ABSTRACT: Physalis is an herbaceous species native to the Andes region. Currently, it is cultivated in various Brazilian states due to the economic interest of growers for this new fruit. Physalis plants grown in the field showed symptoms of shoot proliferation, leaf malformation, and chlorosis. Since these symptoms are commonly induced by phytoplasmas, this study investigated to confirm the presence of these prokaryotes in symptomatic plants. After DNA extraction from symptomatic and asymptomatic plants, phytoplasmas were found in all affected plants through the nested PCR. Examination by transmission electron microscopy (TEM) using appropriately prepared segments of leaf veins allowed the visualization of typical pleomorphic cells of phytoplasmas in the phloem of symptomatic plants. The computer-simulated RFLP patterns and the phylogenetic analysis allowed identifying the detected phytoplasmas as a ‘Candidatus Phytoplasma fraxini’-related strain belonging to the 16SrVII-B subgroup. Moreover, physalis was identified as an additional host species for phytoplasmas in the 16SrVII group, expanding the current knowledge on the host range of phytoplasmas in this group.

ABSTRACT: Acerola bushes were observed showing symptoms of shoot proliferation, generalized stunting, yellowing and decline. Since these symptoms are typically induced by phytoplasmas, this survey was carried out with the aim of detecting, identifying and classifying the supposed phytoplasma present in symptomatic bushes. Total DNA was extracted from symptomatic and asymptomatic samples and used in nested PCR conducted by the primer pairs R16mF2/mR1 followed by R16F2n/R2. Amplifications of expected genomic fragments of 1.2 kb revealed the presence of phytoplasma in 73 % of the symptomatic samples. Molecular analyses, using computer-simulated RFLP patterns, similarity coefficient calculation and phylogenetic analysis allowed for classifying the bacterium as a ‘Candidatus Phytoplasma pruni’ – related strain (subgroup 16SrIII-F). The phytoplasma induced the same symptoms in healthy acerola plants inoculated by grafting and showed molecular identity with the strain identified in naturally infected bushes. Although various strains belonging to distinct subgroups within the 16SrIII group have been previously identified in Brazil, this is the first report of the presence of a representative of the 16SrIII-F subgroup in the Brazilian agroecosystem. Considering that phytoplasmas can be systemically distributed throughout the plant and acerola plants are vegetatively propagated, it is recommended that propagation material be obtained from mother plants free of the pathogen.

ABSTRACT: Momordica charantia (bitter melon) presents two distinct types or varieties, known as wild type and commercial type. Plants of the wild type are hosts of a phytoplasma of the group 16SrIII-J, which is associated with a disease known as witches’ broom. However, this disease has not yet been reported in commercial bitter melon. Thus, symptomatic plants of the commercial type were analyzed in order to demonstrate the association between phytoplasmas and disease. In further assays, strains found in symptomatic plants of the commercial type were subjected to analysis of sequences of the secY gene to determine the extent of genetic diversity. Amplification of DNA fragments from genes 16Sr rRNA (1.2Kb) and secY (1.6Kb) revealed association of phytoplasma with symptomatic plants of the commercial type. Virtual Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) analysis identified this phytoplasma as a member of the subgroup 16SrIII-J. Phylogenetic analysis showed that the phytoplasma was closely related to the representative of the 16SrIII-J subgroup. Molecular analysis indicated that the secY gene, in spite of the greater genetic variation compared with 16S rRNA gene, did not separate strains of the phytoplasma of the subgroup 16SrIII-J among those strains present in M. charantia.

ABSTRACT: Sesame (Sesamum indicum L.) plants exhibiting symptoms of phyllody disease were observed in commercial fields in Paraguay. The symptoms were indicative of infection by phytoplasmas. Thus, the present study investigated the association between affected plants and phytoplasma, which was later analyzed using molecular and phylogenetic methods. Total DNA was extracted from symptomatic and asymptomatic plants and used in nested PCR assays using primers R16SN910601/R16SN011119 and R16F2n/16R2. Amplified products of 1.2 Kb revealed the presence of phytoplasma in all diseased plants, and electron microscopy confirmed the presence of phytoplasmas within phloem vessels. Nucleotide sequences from sesame phytoplasma shared 99 % similarity with phytoplasmas belonging to group 16SrI. Computer-simulated RFLP indicated that the detected phytoplasma is representative of the 16SrI-B, therefore, a ‘Candidatus Phytoplasma asteris’-related strain. Phylogenetic analysis was in agreement with virtual RFLP. Our findings expand the current knowledge regarding distribution of representatives of the aster yellows group in a new agroecosystem and implicate sesame as a new host of 16SrI-B phytoplasma in Latin America.

