Abstract Good food handling practices should be adopted in the home setting, as inadequate practices could lead to the outbreak of foodborne illnesses. The aim of the present study was to investigate knowledge and good food handling practices for products of animal origin by consumers in the home setting and test associations with the socioeconomic characteristics of the respondents. A questionnaire was answered by a non-probabilistic sample. The questionnaire was available online on free access digital platforms for seven days and was used to collect information on the gender, age, income, and schooling of the respondents as well as safe food handling practices in the home setting. Data analysis involved descriptive statistics and the chi-square test to compare the frequencies of the answers per category. A total of 666 responses were obtained. Most respondents were women, had a university/college education, were between 30 and 59 years of age, and had an income of more than four times the monthly minimum wage. The majority of respondents reported positive practices and attitudes regarding food handling in the home setting; 99.5% washed their hands prior to handling food, 89% performed the cooking of animal products and 85.6% washed the cutting surface after cutting each food. Associations were found between some attitudes reported by consumers and the categories of gender, age, schooling, and income (p ≤ 0.05). Women had more good food handling practices compared to men. The results suggest that most respondents practiced good food handling practices. Safe practices were related to the level of schooling, monthly income and age of the participants.

Resumo As boas práticas de manipulação devem ser adotadas no ambiente doméstico, pois algumas atitudes de risco são realizadas pelos consumidores, podendo levar à ocorrência de surtos alimentares. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o conhecimento e as boas práticas de manipulação dos alimentos de produtos de origem animal realizadas pelos consumidores no ambiente domiciliar, de acordo com o perfil socioeconômico dos respondentes. Por amostragem não probabilística, utilizou-se um questionário, no formato online, disponibilizado durante sete dias em plataformas digitais com livre acesso, contendo perguntas para traçar o perfil dos consumidores, como questões sobre gênero, idade, renda mensal e nível de escolaridade, bem como perguntas sobre as práticas de manipulação de alimentos segura nos domicílios. A estatística descritiva e o teste de qui-quadrado das frequências das respostas por categoria foram aplicados aos dados. Obteve-se ao todo 666 respostas, sendo a maioria dos respondentes pertencentes ao gênero feminino, possuíam ensino superior, na faixa etária variando entre 30 e 59 anos, e com renda mensal acima de quatro salários mínimos. A maioria dos participantes apresentou respostas positivas quanto às condutas de boas práticas no ambiente doméstico: 99,5% higienizavam as mãos antes da manipulação, 89% realizavam a cocção dos produtos de origem animal e 85,6% higienizavam a superfície de corte a cada alimento que era cortado. Em algumas atitudes reportadas pelos consumidores, houve associação entre a classificação de gênero, faixa etária, escolaridade e/ou renda (p ≤ 0,05). As mulheres apresentaram mais hábitos de boas práticas em comparação aos homens. Infere-se que a maior parte dos respondentes aplicava as boas práticas de manipulação. De acordo com os resultados obtidos, supõe-se que a execução de práticas seguras esteja relacionada ao nível de escolaridade, à renda mensal e à idade dos participantes.

Resumo As falhas na qualidade higiênico-sanitária da carne podem ser identificadas a partir da avaliação de microrganismos patogênicos que comprometem a qualidade microbiológica do alimento e podem veicular doenças de origem alimentar. O presente estudo objetivou avaliar a qualidade higiênica-sanitária de carnes bovinas comercializadas em supermercados, açougues e mercados públicos da cidade de Campo Grande (Mato Grosso do Sul, Brasil) por meio da pesquisa e caracterização fenotípica e genotípica de Salmonella spp. e Escherichia coli produtora de toxina Shiga (STEC) e pesquisa e contagem de Staphylococcus aureus. Foram avaliadas 71 amostras de carne bovina de 17 estabelecimentos comerciais que foram submetidas a pesquisa de detecção de Salmonella spp., Escherichia coli produtora de toxina Shiga (STEC) e pesquisa e contagem de Staphylococcus aureus. Os isolados obtidos foram submetidos ao perfil de sensibilidade aos antimicrobianos pelo teste de difusão em disco, de acordo com o Clinical & Laboratory Standards Institute (CLSI). Constatou-se a presença de Salmonella em 7,04% das amostras avaliadas, sendo que 70,0% dos isolados foram sensíveis aos antimicrobianos testados. Em relação ao Staphylococcus aureus, 25,35% das amostras foram positivas com contagens variando entre 1,0 x 102 a 4,3 x 104 UFC/g, sendo que os isolados apresentaram resistência para penicilina (62,5%), tetraciclina (18,75%) e cloranfenicol (6,25%). Nenhuma amostra apresentou-se positiva para STEC. A detecção desses patógenos em alimentos representa um perigo a saúde pública, principalmente, devido a presença de isolados resistentes a antimicrobianos. Além disso, ressalta-se a necessidade do emprego das boas práticas de higiene e fabricação nos estabelecimentos varejistas.

