ABSTRACT Introduction: The diabetic foot is a complication of diabetes mellitus and every 20 seconds an amputation by this cause is performed. The adequate stratification of the patient with diabetic foot allows timely actions to avoid, in a high percentage of cases, amputations. Objective: To validate a predictive model for amputation risk in patients with diabetic foot. Methods: Prospective longitudinal study. The sample consisted of 280 patients divided into two groups. The variables used to prepare the model were: age, hematocrit, leukocytes, lymphocytes, neutrophils, albumin, neutrophil/lymphocyte index, platelets, creatinine, lesion size and lesion grade. A predictive model was applied whose score allowed each patient to be individually stratified. Results: An internal validation was performed with 60 % of the sample, which showed good discriminatory capacity for 96.0 % with a sensitivity of 57.69 %, a positive predictive value of 95.4 % and a Cronbach's Alpha of 0.71. In the final test and debugging of the model, 40% of the sample was worked with and external validation was carried out using Cronbach's Alpha statistic = 0.85. The test group had a specificity of 97.40% and a positive predictive value of 96.65, which was higher than the training group. Conclusions: The predictive model proved to be a useful tool for the stratification of patients with diabetic foot and allowed to apply an appropriate behavior in each patient.

RESUMEN Introducción: El pie diabético es una complicación de la diabetes mellitus y cada 20 segundos se realiza una amputación ocasionada por esta causa. La estratificación adecuada del paciente con pie diabético permite realizar acciones oportunas para evitar, en un porcentaje elevado de casos, las amputaciones. Objetivo: Validar un modelo predictivo para el riesgo de amputación en pacientes con pie diabético. Métodos: Estudio longitudinal prospectivo. La muestra estuvo conformada por 280 pacientes divididos en dos grupos. Las variables utilizadas para la confección del modelo fueron: edad, hematocrito, leucocitos, linfocitos, neutrófilos, albumina, índice neutrófilo/linfocito, plaquetas, creatinina, tamaño de la lesión y grado de la lesión. Se aplicó un modelo predictivo cuya puntuación permitió estratificar de forma individual a cada paciente. Resultados: Se realizó una validación interna con el 60 % de la muestra, que mostró buena capacidad discriminatoria para el 96,0 % con una sensibilidad de 57,69 %, un valor predictivo positivo del 95,4 % y un Alpha de Cronbach de 0,71. En la prueba final y depuración del modelo se trabajó con el 40 % de la muestra y se realizó la validación externa mediante el estadígrafo Alpha de Cronbach = 0,85. El grupo de prueba tuvo una especificidad de 97,40 % y un valor predictivo positivo del 96,65, lo que fue superior al grupo de entrenamiento. Conclusiones: El modelo predictivo mostró ser una herramienta útil para la estratificación del paciente con pie diabético y permitió aplicar una conducta adecuada en cada paciente.

ABSTRACT Introduction: Intralesional infiltration of epidermal growth factor (EGF) has emerged as a therapeutic alternative for diabetic foot ulcer (DFU) healing. The objectives of this research were: to determine the molecular profile of patients with DFU and to characterize the systemic effects of EGF intralesional treatment in such patients, taking into account redox balance markers, components of the advanced glycation end-product (AGE) pathway, factors related to the extracellular matrix (ECM) stability and pro-inflammatory markers. Methods: Thirteen patients with DFU were characterized in comparison with diabetic patients without ulcers (compensated and non-compensated) and non-diabetic subjects, attending to redox balance markers, components of the AGE pathway, and elements related to the stability of the ECM. The systemic response of patients with DFU to the intralesional treatment with EGF was evaluated according to the same parameters, in addition to other pro-inflammatory markers. Results: Patients with DFU exhibited the most disheveled biochemical profile, with elevated oxidative stress, low antioxidant reserves, increased glycoxidation products and matrix metalloproteases (MMP), with respect to non-ulcerated diabetic patients and to non-diabetic subjects. The intralesional administration of EGF was associated with a significant recovery of the parameters studied and with the systemic attenuation of several pro-inflammatory markers. Conclusions: These results indicate that intralesional infiltration of EGF translates into systemic antioxidant, anti-inflammatory, anti-degradative and anti-AGE effects, which contribute to restoring homeostasis in the diabetic patient.