Fitoplasmas foram encontrados em vinca (Catharanthus roseus), uma planta tropical herbácea. Plantas exibindo sintomas de virescência, filodia e variegação foram coletadas nos estados de Minas Gerais e São Paulo. O fitoplasma foi transmitido por enxertia a partir de uma planta de vinca infectada para plantas sadias da mesma espécie, e por Cuscuta sp. para uma planta sadia de citrus. Isolados de fitoplasma encontrados em plantas de vinca no Brasil tiveram a região 16S rDNA sequenciada e foram classificados no grupo 16SrIX, subgrupo A, pertencente a espécie 'Candidatus P. phoenicium'.

Periwinkle (Catharanthus roseus), a tropical perennial plant, was found to be infected by a phytoplasma. Plants exhibiting virescence, phyllody and variegation symptoms were collected in the states of Minas Gerais and São Paulo, Brazil. The phytoplasma was transmitted by grafting from an infected periwinkle plant to healthy plants and by dodder to a citrus plant. Phytoplasma isolates from periwinkle plants from Brazil had the 16S rDNA gene sequenced and were classified in the 16SrIX group, subgroup A, belonging to the 'Candidatus P. phoenicium' species.

No presente trabalho foi estudado o efeito da inoculação de plantas de milho com o fitoplasma, agente do enfezamento vermelho, sobre a atividade das enzimas peroxidase, β-1,3 glucanase, quitinase. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetação. Plantas de um híbrido de milho resistente e de um suscetível foram inoculadas através de cigarrinhas infectivas de Dalbulus maidis, 10 dias após a semeadura. Quando os sintomas começaram a aparecer, amostras de folhas foram coletadas em diferentes períodos de tempo para quantificar a atividade das enzimas. Os resultados mostraram um aumento na atividade das três enzimas em plantas inoculadas de ambos os híbridos. De maneira geral, os valores observados para o teor das diferentes enzimas foram mais elevados no híbrido suscetível quando comparado com ao resistente. Assim, os aumentos nos níveis de peroxidade, β-1,3 glucanase, e quitinase em plantas inoculadas se constituíram em evidência de alterações no metabolismo do hospedeiro causadas pelo fitoplasma. Por outro lado, uma vez que os aumentos não puderam ser correlacionados com a resistência de planta, há necessidade de novos estudos para poder interpretar estas alterações.

In the present work we studied the effect of inoculating corn plants with the maize bushy stunt phytoplasma on the activity of the enzymes peroxidase, β-1,3 glucanase and chitinase. The experiments were carried out inside a greenhouse. Plants of a resistant and a susceptible corn hybrid were inoculated by using infective Dalbulus maidis leafhoppers 10 days after sowing. When symptoms started to appear, leaf samples were collected at different periods to quantify enzyme activity. The results showed an increase in the activity of the three enzymes in inoculated plants of both hybrids. In general, the values observed for the level of the different enzymes were higher in the susceptible hybrid when compared to the resistant one. Thus, the increases in peroxidase, β-1,3 glucanase and chitinase levels in inoculated plants are evidence of changes in the host metabolism caused by the phytoplasma. On the other hand, since the increases could not be correlated with plant resistance further studies are needed to explain such changes.

Plantas de hibisco com superbrotamento e definhamento seguido de morte têm sido observadas nos municípios de São Paulo, Campinas e Piracicaba. Como os sintomas são sugestivos daqueles induzidos por fitoplasmas, o presente trabalho buscou identificar o possível fitoplasma associado com a doença. Assim, 14 plantas sintomáticas de hibisco foram coletadas em Piracicaba (SP) e submetidas ao PCR duplo com os primers P1/Tint-R16F2n/R2 e ao exame em microscópio eletrônico de transmissão. A identificação foi realizada por análise de RFLP com as enzimas de restrição BfaI, DraI, HaeIII, HhaI, HpaII, MboI, MseI, RsaI e TaqI. Testes de transmissão foram conduzidos com enxertia de ramos e uso de Cuscuta subinclusa. Os resultados de nested-PCR revelaram a presença consistente de fitoplasmas em todas as plantas sintomáticas e foram confirmados pela observação de corpúsculos pleomórficos no floema, através da microscopia eletrônica. A análise de RFLP mostrou que o fitoplasma encontrado em hibisco pertence ao grupo 16SrXV, o mesmo grupo do Candidatus Phytoplasma brasiliense. O fitoplasma foi transmitido de planta doente para sadia, tanto pela enxertia como pela C. subinclusa, demonstrando ser o agente do superbrotamento do hibisco.