Abstract Hygiene failures in meat can be identified based on the evaluation of pathogenic microorganisms, which compromise the microbiological quality of food and can transmit food-borne diseases. The aim of the present study was to evaluate the hygienic quality of beef sold at supermarkets, butcher shops and public markets in the city of Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, Brazil, through the phenotypic and genotypic characterization of Salmonella spp. and Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) as well as the investigation and quantification of Staphylococcus aureus. Seventy-one samples of beef from 17 commercial establishments were evaluated. Isolates were tested for antimicrobial susceptibility using the disk diffusion method recommended by the Clinical & Laboratory Standards Institute. Salmonella was found in 7.04% of the samples and 70.0% of the isolates were sensitive to the antimicrobials tested. A total of 25.35% of the samples were positive for Staphylococcus aureus, with counts ranging from 1.0 x 102 to 4.3 x 104 CFU/g; these isolates exhibited resistance to penicillin (87.5%), tetracycline (18.75%) and chloramphenicol (6.25%). None of the samples was positive for STEC. The detection of these pathogens in food poses a danger to public health, mainly due to the presence of antimicrobial-resistant isolates. These findings underscore the need for good hygiene and manufacturing practices at retail establishments.

RESUMO: O objetivo deste trabalho foi investigar a presença de Salmonella spp. em amostras coletadas de carcaças de bovinos, em três pontos da linha de abate (após a esfola, lavagem e refrigeração) de três frigoríficos exportadores no Brasil. A detecção foi realizada pela ISO 6579:2002, e confirmada por PCR e qPCR. Os isolados foram tipificados por testes de soroaglutinação e PFGE e avaliado o perfil de sensibilidade aos antibióticos pelo método de difusão em disco. A contaminação foi detectada em apenas um abatedouro-frigorífico. As contaminações das carcaças (n=90) e amostras de carne (n=270) por Salmonella spp. foram 6 (6,7%) e 7 (2,6%), respectivamente. Todos os isolados foram confirmados por PCR e qPCR. A análise sorológica e o PFGE mostraram um único perfil: Typhimurium. As cepas apresentaram 100% de suscetibilidade à ampicilina, cefotaxima, ciprofloxacina, cloranfenicol, gentamicina e tetraciclina. As carcaças positivas após a refrigeração apresentam um risco direto para o consumidor, uma vez que, após este processo, a carne está pronta para ser comercializada.

ABSTRACT: The aim of the present study was to investigate the presence of Salmonella spp. in samples collected from beef meat at three points of the slaughter line (after skinning, washing and cooling) at three slaughterhouses in Brazil that export meat. Detection was based on ISO 6579:2002 and confirmed by PCR and qPCR. The isolates were typified using slide agglutination tests and PFGE. The antibiotic sensitivity profile was determined using the disk diffusion method. Contamination was detected in only one slaughterhouse. The overall frequency of contamination by Salmonella spp. was 6.7% of carcasses (6/90) and 2.6% of carcass surface samples (7/270). All isolates were confirmed by PCR and qPCR. The serological analysis and the PFGE showed a single profile: Typhimurium. The strains demonstrated 100% susceptibility to ampicillin, cefotaxime, ciprofloxacin, chloramphenicol, gentamicin and tetracycline. Positive carcasses after cooling pose a direct risk to consumers, since the meat is considered ready to be marketed after this process.