RESUMEN Introducción: La infiltración intralesional con factor de crecimiento epidérmico (EGF) ha emergido como alternativa terapéutica para la cicatrización de las úlceras de pie diabético (UPD). Los objetivos de esta investigación fueron: determinar el perfil molecular de los pacientes con UPD y caracterizar los efectos sistémicos del tratamiento intralesional con EGF en tales pacientes atendiendo a marcadores de balance redox, componentes de la vía de los productos avanzados de glicación (AGE), factores relacionados con la estabilidad de la matriz extracelular (MEC) y marcadores pro-inflamatorios. Métodos: Se caracterizaron 13 pacientes con UPD en comparación con diabéticos sin úlceras (compensados y no compensados) e individuos no diabéticos, atendiendo a marcadores de balance redox, componentes de la vía de los AGE y elementos relacionados con la estabilidad de la MEC. La respuesta sistémica de los pacientes con UPD al tratamiento intralesional con EGF se evaluó atendiendo a los mismos parámetros, además de otros marcadores pro-inflamatorios. Resultados: Los pacientes con UPD exhibieron un perfil bioquímico muy alterado, con elevado estrés oxidativo, bajas reservas antioxidantes, aumento de los productos de glicoxidación y de las metaloproteasas de la matriz (MMP), con respecto a los diabéticos sin úlceras y a los no diabéticos. La administración intralesional de EGF estuvo asociada a una recuperación significativa de los parámetros estudiados y a la atenuación sistémica de varios marcadores pro-inflamatorios. Conclusiones: Los resultados indican que la infiltración intralesional con EGF se traduce en efectos sistémicos antioxidantes, anti-inflamatorios, anti-degradativos y anti-AGE, que contribuyen a restaurar la homeostasia del paciente diabético.

Abstract BACKGROUND Diabetic foot ulcers are a common diabetic complication leading to alarming figures of amputation, disability, and early mortality. The diabetic glucooxidative environment impairs the healing response, promoting the onset of a ‘wound chronicity phenotype’. In 50% of ulcers, these non-healing wounds act as an open door for developing infections, a process facilitated by diabetic patients’ dysimmunity. Infection can elicit biofilm formation that worsens wound prognosis. How this microorganism community is able to take advantage of underlying diabetic conditions and thrive both within the wound and the diabetic host is an expanding research field. OBJECTIVES 1) Offer an overview of the major cellular and molecular derangements of the diabetic healing process versus physiological cascades in a non-diabetic host. 2) Describe the main immunopathological aspects of diabetics’ immune response and explore how these contribute to wound infection susceptibility. 3) Conceptualize infection and biofilim in diabetic foot ulcers and analyze their dynamic interactions with wound bed cells and matrices, and their systemic effects at the organism level. 4) Offer an integrative conceptual framework of wound–dysimmunity–infection–organism damage. EVIDENCE AQUISITION We retrieved 683 articles indexed in Medline/PubMed, SciELO, Bioline International and Google Scholar. 280 articles were selected for discussion under four major subheadings: 1) normal healing processes, 2) impaired healing processes in the diabetic population, 3) diabetic dysimmunity and 4) diabetic foot infection and its interaction with the host. DEVELOPMENT The diabetic healing response is heterogeneous, torpid and asynchronous, leading to wound chronicity. The accumulation of senescent cells and a protracted inflammatory profile with a pro-catabolic balance hinder the proliferative response and delay re-epithelialization. Diabetes reduces the immune system’s abilities to orchestrate an appropriate antimicrobial response and offers ideal conditions for microbiota establishment and biofilm formation. Biofilm–microbial entrenchment hinders antimicrobial therapy effectiveness, amplifies the host's pre-existing immunodepression, arrests the wound’s proliferative phase, increases localized catabolism, prolongs pathogenic inflammation and perpetuates wound chronicity. In such circumstances the infected wound may act as a proinflammatory and pro-oxidant organ superimposed onto the host, which eventually intensifies peripheral insulin resistance and disrupts homeostasis. CONCLUSIONS The number of lower-limb amputations remains high worldwide despite continued research efforts on diabetic foot ulcers. Identifying and manipulating the molecular drivers underlying diabetic wound healing failure, and dysimmunity-driven susceptibility to infection will offer more effective therapeutic tools for the diabetic population.

ABSTRACT Introduction: Heberprot-P® obtained its first Sanitary Registration in Cuba in 2006, and it is currently approved in 26 other countries. Objective: Describe the sanitary registration process in Mexico of the biotechnological drug Heberprot-P® for the treatment of diabetic foot ulcers. Methods: The sanitary registration process of Heberprot-P® followed the guidelines of the sanitary regulations of Mexico on the basis of the General Health Law and the Regulation of Supplies for Health. The Pharmacopoeia of the United Mexican States and the official Mexican standards were also revised in order to comply with the requirements for the marketing of medicines in this territory. Results: The registration process began in June 2017 in Mexico with actions to complete the documents and information required in the sanitary registration file to be submitted. Among them are the considerations of the Sub-committee on the Evaluation of Biotechnological Products and the Committee on New Molecules, the evaluation of the file by an Authorized Third Party and documents issued by the National Center for Pharmacovigilance and the Mexican Institute of Industrial Property. The application for sanitary registration was submitted to Cofepris and this was approved in May 2018. Conclusions: The work with groups of experts allowed the Mexican authority to do a more expeditious work based on the evidence of the evaluations carried out that are part of the information of the sanitary registry. As a result of this process, Heberprot-P® was granted the Sanitary Registry in May 2018 and COFEPRIS recognized it as an innovative biotechnological medicine.

