RESUMO O gênero Aeromonas compreende espécies consideradas importantes patógenos para os seres humanos, sendo que a principal ação patogênica delas corresponde às gastroenterites. Tendo em vista sua importância como patógeno de origem alimentar, a ocorrência de Aeromonas spp. foi estudada em carcaças bovinas e ambiente do abatedouro em uma indústria do Estado de São Paulo, com o intuito de definir a possível origem comum dessas bactérias no ambiente do frigorífico através de métodos moleculares. Foram colhidas 15 amostras de 19 pontos, totalizando 285 unidades. As amostras foram colhidas dos seguintes pontos: pele seca e úmida, superfície muscular das carcaças durante a toalete e das carcaças resfriadas, mãos dos funcionários antes e durante o trabalho na sala de abate e câmara de resfriamento, facas, parede e piso da câmara de resfriamento, água (clorada, não clorada e residuária da lavagem das carcaças), carne, conteúdo intestinal e ambiente da sala de abate. Foi realizada a caracterização do gênero e os isolados foram analisados pelas técnicas de REP (Repetitive Extragenic Palindromic) e ERIC (Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus)-PCR. Foi encontrada similaridade ? 99% somente entre um isolado de superfície muscular de uma carcaça resfriada com um isolado de mão. As técnicas moleculares não possibilitaram a identificação precisa da origem das bactérias na indústria, mas possibilitaram inferir que os manipuladores podem atuar como disseminadores delas no ambiente de abate.

ABSTRACT The genus Aeromonas comprises important human pathogens and the gastroenteritises are the most common infections attributed to these microorganisms. Considering their importance as foodborne pathogens, the occurrence of Aeromonas spp. was studied on bovine carcasses and in the environment of an abattoir in State of São Paulo, Brazil, with the aim of defining the possible origin of these bacteria in the abattoir environment using molecular methods. Fifteen samples from 19 points were collected, totaling 285 units. The collecting points were: dry and wet skin, muscle surface of the carcasses during trimming process and refrigerated carcasses, operatives’ hands from the slaughter room before and during the work and from refrigerated rooms, knives, wall and floor from refrigerated room, water (chlorinated, nonchlorinated and from carcass washing), meat, intestinal content and slaughter room environment. Characterization of the genus was performed and the isolates were analyzed with REP (Repetitive Extragenic Palindromic) and ERIC-PCR (Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus PCR) techniques. A similarity of ? 99% was found only between one isolate from the muscle surface of one refrigerated carcass with one isolate from a hand. The molecular techniques did not enable the precise identification of the bacteria’s origin within the industry, but they permitted the inference that the operatives can spread Aeromonas in the slaughter environment.

RESUMO O gênero Aeromonas compreende espécies consideradas importantes patógenos para os seres humanos, sendo as gastroenterites as infecções mais comumente atribuídas a estas bactérias. Tendo em vista sua importância como patógeno de origem alimentar, a ocorrência deAeromonas spp. foi estudada em carcaças bovinas e ambiente do abatedouro em uma indústria do Estado de São Paulo. Foram colhidas 285 amostras de 19 locais. Foi realizada a contagem direta por semeadura em meio seletivo, caracterização bioquímica das espécies após enriquecimento seletivo e teste de sensibilidade a antimicrobianos. A contagem direta permitiu a quantificação dessas bactérias em apenas 12 amostras, variando de 0,5 a 9,2 x 100 UFC/cm2, sendo cinco delas de ambiente, com populações que variaram de 1,0 x 100 a 3,0 x 100 UFC/placa. Entretanto, após o enriquecimento seletivo, Aeromonas spp. foram isoladas de 38 amostras que, somadas às amostras de ambiente não submetidas ao enriquecimento, forneceram 62 isolados para análise. A caracterização bioquímica das espécies permitiu verificar a ocorrência de 59 isolados de A. caviae, um de A. sobria, um de A. trota e um de A. schubertii. O teste com antimicrobianos revelou resistência de todos os isolados pela ampicilina e cefalotina, enquanto, para os demais antimicrobianos, esta foi variável. A resistência da totalidade dos isolados a determinados antimicrobianos indica que estes devem ser utilizados criteriosamente com a finalidade de evitar o surgimento precoce de cepas deAeromonas spp. multirresistentes. Ainda, a maior prevalência deA. caviae deve ser considerada relevante, pois trata-se de uma das espécies causadoras de gastroenterite em humanos.

