Trichophyton rubrum and Trichophyton mentagrophytes complex, or Trichophyton spp. are the main etiologic agents of dermatophytosis, whose treatment is limited by the high cost of antifungal treatments, their various side effects, and the emergence of resistance amongst these species. This study evaluated the in vitro antidermatophytic activity of 23 crude extracts from nine plant species of semiarid vegetation (caatinga) found in Brazil. The extracts were tested at concentrations ranging from 1.95 to 1,000.0 mg/mL by broth microdilution assay against the reference strains T. rubrum ATCC 28189 and T. mentagrophytesATCC 11481, and 33 clinical isolates of dermatophytes. All plants showed a fungicidal effect against both fungal species, with MIC/MFC values of the active extracts ranging from 15.6 to 250.0 µg/mL. Selected extracts of Eugenia uniflora (AcE), Libidibia ferrea (AE), and Persea americana (AcE) also exhibited a fungicidal effect against all clinical isolates of T. rubrum and T. mentagrophytes complex. This is the first report of the antifungal activity of Schinus terebinthifolius, Piptadenia colubrina, Parapiptadenia rigida, Mimosa ophthalmocentra, and Persea americana against both dermatophyte species.

A dermatofitose é uma zoonose comum nos centros urbanos. Cães e gatos têm desempenhado um papel importante como seus disseminadores. A descontaminação ambiental é essencial para a prevenção da propagação da infecção em seres humanos e animais. No entanto, desinfetantes ou sanitizantes com atividade antifúngica que estão disponíveis atualmente têm alta toxicidade. O presente estudo avaliou os efeitos in vitro de um extrato de Cymbopogon nardus (citronela) em 31 Microsporum canis isolados de animais e meio ambiente doméstico. Os testes de susceptibilidade foram realizados com base no documento M38-A2 (2008) do Clinical and Laboratory Standards Institute com modificações para os produtos naturais. Embora tenha sido observada variação de susceptibilidade entre os fungos testados, as concentrações que inibiram o crescimento de 50% e 90% dos microrganismos foram baixas (19,5 e 78 µg/mL, respectivamente). Assim, o extrato de citronela mostrou potente atividade fungistática e fungicida contra M. canis isolados de animais e meio ambiente doméstico. Portanto, este extrato pode ser uma alternativa para a profilaxia da dermatofitose no ambiente doméstico.

Dermatophytosis is a common zoonosis in urban centers. Dogs and cats have played an important role as its disseminators. Environmental decontamination is essential for the prevention of its propagation to humans and animals. However, sanitizers or disinfectants with antifungal activity, currently available, have high toxicity. The present study evaluated the in vitro effects of an extract of citronella (Cymbopogon nardus) on 31 Microsporum canis isolates from animals and home environments. Susceptibility tests were performed based on document M38-A2 (2008) of the Clinical and Laboratory Standards Institute with modifications for natural products. Although susceptibility variation was observed between the fungus tested, the concentrations that inhibited the growth of 50 and 90% of the microorganisms were low (19.5 and 78 µg/mL, respectively). Thus, this citronella extract showed potent fungistatic and fungicide activities against M. canis isolated from animals and home environments. Therefore, it could be an alternative for dermatophytosis prophylaxis in the home environment.

O uso de cateter venoso central (CVC) e antibióticos de amplo espectro estão entre os principais fatores de risco para o desenvolvimento da candidemia em pacientes internados em unidades de terapia intensiva (UTI). É conhecido que alguns antibióticos aumentam a resistência das leveduras aos antifúngicos azólicos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar se leveduras presentes em colonização de CVC expostas a antibióticos que atuam em parede celular se beneficiam de uma redução na suscetibilidade ao fluconazol e voriconazol e se obtêm maior capacidade de formar biofilme. Candida albicans, C. tropicalis, C. glabrata,C. parapsilosis e C. guilhermondii foram semeadas em placas de Mueller-Hinton Agar, com gradientes de antibióticos (cefepima, meropenem, vancomicina e piperacilina-tazobactam). A suscetibilidade e a formação de biofilme das leveduras foram testadas antes e após a exposição aos antibióticos. Nenhum dos antibióticos provocou alterações detectáveis in vitro sobre a suscetibilidade das leveduras aos antifúngicos ou à capacidade de formar biofilme. Estes resultados sugerem que o aumento da candidemia na UTI não seria atribuído a possíveis alterações provocadas nas leveduras e sim pelo enfraquecimento da condição geral do paciente após longa exposição à infecção.

