Resumen En el presente estudio describimos y caracterizamos la distribución geográfica de los casos positivos confirmados a HTLV-1 y 2 de pacientes peruanos con diagnóstico presuntivo entre 2019 y 2021. De un total de 555 muestras positivas confirmadas, 546 (98,4%) fueron HTLV-1 y 9 (1,6%) HTLV-2. Además, 22 de 24 departamentos del Perú presentaron casos de HTLV-1, siendo los principales motivos de solicitud de confirmación diagnóstica: aspirante a donar sangre con prueba de tamizaje reactivo, sospecha de leucemia/linfoma y paraparesia espástica tropical. Los resultados reflejan que la identificación de los puntos críticos constituye una brecha persistente respecto al diagnóstico, siendo cruciales para reducir el número de nuevos casos en Perú.

Abstract In the present study we describe and characterize the geographic distribution of HTLV-1 and 2 positive cases from Peruvian patients with presumptive diagnosis 2019 - 2021. Of a total of 555 confirmed positive samples, 546 (98.4%) were HTLV-1 and 9 (1.6%) HTLV-2. In addition, 22 of 24 departments of Peru presented cases of HTLV-1. The main reasons for requesting a confirmatory diagnosis being: aspiring to donate blood with a reactive screening test, suspicion of leukemia/ lymphoma and tropical spastic paraparesis. The results reflect that the identification of critical points constitutes a persistent gap regarding the diagnosis, being crucial to reduce the number of new cases in Peru.

ABSTRACT Objectives: To standardize and validate a western blot test for the diagnosis of human immunodeficiency virus. Methods: A prospective observational study was carried out during 2017 and 2018. The western blot test was standardized, using the polyacrylamide gel electrophoresis technique with sodium dodecyl sulfate (SDS PAGE), being the nitrocellulose blot strips prepared with an Optimal HIV-1 antigen concentration of 2.71 µg / mm. The western blot was validated in the laboratory against 400 reference samples (300 sera and 100 plasmas): 200 positive and 200 negatives for antibodies against HIV-1, being the reference test the Immunoblot of the Fujirebio brand. Diagnostic performance parameters were estimated using Epidat v3.1 and Excel. Results: Eight important bands of the HIV-1 antigen were identified: p17, p24, p31, p39, gp41, p55, p66, and gp120. According to the Consortium for the normalization of serology for retroviruse, those that were taken as specific diagnostic bands were: p24, p31, gp41, and gp120. The sensitivity, specificity, positive and negative predictive value and validity index against sera were: 96.7%, 96.0%, 96.0%, 96.6%, 96.3%; and against plasmas: 98.0%, 100.0%, 100.0%, 98.0%, 99.0% respectively. No false positives and negatives were found, but some were undetermined. Conclusion: The development of this western blot test with proprietary technology presented similar diagnostic performance to the reference test, without showing cross-reactions, being useful for confirming HIV.

RESUMEN Objetivos: Estandarizar y validar una prueba de western blot para el diagnóstico del virus de inmunodeficiencia humana. Métodos: Se realizó un estudio observacional prospectivo durante el 2017 y 2018. Se estandarizó la prueba de western blot, usando la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS PAGE), siendo las tiras blot de nitrocelulosa preparadas con una concentración óptima de antígeno de VIH-1 de 2,71 µg/mm. Se validó el western blot en laboratorio, frente a 400 muestras referentes (300 sueros y 100 plasmas): 200 positivas y 200 negativas a anticuerpos contra VIH-1, siendo la prueba de referencia el Inmunoblot de la marca Fujirebio. Se estimaron los parámetros de rendimiento diagnóstico usando el programa Epidat v3.1 y Excel. Resultados: Se logró identificar ocho bandas importantes del antígeno de VIH-1: p17, p24, p31, p39, gp41, p55, p66 y gp120. De ellas, las que se tomaron como bandas diagnósticas específicas según el Consorcio de normalización de serología para los retrovirus, fueron: p24, p31, gp41 y gp120. La sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo e índice de validez frente a sueros fueron: 96,7%, 96,0%, 96,0%, 96,6%, 96,3%; y frente a plasmas: 98,0%, 100,0%, 100,0%, 98,0%, 99,0% respectivamente. No se encontraron falsos positivos y negativos, pero si algunos indeterminados. Conclusión: El desarrollo de esta prueba western blot con tecnología propia, presentó similar rendimiento diagnóstico a la prueba de referencia, sin mostrar reacciones cruzadas; siendo útil para la confirmación del VIH.

Abstract As Peru is endemic to HTLV-1, it is important to know the reliability of the most used screening trademarks in our country. In the present study, we evaluated two brands of ELISA (Biokit and Wantai) for the detection of antibodies against HTLV-1/2 against Peruvian samples. Both brands were evaluated against 242 sera: 123 positive for HTLV-1 and 119 negative for HTLV-1 (Reference: Immunoblot). We estimated diagnostic accuracy parameters. The sensitivity, specificity, PPV, NPV and validity index of Biokit were: 100%, 93.2%, 93.8%, 100%, 96.6%; respectively and Wantai were 99.1% for all parameters. We conclude that the Biokit brand is the most suitable for use in the National Reference Laboratory of Sexually Transmitted Viruses HIV/AIDS, Peru.

