RESUMO Fungos fitopatogênicos durante o processo de penetração e colonização são capazes de secretar uma variedade de enzimas, as quais os tornam capazes de infectar o tecido vivo do hospedeiro, atuando na degradação de ceras, cutícula e das paredes celulares. A capacidade de um agente patogênico em produzir ou não enzimas pode determinar o grau de severidade da doença. Foram avaliados 33 isolados de Colletotrichum gloeosporioides relacionados à antracnose e mancha manteigosa do cafeeiro, quanto a sua capacidade de produção de enzimas hidrolíticas (amilase, lipase, protease, lacase, pectinase e celulase) e enzimas específicas degradadoras da parede celular “EDPC” (poligalacturonase, polimetilgalacturonase e pectinaliase), e sua relação com a patogenicidade/agressividade dos isolados. Para todos os isolados de C. gloeosporioides foi possível a detecção de enzimas extracelulares, com exceção de celulases. Os isolados I-9 e I-24 apresentaram os maiores índices de produção de enzimas extracelulares, e assim como de EDPCs. Os mesmos obtiveram os maiores índices de intensidade de doença, sugerindo a relação entre estas e a agressividade dos isolados.

ABSTRACT Phytopathogenic fungi during the penetration and colonization process are capable of secreting several enzymes, which enable infection of the host live tissue, acting on the degradation of wax, cuticle and cell walls. The ability of a pathogenic agent to produce enzymes or not can determine the severity degree of a disease. In this study, 33 isolates of Colletotrichum gloeosporioides related to anthracnose and blister spot on coffee trees were evaluated for their ability to produce hydrolytic enzymes (amylase, lipase, protease, laccase, pectinase and cellulase) and specific cell wall degrading enzymes “CWDEs” (polygalacturonase, polymethylgalacturonase and pectin-lyase), as well as their relationship with the pathogenicity/aggressiveness of isolates. For all isolates of C. gloeosporioides, extracellular enzymes could be detected, except cellulases. Isolates I-9 and I-24 produced the highest levels of extracellular enzymes, as well as CWDEs. They also had the highest disease intensity indexes, suggesting a relationship between enzymes and aggressiveness of the isolates.

Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de fosfitos na proteção do feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris) contra antracnose. Diferentes formulações de fosfitos foram avaliadas por meio da quantificação da atividade de peroxidases e polifenoloxidases, de fenóis totais e do teor de lignina. Os tratamentos consistiram de pulverizações, nos estádios V4, R5 e R7, com: fosfitos de K, Zn, Mn, K+Mn, K+ácido salicílico e Cu; ácido salicílico; acibenzolar-S-metil; o fungicida azoxistrobina; além de um controle, sem aplicações. A área abaixo da curva de progresso da doença foi menor em plantas que receberam aplicações dos fosfitos de K e Mn, cujos valores variaram entre 74 e 81%, em comparação ao controle. Os fosfitos de K, Zn e K+ácido salicílico foram eficazes no controle da doença. Além disso, a severidade da doença foi menor com a aplicação dos fosfitos de K, Zn e Mn quando comparado ao controle. A atividade de enzimas (peroxidases e polifenoloxidases) e os níveis de fenóis solúveis foram mais elevados em plantas de feijão comum tratadas com os fosfitos de K e Mn, embora não tenha sido detectada mudança nos níveis de lignina solúvel no mesmo tecido. A aplicação de fosfitos reduz a severidade da doença, pode potencializar a atividade enzimática e é uma alternativa eficaz para o controle da antracnose no feijoeiro comum.

Abstract: The objective of this work was to evaluate the effect of phosphites in the protection of common bean (Phaseolus vulgaris) against anthracnose. Different phosphite formulations were evaluated by quantifying peroxidase and polyphenol oxidase activity, total phenols, and lignin content. The treatments consisted of sprayings, in the V4, R5, and R7 stages, with: the K, Zn, Mn, K+Mn, K+salicyclic acid, and Cu phosphites; salicylic acid; acibenzolar-S-methyl; the fungicide azoxystrobin; besides a control, without sprayings. The area under the disease progress curve was lower in plants that received applications of the K and Mn phosphites, whose values ranged between 74 and 81%, compared with the control. The K, Zn, and K+salicyilic acid phosphites were effective in controlling the disease. In addition, disease severity was lower with the application of the K, Zn, and Mn phosphites than with the control. Enzyme (peroxidases and polyphenol oxidases) activity and levels of soluble phenols were higher in common bean plants treated with the K and Mn phosphites, although no change was detected in the levels of soluble lignin in the same tissue. Phosphite application reduces the severity of the disease, can enhance enzymatic activity, and is an effective alternative for the control of anthracnose in common bean.