RESUMEN Introducción: Heberprot-P® obtuvo su primer registro sanitario en Cuba en el año 2006, actualmente está aprobado en otros 26 países. Objetivo: Describir el proceso de registro sanitario en México, del medicamento biotecnológico Heberprot-P® para el tratamiento de las úlceras del pie diabético. Métodos: El proceso de registro sanitario de Heberprot-P® siguió las pautas de la reglamentación sanitaria de México sobre la base de la Ley general de salud y el Reglamento de insumos para la salud. Se revisaron además la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos y las normas oficiales mexicanas en función de cumplir las exigencias para la comercialización de medicamentos en este territorio. Resultados: El proceso de registro se inició en junio de 2017 en México con acciones en función de completar los documentos e informaciones exigidas en el expediente de registro sanitario a presentarse. Entre ellos resaltan las consideraciones del Subcomité de Evaluación de Productos Biotecnológicos y el Comité de Moléculas Nuevas, la evaluación del expediente por un Tercero Autorizado y documentos emitidos por el Centro Nacional de Farmacovigilancia e Instituto Mexicano de la Propiedad Industrial. Se presentó la solicitud del registro sanitario ante Cofepris y esta se aprobó en mayo de 2018. Conclusiones: El trabajo con grupos de expertos permitió a la autoridad mexicana hacer un trabajo más expedito basado en las evidencias de las evaluaciones realizadas que son parte de la información del registro sanitario. Como resultado de este proceso, se otorgó el Registro Sanitario a Heberprot-P® en mayo de 2018 y Cofepris lo reconoció como un medicamento biotecnológico innovador.

Abstract Lower-extremity diabetic ulcers are responsible for 80% of annual worldwide nontraumatic amputations. Epidermal growth factor (EGF) reduction is one of the molecular pillars of diabetic ulcer chronicity, thus EGF administration may be considered a type of replacement therapy. Topical EGF administration to improve and speed wound healing began in 1989 on burn patients as part of an acute-healing therapy. Further clinical studies based on topically administering EGF to different chronic wounds resulted in disappointing outcomes. An analysis of the literature on unsuccessful clinical trials identified a lack of knowledge concerning: (I) molecular and cellular foundations of wound chronicity and (II) the pharmacodynamic requisites governing EGF interaction with its receptor to promote cell response. Yet, EGF intra- and perilesional infiltration were shown to circumvent the pharmacodynamic limitations of topical application. Since the first studies, the following decades of basic and clinical research on EGF therapy for problem wounds have shed light on potential uses of growth factors in regenerative medicine. EGF’s molecular and biochemical effects at both local and systemic levels are diverse: (1) downregulation of genes encoding inflammation mediators and increased expression of genes involved in cell proliferation, angiogenesis and matrix secretion; (2) EGF intervention positively impacts both mesenchymal and epithelial cells, reducing inflammation and stimulating the recruitment of precursor circulating cells that promote the formation of new blood vessels; (3) at the subcellular level, upregulation of the EGF receptor with subsequent intracellular trafficking, including mitochondrial allocation along with restored morphology of multiple organelles; and (4) local EGF infiltration resulting in a systemic, organismal repercussion, thus contributing to attenuation of circulating inflammatory and catabolic reactants, restored reduction-oxidation balance, and decreased toxic glycation products and soluble apoptogenic effectors. It is likely that EGF treatment may rearrange critical epigenetic drivers of diabetic metabolic memory.

ABSTRACT INTRODUCTION Diabetic foot ulcers are a chronic complication in patients with diabetes mellitus. They appear as a result of the combination of diabetic polyneuropathy and angiopathy, and in many cases require amputation of the affected extremity. Clinical trials have demonstrated that repeated local infiltration with Heberprot-P can improve healing of chronic diabetic foot ulcers. Although there is evidence of its effects as a granulation stimulator and on cell migration and proliferation, genetic control mechanisms explaining its anti-inflammatory and oxidative stress reduction properties are not yet thoroughly understood. OBJECTIVE Analyze changes in expression of genes involved in healing after treatment of diabetic foot ulcers with Heberprot-P. METHODS Biopsies were collected from diabetic foot ulcers of 10 responding patients before and after 2 weeks’ treatment with Heberprot-P (75-μg applied intralesionally 3 times per week). Total RNA was obtained and quantitative PCR used to determine expression of 26 genes related to inflammation, oxidative stress, cell proliferation, angiogenesis and extracellular matrix formation. Genetic expression was quantified before and after treatment using REST 2009 v2.0.13. RESULTS After treatment, there was a statistically significant increase in expression of genes related to cell proliferation, angiogenesis and formation of extracellular matrix (PDGFB, CDK4, P21, TP53, ANGPT1, COL1A1, MMP2 and TIMP2). A significant decrease was observed in gene expression related to inflammatory processes and oxidative stress (NFKB1, TNFA and IL-1A). CONCLUSIONS Our findings suggest that Heberprot-P’s healing action on diabetic foot ulcers is mediated through changes in genetic expression that reduce hypoxia, inflammation and oxidative stress, and at the same time increase cell proliferation, collagen synthesis and extracellular matrix remodeling. The kinetics of expression of two genes related to extracellular matrix formation needs further exploration.

