El protozoario E. histolytica es el agente etiológico de la amibiasis humana; la identificación de su patogenicidad ha sido de gran ayuda en la búsqueda de antígenos importantes para su inmunodiagnóstico e inmunoprofilaxia. En 1995 se describió el aislamiento y axenización de las dos primeras cepas de E. histolytica venezolanas procedentes de pacientes sintomáticos, denominadas IULA: 1092:1 e IULA: 0593:2. Estas cepas han sido evaluadas a través de estudios de perfiles electroforéticos, demostrándose la presencia del zimodemo de tipo II característico de cepas patógenas. También han mostrado ser de alta virulencia. Además, presentan un complejo patrón de reactividad y la presencia de un antígeno marcador de patogenicidad; el análisis isoenzimático ha mostrado correlación con el análisis genotípico, indicando una organización genotípica propia de una cepa patógena. Con esta cepa se han podido evaluar todos los casos de amibiasis remitidos al Instituto de Inmunología Clínica de la Universidad de Los Andes, y han sido de utilidad en otras localidades al emplear sus antígenos para evaluar poblaciones urbanas e incluso indígenas, por lo que pueden ser usadas como cepas nativas de referencia en los ensayos de diagnóstico y profilaxis. Las limitaciones del examen microscópico, específicamente los falsos diagnósticos de amibiasis, y su incapacidad para discriminar entre infecciones por E. histolytica y E. dispar, han conducido al desarrollo de procedimientos de laboratorio que permiten la detección de componentes de las especies presentes. El éxito de tales procedimientos permitiría una disminución de tratamientos innecesarios, los cuales pueden llevar a resistencia ante las diferentes drogas antiamibianas.

The protozoa E. histolytica is the etiologic agent of human amebiasis, the identification of its pathogenicity has been of great aid in the search of important antigens for immunodiagnostic and inmunoprofilaxis. In 1995 the isolation and axenization of the first two strains of Venezuelan E. histolytica were described from symptomatic patients, which were denominated: IULA 1092:1 and IULA: 0593:2 These strains have been evaluated through studies of electrophoretic profiles, demonstrating the presence of type II zymodemes, characteristic of pathogenic strains. Also, they have shown to be of high virulence, they present a complex pattern of reactivity and the presence of a marker antigen of pathogenicity. The isoenzymatic analysis has shown correlation with the genotypic analysis, showing a genotypic organization typical of a pathogenic strain. With this strain, it has been possible to evaluate all the amebiasis cases sent to the Institute of Clinical Immunology of Universidad de Los Andes, in Merida, Venezuela. These strains have been useful, here, as well as in other sites, when using their antigens to evaluate urban and even indigenous populations. They can be used, like native strains of reference, in diagnostic tests and prophylaxis for this parasitosis. The limitations of the microscopic analysis, specifically, the false amebiasis diagnosis and its inability to discriminate between infections caused by E. histolytica and E. dispar have led to the development of laboratory procedures that allow for the detection of components of the species present. The success of such procedures would result in a diminution of unnecessary treatments, which could be the cause of antiamoebic drug resistance.

Foi desenvolvido um teste de ELISA de Captura usando anticorpos policlonais purificados obtidos em coelhos contra três diferentes cepas axênicas de Entamoeba histolytica (ICB-CSP and ICB-462 do Brasil e HM1 do México) para detecção de coproantígenos em amostras de fezes de indivíduos: a) sintomáticos, b) assintomáticos, c) com outros parasitos intestinais, e d) sadios. Imunoglobulina G (IgG) contra E. histolytica foi isolada de imune soro de coelho, em duas etapas: cromatografia de afinidade em uma coluna contendo antígenos de E. histolytica unidos à Sepharose 4B, seguido por outra cromatografía em Sepharose 4B Proteína A. O teste de ELISA usando anticorpos purificados, foi capaz de detectar até um só trofozoíto por lâmina ou 70 ng de proteína de ameba por orifício, apresentando uma sensibilidade de 93% e uma especificidade de 94%. A combinação do exame microscópico com o método de ELISA de Captura teve uma concordância e discordância de 93,25% e 6,75%, respectivamente. Pode-se concluir que o teste de ELISA de Captura utilizando anticorpo purificado é altamente específico para a detecção de coproantígenos de E. histolytica em fezes de pacientes infectados, rápido, fácil e mais sensível que o exame microscópico.

A sensitive and specific Capture Sandwich ELISA (CSE) was developed using polyclonal purified rabbit antibodies against three different axenic strains of Entamoeba histolytica: CSP from Brazil and HM1 - IMSS from Mexico, for the detection of coproantigens in fecal samples. Immunoglobulin G (IgG) againstis E. histolytica was isolated from rabbits immunized with throphozoites whole extract in two stages: affinity chromatography in a column containing E. histolytica antigens bound to Sepharose 4B was followed by another chromatography in Sepharose antibodies 4B-Protein A. A Capture Sandwich ELISA using purified antibodies was able to detect 70ng of amebae protein, showing a sensitivity of 93% and specificity of 94%. The combination of microscopic examination and CSE gave a concordance and discordance of 93.25% and 6.75%, respectively. It was concluded that CSE is highly specific for the detection of coproantigens of E. histolytica in feces of infected patients, is quicker to perform, easier and more sensitive than microscopic examination.