ABSTRACT The genus Aeromonas comprises important human pathogens, gastroenteritis being the most common type of infection attributed to these bacteria. Considering their importance as foodborne pathogens, the occurrence of Aeromonas spp. was studied on bovine carcasses and the environment of a slaughterhouse in São Paulo State, Brazil. A total of 285 samples were collected from 19 points. Direct counting was carried out by seeding on selective medium, with biochemical characterization of the species after selective enrichment and antimicrobial sensitivity testing. The direct count permitted bacteria quantification only in 12 samples ranging from 0.5 to 9.2 x 100 CFU/ cm2, of which 5 were from environment, ranging from 1.0 x 100 to 3.0 x 100 CFU/plate. However, after selective enrichment,Aeromonas spp. was isolated from 38 samples, which when added to the environmental samples not subjected to the enrichment provided 62 isolates for analysis. Biochemical characterization allowed for the verification of the occurrence of 59 isolates of A. caviae, 1 ofA. sobria, 1 ofA. trota and 1 ofA. schubertii. Antimicrobial testing revealed that all isolates were resistant to ampicillin and cephalotin, while the results for the other antimicrobials were variable. Resistance of all isolates to some antimicrobials indicates that these must be used carefully to avoid early development of multiresistantAeromonas spp. Also, the greatest prevalence of A. caviae must be considered relevant because it is one of the causative species of human gastroenteritis.

A total of 72 strains of Staphylococcus aureus were examined for the production of staphylococcal enterotoxins (SE) A, B, C, D and toxic shock syndrome toxin (TSST-1). The strains were isolated from milk samples from cows with mastitis in dairy herds of São Paulo State, Brazil. Off 72 isolates, 38 (52.8%) produced SEA, 38 (52.8%) SEB, 32 (44.4%) SED, 28 (38.9%) SEC and 27 (37.5%) TSST-1. From the 72 strains, 66 (91.7%) produced, at least, one or more toxin, including TSST-1.

RESUMO Este trabalho teve por objetivo analisar o uso da prensa francesa para se adquirir material genético de estafilococos e detectar possíveis genes de resistência cromossomais e plasmidiais aos antimicrobianos oxacilina, gentamicina, canamicina e vancomicina. O método da difusão de discos em ágar foi realizado, inicialmente, para 50 linhagens de estafilococos e a susceptibilidade antimicrobiana foi confirmada por meio de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Os resultados obtidos pelo antibiograma constataram alta susceptibilidade para gentamicina e canamicina (4%) e oxacilina (8%). Todas as linhagens foram susceptíveis à vancomicina. O DNA bacteriano foi obtido por lise física a partir da prensa francesa. Os genes mecA e aph3’IIIa foram detectados no cromossomo dos estafilococos e o gene aac(6’) Ie + aph (2") foi observado tanto no cromossomo como no plasmidio destas bactérias. Pelos resultados pode-se concluir que a metodologia utilizada para a extração de DNA genômico, por meio da prensa francesa, foi barata e eficiente, pois possibilitou a detecção por PCR e a localização, por ultracentrifugação, de genes de resistência em estafilococos.

ABSTRACT The main of the present study was analyze the use of a french press device to obtain genetic material from staphylococci and to detect genes involved with chromosomal and plasmid resistance to the following antimicrobial drugs: oxacillin, gentamicin, kanamycin and vancomycin. The agar disc diffusion method was conducted initially for 50 strains and the bacterial susceptibility was confirmed by means of PCR reactions. The results from the antibiogram method revealed high sensibility to gentamicin and kanamycin (4%) and oxacillin (8%). All strains were susceptible to vancomycin. The DNA from the bacteria was obtained by means of physical lyses using a french press device. The genes mecA and aph’3 – IIIa were detected on the staphylococci chromosome and the gene aac(6’)Ie + aph(2’’) was observed either in the chromosome and in the plasmid content of the staphylococci analyzed. Based on the obtained results one can conclude that the methodology used to extract the genomic genetic material using the french press device was efficient and allowed a simple method to detect by PCR and to locate by ultracentrifugation, the staphylococci antibiotic resistance genes.