Colletotrichum gloeosporioides no Brasil está associado a um complexo de sintomas na cultura do café. Apesar da observação e da identificação da patogenicidade deste, o patógeno ainda tem sua importância questionada, devido às várias formas endofíticas do mesmo, levantando dúvidas sobre a real importância do patossistema. O presente trabalho teve como objetivo demonstrar por meio da utilização de um isolado transformado com o gene gfp a capacidade de infecção e colonização de C. gloeosporioides em plântulas de café. Pode-se observar após o quarto dia da inoculação a exteriorização de sintomas como necrose pontuais as quais progrediram durante o período de avaliação, culminando na morte das plântulas. Por meio de microscopia de epifluorescencia pode-se confirmar a presença do patógeno nas plântulas, assim como visualizar a colonização interna do tecido, a formação de acérvulos e produção de conídios, confirmando que o mesmo foi o responsável pelos sintomas observados.

In Brazil, Colletotrichum gloeosporioides is associated with a complex of symptoms in coffee culture. Although this pathogen had its pathogenesis observed and identified, its importance has still been questioned due to its several endophytic forms, raising doubts as to the real importance of the pathosystem. The aim of this study was to demonstrate, by using an isolate transformed with the gene gfp, the infection and colonization capability of C. gloeosporioides in coffee seedlings. After the fourth day of inoculation, manifestation of symptoms as punctual necrosis could be observed, which progressed during the evaluation period, culminating in the death of seedlings. Epifluorescence microscopy confirmed the presence of the pathogen in the seedlings, as well as the visualization of internal colonization of tissues, acervulus formation and conidium production, confirming that it was responsible for the observed symptoms.

Blister spot (Colletotrichum gloeosporioides) is now widespread in most coffee producing states of Brazil, becoming a limiting factor for production. The lack of data relating to the reproduction of typical symptoms (light green, oily patches) leaves a gap within the pathosystem, forcing the search for new methodologies for monitoring the disease. Monitoring of genetically modified organisms has proven to be an effective tool in understanding the host x pathogen interactions. Thus, the present study was carried out to evaluate the effectiveness of two systems of genetic transformation in obtaining mutants using the gfp reporter gene. Using the two transformation systems (PEG and electroporation) revealed the efficiency of both, confirmed by fluorescence microscopy and resistance to the antibiotic hygromycin-B, when incorporated into the culture medium. The fungus maintained its cultural and morphological characteristics when compared to wild strains. When inoculated on coffee seedlings, it was found that the pathogenicity of the processed isolates had not changed.

Foi avaliada a influência de Colletotrichum. gloeosporioides na sanidade, germinação, viabilidade e vigor de sementes de cafeeiro. Sementes das cultivares Catuaí Vermelho, provenientes de plantas com sintomas de mancha manteigosa, e de lavouras sadias de Catuaí Vermelho IAC 44 e Mundo Novo 379-19 foram submetidas a inoculação por C. gloeosporioides, pelo contato direto com a colônia do fungo, por 0; 24; 48; 72; 96 e 120 horas. As variáveis analisadas foram sanidade, germinação, índice de velocidade de emergência e viabilidade pelo teste de tetrazólio. Verificou-se aumento da incidência de C. gloeosporioides com o do tempo de exposição ao fungo, sendo esta de 26% em Catuaí Vermelho, 21,5% em Catuaí Vermelho IAC-44 (21,5%) e de 11,0% em Mundo Novo IAC 379-19. O fungo afetou a germinação das sementes e o índice de velocidade de emergência das sementes da cultivar Catuaí Vermelho e Catuaí Vermelho IAC 44 a partir de 96 horas de exposição. O efeito de C. gloeosporioides na germinação e no estabelecimento de plântulas de cafeeiro é variável, dependendo da cultivar utilizada, da presença do pergaminho e do tempo de exposição ao fungo, mas a viabilidade das sementes decresce com o aumento do tempo de exposição ao fungo.

