Abstract Zoonotic spillover is a phenomenon characterized by the transfer of pathogens between different animal species. Most human emerging infectious diseases originate from non-human animals, and human-related environmental disturbances are the driving forces of the emergence of new human pathogens. Synthesizing the sequence of basic events involved in the emergence of new human pathogens is important for guiding the understanding, identification, and description of key aspects of human activities that can be changed to prevent new outbreaks, epidemics, and pandemics. This review synthesizes the connections between environmental disturbances and increased risk of spillover events based on the One Health perspective. Anthropogenic disturbances in the environment (e.g., deforestation, habitat fragmentation, biodiversity loss, wildlife exploitation) lead to changes in ecological niches, reduction of the dilution effect, increased contact between humans and other animals, changes in the incidence and load of pathogens in animal populations, and alterations in the abiotic factors of landscapes. These phenomena can increase the risk of spillover events and, potentially, facilitate new infectious disease outbreaks. Using Brazil as a study model, this review brings a discussion concerning anthropogenic activities in the Amazon region and their potential impacts on spillover risk and spread of emerging diseases in this region.

Abstract Amazonian biodiversity is increasingly threatened due to the weakening of policies for combating deforestation, especially in Brazil. Loss of animal and plant species, many not yet known to science, is just one among many negative consequences of Amazon deforestation. Deforestation affects indigenous communities, riverside as well as urban populations, and even planetary health. Amazonia has a prominent role in regulating the Earth’s climate, with forest loss contributing to rising regional and global temperatures and intensification of extreme weather events. These climatic conditions are important drivers of emerging infectious diseases, and activities associated with deforestation contribute to the spread of disease vectors. This review presents the main impacts of Amazon deforestation on infectious-disease dynamics and public health from a One Health perspective. Because Brazil holds the largest area of Amazon rainforest, emphasis is given to the Brazilian scenario. Finally, potential solutions to mitigate deforestation and emerging infectious diseases are presented from the perspectives of researchers in different fields.

RESUMO Acanthamoeba é a mais comum ameba de vida livre no ambiente, pode atuar como um importante veículo para vários micro-organismos que vivem no mesmo ambiente, tais como vírus, e pode ser patogênica para humanos. Este estudo objetivou detectar e quantificar adenovírus humano (HAdV) em Acanthamoebas isoladas de amostras de águas coletadas de piscinas na cidade de Porto Alegre, no sul do Brasil. Amebas de vida livre do gênero Acanthamoeba foram isolados de amostras de água, e os isolados (n = 16) foram usados para investigar a ocorrência de HAdVs. Detecção de HAdV foi realizada usando reação em cadeia de polimerase quantitativa (qPCR) em tempo real. HAdVs foram detectados em 62.5% (10/16) dos isolados de Acanthamoeba, variando de 3.24 x 103 a 5.14 x 105 cópias de DNA por mililitro de isolado. As cargas virais de HAdV encontradas nesse estudo não são negligenciáveis, especialmente porque infecções por HAdV são associadas com diferentes doenças humanas, incluindo gastrenterites, doenças respiratórias e oculares. Este estudo reforça o conceito que Acanthamoeba poderia atuar com um reservatório e promover a transmissão de HAdV através da água.

ABSTRACT Acanthamoeba is the most common free-living environmental amoeba, it may serve as an important vehicle for various microorganisms living in the same environment, such as viruses, being pathogenic to humans. This study aimed to detect and quantify human adenoviruses (HAdV) in Acanthamoebas isolated from water samples collected from swimming pools in the city of Porto Alegre, Southern Brazil. Free-living amoebae of the genus Acanthamoeba were isolated from water samples, and isolates (n=16) were used to investigate the occurrence of HAdVs. HAdV detection was performed by quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR). HAdVs were detected in 62.5% (10/16) of Acanthamoeba isolates, ranging from 3.24x103 to 5.14x105 DNA copies per milliliter of isolate. HAdV viral loads found in this study are not negligible, especially because HAdV infections are associated with several human diseases, including gastroenteritis, respiratory distress, and ocular diseases. These findings reinforce the concept that Acanthamoeba may act as a reservoir and promote HAdV transmission through water.