RESUMO Este trabalho teve por objetivo conhecer a sensibilidade antimicrobiana “in vitro” de 72 cepas de Staphylococcus aureus isoladas em amostras de leite de vacas com mastite clínica e subclínica, em 10 propriedades rurais do Estado de São Paulo. Os testes foram realizados pela da técnica de difusão em discos padronizada por Kirby-Bauer. Os principios ativos que apresentaram maior sensibilidade foram a gentamicina (98,6%) e a eritromicina (98,6%), seguidos pela estreptomicina (94,4%), oxacilina (84,7%), novobiocina (73,4%), vancomicina (72,2%), ampicilina (4,2%) e a penicilina (2,8%). Os resultados obtidos evidenciaram, ainda, que as 72 (100%) cepas estudadas apresentaram resistência a pelo menos 2 antibióticos ou quimioterápicos e que nenhum destes princípios ativos, agindo isoladamente, pode ser ativo contra qualquer das cepas experimentadas.

ABSTRACT The purpose of this study was to determine the in-vitro susceptibility pattern of 72 Staphylococcus aureus strains, isolated from bovine mastitic milk. The calves were reared on 10 dairy farms in the state of São Paulo, Brazil. These strains were tested by the standardized disc diffusion method. The highest susceptibility was to gentamicin (98.6%) and erytromycin (98.6%), followed by streptomycin (94.4%), oxacillin (84.7%), novobiocin (73.4%), vancomycin (72.2%), ampicillin (4.2%) and penicillin (2.8%). Results showed that 72 (100%) strains were resistant to at least 2 antibiotics and chemotherapeutics. None of the active principles, acting alone, was effective against any of the strains tested.

RESUMO Com o objetivo de verificar a capacidade enterotoxigênica “in vivo” de cepas de Aeromonas spp. isoladas em diferentes produtos e locais da planta de processamento de frangos, foram submetidas aos testes de inoculação intragástrica em camundongos lactentes e inoculação em alça ileal ligada de coelhos 75 cepas isoladas de penas, fezes, carcaças não evisceradas, evisceradas e resfriadas e água do pré-resfriamento. Das 75 cepas testadas, 31 (41,3%) produziram enterotoxinas na prova de inoculação em alça ileal ligada de coelhos, sendo 9 (29%) da espécie Aeromonashydrophila, 9 (29%) A. sobria, 6 (19,4%) A. caviae, 4 (12,9%) A. veronii, 1 (3,2%) A. schubertii, 1 (3,2%) A. trota e 1 (3,2%) A. jandaei. Este estudo mostra que cepas de diferentes espécies de aeromonas são capazes de produzir enterotoxinas no teste in vivo, sugerindo riscos à saúde pública. O teste de inoculação intragástrica em camundongos lactentes não demonstrou a presença de cepas produtoras de enterotoxinas.

ABSTRACT With the aim of verifying the capacity of in vivo production of enterotoxins of Aeromonas spp. strains isolated from products and at different places of the processing poultry plant, 75 strains isolated from feather, stool, pre-evisceration, post-evisceration, cooled carcass and “chilling” water samples were assayed by the ligated ileal loop test in rabbits and intragastric inoculation in suckling mice. From 75 strains analyzed, 31 (41.3%) produced enterotoxins in the ligated ileal loop assay in rabbits, the breakdown being 9 (29.0%) A. hydrophila, 9 (29.0%) A. sobria, 6 (19.4%) A. caviae, 4 (12.9%) A. veronii, 1 (3.2%) A. schubertii, 1 (3.2%) A. trota and 1 (3.2%) A. jandaei. This study showed that strains of different species of aeromonas are able to produce enterotoxins in in-vivo tests, suggesting a danger to public health. The test of intragastric inoculation in suckling mice did not show evidence of enterotoxin production.

RESUMO Objetivando verificar os possíveis pontos de contaminação e disseminação de bactérias do gênero Aeromonas, foram analisadas amostras de leite colhidas em diferentes pontos do fluxograma de beneficiamento em uma granja de leite tipo A. De 80 amostras analisadas, Aeromonas spp. foram isoladas em 37 (46,25%) delas. Foram colhidas 20 amostras de cada ponto da linha de produção e revelaram-se positivas no isolamento, 90% (18/20) das amostras de leite cru, 30% (6/ 20) das de leite da saída do pasteurizador, 40% (8/20) das de leite do tanque de abastecimento da máquina de empacotar e 25% (5/20) das amostras do leite pronto para consumo. Dentre as espécies foram identificadas Aeromonas sobria em 40,54% das amostras, Aeromonas hydrophila e Aeromonas caviae em 21,62% delas, Aeromonas veronii em 10,81% e Aeromonas schubertii em 2,7%. Das cepas isoladas, 37 foram submetidas a testes de sensibilidade a antimicrobianos. Destas, 100% foram resistentes à ampicilina, 75,67% à cefalotina, 64,86% à cefoxitina e 48,64% ao aztreonam. As drogas as quais as cepas mostraram-se menos resistentes foram, cloranfenicol, netilmicina, amicacina, gentamicina, tetraciclina e tobramicina. Os resultados obtidos demonstram que bactérias do gênero Aeromonas resistentes a vários antimicrobianos podem estar presentes no leite tipo A, o que faz com que este produto possa determinar risco à saúde da população consumidora, e que deve servir de alerta aos serviços de saúde pública.