Abstract The incidence of root diseases was estimated in apple orchards from Chihuahua, Mexico. Three hundred isolates (fungi and Oomycetes) were identified in samples of root tissue and soil of trees with infectious damage symptoms and disease symptom-free trees. At the same time, putatively antagonistic agents were isolated and subsequently identified. The pathogenicity of fifteen selected isolates (eight fungi and seven Oomycetes), was tested in twelve apple rootstocks under greenhouse conditions. In addition, the in vitro antagonistic activity of Trichoderma and Bacillus species was evaluated against seven of the selected Oomycetes. The incidence of infection damage of roots in 20 tested orchards was 17% (1-40%). Fusarium was the most widely distributed fungi (67.8%). The distribution of the other organisms was variable. Four species of Trichoderma were identified, with T. gamsii being the most widely distributed (72.5%). Bacillus spp. substantially reduced the radial growth (>90%, p=0.05) of Phytophthora cactorum. Eleven rootstocks were susceptible to Pythium ultimum y Phytophthora cactorum C3. The G.935, Standard and M.25 rootstocks were the most resistant with 0% incidence. The antagonistic species of both genera inhibited the in vitro growth of P. cactorum (86.4-93.8%, p= 0.05), respect to Pythium species, and therefore, they might be used as biological control agents.

Resumen Se estimó la incidencia de enfermedades de raíz en manzanos de Chihuahua, México, y se identificaron trescientos aislados (hongos y Oomicetos) tomados del tejido de raíz y suelo de la rizosfera de árboles con síntomas de infección y libres de síntomas de enfermedad. Paralelamente, se aislaron e identificaron hongos putativamente antagonistas. Se determinó la patogenicidad de quince aislados seleccionados (ocho hongos y siete Oomicetos) sobre doce portainjertos de manzano bajo condiciones de invernadero. Adicionalmente, se evaluó la actividad antagónica in vitro de especies de Trichoderma y Bacillus contra siete de los Oomicetos seleccionados. La incidencia de daños infecciosos en raíz en 20 huertos analizados fue del 17% (1-40%). Fusarium fue el hongo más ampliamente distribuido (67.8%). La distribución del resto de los organismos fue variable. Se identificaron cuatro especies de Trichoderma, siendo T. gamsii la más ampliamente distribuida (72.5%). Bacillus spp., redujo sustancialmente el crecimiento radial (>90%, p=0.05) de Phytophthora cactorum. Once portainjertos fueron susceptibles al menos a Pythium ultimum y Phytophthora cactorum C3. Los portainjertos G.935, Standard y M.25 fueron los más resistentes con 0% de incidencia. Las especies antagonistas de ambos géneros inhibieron in vitro significativamente el crecimiento de P. cactorum (86.4-93.8%, p= 0.05), respecto a especies de Pythium, por lo que podrían ser utilizados como agentes de control biológico.

Diabetic healing failure is the clinical expression of countless molecular and cellular disorders having hyperglycemia as the proximal trigger. The fibroblast is a critical building-block cell type for the healing process. Under high glucose concentrations fibroblasts physiology is perturbed. The epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling system is crucial for different healing events. We examined the effect of high glucose burden on healthy-donor' cutaneous fibroblasts proliferation, so as the EGFR autophosphorylation on a critical tyrosine residue, along with the activation of downstream signaling pathways proximal to cyclin D1 expression. Fibroblasts were cultured in 15 % FBS at either 5 (normal glucose) or 35 (high glucose) mM under standard culture conditions. Concurrent osmotic control was included. After 6 days of incubation under high glucose, doubling time was calculated. Cells suspensions were plated, fixed and immunolabelled with antibodies directed to phosphorylated forms of EGFR (Y1197), AKT1 (S473) and mTOR (S2448), and native forms of PI3K p85 alpha subunit and cyclin D1. The ratio of cells positive to the diaminobenzidine/peroxidase reaction was calculated and its intensity estimated according to published methodologies. High glucose concentration significantly increased doubling time 5-fold, as compared to cells grown in physiological conditions. Hyperglycemia reduced the constitutive EGFR autophosphorylation. Accordingly, PI3K was also significantly attenuated. Downstream switches AKT1 and mTOR were also affected and very significantly on the signal intensity. Cyclin D1 expression was completely abrogated due to high glucose burden. Collectively, these data suggest that high glucose exposure hinders fibroblasts proliferation by disrupting the EGFR/PI3K/AKT1/mTOR/Cyclin D1 axis.