Abstract This study investigated the presence of generic and verotoxin-producing E. coli as well as enumerated faecal coliforms in 30 beef carcasses in different parts of the slaughter process (after skinning, washing and cooling) at each of three slaughterhouses of the state of Mato Grosso do Sul, Brazil. Among the total number of carcasses examined (n = 90), 39 (43.3%) had generic E. coli. Among the 270 samples analysed, 25 (9.3%) were positive after skinning, 14 (5.2%) were positive after washing and nine (3.3%) were positive after cooling. The majority of isolates of E. coli was collected from samples after skinning, which is considered a critical point of the microbial contamination of carcasses. However, the highest concentration of faecal coliforms was found after the washing step. The cooling step proved to be important to reducing the amount of hygiene-indicator microorganisms. The E. coli isolates had no stx1 or stx2 genes associated with virulence.

Resumo Este trabalho objetivou avaliar a prevalência e a sazonalidade da infecção natural por parasitos gastrintestinais em bubalinos de aptidão leiteira de diferentes categorias, no município de Bandeirantes, Mato Grosso do Sul. Foram avaliados 41 búfalos da raça Murrah, divididos em três categorias, sendo 11 lactentes, com idade de 0 a 8 meses, 10 desmamados, de 8 a 18 meses, e 20 fêmeas adultas com idade superior a 18 meses. Os animais adultos apresentaram-se livres de parasitismo ou com carga parasitária muito baixa. A categoria lactente apresentou pico de contagem de ovos por grama de fezes (OPG=2038) em novembro, quando a precipitação acumulada foi de 69,3 mm e a temperatura 25,95 ºC, enquanto a menor contagem de ovos (167) ocorreu em maio, dois meses após pico de 234,68 mm e 20,59 ºC. Os búfalos desmamados apresentaram dois picos de OPG, de 1288 e 875, em setembro e junho, com precipitação de 41,45 e 18,4 mm e temperatura de 24,16 e 20,69 ºC, respectivamente. Foi observada correlação significativa (p=0,01) e negativa (r=-0,33) entre o OPG dos bezerros lactentes e precipitação pluviométrica. Os parasitos gastrintestinais mais frequentes foram Haemonchus sp. e Cooperia sp.

Abstract This study evaluated the prevalence and seasonality of natural infection by gastrointestinal parasites and the susceptibility of different dairy buffalo categories in Bandeirantes, state of Mato Grosso do Sul, Brazil. Forty-one Murrah buffaloes were divided into three categories, 11 suckling calves (0-8 months old), 10 weaned calves (8-18 months old), and 20 adult females over the age of 18 months. Adult animals were free from parasitism or showed very low parasite load. The suckling calves showed a peak of egg per gram of feces (EPG = 2038) in November, when the average rainfall was 69.3 mm and the temperature 25.95 ºC, while the lowest egg count (167) occurred in May, two months after the peak of 234.68 mm and 20.59 ºC. Weaned calves showed two peaks of EPG from 1288.89 and 875 in September and June, with rainfall of 41.45 and 18.4 mm, temperature 24.16 and 20.69 ºC, respectively. Significant (p = 0.01) and negative (r = -0.33) correlation between the EPG of suckling calves and precipitation was observed. The most common gastrointestinal parasites were Haemonchus sp. and Cooperia sp.

RESUMO: O objetivo deste trabalho foi introduzir a técnica de espectrometria de massa com fonte de ionização e dessorção a laser assistida por matriz e analisador de tempo-de-voo (MALDI-TOF) para incrementar o método tradicional microbiológico na detecção de Salmonella spp. e Escherichia coli em carcaças bovinas. Foram avaliadas 270 amostras de 90 carcaças de bovinos. Para isolamento de Salmonella spp. e E. coli, foram utilizadas, respectivamente, as metodologias descritas na ISO 6579:2002 e no Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. As análises por MALDI-TOF foram realizadas a partir de isolados cultivados em ágar nutriente ou em caldo triptona de soja, provenientes das amostras com características bioquímicas positivas (n=7), inconclusivas (n=4) e negativas (n=85) para Salmonella spp. e bioquímicas positivas (n=37) e negativas (n=85) para E. coli. Os perfis de massas foram adquiridos com o espectrômetro de massas MALDI-TOF Autoflex III SmartBeam e os espectros brutos foram processados usando o programa MALDI Biotyper (Bruker Daltonics). De acordo com a identificação preliminar, com base na morfologia das colônias e nas reações bioquímicas, sete isolados foram considerados positivos para Salmonella spp. Através do MALDI Biotyper, esses sete isolados foram classificados como pertencentes ao gênero Salmonella e, além disso, identificados como S. enterica. Quatro isolados que apresentaram características fenotípicas não usuais e resultados inconclusivos nos testes bioquímicos para Salmonella foram identificados como pertencentes aos gêneros Citrobacter e Proteus após análise por MALDI. Para E. coli, 37 amostras foram positivas pelos testes bioquímicos da espécie, o que foi confirmado por MALDI Biotyper. A metodologia MALDI-TOF permitiu a rápida confirmação da identidade de Salmonella spp. e E. coli, podendo ser utilizada para detecção desses microrganismos em isolados bacterianos de carcaças bovinas.