The objective of this study was to evaluate the influence of Colletotrichum gloeosporioides on the seed health, germination, viability and vigor of different coffee cultivars. Seeds of the Catuaí Vermelho cultivar, with symptoms of blister spot, and of healthy cultivars of Catuaí Vermelho IAC 44 and Mundo Novo 379-19 were inoculated with C. gloeosporioides, by direct contact with the fungus colony for 0; 24; 48; 72; 96 and 120 hours. The variables analyzed were: health with the Blotter test, germination, speed of emergence and seed viability by tetrazolium test. There was an increased incidence of C. gloeosporioides with increasing exposure to the fungus, with 26.0% in Catuaí Vermelho, 21.5% in Catuaí IAC-44 (21.5%) and 11.0% in Mundo Novo IAC 379-19. C. gloeosporioides affected the germination and seed emergence rate of Catuaí Vermelho and Catuaí Vermelho IAC 44 after 96 hours of exposure to the fungus. The effect of C. gloeosporioides on coffee germination and seedling establishment varies with cultivar susceptibility, the presence of parchment and time of exposure to the fungus, but viability decreases with increasing exposure time to the fungus.

Verificou-se a influência dos fungos associados aos frutos de café na composição físico-química e química do grão beneficiado de Coffea arabica L. Os frutos foram colhidos na fazenda Experimental da EPAMIG, no município de Lavras-MG. Após beneficiamento e secagem, os grãos foram incubados em câmara úmida para exteriorização dos fungos através do método blotter test e submetidos às análises de polifenoloxidase, açúcares totais redutores e não redutores, ácido clorogênico, acidez titulável, lixiviação de potássio, condutividade elétrica e cafeína. Verificou-se a ocorrência dos fungos Penicillium variable, P. rugulosum, P. funiculosum, Fusarium semitectum, F.equiseti, Aspergillus alutaceus, A. niger, Cladosporium cladosporioides. Pela análise dos resultados obtidos observou-se que a presença do fungo Aspergillus alutaceus reduz a atividade da enzima polifenoloxidase e aumenta os valores de lixiviação de potássio, condutividade elétrica e fenólicos totais. A incidência do fungo Cladosporium cladosporioides influenciou nos valores médios de lixiviação de potássio e condutividade elétrica.

The influence of fungi associated with coffee fruits was verified regarding the chemical and physicochemical composition of Coffea arabica L. raw grains. The fruits were harvested at EPAMIG Experimental farm in Lavras, State of Minas Gerais - making up the different samples here analyzed. After processing and drying, the grains were incubated in wet chamber for fungal exteriorization through the blotter test method and submitted to the following analyses: polyphenoloxidase, total reducing and non-reducing sugars, clorogenic acid, titrable acidity, potassium leaching, electric conductivity and caffeine. The occurrence of the P. variable, P. rugulosum, P. funiculosum, F. equiseti, F. semitectum, A.alutaceus, A. niger and C. cladosporioides fungi in the different samples was detected. From the analysis of the results obtained, it was observed that the presence of the Aspergillus alutaceus fungus reduces the activity of the enzyme polyphenoloxidase and increases the values of potassium leaching, electric conductivity and chlorogenic acid. The incidence of the Cladosporium cladosporioides fungus influenced the average values of potassium leaching and electric conductivity.