Adenoviruses are among the most promising viral markers of fecal contamination. They are frequently found in the water, sediment and soil of regions impacted by human activity. Studies of the bioaccumulation of enteric viruses in shrimp are scarce. The cities located in the northern coast of the lake systems in Southern Brazil have high urbanization and intensive farming rates, and poor sewage collection and treatment. One hundred (n = 100) Farfantepenaeus paulensis pink-shrimp specimens and 48 water samples were collected from coastal lagoons between June 2012 and May 2013. Water samples were concentrated and the shrimp, mashed. After DNA extraction, samples were analyzed by real time polymerase chain reaction (qPCR) in order to detect and quantify viral genomes. Thirty-five percent of shrimp samples were positive for contamination, predominantly by avian adenoviruses. A total of 91.7% of water samples contained adenoviruses DNA, with the human form being the most frequent. Our results provided evidence of significant bioaccumulation of adenoviruses in shrimp, showing the extent of the impact of fecal pollution on aquatic ecosystems.

A técnica da compostagem é um recurso empregado com o objetivo de reciclar resíduos orgânicos domésticos e sanitizar o lodo produzido nas estações de tratamento de efluentes de esgoto (ETE) podendo-se obter um composto com propriedades de fertilizante agrícola e/ou corretor de solos degradados. A alta temperatura atingida pelo sistema deve ser responsável pela redução de micro-organismos patogênicos presentes no início do processo assegurando, desta forma, a qualidade microbiológica do composto sem oferecer riscos de contaminação, conforme preconiza a Resolução 354/2006 do CONAMA. Objetivou-se, com o trabalho, avaliar a influência da temperatura sobre a redução de Escherichia coli, Salmonella sp., ovos de helmintos e vírus entéricos durante o processo de compostagem, além da contagem de bactérias heterotróficas. Foram realizados testes colimétricos, semeaduras em meios de cultivo, testes de visualização de ovos de helmintos e detecção molecular de vírus entéricos. Os resultados indicaram oscilação nas contagens de E. coli e de bactérias heterotróficas, mesmo após a fase termofílica. Por outro lado, não foi detectada a presença de Salmonella sp., vírus entéricos nem de ovos viáveis de helmintos, ao final do processo.

The composting technique is a promising alternative for the treatment of solid organic residues, along with the sludge produced in sewage treatment plants. The final compost might show fertilizer properties, which can be used to recover poor soils. The high temperatures that the composting process can achieve are responsible for the reduction of the pathogenic microbial population, helminth eggs and virus present in the beginning of the process. This behavior assures the microbial quality of the compost according to the 375/2006 Resolution of the CONAMA. The aim of this study was to evaluate the influence of temperature on Escherichia coli, Salmonella sp., helminth egg and enteric virus presence in the final product from a composting process. For this matter colimetric assays were performed together with the seedling of the samples in different culture media, the assay for helminth eggs visualization under the microscope and the identification of enteric virus. The results showed an oscillation on E. coli and heterotrophic bacteria counts, even after the thermophilic phase. On the other hand, Salmonella sp., helminth eggs and enteric virus were not found in the final compost.

O Metapneumovírus aviário (aMPV) é um patógeno respiratório associado à síndrome da cabeça inchada (SHS) em galinhas. Apesar de vacinas vivas contra o aMPV serem utilizadas no Brasil, os subtipos A e B (aMPV/A e aMPV/B) são ainda encontrados no país, com predominância do subtipo B. Este estudo foi conduzido com o intuito de estudar dois isolados brasileiros de aMPV (subtipos A e B) isolados de frango. Para isto, um desafio experimental em frangos foi conduzido com o intuito de explorar a capacidade de replicação dos subtipos A e B Brasileiros. Posteriormente, a protecção virológica conferida por uma vacina do subtipo B em pintos foi realizada com os mesmos isolados. Após o desafio experimental demonstrou-se, por isolamento viral e PCR em tempo real, que o isolado do subtipo B replicou por maior período de tempo e em quantidades maiores, em comparação com o subtipo A. Para o estudo de proteção, 18 pintos de um dia de idade foram vacinados e desafiados aos 21 dias. Usando isolamento viral e PCR em tempo real, em nenhuma ave vacinada e desafiada com aMPV/A foi detectado o vírus, ao passo que uma ave vacinada e desafiada com o aMPV/B foi positiva. Os resultados mostraram que a vacina do subtipo B forneceu protecção heteróloga completa, embora a protecção homóloga não tenha sido conferida em uma ave. Apesar de o aMPV/B ter sido detectado em apenas um frango após vacinação homóloga, a replicação viral em aves vacinadas pode resultar em emergência de mutantes de escape.