ABSTRACT: The aim of this study was to introduce matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) time-of-flight (TOF) mass spectrometry to improve the traditional microbiological method for the detection of Salmonella spp. and Escherichia coli in beef carcasses. Two hundred seventy samples from 90 beef carcasses were evaluated. The methodologies described in ISO 6579:2002 and in the Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods were used for Salmonella spp. and E. coli isolation, respectively. MALDI-TOF analysis were performed on tryptone soya broth suspension isolates or directly from nutrient agar colonies, from the positive, inconclusive or negative biochemically tested samples for Salmonella and E. coli. Mass profiles were acquired on an Autoflex III SmartBeam MALDI-TOF mass spectrometer and the raw spectra were processed using the MALDI Biotyper software (Bruker Daltonics). According to the preliminary identification based on colony morphology and the biochemical reactions, seven isolates were positive for Salmonella spp. Through MALDI Biotyper these seven isolates were also classified as belonging to the genus Salmonella and further identified as S. enterica. Four isolates showing unusual phenotypic characteristics and inconclusive results in biochemical tests for Salmonella were identified as belonging to Citrobacter and Proteus genera after MALDI analysis. Regarding Escherichia coli, 37 were positive for species biochemical testing which MALDI Biotyper confirmed. MALDI-TOF methodology allowed rapid Salmonella spp. and E. coli identity confirmation and may be used to detect these microrganisms within bacterial isolates from beef carcasses.

INTRODUCTION: Leptospirosis is a zoonosis that affects both humans and animals. Dogs may serve as sentinels and indicators of environmental contamination as well as potential carriers for Leptospira. This study aimed to evaluate the seroprevalence and seroincidence of leptospirosis infection in dogs in an urban low-income community in southern Brazil where human leptospirosis is endemic. METHODS: A prospective cohort study was designed that consisted of sampling at recruitment and four consecutive trimestral follow-up sampling trials. All households in the area were visited, and those that owned dogs were invited to participate in the study. The seroprevalence (MAT titers ≥100) of Leptospira infection in dogs was calculated for each visit, the seroincidence (seroconversion or four-fold increase in serogroup-specific MAT titer) density rate was calculated for each follow-up, and a global seroincidence density rate was calculated for the overall period. RESULTS: A total of 378 dogs and 902.7 dog-trimesters were recruited and followed, respectively. The seroprevalence of infection ranged from 9.3% (95% CI; 6.7 - 12.6) to 19% (14.1 - 25.2), the seroincidence density rate of infection ranged from 6% (3.3 - 10.6) to 15.3% (10.8 - 21.2), and the global seroincidence density rate of infection was 11% (9.1 - 13.2) per dog-trimester. Canicola and Icterohaemorraghiae were the most frequent incident serogroups observed in all follow-ups. CONCLUSIONS: Follow-ups with mean trimester intervals were incapable of detecting any increase in seroprevalence due to seroincident cases of canine leptospirosis, suggesting that antibody titers may fall within three months. Further studies on incident infections, disease burden or risk factors for incident Leptospira cases should take into account the detectable lifespan of the antibody.