La fisiología de los fibroblastos, esenciales para la cicatrización, se perturba ante altas concentraciones de glucosa. Se estudió el efecto de altas cargas de glucosa sobre la proliferación de fibroblastos cutáneos de donantes sanos a través de la cascada de señalización del factor de crecimiento epidérmico (EGFR): la autofosforilación del EGFR y la activación de intermediarios de la transducción hasta la ciclina D1. Los fibroblastos se cultivaron durante seis días en condiciones estándar con SFB al 15 %, y glucosa a 5 mM (glucosa normal) o 35 mM (glucosa alta). Se incluyó un control osmótico concurrente. Tras seis días se estimó el tiempo de duplicación. Las suspensiones celulares se sembraron, fijaron e inmunomarcaron con anticuerpos específicos contra las formas fosforiladas de EGFR (Y1197), AKT1 (S473) y mTOR (S2448), y las formas nativas de la subunidad p85 alfa de la PI3K y la ciclina D1. Se calculó la proporción de células positivas a la reacción de diaminobenzidina/peroxidasa, y su intensidad según procedimientos estándar. Las altas concentraciones de glucosa multiplicaron en 5 veces el tiempo de duplicación comparado con el de células cultivadas en condiciones fisiológicas. También redujo la autofosforilación constitutiva del EGFR, atenuó significativamente la subsiguiente fosforilación de PI3K y muy significativamente la de sus intermediarios de transducción AKT1 y mTOR. La expresión de la ciclina D1 se abolió ante las altas cargas de glucosa. Los resultados sugieren que la exposición a altas concentraciones de glucosa afecta la proliferación de los fibroblastos al perturbar el eje de transducción EGFR/PI3K/AKT1/mTOR/Ciclina D1.

Introduction: ulcerative colitis is a little known chronic inflammatory disease in colonic mucosa. The positive effect of epidermal growth factor was shown in a previous report, with enema use for treatment of mild to moderate left-sided manifestation of the disease. This evidence provided the basis for evaluating the efficacy and safety profile of a viscous solution of this product. Methods: thirty-one patients were randomized to three groups for daily medications during 14 days. Twelve received one 10 mg enema of epidermal growth factor dissolved in 100 mL of viscous solution whereas nine were treated with placebo enema; both groups also received 1.2 g of oral mesalamine per day. The other group included ten patients with 3 g / 100 mL of mesalamine enema. Primary end point was clinical responses after two weeks of treatment, defined as a decreased of, at least three points from baseline, the Disease Activity Index and endoscopic or histological evidences of improvement. Results: remission of disease was observed in all patients in the epidermal growth factor group, and six in both, mesalamine enema and placebo group. All the comparisons between groups showed statistically significant superiority for epidermal growth factor, the only product with significant reduction in disease activity index as well as the presence and intensity of digestive symptoms in patients after treatment. None adverse event was reported. Conclusions: the results agree with previous molecular and clinical evidences, indicating that the epidermal growth factor is effective to reduce disease activity and to induce remission. A new study involving more patients should be conducted to confirm the efficacy of the epidermal growth factor enemas.

Introducción: la colitis ulcerosa es una enfermedad inflamatoria crónica de etiología poco conocida, que afecta la mucosa del colon. El efecto positivo del factor de crecimiento epidérmico fue reportado en estudio previo con uso de enema para tratamiento de la manifestación izquierda leve o moderada de la enfermedad. Este antecedente sirvió de base para evaluar la eficacia y perfil de seguridad de una solución viscosa del producto. Métodos: fueron aleatorizados 31 pacientes hacia tres grupos de tratamiento diario durante 14 días. Doce recibieron enemas de 10 mg de factor de crecimiento epidérmico en 100 mL de solución viscosa, mientras nueve fueron tratados con enemas placebo conteniendo solamente solución viscosa. Ambos grupos recibieron además 1,2 g diarios de mesalacina oral. El tercer grupo incluyó 10 pacientes con mesalacina en enemas de 3g / 100 mL. La variable principal de eficacia fue la respuesta clínica al finalizar las dos semanas de tratamiento, definida como la disminución de, al menos tres puntos, el índice basal de actividad de la enfermedad acompañada de mejoría endoscópica o histológica. Resultados: se alcanzó remisión de la enfermedad en todos los pacientes que recibieron factor de crecimiento epidérmico y en seis de los grupos mesalacina enema y placebo. Todas las comparaciones entre grupos mostraron superioridad estadísticamente significativa para el factor de crecimiento epidérmico, único producto que logró la reducción significativa del índice de actividad de la enfermedad y de la presencia e intensidad de los síntomas digestivos en los pacientes luego del tratamiento. Ningún evento adverso fue reportado. Conclusiones: estos resultados son consistentes con las anteriores evidencias moleculares y clínicas que señalan al factor de crecimiento epidérmico capaz de reducir la actividad e inducir la remisión de la colitis ulcerosa. Debe ser realizado un nuevo estudio en un número mayor de pacientes para confirmar la eficacia de los enemas de factor de crecimiento epidérmico.