Ornamental hibiscus have been affected by shoot proliferation and decline followed by death in several cities in São Paulo State, especially São Paulo, Campinas and Piracicaba. As the symptoms are suggestives of those induced by phytoplasmas, the present work aimed to identify the possible phytoplasma associated with the disease. Fourteen symptomatic hibiscus were sampled in Piracicaba, submitted to nested-PCR with the primers P1/Tint-R16F2n/R2 and processed by transmission electron microscopy. The identification was made by RFLP analyses with the restriction enzymes BfaI, DraI, HaeIII, HhaI, HpaII, MboI, MseI, RsaI, and TaqI. Transmission assays were performed by grafting and Cuscuta subinclusa. The presence of phytoplasma was always detected by molecular technique and electron microscopy in all samples. The RFLP analyses showed that the phytoplasma belongs to group 16SrXV, the same group of the Candidatus Phytoplasma brasiliense. It was experimentally transmitted by C. subinclusa to periwinkle and by grafting to hibiscus in which it reproduced the original symptoms. This indicates that the studied phytoplasma is the causal agent the disease.

Uma doença conhecida como síndrome do amarelecimento foliar da cana-de-açúcar ou amarelinho causou danos expressivos à cultura no estado de São Paulo, na década de noventa. A síndrome também foi registrada em outros países e investigações sobre a etiologia evidenciaram a associação da doença com vírus e fitoplasma, de forma isolada ou simultânea. A doença é potencialmente importante e ocorre endemicamente no estado paulista, por esta razão o presente estudo buscou demonstrar a ocorrência do fitoplasma em três tradicionais regiões produtoras de cana, localizadas no estado de São Paulo, através da detecção molecular deste agente em plantas naturalmente infectadas. Para isto, plantas sintomáticas das variedades SP71-6163, SP71-6180 e SP89-1115 foram amostradas em Piracicaba, Jaú e Ribeirão Preto e a partir do tecido foliar foi extraído o DNA total. PCR duplo foi processado com os "primers" P1/Tint-16F2n/R2 e os produtos foram analisados por eletroforese em gel de agarose. Amplificações de fragmentos de DNA de 1,2 kb evidenciaram a presença de fitoplasma em 36% das plantas sintomáticas e revelaram a sua ocorrência nas três regiões amostradas. Os resultados demonstraram a associação do fitoplasma com a doença e a importância de se manter uma atenta vigilância nos campos e viveiros, bem como buscar genótipos com bom nível de resistência nos programas de melhoramento.

Sugarcane yellow leaf syndrome caused serious damage to crops in the São Paulo State, Brazil, in the 1990's. The syndrome was also reported in other countries and investigations into the etiology revealed an association between the disease and virus and/or phytoplasma. The disease is potentially important and occurs endemically in that State, and for this reason the present study was conducted in order to demonstrate the occurrence of phytoplasma in three traditional sugarcane-producing areas, in São Paulo State, through molecular detection from naturally infected plants. Symptomatic plants belonging to varieties SP71-6163, SP71-6180 and SP89-1115 were sampled from Piracicaba, Jaú and Ribeirão Preto, and total DNA was extracted from foliar tissues. Nested PCR was conducted with primer pairs P1/Tint-16F2n/R2, and the amplified products were analyzed by electrophoresis on agarose gels. Amplified DNA fragments of 1.2 kb evidenced the presence of phytoplasma in 36% of symptomatic plants and revealed its occurrence in all sampled regions. The results demonstrated that phytoplasma is associated with the disease and that it is important to keep a safe inspection of nurseries and monitoring plants in the field, as well as to select sugarcane genotypes with a good level of resistance in breeding programs.