Resumen Por ser el Perú un país endémico de HTLV-1, es importante conocer la confiabilidad de las marcas comerciales para el diagnóstico más usadas en nuestro país. En el presente estudio, evaluamos dos marcas comerciales de pruebas de ELISA (Biokit y Wantai) para la detección de anticuerpos contra HTLV-1 frente a muestras peruanas. Ambas marcas comerciales fueron evaluadas frente a 242 sueros: 123 positivos a HTLV-1 y 119 negativos a HTLV-1 (referencia: inmunoblot). Se estimaron los parámetros de precisión diagnóstica. La sensibilidad, especificidad, VPP, VPN e índice de validez de Biokit fueron: 100%, 93,2%, 93,8%, 100%, 96,6%; respectivamente y de Wantai fue de 99,1% para todos los parámetros. Concluimos, que la marca Biokit fue la más adecuada para ser usada en el Laboratorio de Referencia Nacional de Virus de Transmisión Sexual, VIH/SIDA de Perú.

ABSTRACT The objective of the study was to determine the diagnostic yield of the indirect immunofluorescence (IFI) test for the detection of antibodies against HTLV-1. A diagnostic test evaluation study was performed. HTLV-1-infected MT2 cells and HTLV-1-uninfected K-562 cells were cultured; then these cells were impregnated and fixed in sheets for immunofluorescence and faced to Peruvian sera. A total of 155 sera (80 HTLV-1-positive sera and 75 sera positive for other diseases) from the Peruvian Instituto Nacional de Salud were used. In addition, the parameters of repeatability (intra-laboratory) and reproducibility (in laboratories of the Peruvian coast, mountains and jungle) of the test were evaluated. The IFI test detected the presence of antibodies against HTLV-1 reaching a sensitivity of 98.75% (95% CI: 95.69 - 100.00%), a specificity of 98.67% (95% CI: 95.40 - 100.00%) and the Kappa index was 0.975. There were no false positives or false negatives; however, one undetermined result and one non-specific result were obtained. The test showed 100% qualitative agreement when performing the repeatability and reproducibility. The results obtained are comparable to the reference test. Therefore, the IFI test had a good diagnostic performance and would be useful for the confirmation of HTLV-1.

RESUMEN El objetivo del estudio fue determinar el rendimiento diagnóstico de la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) para la detección de anticuerpos contra HTLV-1. Se realizó un estudio de evaluación de prueba diagnóstica. Se usaron cultivos celulares MT2 infectados con HTLV-1 y K-562 sin infección, luego fueron sembrados, fijados en láminas para inmunofluorescencia y enfrentados a sueros. Se usaron 155 sueros (80 positivos para HTLV-1 y 75 positivos para otras enfermedades) procedentes de la seroteca del Instituto Nacional de Salud del Perú. Adicionalmente, se evaluó la repetibilidad (en el laboratorio) y reproducibilidad (en laboratorios de costa, sierra y selva) de la prueba. La prueba IFI para la detección de anticuerpos contra HTLV-1 tuvo una sensibilidad de 98,75% (IC 95%: 95,69-100%), una especificidad de 98,67% (IC 95%: 95,40-100%) y el índice de kappa de 0,975. No hubo falsos positivos ni falsos negativos; sin embargo, sí se obtuvo un resultado indeterminado y uno inespecífico. La prueba mostró 100% de concordancia en la repetibilidad y reproductibilidad. Concluimos que los resultados obtenidos son comparables a la prueba de referencia. La prueba de IFI presenta un buen rendimiento diagnóstico y sería de utilidad para la confirmación de HTLV-1.

The objective of the study was to determine the diagnostic yield of the indirect immunofluorescence (IFI) test for the detection of antibodies against HTLV-1. A diagnostic test evaluation study was performed. HTLV-1-infected MT2 cells and HTLV-1-uninfected K-562 cells were cultured; then these cells were impregnated and fixed in sheets for immunofluorescence and faced to Peruvian sera. A total of 155 sera (80 HTLV-1-positive sera and 75 sera positive for other diseases) from the Peruvian Instituto Nacional de Salud were used. In addition, the parameters of repeatability (intra-laboratory) and reproducibility (in laboratories of the Peruvian coast, mountains and jungle) of the test were evaluated. The IFI test detected the presence of antibodies against HTLV-1 reaching a sensitivity of 98.75% (95% CI: 95.69 - 100.00%), a specificity of 98.67% (95% CI: 95.40 - 100.00%) and the Kappa index was 0.975. There were no false positives or false negatives; however, one undetermined result and one non-specific result were obtained. The test showed 100% qualitative agreement when performing the repeatability and reproducibility. The results obtained are comparable to the reference test. Therefore, the IFI test had a good diagnostic performance and would be useful for the confirmation of HTLV-1.

El objetivo del estudio fue determinar el rendimiento diagnóstico de la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) para la detección de anticuerpos contra HTLV-1. Se realizó un estudio de evaluación de prueba diagnóstica. Se usaron cultivos celulares MT2 infectados con HTLV-1 y K-562 sin infección, luego fueron sembrados, fijados en láminas para inmunofluorescencia y enfrentados a sueros. Se usaron 155 sueros (80 positivos para HTLV-1 y 75 positivos para otras enfermedades) procedentes de la seroteca del Instituto Nacional de Salud del Perú. Adicionalmente, se evaluó la repetibilidad (en el laboratorio) y reproducibilidad (en laboratorios de costa, sierra y selva) de la prueba. La prueba IFI para la detección de anticuerpos contra HTLV-1 tuvo una sensibilidad de 98,75% (IC 95%: 95,69-100%), una especificidad de 98,67% (IC 95%: 95,40-100%) y el índice de kappa de 0,975. No hubo falsos positivos ni falsos negativos; sin embargo, sí se obtuvo un resultado indeterminado y uno inespecífico. La prueba mostró 100% de concordancia en la repetibilidad y reproductibilidad. Concluimos que los resultados obtenidos son comparables a la prueba de referencia. La prueba de IFI presenta un buen rendimiento diagnóstico y sería de utilidad para la confirmación de HTLV-1.