Type 2 diabetes mellitus comprises a group of non-communicable metabolic diseases with an expanding pandemic magnitude. Diabetes predisposes to lower extremities ulceration and impairs the healing process leading to wounds chronification. Diabetes also dismantles innate immunity favoring wound infection. Amputation is therefore acknowledged as one of the disease's complications. Hyperglycemia appears as the proximal detonator of toxic effectors including pro-inflammation, spillover of reactive oxygen and nitrogen species. The systemic accumulation of advanced glycation end-products irreversibly impairs the entire physiology from cells-to-organs. Insulin axis deficiency weakens wounds' anabolism and predisposes to inflammation. These factors converge to hamper fibroblasts and endothelial cells proliferation, migration, homing, secretion and organization of a productive granulation tissue. Diabetic wound bed may turn chronically inflamed, pro-catabolic and a superimposed source of circulating pro-inflammatory cytokines, establishing a self-perpetuating loop. Diabetic toxicity breadth includes mitochondrial damages in fibroblasts and endothelial cells becoming prone to apoptosis thus hindering granulation. Endothelial progenitor cells recruitment and tubulogenesis are also impaired. Failure of wound re-epithelialization remains as a clinical challenge while it appears to be biologically multifactorial. Novel medical interventions as the local intra-ulcer infiltration of epidermal growth factor have emerged to hopefully reduce the current worldwide amputation rates.

La diabetes mellitus tipo 2 implica desórdenes metabólicos no transmisibles, cuya incidencia va en aumento, con una extensión casi pandémica. Predispone a padecer úlceras en las extremidades inferiores y a su cronicidad, al afectar el proceso de cicatrización. También interfiere la inmunidad innata, lo que favorece la infección de posibles lesiones, y puede conducir a la amputación. La hiperglucemia desencadena los efectores tóxicos que incluyen la inflamación y la producción en exceso de especies reactivas de oxígeno y nitrógeno. Los productos finales altamente glicosilados, que se acumulan sistemáticamente, desarticulan la estructura de células y órganos. La deficiencia en el eje insulínico debilita el anabolismo en las lesiones y predispone a la inflamación. Estos factores convergen y debilitan la proliferación, la migración, el direccionamiento, la secreción y la organización de los fibroblastos y células endoteliales, lo que interfiere en la formación de tejido de granulación útil. El lecho de las heridas puede convertirse en una fuente inflamatoria y procatabólica de citocinas, y constituir un ciclo de perpetuación. La toxicidad diabética provoca daños mitocondriales en los fibroblastos y las células endoteliales, que los hace susceptibles de apoptosis y dificulta la granulación del tejido. También afecta el reclutamiento de las células progenitoras endoteliales, e impide la tubulogénesis. La regeneración del tejido epitelial en las lesiones sigue siendo un desafío clínico que depende de múltiples factores biológicos. Nuevas intervenciones médicas, como la infiltración local intralesional del factor de crecimiento epidérmico recombinante, prometen la reducción de las tasas mundiales de amputación.

Tissue fibrosis is a leading cause of morbidity and mortality. Current treatments for conditions such as hepatic fibrosis have been unsuccessful. The growth hormone relasing peptide 6 (GHRP6) is endowed with cardioprotective actions but its antifibrotic effect had not been anticipated. We examined the GHRP6 ability to prevent and revert liver cirrhosis after induction in Wistar rats by a subcutaneous administration of CCl4. GHRP6 effects were examined after concomitant and delayed administration to toxic respectively. The percentages of hepatic fat, fibrosis, nodularity and septae thickness were histologically and morphometrically determined. Ascitis and portal dilation were judged by ultrasound and serum biochemical profile and oxidative stress parameters determined. Mechanistic involvement of selective gene/proteins was assessed by RT-PCR and immunohistochemistry. Microarrays showed gene expression profiles of GHRP6-treated liver samples on CapitalBio Rat Genome Oligo Array. GHRP6 concomitant intervention prevented in more than 85% parenchymal fibrotic induration (p < 0.0001) and therapeutic administration for only 15 days allowed for 37% fibrotic clearance (p = 0.0004) with more than 30% reduction of septae thickness (p = 0.0011). The 60 days GHRP6 administration scheme produced a 75% reduction of the fibrotic area with more than 60% reduction of nodularity. GHRP6 reduced oxidative damage enhancing the activity of antioxidant enzymes. Vimentin and alpha smooth muscle actin immunodetection profile indicated GHRP6 reduced the number of activated stellate cells. GHRP6 administration reduced fibrogenic factors as TGF-ß and CTGF on Kupffer cells. Differentially expressed genes in the microarray experiment indicated GHRP6 modulate the redox balance and parenchymal cells response to injury. These evidences suggest GHRP6 may control the liver's fibroplastic response.