A murcha bacteriana, causada por Ralstonia solanacearum, é considerada uma doença de importância para a cultura da berinjela, sendo de difícil controle. O controle de doenças através de indução de resistência é um método que vêm se revelando como promissor. Basidiomas de Agaricus blazei e Lentinula edodes possuem substâncias do tipo antibiótico e outras substâncias capazes de atuarem como elicitoras da resposta de resistência em plantas, mostrando-se assim promissores no controle alternativo de fitopatógenos. O presente trabalho foi conduzido com o objetivo de estudar o efeito de extratos aquosos dos fungos e do indutor químico acibenzolar-S-metil (aSm) sobre o crescimento da bactéria in vitro e o controle da murcha bacteriana, bem como investigar seu efeito sobre a atividade de determinadas enzimas da planta. O efeito inibitório sobre o patógeno foi avaliado usando diferentes concentrações dos extratos aquosos. A indução de resistência foi estudada em plantas tratadas com o indutor biológico e químico, medindo-se a intensidade de murcha e determinando-se as alterações de algumas enzimas. Os resultados revelaram que os isolados de A. blazei e L. edodes, utilizados em diversas diluições, não exerceram efeito inibitório in vitro. Em relação à indução de resistência, extratos dos isolados Abl-11 e Abl-28 de A. blazei (15%, v/v) e o aSm (0,05 g/L) promoveram redução significativa na ocorrência de folhas murchas, quando aplicados dois dias antes da inoculação. O aumento na atividade de peroxidase foi verificado em plantas tratadas com extratos de Abl-11, Abl-28 e com suspensão de aSm. A atividade de quitinase, fenilalanina amônia-liase e polifenoloxidase não foi alterada nas plantas tratadas com extrato de Abl-28 e com o aSm. No entanto, plantas de berinjela tratadas com Abl-11 exibiram uma aumento na atividade de fenilalaniana amônia-liase e de polifenoloxidase, enquanto que a atividade de quitinase não foi alterada. Com base nos resultados, ficou evidenciado que o aSm e os isolados Abl-11 e Abl-28 de A. blazei apresentam potencial para induzir resistência em berinjela contra R. solanacearum.

The bacterial wilt, caused by Ralstonia solanacearum, is an important disease for eggplants, which control is difficult. Induction of resistance in plants is a promising method for disease control. Fruiting bodies of Agaricus blazei and Lentinula edodes have substances that exhibit antibiotic activity or are able of acting as elicitors of resistance in plants. The objectives of the present work were to verify the effect of aqueous extracts from the mushrooms and the plant activator acibenzolar-S-methyl (aSm) on in vitro bacterial growth and to control bacterial wilt as well as to investigate the activity of certain enzymes. The inhibitory effect on the pathogen was evaluated by using different concentrations of aqueous extracts. The induced resistance was studied in plants treated with the biological or chemical inducers, by measuring the intensity of wilt and alterations in some defense-related enzymes. The results showed that the isolates of A. blazei and L. edodes, used in several dilutions, did not inhibit in vitro bacterial growth. The extracts of the isolates Abl-11 and Abl-28 from A. blazei (15%, v/v) and aSm (0,05 g/L) caused significant reduction in the occurrence of wilted leaves, when applied two days before inoculation. Plants treated with aSm or aqueous extracts of Abl-11 and Abl-28 exhibited increased peroxidase activity. The chitinase, phenylalanine ammonia-lyase and polyphenoloxidase activities did not change in plants treated with Abl-28 and aSm. However, plants treated with Abl-11 exhibited increased phenylalanine ammonia-lyase and polyphenoloxidase activities, while the chitinase activity was not affected. Based upon the results, it was shown that the aSm and the isolates Abl-11 and Abl-28 of A. blazei exhibited a potential to induce resistance in eggplants against R. solanacearum.