Neste trabalho, os objetivos foram avaliar a transmissibilidade de C. gloeosporioides mancha manteigosa (MM) em sementes e estudar o efeito do tratamento por fungicidas no controle do referido patógeno. Colheram-se frutos cerejas em plantas doentes e sadias, procedeu-se o despolpamento manual secando as sementes à sombra, retirou-se o endocarpo e, em seguida, realizaram-se os devidos tratamentos (fungicida) semeando-as em areia esterilizada. Avaliaram-se os sintomas de necrose e morte das plântulas e a incidência de C. gloeosporioides, por meio do teste de incubação em substrato de papel (blotter test), em sementes de cafeeiro tratadas e não tratadas com mistura comercial de benzimidazol+dimetilditiocarbamato (dose i.a. de 45 g+105 g/100 kg sementes). Com o desenvolvimento das plântulas, observaram-se em sementes de plantas com MM , altos índices de morte de plântulas, tendo apenas 5,2% de sobrevivência, porém, com a abertura dos primeiros folíolos observaram-se, nestas plântulas, sintomas típicos da doença, com posterior morte das mesmas, enquanto que, a partir de sementes sadias, as plântulas apresentam-se vigorosas e em pleno crescimento. Já, com o uso do tratamento fungicida, observou-se efeito significativo, principalmente em sementes de plantas doentes (MM), nas quais verificou-se uma menor área abaixo da curva de progresso da doença e, consequentemente, menor incidência e severidade da doença. Pelo bloter test, em sementes tratadas, não houve crescimento de nenhum agente fúngico tanto para sementes de plantas com MM como para sementes de plantas sadias. Em sementes não tratadas, observou-se incidência de C. gloeosporioides em 29,8% nas sementes de plantas com MM e 1,2% de incidência em sementes de plantas sadias. Com base nestes resultados, fica evidenciado que neste patossistema, mancha manteigosa - cafeeiro, a principal via de transmissão de C. gloeosporioides é a semente.

The objectives in this study were: (i) the assessment of the transmission of blister spot(C. gloeosporioides) from seed to plant, and (ii) an observation study on the effect of seed treatment with fungicides used in the control of that disease. Natural transmission of the fungus was studied in seeds collected from both healthy and diseased 'Catucaí' coffee trees. The endocarp of the seeds was removed, and the seeds were sowed in sterilized sand substrate. The symptoms and the death process of hypocotyls were evaluated. Additionally, the incidence of blister spot (C. gloeosporioides) was assessed through blotter test in both fungicide treated and untreated seeds. A large number of hypocotyl deaths in seeds obtained from blister spot trees were observed, whereas seeds collected from healthy trees produced healthy seedlings. A total of 5.2% of the seedlings from blister spot trees were apparently healthy. But after the completion of the development of the first pair of leaves, blister spot symptoms were observed. When treated with fungicides (benzimidazol + dimethyldithiocarbamate), seeds from blister spot and healthy trees were free of fungi. Seeds collected from blister spot trees presented an incidence of 29.8% C. gloeosporioides , whereas seeds collected from healthy trees had an incidence of 1.2%. Therefore, based on the results of this study, it was clear that seeds were the principle means of transmission of blister spot in coffee.

O presente trabalho teve por objetivo obter informações sobre os eventos de pré-penetração, penetração e colonização de isolados de C. gloeosporioides, obtidos de mangueira e cafeeiro, quando inoculados em folhas de cafeeiros (Coffea arabica L.) da cultivar Catucaí Vermelho. As folhas foram selecionadas, padronizadas e lavadas, demarcando-se áreas circulares de 0,5 cm de diâmetro na face abaxial, inoculando-se uma alíquota de 20 µL da suspensão de conídios. Utilizou-se um isolado obtido de mangueira e dois isolados obtidos de cafeeiro com mancha manteigosa. Realizaram-se avaliações com 3, 6, 8, 12, 24, 36, 48, 72, 96, 144 e 240 horas após a inoculação (hai). Todos os materiais foram processados e observados em microscópico eletrônico de varredura. Os conídios de todos os isolados aderiram freqüentemente nas depressões das células da epiderme e células-guarda dos estômatos, formando septo antes da germinação. A penetração, na maior parte, se deu por via direta e algumas vezes por estômatos. Isolados de cafeeiro germinaram em folhas de 6 a 8 hai, produzindo apressórios 12 hai e acérvulos de 96 a 144 hai. O isolado de mangueira germinou de 6 a 8 hai com formação de apressório de 8 a 12 hai e produziu novos conídios diretamente em hifas conidiogênicas. Não foi observada a formação acérvulos para este isolado.

