as a confirmatory analysis, we observed a seroreagent prevalence in dogs of 2.5% (7/285) on Argentina border and 5.1% (20/396) on Paraguay border. The non-public collection of domestic waste (p= 0.0004) was shown to be associated with leishmaniasis. This study shows the presence of leishmaniasis and suggest the emergence of canine visceral leishmaniasis in state of Paraná due to the confirmed occurrence of seroreactive dogs on Argentina and Paraguay border, which has environmental and geographical characteristics that favor the spread of the parasite.

A produção de xilanase por Streptomyces viridosporus T7A foi realizada em fermentação submersa (FSm) e fermentação no estado sólido (FES) utilizando resíduos e sub-produtos agroindustriais. Capim Napier, bagaço de cana e farelo de soja foram empregados como fonte de carbono, suporte/substrato e fonte nitrogênio, respectivamente. Em FSm, o capim Napier (1 % p/v) foi suplementado com farelo de soja (1,5 % p/v), hidroxietilcelulose (0,15 %) e vitaminas do complexo B (1,5 %) sendo que a produção de xilanase atingiu 23.41 U/mL. Em FES, o efeito dos seguintes parâmetros foi estudado: composição do substrato (bagaço de cana, Capim Napier e farelo de soja), umidade inicial, aeração e taxa de inoculação. A mais elevada produção de xilanase (423,9 U/g) foi atingida com 70% bagaço de cana, 20% de capim Napier e 10 % farelo de soja, 90 % de umidade inicial e 10(7) células/g substrato.

The study of xylanase production was conducted by Streptomyces viridosporus T7A in submerged (SmF) and solid-state fermentation (SSF), using agro-industrial residues and sub-products. Napier grass, sugarcane bagasse and soybean bran were used as carbon source, substrate/support, and nitrogen source, respectively. In SmF, Napier grass (1% v/w) supplemented with soybean bran, hydroxyethylcellulose and B complex vitamins were used. Soybean bran (1.5 % w/v), B complex vitamins (0.1%), and hydroxyethilcellulose (0.15%) led to an increase in xylanase production (23.41 U/mL). In SSF, the effects of the following parameters were studied: substrate composition (sugarcane bagasse, Napier grass and soybean bran), initial moisture, and inoculum rate. In SSF, the highest xylanase activity (423.9 U/g) was reached with: 70 % sugarcane bagasse, 20% Napier grass and 10% soybean meal, 90% of moisture, and 10(7)/g substrate.

A dengue é transmitida pelo Aedes aegypti, doença responsável por 20.000 mortes/ano no mundo. Bacillus thuringiensis var israelensis libera toxinas seletivas e eficazes (proteínas cristal) contra larvas de A. aegypti. Propõe-se um bioprocesso de baixo custo para a produção da toxina, pelo emprego de uma cepa brasileira selecionada de Bti (BR-LPB01) e de substratos de baixo custo. Farelo de soja e melaço de cana levaram a eficácia tóxica alta após fermentação em biorreator 2L (DL50=26ng/mL), valor próximo a estirpe de referência IPS82 (DL50=17,3 ng/mL). O pH variou entre 5,8 e 7,0 durante o período de crescimento exponencial e entre 7,0 e 8,4 durante a fase estacionária, com baixa atividade larvicida. Assim, controles de espuma e de pH 7,0 foram iniciados e demonstraram serem cruciais para alta atividade. Verificou-se que a fermentação deve ser interrompida após vinte horas, quando se obtém a maior atividade.

Aedes aegypti is the vector of Dengue disease, responsible for 20,000 deaths/year worldwide. Bacillus thuringiensis var israelensis - Bti releases selective and effective toxins (crystal proteins) against A. aegypti larvae. We present a low cost bioprocess for toxin production, accomplished by a selected Brazilian strain Bti (BR-LPB01) and employment of low cost substrates. Soybean meal and sugarcane molasses lead to high toxic effectiveness after 2L bioreactor fermentation (LD50=26ng/mL), near to the reference strain IPS82 (LD50=17.3 ng/mL). The pH ranged between 5.8 and 7.0 during the exponential growth period and between 7.0 and 8.4 during the stationary phase, with low activity. Thus, control of foam and pH 7.0 were started and proved to be crucial for high activity. It was verified that the fermentation could be discontinued after 20 hours, when the highest activity was present.