La fibrosis es causa fundamental de morbilidad y mortalidad. Los tratamientos actuales han fracasado. El péptido liberador de la hormona de crecimiento-6 (GHRP6) ejerce efectos cardioprotectores, pero no se ha descrito su acción antifibrótica. Se examinó la propiedad del GHRP6 para prevenir y revertir la cirrosis hepática, luego de su inducción en ratas mediante la administración de CCl4. Se evaluó el porcentaje de grasa hepática, fibrosis, nodularidad y grosor septal mediante estudios histomorfométricos y la ascitis o dilatación portal por ultrasonido. Se determinó el perfil bioquímico y los parámetros de estrés oxidativo en suero, así como la participación de genes y proteínas, mediante reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa e inmunohistoquímica. Se utilizó un microarreglo de oligonucleótidos del genoma de rata para estudiar el perfil de expresión de los genes inducidos por el GHRP6. La intervención concomitante con GHRP6 previno la induración fibrótica en más del 85% (p < 0.0001). La administración terapéutica durante 15 días permitió la remoción fibrótica del 37% (p = 0.0004), la reducción del grosor septal superó el 30% (p = 0.0011). La administración durante 60 días redujo las áreas fibróticas en 75%, y la reducción de la nodularidad fue de más del 60%. El GHRP6 redujo el daño oxidativo porque aumentó la actividad de las enzimas antioxidantes y las células estrelladas activadas positivas a vimentina y actina alfa de músculo liso. También redujo la expresión de factores fibrogénicos sobre las células Kupffer. El perfil de expresión de genes indicó que el GHRP6 modula el balance redox y la respuesta al daño tisular en las células parenquimales. Estas evidencias sugieren que el GHRP6 pudiera controlar la respuesta fibroplásica del hígado.

Impaired healing in diabetes affects the resolution of both acute and chronic wounds. The vicious circle between wound chronicity and a deficient control of local infection is the cause that diabetic patients constitute 85% of all non-traumatic lower extremity amputations. From an etiological viewpoint, hyperglycemia is what triggers the onset and progression of biochemical disturbances that lead to systemic complications. In contrast to normal wound healing, physiological apoptotic clearance of inflammatory cells is prevented and the inflammatory phase is abnormally prolonged in diabetic wounds. Pro-inflammatory cytokines as tumor necrosis factor-alpha (TNF-a) and interleukin-1b (IL-1b) are increased in diabetic wounds with negative local and remote consequences. The etiopathogenic network consisting of inflammatory cytokines, local proteases, reactive oxygen and nitrogen species produces a cytotoxic and pro-degradation environment within the wound bed that impairs granulation and re-epithelialization. The nonenzymatic glycation of proteins, generating advanced glycation end-products (AGE), acts as an active pathogenic stream affecting healing. The accumulation of AGE interferes with DNA replication, cell anchoring, migration and proliferation. The binding of AGE to a receptor model (RAGE) may completely hamper the healing process. Diabetes impairs the recruitment and differentiation of bone marrow-derived stem cells, thereby limiting the availability of tissue repair cells. Re-epithelialization is also hindered by incomplete activation and/or differentiation of keratinocytes that impair migration. Novel and revolutionary pharmacological interventions are urgently needed to reduce diabetes complications, such as amputations of the lower extremities.

El deterioro de la cicatrización en la diabetes afecta la resolución tanto de heridas agudas como crónicas. Se establece un círculo vicioso interamplificativo entre el fenotipo crónico y el control deficiente de la infección, que determina que el 85% de todas las amputaciones no traumáticas de miembros inferiores se practiquen en individuos diabéticos. La hiperglicemia es el detonador etiopatogénico proximal en el inicio y progresión de los desórdenes bioquímicos que dan lugar a las complicaciones sistémicas. Contrario a lo que ocurre durante la cicatrización normal, la eliminación apoptótica fisiológica de las células inflamatorias se detiene, lo que provoca un anormal estancamiento de la fase inflamatoria en las heridas diabéticas. En estas, además existe una sobre-expresión de citocinas pro-inflamatorias como el factor de necrosis tumoral alfa (del inglés, TNF-a) y la interleucina-1b (IL-1b), lo que trae consigo consecuencias deletéreas de impacto local y remoto. La red etiopatogénica de citocinas inflamatorias, proteasas locales, especies reactivas al nitrógeno y al oxígeno, propician un ambiente citotóxico y pro-degradativo en el lecho de la herida, que perjudica la granulación y re-epitelización. La glicosilación no enzimática de proteínas persiste como un ingrediente patogénico activo en el deterioro del proceso de cicatrización. La acumulación anormal de productos glicosilados interfiere con la replicación del ADN, el anclaje, la migración y la proliferación celular. La diabetes afecta la liberación, el reclutamiento y la diferenciación de las células madre derivadas de médula ósea, lo que limita la disponibilidad de estas células para reparar el tejido. La re-epitelización también se altera debido a la activación y/o diferenciación incompleta de los queratinocitos, lo cual obstruye su migración. Se necesitan de forma urgente abordajes farmacológicos novedosos y revolucionarios para reducir las diversas complicaciones de la diabetes, tales como la temida amputación de miembros inferiores.