A escaldadura das folhas, causada pela bactéria Xanthomonas albilineans (Ashby) Dowson, é uma das cinco doenças mais importantes da cana-de-açúcar e sua ocorrência reduz o rendimento e a longevidade da cultura. Variedades resistentes têm sido usadas para o controle, porém há evidências da ocorrência de variantes do patógeno. Em campos comerciais do Estado de São Paulo, tem sido observado que a mesma variedade de cana se apresenta como resistente em uma região e suscetível em outra, sugerindo a ocorrência de variantes na população do patógeno. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a presença de diversidade genética da bactéria em áreas comerciais. Um total de 50 isolados foram obtidos em cultura pura a partir de plantas sintomáticas coletadas em Piracicaba (SP), Jaú (SP), região de Ribeirão Preto (SP) e Iturama (MG). Os isolados foram confirmados como pertencentes à espécie X. albilineans por meio de características de colônias, serologia e PCR com 'primers' específicos. Para caracterização da diversidade genética, foi usado o método de Rep-PCR, a partir do DNA extraído de cada isolado. Oito isolados, provenientes dos diferentes grupos identificados por rep-PCR, foram usados em testes de patogenicidade, por meio de inoculação em duas variedades de cana. Os resultados confirmaram todos os isolados como pertencentes à espécie X. albilineans. Por meio de rep-PCR, foi demonstrada diversidade genética entre os isolados, os quais foram separados em três grupos: um grupo composto somente pelos isolados de Piracicaba; um segundo, contendo todos os isolados amostrados em Jaú e na região de Ribeirão Preto, e um isolado de Iturama; e, no terceiro, somente dois isolados coletados em Iturama. Os testes de patogenicidade revelaram diferenças na agressividade entre isolados, porém sem relação com sua região de origem. Este trabalho revelou a ocorrência de diversidade genética e de agressividade dentro da espécie X. albilineans, evidenciando uma possível relação entre ocorrência de variantes do patógeno e reação de variedades de cana cultivadas no estado de São Paulo.

Leaf scald is among the five more important diseases in sugarcane and its occurrence reduces yield and crop longevity. Resistant cultivars have been used to control the disease, but there is evidences of the occurrence of variants of the pathogen. In commercial fields located in São Paulo State, it has been observed that one sugarcane cultivar can show symptoms in some regions but not in anothers, suggesting the presence of variants within the pathogen population. Thus, the aim of this study was to investigate the presence of genetic diversity of the bacteria in commercial areas. A total of 50 isolates were obtained in pure culture from symptomatic plants collected in 'Piracicaba (SP)', 'Jaú (SP)', 'Ribeirão Preto (SP)' region and 'Iturama (MG)'. The isolates were confirmed as X. albilineans by using characteristics such as of colony type, serology and PCR with specific primers. Rep-PCR method was used to evaluate genetic diversity using DNA extracted from each isolate. Eight isolates, from different groups identified by rep-PCR, were used in assays for pathogenicity by inoculation on two sugarcane cultivars. The results confirmed that all isolates belonged to X. albilineans. By using rep-PCR it was demonstrated the occurrence of genetic diversity among the isolates, which were separated in three groups: group 1- isolates only from 'Piracicaba'; group 2- isolates sampled in 'Jaú,' the isolates collected in 'Ribeirão Preto' region and one isolate from Iturama; and group 3 - two isolates from 'Iturama'. Assays for pathogeneicity revealed differences in agressivity among isolates, but not related to regions where they were collected. This study revealed the occurrence of genetic and agressivity diversity within X. albilineans population suggesting a possible relationship between occurrence of bacteria variants and reaction of sugarcane cultivars grown in São Paulo State.

Doenças de hortaliças de ocorrência no território brasileiro e em outras áreas do mundo têm sido associadas a diversos fitoplasmas. Na região de Piracicaba-SP e Bragança Paulista-SP, em plantas de tomate e berinjela foram observados sintomas típicos de enfezamento caracterizados por porte reduzido, clorose foliar, superbrotamento de ramos, desenvolvimento anormal do cálice, encurtamento de entre-nós, redução no tamanho de folhas, flores e frutos. Através de duplo PCR, utilizando os iniciadores R16 mF1/mR2 e R16 F2n/R2, fragmentos de DNA de 1,2 kb foram amplificados de amostras sintomáticas, demonstrando a presença de fitoplasma nos tecidos das plantas. O uso de iniciadores específicos demonstrou que estes fitoplasmas eram afiliados ao grupo 16SrIII. Análises de RFLP, usando as enzimas de restrição AluI, HpaII, KpnI, MboI, MseI e RsaI confirmaram que os fitoplasmas detectados eram representantes do grupo 16SrIII. Os fragmentos de DNA amplificados foram clonados em Escherichia coli, sequenciados e comparados, por homologia de seqüência, entre si e com outros fitoplasmas do grupo 16SrIII. Um índice de similaridade de seqüência acima de 95% foi encontrado quando seqüências dos fitoplasmas detectados em tomate e berinjela foram comparadas com aquelas de outros representantes do grupo 16SrIII. Um índice de 98-99% foi obtido quando seqüências dos fitoplasmas encontrados em tomate e berinjela foram comparadas entre si. Estes resultados evidenciaram que o enfezamento do tomateiro e da berinjela podem estar associados a um mesmo fitoplasma, com base na análise de seqüências do gene do 16S rDNA.