The use of central venous catheters (CVC) and broad-spectrum antibacterials are among the main risk factors for the development of candidemia in patients admitted to intensive care units (ICU). It is known that some antibacterials increase the resistance of these yeasts to azole antifungals. Thus, the aim of this research was to determine whether yeast present in CVC colonizations previously exposed to cell-wall targeted antibacterials benefit from a reduction in susceptibility to fluconazole and voriconazole, facilitating their ability to form biofilms. Candida albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. parapsilosis and C. guilhermondii were seeded into antibacterial (cefepime, meropenem, vancomycin, and piperacillin-tazobactam) gradient plates produced in Mueller-Hinton Agar. The susceptibility to fluconazole and voriconazole and the biofilm formation of the yeasts were tested before and after exposure to the antibacterials. None of the antibacterials exerted a significant effect on the in vitro susceptibility of the yeasts to the antifungal agents or on their ability to form biofilms. These results suggest that increased candidemia in ICU patients is not attributable to possible alterations in the yeasts, but is more likely caused by a weakening of the patient's general condition after long exposure to infection.

RESUMOIntrodução: A maioria das infecções fúngicas hospitalares são causadas por Candida spp. e C. albicans é a espécie mais comumente identificada. Métodos moleculares são ferramentas importantes para a avaliação da origem das leveduras isoladas em hospitais.Métodos: Este é um estudo sobre o perfil genético de 39 isolados clínicos nosocomiais de C. albicans através das técnicas de RAPD e microssatélite, foram usados dois diferentes iniciadores para cada técnica.Resultados: RAPD forneceu 10 e 11 diferentes perfis com valores de SAB 0,84 ± 0,126 e 0,88 ± 0,08 para os primers M2 e P4, respectivamente. A análise de microssatélites, usando os marcadores CDC3 e HIS3 permitiu a observação de seis e sete diferentes alelos respectivamente, com poder discriminatório combinado de 0,91.Conclusões: Embora seja clara a variabilidade genética, foi possível identificar alta similaridade, sugerindo origem comum para pelo menos parte deles. É importante enfatizar que foi comprovada origem comum de leveduras isoladas de colonização (urina, cateter ou secreção orotraqueal) e hemocultura do mesmo paciente, indicando que a candidemia deve ter iniciado a partir de um sítio de colonização. A combinação das técnicas RAPD e microssatélites fornece uma análise rápida e eficiente para investigação de similaridade entre isolados nosocomiais de C. albicans.

SUMMARYIntroduction: The majority of nosocomial fungal infections are caused by Candida spp. where C. albicans is the species most commonly identified. Molecular methods are important tools for assessing the origin of the yeasts isolated in hospitals.Methods: This is a study on the genetic profifiles of 39 nosocomial clinical isolates of C. albicans using two typing methods: random amplifified polymorphic DNA (RAPD) and microsatellite, two different primers for each technique were used.Results: RAPD provided 10 and 11 different profiles with values for SAB of 0.84 ± 0.126 and 0.88 ± 0.08 for primers M2 and P4, respectively. Microsatellite using two markers, CDC3 and HIS3, allowed the observation of six and seven different alleles, respectively, with combined discriminatory power of 0.91.Conclusions: Although genetic variability is clear, it was possible to identify high similarity, suggesting a common origin for at least a part of isolates. It is important to emphasize that common origin was proven from yeasts isolated from colonization (urine, catheter or endotracheal secretions) and blood culture from the same patient, indicating that the candidemia must have started from a site of colonization. The combination of RAPD and microsatellite provides a quick and efficient analysis for investigation of similarity among nosocomial isolates of C. albicans.

