RESUMO A mastite é considerada uma das principais doenças que afetam rebanhos leiteiros ao redor do mundo e é causada principalmente por Staphylococcus aureus e Streptococcus spp. ambientais. Eventualmente, patógenos não convencionais, como Mycobacterium de crescimento rápido (RGM), podem também causar mastite crônica, a qual não respondera ao tratamento com antimicrobianos. O diagnóstico de mastite causada por RGM é uma tarefa difícil, e a maioria das vezes esse agente pode ser subdiagnosticado. Neste relato, descreveu-se um caso de mastite clínica em uma vaca, no sul do Brasil, causada por RGM Mycobacteroides abscessus, confirmado por caracterização microbiológica e molecular. Os resultados reforçam a necessidade de um diagnóstico laboratorial detalhado para a identificação do agente e a inclusão deste como diagnóstico diferencial no reconhecimento de mastite crônica não responsiva ao tratamento.

ABSTRACT Mastitis is considered the main disease that affects dairy cattle worldwide, and it is caused mainly by Staphylococcus aureus and environmental Streptococcus spp. Eventually, nonconventional pathogens, as rapidly growing mycobacteria(RGM), may also cause chronic mastitis, which will not be responsive to antibiotic treatments. Diagnosis of mastitis caused by RGM is a difficult task, and most of time this agent may be misdiagnosed. Here we describe a case of clinical mastitis caused by the RGM Mycobacteroides abscessus in a cow from Southern Brazil, confirmed by microbiological and molecular characterization. Our results reinforce the necessity of a detailed laboratorial identification of the agent and to include this agent in differential diagnosis of chronical clinical mastitis nonresponsive to treatment.

RESUMO Neospora caninum é o principal agente etiológico da neosporose em animais domésticos, e sua patogênese compreende duas fases características: aguda e crônica. Roedores são usados como modelos experimentais para simular neosporose bovina aguda e crônica. Neste estudo, foi inoculado um total de 27 gerbilos, fêmeas, com diferentes doses de taquizoítos de N. caninum, visando induzir doença crônica. O DNA foi extraído de diferentes órgãos de cada animal após a morte espontânea ou a eutanásia. Os tecidos encefálicos foram submetidos à PCR em tempo real de alta sensibilidade para detecção de animais com infecção crônica. Todas as outras amostras foram submetidas à PCR padrão. Um total de 11 gerbilos morreu devido à neosporose aguda, como confirmado pela detecção de DNA de N. caninum nos órgãos. A dosagem de antígeno que pode induzir infecção crônica foi de 5x103 taquizoítos/mL de N. caninum. Em seções do encéfalo de alguns animais, que apresentaram sinais clínicos de infecção persistente, encontraram-se 70% de positividade para a seção do encéfalo anterior, sugerindo essa área como preferencial para a formação de cisto. Assim, foram determinadas,, em gerbilos, as dosagens de taquizoítos capazes de induzir infecção crônica ou aguda, bem como foram detectados tecidos positivos, preferencialmente, em órgãos sistêmicos, na fase aguda, e no encéfalo, na crônica.

ABSTRACT Neospora caninum is the main etiologic agent of neosporosis in domestic animals and its pathogenesis comprises two characteristic phases: acute and chronic. Rodents are used as experimental models to mimic acute and chronic bovine neosporosis. In this study, we inoculated a total of 27 female gerbils, with different doses of N. caninum tachyzoites aiming to induce chronic disease. DNA was extracted from different organs of each animal after spontaneous death or euthanasia. Encephalic tissues were submitted to a highly sensitive real time PCR aiming to detect chronically infected animals. All the other samples were submitted to standard PCR. A total of 11 gerbils died due to acute neosporosis, as confirmed by N. caninum DNA detection in organs. 5x103 tachyzoites/mL of N. caninum was the dosage of antigen that can induce chronic infection in gerbils. In the encephalon sections of some animals that showed clinical signs of persistent infection, we found 70% positive for the anterior encephalon section, suggesting this area as preferential for cyst formation. Therefore, we determined the doses of tachyzoites that cause acute or chronic infection and detection of positive tissues, preferably, systemic organs during acute and encephalon in chronic phases.

Avaliou-se a atividade antimicrobiana dos óleos essenciais (OE) de Origanum vulgare (orégano), Thymus vulgaris (tomilho), Lippia graveolens (lipia), Zingiber officinale (gengibre), Salvia officinalis (sálvia), Rosmarinus officinalis (alecrim) e Ocimum basilicum (manjericão), e de suas frações majoritárias, carvacrol e timol, frente a 32 isolados de Staphylococcus spp, oriundos de rebanhos leiteiros bovinos. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima foram determinadas por meio da técnica de microdiluição em caldo. Orégano, tomilho e lípia (Orégano Mexicano) apresentaram atividade antimicrobiana similar, médias geométrica de CIM de 1600µg mL-1; 1564µg mL-1; 1562µg mL-1, respectivamente, no entanto menos ativos que carvacrol, 584µg mL-1 e thymol, 427µg mL-1. Isolados com diferentes perfis de susceptibil idade aos antimicrobianos usados no tratamento de mastite bovina, quando subagrupados, foram inibidos por concentrações semelhantes de OE . Estes resultados confirmam a atividade antimicrobiana de OE e algumas frações majoritárias.