The present study was carried out with the objective to provide information on the pre-penetration, penetration and colonization events of isolates of Colletotrichum gloeosporioides from mango and coffee, when inoculated in coffee leaves. The cultivar Catucaí Vermelho was used in all experiments. Coffee leaves were selected, standardized and washed in sterile water. After that, circular areas of 0.5 cm in diameter were marked on the undersurface of the leaves. In the center of each circular area, 20 µL of spore suspension was deposited. One isolate from mango and two from coffee presenting blister spot were used in all trials. The time course of the experiments was 3, 6, 8, 12, 24, 36, 48, 72, 96, 144 and 240 hours after inoculation (h.a.i.). All materials were analyzed in scanning electron microscopy. The conidia of all isolates adhered more frequently on the plant tissue depressions and guard-cells forming septum before germination. The most common penetration via was the direct, although some penetration through stomata also occurred. Isolates obtained from blister spot symptoms germinated on coffee leaves after 6 to 8 h.a.i., producing appressoria after 12 h.a.i., and acervuli after 96 to 144 h.a.i. The isolate from mango germinated on the coffee leaves after 6 to 8 h.a.i. and formed appressoria after 8 to 12 h.a.i., but was unable to form acervuli, bearing conidia directly from conidiogenous hypha on the mycelium.

O objetivo deste trabalho foi verificar a micota associada interna e externamente a grãos de café nas cultivares: Catuaí Amarelo, Mundo Novo, Acaiá, Rubi e Icatú, e detectar a ocorrência de Ocratoxina A nestas amostras. Frutos de café foram colhidos na Fazenda Experimental da EPAMIG, situada no município de Lavras/MG. O procedimento para análise de fungos filamentosos foi o método Blotter test. A determinação da ocratoxina A foi realizada por CLAE. Fusarium semitectum foi identificado apenas na cultivar Icatu e F. equiseti foi detectado em todas as cultivares, exceto na Mundo Novo. Três espécies de Penicilium foram isoladas dos grãos: P. rugulosum na cultivar Rubi, P. funiculosum na cultivar Icatu e P. variabile nas demais. A cultivar Acaiá apresentou maior incidência de P. variabile, seguida por Mundo Novo e Catuaí. A ocorrência de A. niger e A. ochraceus não diferiu entre as cultivares. A presença de fungos na superfície dos grãos foi significativamente superior ao encontrado internamente. Em nenhuma amostra foi detectada a ocorrência de ocratoxina A.

The aim of this work was to verify the mycobiota associated both internally and externally with coffee beans on the cultivars "Catuai Amarelo", "Mundo Novo", "Acaiá," "Rubi" and "Icatú" and detect the occurrence of ochratoxin A in these samples. Coffee fruits were harvested on the EPAMIG experiment farm, situated in Lavras /Minas Gerais. The procedure for fungi analysis was the Blotter test. Determination of ochratoxin A was accomplished by HPLC. Fusarium semitectum was identified only on the Icatu cultivar and F. equiseti was identified on all cultivars except Mundo Novo. Three species of Penicillium were isolated from the beans: P. rugulosum on the Rubi cultivar, P. funiculosum on the Icatu cultivar and P. variabile on the others. The Acaiá cultivar had the highest incidence of P. variabile followed by Mundo Novo and Catuaí. The occurrence of A. niger and A. ochraceus did not differ among the cultivars.The presence of fungi on the surface was significantly higher than inside the beans. None of the samples presented ochratoxin A.

Objetivou-se, no presente trabalho, analisar microscopicamente a colonização de C. gloeosporioides, agente da mancha manteigosa (MM), em condições naturais da doença, sobre os diferentes órgãos e tecidos da cultivar Catucaí Vermelho: folhas, pecíolos, nervuras, ramos, frutos e pedúnculos. Todas as amostras foram processadas, obtendo-se imagens em microscópico eletrônico de varredura. Os ramos e as nervuras de folhas de cafeeiros com mancha manteigosa apresentando morte descendente e hipocótilos oriundos de sementes têm os vasos do xilema, floema e células do córtex colonizados por C. gloeosporioides, já os frutos com sintoma da mancha manteigosa apresentaram colonização nos tecidos do exocarpo, mesocarpo, endocarpo e endosperma.

The aim of this work was to study the colonization of leaves, petioles, veins, branches, fruits, and peduncles by C. gloeosporioides, the causal agent of blister spot, under natural infections of cultivar Catucaí Vermelho in field conditions. All materials were analyzed through scanning electron microscopy. The branches and veins of coffee leaves affected by blister spot with descending death as well as hypocotyls from seedlings had their xylem, phloem and cortical cells colonized by C. gloeosporioides while fruits showing blister spot symptoms had their exocarp, mesocarp, endocarp, and endosperm tissues colonized by C. gloeosporioides.