INTRODUÇÃO: No ambiente hospitalar, são frequentes as infecções por leveduras do gênero Candida spp., o que torna esse assunto um importante alvo de estudos. OBJETIVO: Avaliar o perfil de suscetibilidade aos antifúngicos de espécies de Candida de pacientes internados no Hospital Universitário Regional de Maringá-PR (HURM). MATERIAL E MÉTODOS: As amostras foram submetidas ao teste de microdiluição em caldo (MD), segundo o documento M27-A3 para determinação da concentração inibitória mínima (CIM), e ao teste de difusão em disco de acordo com o documento M44-A2, ambos do Clinical Laboratory Standarts Institute (CLSI). RESULTADOS E DISCUSSÃO: Foram obtidos 91 isolados provenientes de amostras de urina, hemocultura, ponta de cateter, secreção orotraqueal, entre outros, sendo 38 Candida albicans, 23 C. tropicalis, 16 C. gabrata, 10 C. parapsilosis e quatro C. krusei. Dos antifúngicos testados, anfotericina B, voriconazol e anidulafungina foram os mais eficazes. CONCLUSÃO: A comparação entre as metodologias de microdiluição em caldo e disco difusão (DD) mostrou boa correlação para fluconazol para a maioria das espécies de Candida spp., sendo possível destacar que a DD é útil para triagem dos principais antifúngicos usados na prática clínica. No entanto, casos de resistência detectados por DD devem ser confirmados por meio do método de MD, evitando, assim, resultados falsos resistentes, melhorando a eficácia e a segurança do tratamento.

INTRODUCTION: Due to the ubiquity of nosocomial yeast infections of the genus Candida spp., studies in this area have become increasingly relevant. OBJECTIVE: To evaluate the antifungal Candida spp. susceptibility profile of hospitalized patients from the Regional University Hospital of Maringá-PR (HURM). MATERIAL AND METHODS: The samples were submitted to broth microdilution test (MD) according to protocol M27-A3 in order to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and disk diffusion test according to protocol M44-A2, both from Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). RESULTS AND DISCUSSION: We obtained 91 isolates from urine samples, blood culture, catheter tip, endotracheal secretions, among others, from which 38 were Candida albicans, 23 were C. tropicalis, 16 were C. gabrata, 10 were C. parapsilosis, and four were C. krusei. Among the tested antifungal medications, amphotericin B, voriconazole and anidulafungin proved to be the most effective. CONCLUSION: In the comparison between broth microdilution and disk diffusion (DD) methods, fluconazole showed good correlation for most Candida spp., which corroborates the usefulness of DD in the screening of main antifungal agents used in clinical practice. Nonetheless, cases of resistance detected by DD need to be confirmed by MD method, which avoids false-resistant results and maximizes the treatment efficacy and reliability.

Trichosporon asahii é um patógeno oportunista que apresenta altos índices de mortalidade em pacientes imunocomprometidos. No presente trabalho, dez cepas foram isoladas da cavidade bucal e urina de pacientes internados na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) por seis meses. Todos os isolados foram identificados por métodos clássicos e moleculares, tipados por RAPD e testados in vitro quanto à sensibilidade ao fluconazol, itraconazol, 5-fluorocitosina e anfotericina B. Houve concordância total entre a identificação de Trichosporon sp por PCR baseado na seqüência da região ITS (Internal Transcribed Spacer) e na seqüência da subunidade menor do DNA ribossômico (rDNA). Os perfis genéticos foram determinados por RAPD utilizando dois iniciadores P6 e M13. A análise do dendrograma mostrou que a maioria das amostras apresentou alta similaridade entre elas (>0.9) e todas foram multidrogas resistentes. Este estudo traz novos resultados em relação à identificação e genotipagem de isolados brasileiros de T. asahii em pacientes internados em UTI, bem como dados sobre o perfil de sensibilidade aos antifúngicos.

Trichosporon asahii is an opportunistic pathogen, associated with a high mortality rate in immunocompromised patients. In this study, ten isolates, recovered from oral cavity and urine of patients in Intensive Care Units (ICU) over six months, were identified by classical and molecular methods, typed by RAPD and tested in vitro for susceptibility to fluconazole, itraconazole, 5-flucytosine and amphotericin B. A total agreement between the identification of Trichosporon sp by PCR based on sequences of the Internal Transcribed Spacer Regions (ITS) and on the sequences of small-subunit (SSU) ribosomal DNA (rDNA) was found. Randomly amplified of polymorphic DNA (RAPD), with primers P6 and M13, was used to determine the genomic profiles. The dendogram analysis indicated that almost all strains showed similarity >0.9 among them and all strains were multidrug-resistant. This study brings new results on the identification and genotyping of T. asahii isolated from Brazilian ICU patients and information about their antifungal drugs susceptibility.