Os fatores de virulência e a resistência aos antimicrobianos foram avaliados em Escherichia coli. Um total de 80 isolados de E. coli, sendo 64 de amostras clínicas (conteúdo intestinal e fragmentos de órgãos de leitões diarreicos), sete das fezes de porcas e leitões saudáveis e nove de amostras ambientais (cinco de instalações, dois de alimentos, um de inseto e um de esterqueira). A caracterização molecular feita pela PCR objetivou detectar fimbrias e toxinas, bem como a determinação do conteúdo de plasmídeos. Os isolados foram caracterizados quanto à resistência ou sensibilidade às seguintes drogas: ampicilina, sulfazotrim, tetraciclina, amikacina, colistina, norfloxacina, florfenicol, enrofloxacina, cefalexina, trimetoprim, neomicina, cloranfenicol e gentamicina. Dos 80 isolados, 53,8% foram classificados como E. coli enterotoxigênica (ETEC), 2,5% como E. coli produtora de shiga toxina (STEC) e 43,8%, por não apresentarem padrão específico, não foram classificadas. Pela PCR, um isolado de fezes de suíno sem diarreia foi classificado como ETEC. Os isolados das amostras clínicas foram principalmente resistentes à tetraciclina e à sulfazotrim. Em 70 isolados, observaram-se DNA plasmidial, destes 78,5% foram obtidos de amostras clínicas, 8,57% de leitões sadios e 12,8% de amostras ambientais.

Virulence factors and antimicrobial resistance patterns of Escherichia coli isolates were evaluated. A total of 80 E. coli isolates were evaluated, being 64 from clinical samples (intestinal content and fragments of organs from diarrheic piglets), seven from feces of clinically healthy piglets and sows, and nine environmental samples (five from facilities, two from feed, one from insect, and one from waste). Molecular characterization was performed by PCR detection of fimbriae and toxin genes and plasmid content determination. The isolates were also characterized according to their resistance or sensitivity to the following drugs: ampicillin, trimethoprim:sulfamethoxazole, tetracycline, amikacine, colistin, norfloxacin, florfenicol, enrofloxacin, cefalexin, trimethoprim, neomycin, chloramphenicol, and gentamicin. From 80 E. coli isolates, 53.8% were classified as enterotoxigenic E. coli (ETEC), 2.5% were shiga toxin-producing E. coli (STEC), and 43.8% showed a non specific pattern and were unclassified. One fecal isolate from non-diarrheic piglet was classified as ETEC by PCR. Clinical isolates showed resistance mainly for tetracycline and trimethoprim:sulfamethoxazole. Plasmidial DNA was observed in 70 isolates, being 78.5% of clinical isolates, 8.57% of non-diarrheic feces, and 12.8% of environment.

Foram analisados 24 isolados bacterianos oriundos de leite e pele de búfalas (Bubalus bubalis), os quais foram previamente identificados como Rhodococcus equi com o auxílio de fenotipia concisa. Testes fenotípicos complementares e ferramentas moleculares foram utilizados com o objetivo de caracterizar esses isolados, bem como diferenciá-los de outros microrganismos intimamente relacionados. Observaram-se três fenótipos distintos, porém a identificação dos isolados foi inconclusiva. Apenas um dos isolados foi comprovado como sendo R. equi com a realização da PCR espécie-específica, sequenciamento e análise dos fragmentos de DNA. Os demais isolados só foram identificados pelo sequenciamento de fragmento do gene que codifica a região 16S do rRNA universal de bactérias, indicando tratar-se de Dietzia maris. O perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos revelou maior resistência dos isolados de D. maris para oxacilina (96%) e rifampicina (87%). O isolado de R. equi apresentou resistência à amicacina, oxacilina, penicilina, rifampicina e tetraciclina. Alerta-se para o risco da incorreta identificação dos isolados baseados em testes fenotípicos concisos e para a necessidade de utilização de testes complementares para diferenciação entre R. equi e D. maris.

Twenty-four bacterial isolates from milk and skin of buffalo females (Bubalus bubalis), which previously had been identified as Rhodococcus equi by using a restricted number of phenotypical tests for bacterial characterization, were analyzed. The goal of this study was to perform the characterization of these isolates, as well as the differentiation of other microorganisms closely related by using additional phenotypical tests and molecular tools. Based on the phenotypical results, three different biotypes were obtained. However, the identification of the isolates was inconclusive. Only one of the isolates was confirmed as R. equi by the PCR specifically for this species, as well DNA sequencing and DNA fragment analysis. All the other isolates only could be precisely identified after the DNA sequencing, and they were characterized as Dietzia maris. The sensitivity profile to antimicrobials demonstrated the highest resistance of D. maris to oxacillin and rifampin, 96% and 87%, respectively. R. equi isolate, presented resistance to amikacin, oxacillin, penicillin, rifampin, and tetracycline. Thus, it is important to alert for the risk of the incorrect identification of the bacterial isolates by using diagnostic analysis based on phenotypical tests in order to differentiate R. equi and D. maris, besides the necessity to use complementary tests for differentiation of these microorganisms.