Neste trabalho, objetivou-se avaliar a eficiência de alguns fungicidas no controle da mancha manteigosa (Colletotrichum gloeosporioides) do cafeeiro (Coffea arabica L.) em campo, e verificar os efeitos climáticos no progresso da doença. Foram conduzidos ensaios sobre cafeeiros da cultivar Catucaí Vermelho, com aproximadamente 8 anos de idade. Os fungicidas testados foram: tetraconazol, triadimenol, chlorotalonil e mancozeb, nas dosagens de 1,0L/ha, 12Kg/ha, 3Kg/ha e 2Kg/ha, respectivamente. Coletaram-se dados climáticos diariamente, no período de outubro de 2004 a maio de 2006. Os fungicidas chlorotalonil e triadimenol foram os que proporcionaram os melhores resultados de eficiência de controle do progresso de morte de ramos e frutos, destacando a produção de frutos cereja. Entre os meses de outubro a janeiro, verificou-se elevado progresso de mortes de ramos influenciado pelas altas precipitações pluviais. Os fungicidas tetraconazol e o mancozeb mostraram-se ineficientes. Plantas com mancha manteigosa, mesmo quando pulverizadas com fungicidas, tiveram significativa queda de frutos, enquanto plantas sadias apresentaram produções 95% superiores àquelas.

The aim of this work was to assess the effect of selected fungicides on the control of coffee blister spot in the field and to verify the climatic effects on the progress of the disease. Trials were carried out with coffee plants of cultivar Catucaí Vermelho, approximately 8 years old. The fungicides tested were tetraconazol (1L/ha), triadimenol (12Kg/ha), chlorothalonil (3Kg/ha), and mancozeb (2Kg/ha). Climatic data were collected daily from October 2004 to May 2006. The fungicides chlorotalonil and triadimenol provided the best efficiency results on the control of the progress of die-back and the number of fruits, with an increase in the cherry production. The increase of die-back during the period from October to January was possibly induced by the rainfall. Tetraconazol and mancozeb were not efficient. Coffee trees affected by blister spot, even if treated with fungicides, had significant decrease in the fruit production and the untreated healthy trees had their yield 95% higher than of those treated.

Objetivou-se estudar a dispersão espacial da mancha manteigosa em cafeeiro, por meio de arranjos espaciais e da análise da dinâmica e estruturas de focos da doença durante três anos consecutivos. Nesse período, não houve progresso da doença no campo. Sob plantas doentes, surgiam mudas com sintomas da doença, um indício da transmissibilidade via semente. Constatou-se um total de 10 focos, com média de 2,5 plantas/focos e com tendência desses focos (maior número de plantas sintomáticas) na direção das linhas de plantios, tendo disposição de forma elíptica. Observou-se número elevado de focos unitários, correspondendo a 52% das plantas doentes. Pelas análises de seqüências ordinárias runs e doublet verificou-se padrão espacial aleatório. Tal fato indica que a mancha manteigosa ocorre a partir de plantas isoladas (focos unitários) e que a principal via de transmissão é a semente (semente/planta/semente).

The aim of this study was to analyze the spatial dispersion pattern of the blister spot on coffee trees, through spatial arrangements and the analysis of the dynamics and foci structure of the disease during three consecutive years. No disease progress was observed in this area during the period of study. Seedlings showing disease symptoms were found under the canopy of diseased trees, strongly indicating that the disease may be transmitted through the seeds. Ten foci with 2.5 trees per focus were observed in the studied area. The foci were distributed following the plant rows with elliptical shape. Unitary foci predominated in the area in 52% of the diseased trees. Analyses of runs and doublets showed a random spatial pattern of the disease. These results evidenced that the blister spot occurs from isolated plants (unitary foci) and this characteristic may possibly be explained if the seeds are the main disease transmission agent (seed-plant-seed).