Cryptococcus neoformans, pertencente à classe dos basidiomicetos, é um importante patógeno, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Neste estudo, 47 isolados clínicos de C. neoformans de várias regiões do Estado de São Paulo foram avaliados quanto aos sorotipos e ao mating-type por PCR. A diversidade genética foi analisada por PCR-fingerprinting com a seqüência iniciadora específica para regiões microssatélite (GACA)4, RAPD com o iniciador 6 (Amersham Pharmacia Biotech) e por RFLP do gene PLB1 digerido com AvaI. Todos os isolados foram obtidos de pacientes HIV positivos e identificados como sorotipo A e MATalfa. A maioria dos isolados pertencia ao tipo molecular VNI (45/47) e apenas dois foram VNII quando analisados por PCR-fingerprinting e PCR-RFLP. Homogeneidade alta foi obtida com o iniciador (GACA)4, com a maioria dos isolados apresentando correlação alta (> 0.9). Os resultados do RAPD, por sua vez, revelaram maior heterogeneidade com número maior de perfis moleculares. Por PCR-RFLP, nenhum tipo molecular novo foi encontrado, realçando a idéia de que em genes conservados como PLB1, as diferenças podem ser resultantes de divergências evolutivas dentro do complexo C. neoformans, separando os isolados nos oito subtipos moleculares já estabelecidos. Nossos resultados fornecem novas informações sobre a epidemiologia molecular de C. neoformans na região sudeste do Brasil.

The basidiomycetous yeast Cryptococcus neoformans is an important fungal pathogen mainly in immunocompromised patients. In this study, 47 clinical isolates of C. neoformans from regions of São Paulo State were studied serologically by using the Crypto Check Iatron RM 304-K kit, their genetic diversity was estimated by PCR-fingerprinting with a microsatellite-specific sequence (GACA)4, RAPD with primer 6 (Amersham Pharmacia Biotech), PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of the phospholipase B gene (PLB1) digested with AvaI and mating type analysis by PCR. All 47 strains isolated from HIV positive patients included in this study were serotype A and MATalpha. The majority of the isolates (45/47) were VNI and only two were VNII by PCR-fingerprinting and PCR-RFLP analysis. High degree of homogeneity was observed when (GACA)4 was used, being highly correlated (> 0.9). In contrast, the RAPD analysis was more heterogeneous with higher number of molecular profiles. By PCR-RFLP, no new molecular type was found, enhancing the suggestion that the differences based on conserved gene as PLB1, can be resultant of ongoing divergent evolution within the C. neoformans complex, into the current eight subtypes. Our results furnish new information on the molecular epidemiology of C. neoformans in the southeast region of Brazil.

Trichophyton rubrum é um importante agente causal de dermatomicose. Os métodos de tipagem molecular têm sido recentemente desenvolvidos para responder questões sobre epidemiologia e auxiliar no esclarecimento de recidivas, após o tratamento. As seqüências aleatórias 1- (5'-d[GGTGCGGGAA]-3') e 6- (5'-d[CCCGTCAGCA]-3') foram usadas para tipagem molecular deste fungo por RAPD produzindo variabilidade intraespecífica. Cinco padrões foram observados entre os 10 isolados de T. rubrum, com ambas as seqüências. Foi concluído que a análise por RAPD pode ser utilizada para estudos epidemiológicos.

Trichophyton rubrum is an important cause of dermatomycoses. Molecular strain typing methods have recently been developed to address questions about epidemiology and source of relapse following treatment. This report describes the application of RAPD for molecular strain differentiation of this fungus utilizing the primers 1- (5'-d[GGTGCGGGAA]-3') and 6- (5'-d[CCCGTCAGCA]-3'). A total of five RAPD patterns were observed among 10 strains of T. rubrum, with each of the primers used. We conclude that RAPD analysis using primers 1 and 6 can be used in epidemiological studies.