Vegetable diseases occurring in the Brazilian territory and around the world have been associated with various phytoplasmas. In the region of Piracicaba-SP and Bragança-SP, in eggplant and tomato plants typical symptoms of stunting characterized by reduced canopy, leaf yellowing, proliferation of shoots, calix malformation, shortening internodes, reduced size of leaves, flowers and fruits were observed. In nested PCR with primers R16 mF1/mR2 e R16 F2n/R2, fragments of 1.2kb in size were amplified from symptomatic samples demonstrating the presence of phytoplasmas in plant tissues. By using especific primers pairs it was demonstrated that the phytoplasmas were affiliated to group 16SrIII. RFLP analysis using the restriction enzymes AluI, HpaII, KpnI, MboI, MseI, and RsaI confirmed that the phytoplasmas were representatives of group 16SrIII. Amplified DNA fragments were cloned in Escherichia coli, sequenced and compared by sequence similarities among themselves and with sequences belonging to phytoplasmas of group 16SrIII. Sequence similarities greater than 95% were found when the phytoplamas detected in tomato and eggplant were compared to the representatives of group 16SrIII. Values of 98-99% were obtained when sequences of phytoplasmas found in tomato and eggplant were compared among themselves. The results evidenced that tomato and eggplant stunting were associated with the same phytoplasma based upon the sequencing of the 16S rDNA gene.

O lenho mole da macieira é uma doença relevante em diversas partes do mundo. Sintomas típicos desta doença têm sido observados em pomares instalados em estados do sul do território brasileiro desde a década de oitenta. Enxertia tem revelado a natureza infecciosa da doença e a observação de corpúsculos filamentosos no floema tem evidenciado possível associação com fitoplasma. No presente trabalho plantas com sintomas de lenho mole foram coletadas em pomar comercial, visando demonstrar a presença de fitoplasma em tecido doente, bem como identificar molecularmente este fitoplasma. Através do emprego de duplo PCR com iniciadores universais R16mF2/R1 e R16F2n/R2, fitoplasma foi consistentemente detectado em plantas sintomáticas. A identificação conduzida com duplo PCR usando-se iniciadores específicos R16(III)F2/R demonstrou que o fitoplasma detectado pertencia ao grupo 16SrIII. Análises de RFLP conduzidas com as endonucleases AluI, KpnI, HinfI, HpaII, MseI, RsaI e SauIIIA confirmaram que o fitoplasma era um representante típico do grupo 16SrIII. A detecção e identificação molecular se constitui numa forte evidência que um fitoplasma está associado ao lenho mole da macieira no Brasil, complementando os trabalhos realizados anteriormente com transmissão por enxertia e observação por microscopia eletrônica .

Apple rubbery wood is an important disease occurring worldwide. Typical symptoms have been observed since 80' decade in orchards located in the South part of Brazil. In previous studies, grafting has evidenciated that the disease had infeccious etiology and visualization of filamentous bodies inside phloem had indicated that a phytoplasma could be associated with the disease. In the present study, plants with symptoms of rubbery wood were sampled in a commercial orchard in order to demonstrate the presence of phytoplasma in infected tissue and to identify molecularly that the organism. Using nested PCR with universal primers pairs R16mF2/R1 and R16F2n/R2, phytoplasma was consistently detected in symptomatic plants. Identification conducted with specific primer pair R16(III)F2/R1 in nested PCR demonstrated that the phytoplasma was a member of group 16SrIII. RFLP analyses with endonucleases AluI, KpnI, HinfI, HpaII, MseI, RsaI e SauIIIA confirmed that the phytoplasma was a representative of the group 16SrIII. The detection and molecular identification are strong evidences that a phytoplasma is associated with apple rubbery wood in Brazil and agrees with previous evidences using grafting and electron microscopy.