Nos estudos envolvendo a interação Colletotrichum gloeosporioides-cafeeiro (Coffea arabica L.), poucas são as informações a respeito do modo de penetração e colonização deste patógeno. Estudou-se por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV), os eventos de pré-penetração e penetração de C. gloeosporioides em hipocótilos de cafeeiros e a colonização natural de ramos e frutos provenientes de plantas com mancha manteigosa. Realizaram-se três ensaios. No primeiro, fez-se a observação dos eventos de pré-penetração de C. gloeosporioides inoculados em hipocótilos de plântulas da cv. Acaiá Cerrado com e sem ferimentos; no segundo, observou-se a colonização de ramos enfermos em que havia murcha drástica e necrose local e, no terceiro, a colonização de frutos enfermos. A germinação dos conídios nos hipocótilos feridos ocorreu 6 horas após a inoculação, com a formação de um ou dois tubos germinativos terminais e a adesão dos conídios nas depressões dos hipocótilos. Apressórios globosos a subglobosos e de contorno regular surgiram 12 horas após a inoculação. Até 72 horas, não foi possível observar a formação de acérvulos sobre os tecidos submetidos à inoculação. Nos ramos observava-se colonização nos vasos floema e parênquima cortical. Nos frutos em diferentes estádios de maturação foi observada a colonização do tecido próximo à epiderme e colapso dos estômatos na área lesionada.

In studies involving the interaction Colletotrichum gloeosporioides - coffee trees (Coffea arabica L.) there is little information regarding the pre-penetration, penetration and colonization pathways of this pathogen. The objectives of this work were: 1. to study through scanning electron microscopy (SEM) the pre-penetration and penetration events of C. gloeosporioides in hypocotyls of coffee plantlets; 2. to observe the colonization of Colletotrichum spp. in branches and fruits of coffee trees with blister spot symptoms. The study took place in three trials. In the first trial, it was observed and reported the pre-penetration events of C. gloeosporioides inoculated on hypocotyls of coffee cv. Acaiá Cerrado with and without wounds. The second trial was performed to investigate the colonization of diseased coffee branches that presented drastic wilt and local necrosis was observed. Finally the third trial investigated the colonization of this pathogen in diseased coffee fruits. When C. gloeosporioides was inoculated, germination could be observed in wounded hypocotyls 6 hours after inoculation. Better adhesion of conidia was evident at surface depressions of hypocotyls and germination started by emission of one or two terminal germ tubes. Round or sub-round shaped apressoria appeared 12 hours after inoculation. Up to 72 hours, acervula formation was not observed on inoculated tissues. The wilted branches presented colonization in the phloem and cortical tissues. In fruits at different stages of maturation, it was observed colonization in tissues near the epidermis and collapse of the stomata in the affected area.

Com o objetivo de avaliar a eficiência de alguns fungicidas sobre Colletotrichum gloeosporioides, agente etiológico da mancha manteigosa do cafeeiro (Coffea arabica L.), testes in vitro foram conduzidos no Laboratório de Diagnose e Controle/UFLA. Utilizou-se o método de incorporação de fungicidas ao meio de cultura MEA 2% para a avaliação da inibição do crescimento micelial e em lâmina escavada contendo água com fungicida para a germinação de conídios. Os fungicidas, tetraconazol, triadimenol, chlorotalonil e mancozeb foram testados quanto à inibição do crescimento do micelial (nas concentrações de 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500 e 1.000 mg L-1) e quanto à inibição da germinação de conídios (nas concentrações de 1, 5, 10, 25, 50 e 100 mg L-1). Os fungicidas tetraconazol e triadimenol apresentaram alta eficiência na inibição do crescimento micelial. Os fungicidas chlorotalonil e mancozeb mostraram baixa eficiência e ineficiência, respectivamente. Quanto à germinação dos conídios, os fungicidas que demonstraram maior eficiência em baixas concentrações foram o chlorotalonil e o tetraconazol.

With the aim of assessing the effect of selected fungicides on Colletotrichum gloeosporioides, the cause of coffee blister spot, in vitro tests were carried out in the Laboratory of Diagnosis and Control/UFLA, Federal University of Lavras, Brazil. In the in vitro experiments the fungicides were incorporated into malt extract medium (MEA 2%) to evaluate the effect on the fungus growth rate, and concavity slides containing water plus fungicide to assess the conidia germination. The fungicides tetraconazol, triadimenol, chlorothalonil and mancozeb were tested on the mycelial growth inhibition (in the concentrations of 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500 and 1.000 mg L-1) and on the inhibition conidia germination (in the concentrations of 1, 5, 10, 25, 50 e 100 mg L-1). The fungicides tetraconazol and triadimenol showed high efficiency on the mycelial growth inhibition. Chlorotalonil and mancozeb showed low efficiency and inefficiency, respectively. As to the germination of conidia, chlorothalonil and tetraconazol demonstrated to be more efficient in low concentrations.