Haemonchus contortus é uma das causas mais comuns e economicamente significativas de doença em produções de pequenos ruminantes em todo o mundo, e os programas de controle de parasitas nematoides - incluindo H. contortus - baseiam-se principalmente no uso de drogas anti-helmínticas. A consequência da utilização desses compostos, como sendo a única estratégia sanitária para evitar infecções por parasitas, tem sido a redução da eficácia de todos os produtos quimioterápicos, selecionando fortemente para resistência. O desenvolvimento generalizado da resistência anti-helmíntica e a dificuldade de seu diagnóstico precoce têm sido uma grande preocupação para o manejo sustentável de parasitas no campo. O objetivo desta pesquisa foi determinar e comparar o efeito da ivermectina (IVM) e da moxidectina (MOX) em um isolado de campo selecionado de H. contortus com um estado de resistência conhecido, utilizando o teste in vitro de migração de larvas em ágar (LMTA). Larvas de terceiro estágio de um isolado de H. contortus selecionado foram obtidas a partir de culturas de fezes de ovinos infectados experimentalmente e incubadas em onze concentrações diluídas crescentes de IVM e MOX (6, 12, 24, 48, 96, 192, 384, 768, 1536, 3072 e 6144µg/mL). As curvas sigmoides de dose-resposta foram obtidas utilizando o valor de R² >0,90 e a dose de concentração letal (CL50) para as drogas anti-helmínticas testadas, utilizando um modelo logístico de quatro parâmetros. O valor de CL50 para MOX foi significativamente menor do que para IVM (1,253µg/mL e 91,06µg/mL), identificando o isolado de H. contortus como consideravelmente menos suscetível à IVM em comparação à MOX. Além disso, o LMTA mostrou uma alta consistência (p<0,0001) e pode ser uma ferramenta útil de diagnóstico para monitorar o status de resistência de IVM e MOX em isolado de campo de H. contortus, assim como ser utilizado de forma oficial e em rotina para programas de monitoramento das drogas sob a demanda do Ministério da Agricultura (MAPA).

Haemonchus contortus is one of the most common and economically significant causes of disease in small ruminants worldwide, and the control programs of parasitic nematodes - including H. contortus - rely mostly on the use of anthelmintic drugs. The consequence of the use of this, as the sole sanitary strategy to avoid parasite infections, was the reduction of the efficacy of all chemotherapeutic products with a heavy selection for resistance. The widespread of anthelmintic resistance and the difficulty of its early diagnosis has been a major concern for the sustainable parasite management on farms. The objective of this research was to determine and compare the ivermectin (IVM) and moxidectin (MOX) effect in a selected field strain of H. contortus with a known resistance status, using the in vitro larval migration on agar test (LMAT). Third stage larvae of the selected isolate were obtained from faecal cultures of experimentally infected sheep and incubated in eleven increasing diluted concentrations of IVM and MOX (6, 12, 24, 48, 96, 192, 384, 768, 1536, 3072 and 6144µg/mL). The dose-response sigmoidal curves were obtained using the R² value of >0.90 and the lethal concentration (LC50) dose for the tested anthelmintic drugs using a four-parameter logistic model. The LC50 value for MOX was significantly lower than IVM (1.253µg/mL and 91.06µg/mL), identifying the H. contortus isolate as considerably less susceptible to IVM compared to MOX. Furthermore, the LMAT showed a high consistency (p<0.0001) and provided to be a useful diagnostic tool for monitoring the resistance status of IVM and MOX in H. contortus field isolate, as well as it may be used for official routine drug monitoring programs under the Ministry of Agriculture (MAPA) guidance.

A leptospirose é uma grave zoonose associada às áreas de baixa renda dos centros urbanos. Embora roedores urbanos sejam considerados como principal reservatório para a leptospirose, o cão também pode desenvolver a doença e se tornar carreador assintomático. O objetivo do presente trabalho foi utilizar a metodologia estatística baseada na teoria de processos pontuais espaciais, buscando identificar a forma como se distribuem os cães sororreagentes para a leptospirose e seus determinantes de risco em uma vila na cidade de Curitiba. A análise do modelo possibilitou identificar as regiões de sobre-risco, onde o risco de soropositividade canina à leptospirose é significativamente maior. A relação significativa do efeito espacial no desenvolvimento da doença, além das variáveis estudadas, revela que não apenas um, mas a ação conjunta dos fatores relacionados ao animal, ao proprietário e ao ambiente influencia o risco maior da doença nos locais de maior efeito espacial. O resultado da análise indica claramente os territórios em maior risco na região da Vila Pantanal, possibilitando o planejamento de ações mais específicas e dirigidas a essas áreas em um contexto de vigilância da saúde.