Begônia é um gênero muito apreciado de plantas ornamentais, de relevância econômica, compreendendo espécies de flores e de folhagem. Em cultivo comercial foram observadas plantas apresentando sintomas característicos de infecção por fitoplasma, entre eles superbrotamento de ramos, redução no porte da planta, folhas e flores pequenas e filodia. A partir de amostras foliares foi feita extração de DNA para ser usado em duplo Polymerase Chain Reaction (PCR), visando 'a detecção de fitoplasma em tecido doente e a sua identificação ao nível de grupo de classificação. Os testes revelaram consistemente a associação de fitoplasma com os sintomas da doença, através da amplificação de um fragmento genômico típico de 1,2kb para os iniciadores universais R16mF2/mR1 e R16F2n/R2, usados na reação de PCR. O emprego de iniciadores específicos R16(III)F2/R1 permitiu identificar o fitoplasma detectado como um representante do grupo 16SrIII. Este é um resultado expressivo, pois diversas doenças causadas por fungos, bactérias, vírus e nematóides têm sido relatadas para begônia, no entanto, não têm sido encontrados relatos para doenças de begônia associadas a fitoplasmas.

Begonia is a very appreciated genus of ornamental plants, of economic relevancy, having species of flowers and foliage. In commercial croppings, plants exhibiting characteristic symptoms of phytoplasma infection have been observed, such as shoot proliferation, reduced plant, size small leaves and flowers, and phyllody. Leaves were sampled and total DNA was extracted to be used in nested Polymerase Chain Reaction (PCR), in order to detect and identify an expected phytoplasma. The results confirmed consistently the presence of a phytoplasma associated with symptomatic plants through the amplification of a typical genomic fragment of 1.2 kb by using the universal primers R16mF2/mR1 and R16F2n/R2. The use of specific primers R16(III)F2/R1 allowed to identify the phytoplasma detected as a representative of the group 16SrIII. This information is very expressive, because different diseases caused by fungus, bacteria, virus and nematodes have been reported for begonia, however, reports have not been found for begonia diseases associated with phytoplasmas.

Bico-de-papagaio é uma espécie ornamental, encontrada tanto na forma de arbustos, presente em jardins residenciais e públicos, como comercializada em vasos para decoração de interiores. Com o objetivo de detectar a presença de fitoplasma em plantas mostrando sintomas de proliferação de ramos, amostras foram obtidas de plantas sintomáticas e assintomáticas cultivadas em jardins e de plantas comerciais sintomáticas envasadas. A técnica de duplo PCR, utilizando os iniciadores R16mF2/mR1 e R16F2n/R2, foi empregada para detecção do fitoplasma, a partir de DNA extraído de folhas. Fitoplasma foi detectado consistentemente em todas as amostras sintomáticas, porém não houve detecção em qualquer das amostras assintomáticas. A identificação molecular conduzida através de PCR com iniciadores específicos e por análise de RFLP revelou que o fitoplasma detectado pertence ao grupo 16SrIII. Assim, foi demonstrado que a ocorrência de proliferação de ramos em bico-de-papagaio está associada à presença de fitoplasma. Plantas superbrotadas apresentam um dossel mais compacto, sendo mais atrativas ao consumidor, portanto a presença do fitoplasma é considerada como benéfica para fins ornamentais e comerciais.

Poinsettia is an ornamental species found as a shrub in residential and public gardens or commercialized in pots for indoor decoration. In order to detect phytoplasma in poinsettia exhibiting shoot proliferation, samples were collected from plants with and without symptoms grown in gardens, and commercial plants cultivated in pots showing symptoms. The PCR technique using primers R16mF2/mR1 and R16F2n/R2 was employed to detect phytoplasma by using DNA extracted from fresh leaves. The results revealed that phytoplasma was consistently detected from samples with symptoms, but no phytoplasma was found in any samples without symptoms. It was thus demonstrated that poinsettia proliferation was associated with the presence of phytoplasma. Molecular identification using group-specific primer pairs and RFLP analyses revealed that the phytoplasma was a member of group 16SrIII. Plants with proliferation have shown a compact top and are more attractive to consumers; hence the presence of phytoplasma is desirable for ornamental and commercial purposes.