A mancha manteigosa tem afetado um grande número de plantas de cafeeiro em condições de campo. Sua causa tem sido atribuída a Colletotrichum gloeosporioides, entretanto a sintomatologia da doença na folha não tem sido reproduzida. Neste estudo, relata-se pela primeira vez a associação de Xylella fastidiosa, agente da atrofia dos ramos de cafeeiro, com pecíolo de folhas e hipocótilos obtidos a partir de sementes de plantas com sintomas da mancha manteigosa, através de estudos ultra-estruturais em Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV), bem como por PCR (Polymerase Chain Reaction). Para o estudo foram realizados três ensaios. No primeiro, coletaram-se folhas com sintomas de mancha manteigosa e assintomáticas em duas localidades as quais foram preparadas para MEV. No segundo, pecíolos de 40 plantas sintomáticas e 40 assintomáticas foram coletados no campo experimental de café da UFLA. Os Pecíolos das folhas foram cortados e macerados para extração do DNA e analisados por PCR. Quatro pecíolos de cada uma destas amostras (plantas com e sem sintomas) também foram preparados para MEV. Em um terceiro ensaio, sementes obtidas de plantas com sintomas de mancha manteigosa, foram semeadas em bandejas de isopor contendo substrato Plantmax®. As bandejas permaneceram em câmara de crescimento e aos 30, 60 e 90 dias, após a semeadura, foram coletados hipocótilos para preparação e observação em MEV. Inicialmente uma bactéria semelhante à Xylella foi encontrada nos vasos do xilema de plantas sintomáticas das duas localidades estudadas. Pela análise por PCR constatou-se X. fastidiosa em 34% das plantas com sintoma da doença e 9,3% nas sem o sintoma da mancha manteigosa. Pecíolos de plantas Xylella positivas por PCR apresentaram obstrução dos vasos do xilema pelas bactérias. Das quatro plantas negativas por PCR, apenas uma teve o pecíolo com vasos obstruídos pela bactéria quando analisados em MEV. Em hipocótilos analisados em MEV verificaram-se células bacterianas semelhantes à X. fastidiosa nos vasos do xilema aos 60 e 90 dias após semeadura. Esse é o primeiro relato da associação de X. fastidiosa a pecíolos e hipocótilos de cafeeiros expressando sintomas de mancha manteigosa.

Buttery spot has greatly affected coffee plants in field conditions. Its cause has been attributed to Colletotrichum gloeosporioides. However, its symptoms in leaves have not been reproduced. In this study we reported for the first time the presence of X. fastidiosa, causal agent of the coffee atrophy in petiole and hypocotyls from coffee plants with buttery spot through PCR and ultrastructural studies by scanning electron microscopy (SEM). In this study three trials were developed. In the first we collected leaves from plant with and without buttery spot symptoms in two places which were prepared for SEM. In the second petioles of 40 symptomatic and 40 asymptomatic leaves were collected in a coffee experimental field of Federal University of Lavras. Petiole from these leaves were cut and macerated for DNA extraction and analyzed by PCR. Four petioles of each sample (plants with and without symptoms) were prepared for SEM. In a third trial, seeds from plants with battery spot were sowed in foam trays with Plantimax® substrate. The trays stayed in a growth chamber and after 30, 60 and 90 days of the germination hypocotyls were collected for preparation and observation in SEM. Initially a bacterium similar to X. fastidiosa was found in vessels of symptomatic plants studied. Through the analysis by PCR we verified X. fastidiosa in 34% of plants with the disease symptoms and 9,3% in those without symptom of buttery spot. Petioles of positives Xylella plants by PCR presented obstruction of vessels of xylem by bacteria. Out of four PCR-negatives plants, one had petioles with vessels clogged by bacteria when analyzed by SEM. In analyzed hypocotyls with SEM were observed bacterial cells like X. fastidiosa in xylem vessels at 60 and 90 days. This is the first report of the colonization of X. fastidiosa in coffee plant petiole and hypocotyls of seeds of plants expressed buttery spot symptoms.