RESUMO Rhodococcus equi é uma importante causa de broncopneumonia em potros com menos de seis meses de idade, sendo responsável pela mortalidade de eqüinos no mundo inteiro. É um microrganismo intracelular capaz de sobreviver e se multiplicar no interior de macrófagos. Apresenta três níveis de virulência de acordo com os diferentes antígenos expressos em sua superfície. Cepas virulentas apresentam um plasmídeo que codifica a proteína de superfície VapA e são isoladas principalmente de potros com pneumonia e de alguns pacientes humanos. Cepas com virulência intermediária expressam a proteína VapB e predominam em suínos e humanos com AIDS. Cepas avirulentas não expressam antígenos de superfície e são encontradas principalmente no ambiente e em pacientes humanos. Um dos fatores responsáveis pela ampla distribuição da enfermidade em potros é a imaturidade do sistema imunológico dos animais acometidos pela infecção, que pode se tornar endêmica em alguns criatórios. Em humanos, as formas de infecção são ainda desconhecidas, mas o contato com eqüinos é relatado em um terço dos casos. Devido à importância clínica da doença, são necessários métodos diagnósticos que promovam sua identificação precoce, facilitando e aumentando as chances de sucesso com o tratamento. Os métodos mais utilizados atualmente são o cultivo microbiológico, testes sorológicos para detecção de anticorpos séricos nos animais e técnicas de PCR que detectam a região 16S do rDNA e o fragmento do gene vapA do microrganismo.

ABSTRACT Rhodococcus equi is an important cause of bronchopneumonia in 1to 6-month-old foals, being responsible for 3% of horse death in many countries of the world. It is an intracellular microorganism able to survive and to multiply inside macrophages. Three virulence levels have been identified in R. equi, by the presence of virulence associated antigens on the bacteria surface. Virulent strains have a plasmid encoding VapA protein and are isolated from diseased foals and some human patients. Intermediate virulent strains show VapB protein and are commonly found in swine and HIV infected patients. Avirulent strains do not show virulence antigens and are found in the environment and humans. The immature immune system is the major cause of the susceptibility of foals to the R. equi pneumonia. In humans, the infection routes are still unknown, but contact with horses is related with one-third of human infections. Due the clinical importance of the disease, diagnostic methods for early identification in animals are necessary, increasing the chances for treatment. The more common diagnostic methods are microbiologic culture, serologic tests and PCR techniques for 16S rDNA and vapA detection.

RESUMO A criação de eqüinos no Brasil é uma atividade de grande importância econômica, e devido à sua intensificação, enfermidades respiratórias como a adenite eqüina também se exacerbam. Os prejuízos são relacionados à redução da performance, aos custos de tratamento e eventuais mortes. A adenite eqüina é uma enfermidade causada pelo Streptococcus equi subesp. equi, uma bactéria beta-hemolítica, pertencente ao grupo C de Lancefield. Esta revisão tem por objetivo relatar os principais aspectos da enfermidade e características fenotípicas e moleculares do agente e de outras espécies relacionadas ao gênero Streptococcus, bem como relatar as técnicas descritas para o diagnóstico da adenite eqüina.

ABSTRACT Horse raising in Brazil is of great economic importance, and due to intensification of this activity, respiratory diseases such as strangles have increased. The damages involve reduced performance, treatment costs and eventual deaths. Strangles is a disease caused by Streptococcus equi subsp. equi, a beta-hemolytic bacteria, of the C Lancefield group. The aim of this review was to relate some aspects of the disease and phenotipical and molecular features of the etiological agent and other Streptococcus of the same group, as well as to describe techniques of strangles diagnosis.

Relata-se o isolamento de Campylobacter jejuni de um feto ovino abortado no terço final da gestação. Em uma semana, observaram-se quatro casos de aborto em ovelhas com quatro meses de gestação. Imediatamente após o terceiro aborto, um dos fetos foi submetido a exame patológico, quando se realizou a colheita do conteúdo do abomaso para análise bacteriológica. À necropsia, somente foram evidenciadas alterações autolíticas. Apenas na microaerofilia encontrou-se crescimento bacteriano puro com características morfo-tintoriais de Campylobacter sp., identificado fenotípica e molecularmente como C. jejuni. Alerta-se para a possibilidade de quadros de abortos em ovinos serem causados por esse patógeno.

Campylobacter jejuni was isolated from aborted ovine fetus at the end of gestation. Three abortion cases within a week and another fourth case one month later were observed. Immediately after the third case, one fetus was submitted to necropsy and samples from abomasal content were collected for bacteriological analysis. At necropsy, only post-mortem and autolytic lesions were observed. Under microaerophilic conditions, a pure bacterial growth was obtained and identified by morphological and tintorial characteristics as Campylobacter sp., being the isolate confirmed as C. jejuni, by phenotypic and molecular assays. This is an alert for the possibility of this pathogen cause abortion in ovine.