Avian metapneumovirus (aMPV) is a respiratory pathogen associated with the swollen head syndrome (SHS) in chickens. In Brazil, live aMPV vaccines are currently used, but subtypes A and, mainly subtype B (aMPV/A and aMPV/B) are still circulating. This study was conducted to characterize two Brazilian aMPV isolates (A and B subtypes) of chicken origin. A challenge trial to explore the replication ability of the Brazilian subtypes A and B in chickens was performed. Subsequently, virological protection provided from an aMPV/B vaccine against the same isolates was analyzed. Upon challenge experiment, it was shown by virus isolation and real time PCR that aMPV/B could be detected longer and in higher amounts than aMPV/A. For the protection study, 18 one-day-old chicks were vaccinated and challenged at 21 days of age. Using virus isolation and real time PCR, no aMPV/A was detected in the vaccinated chickens, whereas one vaccinated chicken challenged with the aMPV/B isolate was positive. The results showed that aMPV/B vaccine provided a complete heterologous virological protection, although homologous protection was not complete in one chicken. Although only one aMPV/B positive chicken was detected after homologous vaccination, replication in vaccinated animals might allow the emergence of escape mutants.

O Herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) é reconhecido como um importante agente de perdas econômicas em bovinos. Vacinação tem sido amplamente empregada para minimizar as perdas conseqüentes a infecções com o BoHV-1. Reportamos previamente o desenvolvimento de uma vacina diferencial para BoHV-1, baseada em um recombinante do qual a glicoproteína gE (gE) foi deletada (265gE-). No presente trabalho foi realizada a avaliação da eficácia de tal recombinante como vacina inativada. Cinco bovinos soronegativos para BoHV-1 foram vacinadas por via intramuscular no dia 0 e revacinadas 30 dias após com uma vacina inativada com adjuvante oleoso, contendo massa antigênica equivalente a 10(7.0) doses infectantes para 50% dos cultivos celulares (DICC50) de 265gE-. Três animais foram mantidos como controles não vacinados. No dia 60 pós-vacinação, os animais vacinados e controles foram desafiados com a amostra virulenta parental. Nenhum sinal clínico ou efeito adverso foi observado após ou durante a vacinação. Após o desafio, 2 dos 5 animais vacinados apresentaram sinais leves de infecção, enquanto que todos os animais não vacinados apresentaram intensa rinotraqueíte e disseminaram vírus por mais tempo e em títulos mais elevados do que os animais vacinados. Respostas sorológicas foram detectadas em todos os animais vacinados depois da segunda dose de vacina, mas não nos animais do grupo controle. Após a administração de corticosteróide visando a reativação de infecções latentes, não foram observados sinais clínicos em nenhum dos 5 animais vacinados, enquanto os animais não vacinados apresentaram sinais leves de doença respiratória. Em vista de sua imunogenicidade e efeito protetor frente ao desafio com BoHV-1 virulento, a preparação oleosa com o recombinante 265gE- inativado foi demonstrada ser adequada para uso como vacina.

Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) is recognized as a major cause of economic losses in cattle. Vaccination has been widely applied to minimize losses induced by BoHV-1 infections. We have previously reported the development of a differential BoHV-1 vaccine, based on a recombinant glycoprotein E (gE)-deleted virus (265gE-). In present paper the efficacy of such recombinant was evaluated as an inactivated vaccine. Five BoHV-1 seronegative calves were vaccinated intramuscularly on day 0 and boostered 30 days later with an inactivated, oil adjuvanted vaccine containing an antigenic mass equivalent to 10(7.0) fifty per cent cell culture infectious doses (CCID50) of 265gE-. Three calves were kept as non vaccinated controls. On day 60 post vaccination both vaccinated and controls were challenged with the virulent parental strain. No clinical signs or adverse effects were seen after or during vaccination. After challenge, 2/5 vaccinated calves showed mild clinical signs of infection, whereas all non vaccinated controls displayed intense rhinotracheitis and shed virus for longer and to higher titres than vaccinated calves. Serological responses were detected in all vaccinated animals after the second dose of vaccine, but not on control calves. Following corticosteroid administration in attempting to induce reactivation of the latent infection, no clinical signs were observed in vaccinated calves, whereas non vaccinated controls showed clinical signs of respiratory disease. In view of its immunogenicity and protective effect upon challenge with a virulent BoHV-1, the oil adjuvanted preparation with the inactivated 265gE- recombinant was shown to be suitable for use as a vaccine.