Burn disease stimulates systemic inflammatory response and its morphologic expression that is multiple organ failure. With the objective of identifying the behaviour of oxidative stress through malonaldehyde, superoxide dismutase, and catalase, and its change by using the systemic treatment based on Aloe b, ozone or epidermal growth factor, a dry burn model of a 11 % area in balb/c female mice of 20 ± 2 g (n= 24) was designed. Eutanasia was applied at different moments, organs were studied with qualitative evaluation of intensity degrees, and biochemical variables were analyzed from the kidney and the liver of mice. Test G served to find out dependence among variables and Test t was used to compare percentages. Bifactoral variance analysis and Duncan´s multiple range test were used in the studied oxidative stress variables. Ethical standards on work with animals were complied with. Dependence was observed among the various groups and survival rate (G= 268,83***) was higher in the treated groups. Untreated groups showed more intensive multiple organ damage and worse oxidative stress response. The groups treated with ozone and epidermal growth factor showed better recovery. The treatment with ozone and epidermal growth factor immediately after burning favored recovery and survival of balb/c mice.

La enfermedad por quemadura estimula la respuesta inflamatoria sistémica y el daño múltiple de órganos, su expresión morfológica. Con el propósito de identificar el comportamiento del estrés oxidativo mediante el malondialdehído, la superóxido dismutasa y la catalasa y su modificación con el empleo del tratamiento sistémico con Aloe b, ozono o factor de crecimiento epidérmico, se elaboró un modelo de quemadura seca de un área de 11 %, en ratones hembras, balb/c de 20 ± 2 g (n= 24). Se aplicó eutanasia en diferentes tiempos, se estudiaron los órganos con evaluación cualitativa en grados de intensidad y las variables bioquímicas se obtuvieron del riñón y del hígado. La prueba G se empleó para conocer la dependencia entre las variables y la prueba t se usó al comparar porcentajes. El análisis de varianza bifactorial y la prueba de rango múltiple de Duncan se empleó en las variables del estrés oxidativo estudiadas. Se siguieron las normas éticas en el trabajo con los animales. Existió dependencia entre los diferentes grupos y la vitalidad (G= 268,83***) superior en los grupos tratados. Los grupos no tratados tuvieron mayor intensidad del daño múltiple de órganos y peor respuesta del estrés oxidativo. Los grupos con mejor evolución fueron el tratado con ozono y el tratado con factor de crecimiento epidérmico. El tratamiento inmediatamente después de la quemadura con ozono y factor de crecimiento epidérmico resultó favorable para la evolución y supervivencia de los animales.

The disease caused by burns allow to follow research lines related to the syndrome of generalized systemic inflammation and to the syndrome of multiple organ dysfunction. In order to develop an experimental burn model that may be used in biomedical research, Balb/c female mice of 20±2g were used, a metal mesh with an open-work of 0.5 cm was made for the boxes, and ketamine (100 mg/kg) was administered 5 days before the burn. The total dry burn was attained by using 2 devices adapted to be coupled with a welding station with automatic temperature control to have between 11 and 22 % of burned body surface (paravertebral). Different burn times were applied. The evolution of the animals was observed and the t test was used to compare the percentage values among the groups.11 % of the inferior paravertebral BBS was the most adequate. It was also demonstrated that the desired mortality or survival may be obtained by varying the time. The metal suspension mesh proved to be efficient for the evolution of the depilation, the burn and the observation of the animal. The utilization of the welding equipment with digital control allows to mantain a fixed temperature during the whole experiment and it has multiple purposes, such as to conduct studies on burn prognoses. The dry burn model serves as a biological model to study the processs connected with the disease due to burns.

La enfermedad por quemaduras permite líneas de investigaciones relacionadas con el síndrome de inflamación sistémica generalizada y el síndrome de disfunción múltiple de órganos. Con el propósito de desarrollar un modelo experimental de quemadura factible de emplear en investigaciones biomédicas, se utilizaron ratones Balb/c, hembras de 20±2 g, se elaboró una malla metálica con calado de 0,5 cm para las cajas, se depilaron con métodos combinados y se empleó ketamina (100 mg/kg) 5´antes de la quemadura. La quemadura seca total se logró con el empleo de 2 dispositivos elaborados para lograr entre el 11 y 22 % de superficie corporal quemada (SCQ), paravertebral, adaptados para acoplar a una estación de soldadura con control automático de la temperatura. Se aplicaron diferentes tiempos de quemadura. Se observó la evolución de los animales y se empleó la prueba t para comparar los valores de porcentaje entre los grupos. El 11 % de SCQ paravertebral inferior fue el más adecuado y variando el tiempo se puede obtener la mortalidad o supervivencia deseada. La malla de suspensión metálica elaborada fue eficiente para la evolución del depilado, la quemadura y la observación del animal. El empleo del equipo de soldadura con control digital posibilita mantener la temperatura fija todo el experimento y se adapta a diferentes propósitos, entre ellos, se pueden realizar estudios sobre pronósticos de quemadura. El modelo de quemadura seca elaborado sirve como modelo biológico para el estudio de los procesos relacionados con la enfermedad por quemaduras.