ABSTRACT Milk samples obtained from different points of the processing flow at a type “A” milk farm were analysed with the objective to verify possible points of Aeromonas genus bacteria contamination and dissemination. In 80 samples analysed, Aeromonas spp. were isolated in 37 (46.25%) of them. From each point of the processing flow 20 samples were obtained. The results showed that 90% (18/20) of raw milk samples, 30% (6/20) of the pasteurizer-exit samples, 40% (8/20) of the packing-machine-tank samples and 25% (5/20) of ready-to-drink milk samples were positive on isolation. The breakdown by species of the bacteria isolated was: Aeromonas sobria in 40.54% of the samples, Aeromonas hydrophila and Aeromonas caviae in 21.62%, Aeromonas veronii in 10.81%, and Aeromonas schubertii in 2.7%. Of the isolated strains, 37 were submitted to antimicrobial susceptibility testing, which revealed that 100% were resistant to ampicillin, 75.64% to cephalotin, 64.86% to cefoxitin and 48.64% to aztreonam. The strains presented less resistance to chloramphenicol, netilmicin, amikacin, gentamicin, tetracycline and tobramycin. The results demonstrate that Aeromonas spp. bacteria resistant to several antimicrobials may be present in type “A” milk, indicating that this product might be a risk to consumer health, and this data should be an alert to public health services.

RESUMO O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência do uso do extrato de Moringa oleifera e da radiação solar na clarificação e desinfecção da água com diferentes níveis de turbidez. O experimento foi divido em duas etapas: (a) tratamento por exposição ao sol de amostras de água com diferentes níveis de turbidez e (b) utilização das sementes de M. oleifera para floculação e sedimentação clarificando a água e desinfecção da água clarificada por radiação solar. Nos dois protocolos foram realizados: colimetria, segundo substrato cromogênico; DBO, por medição manométrica; turbidez, por meio de turbidímetro. Os resultados comprovaram a eficiência da radiação solar na desinfecção da água com baixo e alto nível de turbidez, sendo que, para Escherichia coli, as maiores reduções ocorreram nas amostras com turbidez 30-40 UNT e após 12h de exposição. A adição do extrato de M. oleifera, nas amostras de baixa e alta turbidez, proporcionou elevadas reduções da turbidez em relação ao nível de turbidez inicial e potencializou a ação da luz solar na desinfecção da água. Propõe-se a adição de extratos de sementes de M. oleifera e radiação solar para maximizar a eliminação de E. coli das amostras de água turvas e assim minimizar o risco de transmissão hídrica de agentes patogênicos de origem intestinal.

ABSTRACT The objective of this study was to evaluate the effectiveness of Moringaoleifera extract and solar radiation in the clarification and disinfection of water with different turbidity levels. The experiment had two stages: (a) treatment of water samples with different turbidity levels by exposure to solar radiation and (b) use of M. oleifera seeds for flocculation and sedimentation for water cleansing and disinfection of cleansed water by solar radiation. Colimetry, following chromogenic substrate; BDO by manometer; and turbidity by turbidity meter were deployed in the two protocols. The results show the effectiveness of solar radiation in low and high turbid water disinfection. In the case of Escherichia coli, the greatest decrease occurred in 30–40 UNT turbidity after a 12-h exposure. In low and high turbidity samples the addition of M. oleiferaextract resulted in a great decrease of turbidity when compared to initial turbidity and empowered the effect of solar radiation in water disinfection. The addition of M. oleifera seed extract and solar radiation are recommended to maximize the elimination of E. coli from turbid water samples and consequently minimize the risk of water-transmitted pathogenic agents originating from the intestines.