A doença de Aujeszky ou pseudoraiva (DA), causada pelo vírus da pseudoraiva (PRV) é a maior preocupação na produção de suínos. No estado do Rio Grande do Sul, Brasil, a DA foi somente detectada em 1954, em bovino. Em 2003, ocorreram dois surtos de encefalite em granjas na região norte do estado, fronteira com o estado de Santa Catarina. O vírus da doença de Aujeszky (VDA) foi isolado a partir de animais coletados em oito granjas distintas da região e submetido a análises antigênicas e moleculares. As amostras de VDA isoladas foram comparadas com as amostras padrão NIA-3 e NP. A caracterização antigênica dos mesmos foi realizada com testes de imunoperoxidase frente a um painel de anticorpos mono-clonais (Mabs) preparado contra epitopos de glicoproteinas virais (gB, gC, gD e gE). A caracterização genômica foi realizada através da análise restrição enzimática (REA) sobre o genoma total das amostras, com a enzima de restrição (REA) Bam HI. O perfil antigênico das oito amostras isoladas no Rio Grande do Sul, bem como os apresentados pelas amostras padrão NIA-3 e NP, foram similares. A REA revelou que todos as oito amostras do Rio Grande do Sul apresentaram um arranjo genômico do tipo II, genótipo frequentemente encontrado em surtos prévios de DA em outros estados do Brasil. Os resultados aqui obtidos indicam que as oito amostras isoladas no Rio Grande do Sul são similares.

Pseudorabies or Aujeszky's disease (AD), caused by pseudorabies virus (PRV) is a major concern in swine production. In the state of Rio Grande do Sul, Brazil, AD was only detected in 1954, in cattle. In 2003 two outbreaks of encephalitis occurred on the northern region of the state, close to the border with the state of Santa Catarina. Pseudorabies virus (PRV) was isolated from distinct farms within the region and subjected to antigenic and genomic analyses. These isolates were compared with prototype strains NIA-3 and NP. Antigenic characterization with a panel of monoclonal antibodies (Mabs) directed to viral glycoproteins (gB, gC, gD and gE,) was performed by an imunoperoxidase monolayer assay (IPMA) on infected cell monolayers. Genomic characterization was carried out by restriction enzyme analysis (REA) of the whole DNA viral genome with Bam HI. The antigenic profile of the eight isolates from Rio Grande do Sul as well as strains NIA-3 and NP were similar. REA analysis revealed that all isolates from Rio Grande do Sul displayed a genomic type II arrangement, a genotype often found in other outbreaks of AD previously reported in other Brazilian states. The results obtained suggest that the eight isolates examined here were similar.

Infecções pelo herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) são importantes causas de doença respiratória, reprodutiva e abortos em bovinos. A vacinação é freqüentemente empregada para minimizar as perdas produzidas pela infecção. Todavia, a imunização de vacas durante a prenhez com algumas vacinas contendo vírus vivo modificado (MLV) pode ocasionalmente causar abortos. Em trabalho prévio, nosso grupo desenvolveu uma vacina recombinante de BoHV-1 construída a partir de um isolado brasileiro de BoHV-1 (Franco et al., 2002a) do qual o gene que codifica para a glicoproteína E (gE) foi artificialmente deletado. Tal recombinante (gE-) vem sendo avaliado como vacina diferencial, isto é, capaz de permitir a diferenciação entre animais vacinados e infectados. No presente estudo, o potencial de disseminação do vírus recombinante foi avaliado em um rebanho de gado de corte, em condições de campo. Para tanto, a segurança da vacina gE- quando aplicada durante a prenhez foi avaliada pela inoculação intramuscular de 10(7,4) doses infectantes para 50% dos cultivos celulares (DICC50) do vírus em 22 fêmeas prenhes (14 previamente soronegativas e 8 previamente soropositivas para BoHV-1) em diferentes fases da gestação. Outras 15 vacas prenhes foram mantidas como controles não-vacinados. Não ocorreram abortos, natimortos ou anormalidades fetais em nenhum dos grupos. Soroconversão foi observada nas fêmeas vacinadas previamente soronegativas. Em um segundo experimento, 4 novilhas foram inoculadas pela via intranasal com 10(7,6) DICC50 do vírus recombinante, sendo mantidos em contato com 16 novilhas em uma área de campo, a uma densidade de 1 animal por hectare. Os animais foram monitorados quanto à presença de sinais clínicos; amostras de soro foram coletadas nos dias 0, 30, 60 e 180 após a vacinação. Soroconversão foi observada apenas nos animais vacinados e não nos contatos. Estes resultados indicam que, nas condições do presente estudo, a vacina gE- não tem efeitos deletérios para fêmeas gestantes nem para seus fetos e não se dissemina horizontalmente no rebanho.

Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) is recognized as a major cause of respiratory, reproductive disease and abortion in cattle. Vaccination is widely applied to minimize losses induced by BoHV-1 infections; however, vaccination of dams during pregnancy with modified live virus (MLV) vaccines has been occasionally associated to abortions. We have previously reported the development of a BoHV-1 recombinant virus, constructed with basis on a Brazilian BoHV-1 (Franco et al. 2002a) from which the gene coding for glycoprotein E (gE) was deleted (gE-) by genetic manipulation. Such recombinant has been previously evaluated in its potential as a differential vaccine (gE- vaccine) that allows differentiation between vaccinated and infected animals. Here, in the first part of the present study, the safety of the gE- vaccine during pregnancy was evaluated by the intramuscular inoculation of 10(7.4) tissue culture 50 % infective doses (TCID50) of the virus into 22 pregnant dams (14 BoHV-1 seronegative; 8 seropositive), at different stages of gestation. Other 15 pregnant dams were kept as non-vaccinated controls. No abortions, stillbirths or fetal abnormalities were seen after vaccination. Seroconversion was observed in both groups of previously seronegative vaccinated animals. In the second part of the study, the potential of the gE- vaccine virus to spread among beef cattle under field conditions was examined. Four heifers were inoculated intranasally with a larger amount (10(7,6) TCID50) of the gE- vaccine (to increase chances of transmission) and mixed with other sixteen animals at the same age and body condition, in the same grazing area, at a population density equal to the average cattle farming density within the region (one cattle head per 10,000 m²), for 180 days. All animals were monitored daily for clinical signs. Serum samples were collected on days 0, 30, 60 and 180 post-vaccination. Seroconversion was observed only in vaccinated heifers. These results indicate that, under the conditions of the present study, the gE- vaccine virus did not cause any noticeable harmful effect on pregnant dams and on its offspring and did not spread horizontally among cattle.

O presente estudo teve como objetivo a caracterização das propriedades de crescimento in vitro de uma amostra brasileira de herpesvírus bovino tipo 1.2a que apresenta uma deleção no gene que codifica a glicoproteína E (BHV-1.2a gE-). Os tamanhos de placa, cinética de penetração e cinética de multiplicação do vírus BHV-1.2a gE- foram estudados e comparados com o vírus parental, bem como com um vírus BHV-1.1 gE- recombinante, o qual é derivado de uma amostra européia de BHV-1.1. Em termos de cinética de penetração, não foram observadas diferenças significativas quando comparados os vírus gE- com os parentais. A determinação da cinética de multiplicação não demonstrou diferenças significativas entre os quatro vírus estudados. Foi entretanto observado que 11 horas pós infecção os dois vírus gE- foram excretados das células em títulos significativamente maiores do que os vírus parentais. Não foram observadas diferenças significativas quando comparados os diâmetros de placas formadas pelos dois vírus parentais. Da mesma forma, os diâmetros de placas dos vírus gE- foram semelhantes nos três tipos celulares estudados. Entretanto, a comparação dos diâmetros de placas entre os vírus gE- e os parentais mostrou uma redução significativa das placas dos vírus gE- em todos os tipos celulares. Esta característica indica que a falta da gE teve o mesmo efeito em ambos os subtipos de BHV-1, representado por uma disseminação viral célula-célula reduzida.