Leptospirosis is a serious zoonotic disease associated to low income areas of urban settings. Although rodents are considered the main reservoir for urban leptospirosis, dogs may also develop the disease and become asymptomatic carriers. The objective of this study was to apply a statistical method based on the spatial point processes theory for canine leptospirosis to identify how seroreagents dogs are spatially distributed and their risk determinants in a village of Curitiba city. The model analysis allowed the identification of over-risk regions, where seropositivity risk for canine leptospirosis was significantly higher, revealing that not just one, but the combination of animal, owner and environment factors influenced the disease risk within areas with greater spatial effect. Analysis of results clearly identified the highest risk areas in the Pantanal Village, allowing the establishment of more specific preventive actions and focused on risk areas as priority for public health surveillance.

Animais domésticos em áreas urbanas podem servir de reservatório para zoonoses parasitárias. O objetivo deste trabalho foi monitorar a situação parasitária de cães domiciliados, após um ano, em área urbana de Pinhais, região metropolitana de Curitiba, Estado do Paraná, Brasil. Em maio de 2009, foram coletadas amostras de fezes de 171 cães, realizados raspados cutâneos e pesquisa de carrapatos. Foi aplicado um questionário aos proprietários (sexo, idade, ambiente e uso de vermífugos). Em maio de 2010, 26,3% (45/171) dos cães tiveram as amostras de fezes analisadas novamente. Das amostras de fezes, 33,3% (57/171) em 2009 e 64,4% (29/45) em 2010, foram positivas. As espécies de parasitos mais frequentes em 2009 e 2010 foram, respectivamente, Ancylostoma sp. 66,7 e 44,8% e Strongyloidesstercoralis, 26,3 e 3,4%. Todos os raspados cutâneos foram negativos e nenhum carrapato ou protozoário foi encontrado. Não houve associação estatística (p > 0.05) entre exame positivo e idade, sexo ou ambiente. Somente em 2009, cães com histórico de antiparasitários tiveram 2,3 vezes mais chance de serem negativos. Foi observada grande substituição dos cães após um ano. Dessa forma, estratégias isoladas de tratamento podem obter efeito nulo quanto ao controle de parasitas, haja vista o risco de introdução de novos agentes, limitando estratégias de prevenção dos mesmos.

Domestic animals in urban areas may serve as reservoirs for parasitic zoonoses. The aim of this study was to monitor the parasitic status of household dogs in an urban area of Pinhais, in the metropolitan region of Curitiba, Paraná State, Brazil, after a one-year period. In May 2009, fecal samples, skin scrapings and ticks were collected from 171 dogs. Questionnaires were applied to the owners (sex, age, environment and anthelmintic use). In May 2010, 26.3% (45/171) of the dogs were fecal samples reanalysed. From the fecal samples, 33.3% (57/171) in 2009 and 64.4% (29/45) in 2010 were positive. The parasite species most observed were, respectively in 2009 and 2010, Ancylostoma sp., 66.7 and 44.8%, and Strongyloidesstercoralis, 26.3 and 3.4%. All the skin scrapings were negative, and no ticks or protozoa were found. There was no statistical association (p > 0.05) between positive fecal tests and age, sex or environment. In 2009 alone, dogs with a history of antiparasitic drug administration were 2.3 times more likely to be negative. A great number of replacement dogs was noticed one year later. Therefore, isolated antiparasitic treatment strategies may have no impact on parasite control, given the risk of introduction of new agents, thereby limiting the prevention strategies.

INTRODUÇÃO: Após 29 anos, raiva em um gato foi detectada em Curitiba, sul do Brasil. MÉTODOS: Foram realizados imunofluorescência direta e prova biológica através de inoculação em camundongos para o diagnóstico da raiva. RESULTADOS: A imunofluorescência direta foi negativa, mas a prova biológica foi positiva e o vírus caracterizado como variante 4 (de morcegos não hematófagos). CONCLUSÕES: O reaparecimento da raiva alerta para o risco aéreo-silvestre de infecção e para a necessidade de monitoramento de morcegos em áreas historicamente livres da raiva.

INTRODUCTION: After 29 years, rabies was detected in a cat in Curitiba, southern Brazil. METHODS: The fluorescent antibody test (FAT) and mouse inoculation test (MIT) were performed on central nervous system (CNS) samples. RESULTS: Direct immunofluorescence was negative, but the biological test was positive and rabies virus was characterized as variant 4 (from Tadarida brasiliensis). CONCLUSIONS: Reappearance of rabies in domestic animals warns of sylvatic-aerial risk of infection and the necessity of monitoring bats in historically rabies-free areas.