This study aimed the in vitro growth characterization of a previously constructed Brazilian bovine herpesvirus 1.2a with a deletion in the glycoprotein E gene (BHV-1.2a gE-). The plaque sizes, penetration and growth kinetics of the Brazilian BHV-1.2a gE- were studied and compared with the parental virus, as well as with a BHV-1.1 gE- recombinant derived from an European BHV-1.1 strain. No statistical differences were observed between the gE- recombinants and the respective parental viruses penetration assays were performed. When single step growth curves were studied, no statistical differences were observed between gE- and parental viruses. However, it was observed that both gE- viruses were excreted from cells in significantly higher titres at 11 hours post infection in comparison with parental viruses. No statistical differences were observed when plaque sizes of parental viruses or gE- viruses we analyzed separately in each cell type. However, both gE- recombinants displayed a significantly reduced plaque areas on three different cell cultures, in comparison with parental viruses, indicating that the lack of gE had the same effect on both BHV-1 subtypes, manifested by a restricted cell-to-cell spread in infected cells.

O encéfalo de um bezerro macho, de um ano de idade, que morreu com sinais de doença neurológica, foi submetido ao laboratório para diagnóstico de raiva. O exame histopatológico revelou mielite moderada, meningoencefalite leve com infiltração perivascular e corpúsculos de Negri nas células de Purkinje do cerebelo. A infecção pelo vírus rábico foi ainda confirmada por imunofluorescência direta e por inoculação em camundongos. Além disso, um herpesvírus foi isolado dos tecidos do encéfalo. O vírus isolado foi antigênica e geneticamente caracterizado como Herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5). Não foi possível determinar se o BHV-5 teve algum papel ativo no desfecho da enfermidade, uma vez que o vírus poderia estar presente em forma latente nos tecidos neurais. Este é o primeiro relato de uma infecção mista pelo vírus da raiva e BHV-5 em bovinos.

The brain of an one year old male calf which died with signs of neurological disease was submitted to the laboratory for rabies diagnosis. Microscopical findings included moderate mielitis, mild meningoencephalitis with perivascular cell cuffing and Negri inclusion bodies in Purkinje cells of the cerebellum. Rabies virus infection was further confirmed by the direct fluorescent antibody test as well as by mouse inoculation. In addition, a herpesvirus was isolated from brain tissues. The isolate was antigenic and genetically characterized as bovine herpesvirus type 5 (BHV-5). It was not possible to determine whether BHV-5 played an active role in the outcome of the infection, since, the virus might have been present in a latent form in neural tissues. This is the first report of a mixed rabies/ BHV-5 infection in calves.

Com o objetivo de avaliar a capacidade dos herpesvírus bovinos tipos 1 e 5 (BHV-1 e BHV-5) de invadir e replicar no sistema nervoso central (SNC) (neuroinvasividade), bem como sua capacidade de induzir doença neurológica (neurovirulência), coelhos com 30 a 35 dias de idade foram inoculados com uma amostra do Herpesvírus da Encefalite Bovina (BHV-5; amostra EVI 88/95) ou com amostras de BHV-1 (Los Angeles ou Cooper), pelas vias intratecal (IT) e intranasal (IN). A inoculação da amostra de BHV-5, tanto pela via IT como IN, induziu sinais clínicos neurológicos em 100% (12/12) dos coelhos inoculados. Os exames histopatológicos revelaram um quadro de meningoencefalite não-purulenta multifocal, caracterizada por gliose multifocal e infiltrados perivasculares. O vírus foi isolado de várias áreas do SNC desses animais. As amostras de BHV-1, quando inoculadas pela via IT, não foram neurovirulentas. A amostra Los Angeles de BHV-1, quando administrada pela via IN, induziu sinais respiratórios severos, além de sinais neurológicos em 57% (4/7) dos animais inoculados. Entretanto, o exame histopatológico destes quatro animais revelou vasculite e trombose no pulmão e cérebro, este último apresentando focos de necrose neuronal, porém sem lesões indicativas de encefalite. Isso sugere que os sinais neurológicos foram, provavelmente, conseqüentes a prejuízos no fluxo sangüíneo encefálico, e não a danos neuronais provocados pela inoculação desse vírus. A amostra Cooper de BHV-1, quando inoculada pela via IN, induziu apenas sinais leves de infecção respiratória. Estes resultados indicam que apenas a amostra de BHV-5 foi capaz de invadir e replicar no encéfalo dos coelhos quando inoculada tanto por via IN como IT, apresentando neuroinvasividade e neurovirulência. É possível que estas observações tenham relação com o fato de amostras de BHV-5 freqüentemente causarem encefalites, em contraposição a infecções pelo BHV-1, onde encefalites são raramente observadas.

In order to determine the capacity of bovine herpesvirus type 1 and 5 (BHV-1 and BHV-5) to invade, multiply and spread along the central nervous system (CNS) (neuroinvasiveness), as well as their potential to induce neurological illness (neurovirulence), 30 to 35 days old rabbits were inoculated with the BHV-5 strain EVI 88 / 95 and Los Angeles and Cooper BHV-1 strains, by the intrathecal (IT) and intranasal (IN) routes. The BHV-5 strain induced severe neurological clinical signs in 100% (12/12) of the rabbits inoculated by both routes. Histopathological examination revealed multifocal non-suppurative meningoencephalitis, characterized by multifocal gliosis and perivascular cuffing. Virus was recovered from many parts of the brain. Both BHV-1 strains, when inoculated via IT route, were not neurovirulent. The strain Los Angeles, after IN inoculation, induced signs of severe respiratory disease (7/7), as well as signs of neurological impairment, indistinguishable from those induced by BHV-5, in 57% (4/7) of the infected rabbits. However, the rabbits with nervous signs revealed at histopathology vasculitis and thrombosis in lungs and brain, the latter with foci of neuronal necrosis, but no lesions indicative of encephalitis, suggesting that neural damage was probably consequent to tissue anoxia. The BHV-1 strain Cooper, after IN inoculation, induced only mild signs of respiratory disease. These findings indicate that the BHV-5 strain was both neuroinvasive and neurovirulent, since it was capable of invading, spreading and multiplying in the rabbits' brains by both routes of inoculation, yet causing neurological disease, apparently consequent to virus induced neural damage. The BHV-1 Los Angeles strain was not neuroinvasive, whereas its neurovirulence was probably consequent to tissue anoxia, which histologically seemed not to be related to direct viral pathogenic effect. The BHV-1 strain Cooper was neither neurovirulent nor neuroinvasive for rabbits. It is possible that these observations bear relationship with the frequent association of BHV-5 with encephalitis in cattle, as opposed to BHV-1 encephalitis, which is a rare event in nature.

Um ensaio imunoenzimático do tipo ELISA de bloqueio com anticorpo monoclonal (ELISA-M) foi desenvolvido e padronizado para a detecção de anticorpos contra o vírus da Rinotraqueíte Infecciosa Bovina (Herpesvírus Bovino tipo 1; BHV-1). Foram utilizadas nesta avaliação 266 amostras de soros bovinos, sendo 148 negativos e 118 positivos em testes de soroneutralização (SN). Em comparação com este último, o ELISA-M demonstrou uma sensibilidade de 92,37%, especificidade de 92,56%, valor preditivo positivo de 90,83%, valor preditivo negativo de 93,83% e precisão de 92,48%. O índice de concordância (k) entre os testes foi de 0,85. O ELISA-M apresentou como vantagens a rapidez e a praticidade de execução. Com base nestes resultados, o ELISA-M foi considerado uma alternativa apropriada para o diagnóstico sorológico de infecções pelo BHV-1. Entretanto, o teste não foi capaz de diferenciar anticorpos induzidos por BHV-1 ou BHV-5.

A monoclonal antibody-based blocking enzyme linked immunosorbent assay (ELISA-M) was developed and standardized for the detection of antibodies to infectious bovine rhinotracheitis virus (Bovine Herpesvirus type 1; BHV-1). A total of 266 samples of bovine sera (148 negative and 118 positive) were tested and compared with the results of a standard serum neutralization (SN) test. The ELISA-M was adjusted to 92.37% sensitivity, 92.56% especificity, 93.83% negative predictive value, 90.83% positive predictive value and to an accuracy of 92.48%, with an agreement index (k) equal to 0.85. The main advantages presented by the ELISA-M were its practicality and rapidity in performance. This test was shown to be a suitable alternative to SN tests in the detection of BHV-1 antibodies in cattle. However, the ELISA was unable to discriminate between BHV-1 and bovine herpesvirus type 5 (BHV-5) antibodies.