Este artigo descreve a anteriormente desconhecida diversidade molecular de amostras brasileiras de Coronavírus canino (CCoV). Vinte e duas amostras foram submetidas à análise da sequência parcial do gene codificador da proteína de membrana, sendo 12 classificadas como CCoV Tipo II e 10 como CCoV Tipo I e uma possível sublinhagem tipicamente brasileira foi encontrada para o CCoV Tipo II.

A semi-intensive wildlife boars farm presented a clinical history of high mortality in 70 - 90 days-old pigs (> 50 %). Two 90 days-old animals with weight loss and wasting were necropsied and the samples tested for PCV2 by polymerase chain reaction (PCR). The genetic material of PCV2 was sequenced and classified into the PCV2a genotype together with PCV2 sequences obtained from samples of Poland, Brazil, Slovenia and Greece wild boars.

RESUMO O presente relato refere-se ao primeiro isolamento no Brasil do herpesvírus eqüino tipo 1 (HVE-1) proveniente de um caso clínico de mieloncefalopatia herpética em uma égua, que evoluiu para o óbito. O isolado do HVE-1, denominado 07/05, foi obtido a partir de uma amostra de líquor na primeira passagem em células Vero, confirmando-se sua identidade pela PCR e pela prova de neutralização viral. Como o isolamento viral a partir do líquor geralmente não é bem sucedido, conforme demonstrado em vários relatos de casos, o presente achado sugere que a doença neurológica foi causada por uma amostra particularmente neurovirulenta de HVE-1.

ABSTRACT This report describes the first Brazilian equine herpesvirus type 1 (EHV-1) isolation from a single fatal equine herpes myeloencephalopathy case in a mare. The isolation of EHV-1 was confirmed from the first passage of cerebrospinal fluid (CSF) sample in Vero cells by PCR and virus neutralization assay. As virus isolation from CSF is unlikely to be successful, as has been shown in several case reports, this circumstantial evidence suggests that the neurological disease was caused by particularly neurovirulent strain of EHV-1.

RESUMO O Circovírus suíno-2 (Porcine circovirus type 2 – PCV-2) é um vírus não envelopado, apresenta simetria icosaédrica e mede de 15 a 17 nm de diâmetro. É o menor vírus animal descrito e está relacionado a várias síndromes que acometem suínos, responsável por perdas econômicas nas granjas. A alta variabilidade da região do genoma que codifica as proteínas estruturais associada às co-infecções, dificulta o seu diagnóstico e sua prevenção.

ABSTRACT Porcine circovirus-2 (PCV-2) is an icosahedric nonenveloped virus with a diameter of from 15 to 17 nm. It is the smallest animal virus and is associated with many swine syndromes, responsible for economic losses for pig farms. The high variability of the enconding genes for the structural proteins associated with the co-infections makes the diagnosis and prevention of this virus more difficult.

RESUMO Estudou-se a participação de coronavírus bovino (BCoV) rotavírus e Cryptosporidium parvum em um surto de diarréia em bezerros de corte no Município de Presidente Epitácio, Estado de São Paulo. Das 9 amostras colhidas, 2 foram positivas para BCoV, 6 para C. parvum e 6 para rotavírus, sendo 4 co-infecções por rotavírus e C. parvum, 1 coinfecção por BCoV e C. parvume 1 co-infecção por rotavírus e coronavírus. Estes resultados reiteram a necessidade de que se pesquise de um modo abrangente a etiologia de diarréias, com o intuito de se avaliarem os agentes circulantes no rebanho, o que possibilita uma abordagem profilática mais exata para impedir o aparecimento de surtos epidêmicos de gastroenterites.

ABSTRACT This article describes the role of bovine coronavirus, rotavirus and Cryptosporidium parvum in an outbreak of beef calf diarrhea in Presidente Epitácio, São Paulo State. Two out 9 fecal samples were positive to BCoV, 6 to C. parvum and 6 to rotavirus, with 4 rotavirus-C. parvumco-infections, 1 BCoV-C. parvumco-infection and 1 rotavirus-BCoV co-infection. These results show the need for a detailed survey of the etiology of diarrheas, aiming to evaluate the agents spread in a flock, allowing the design of prophylactic measures against gastroenteritis outbreaks.

Samples of 114 bovine fetuses and 10 calves, which dead in perinatal period, were examined for detection of DNA. The most common detected agent was Brucella spp. in 17 samples (13.7%) followed by Leptospira spp. in 4 cases (3.2%),bovine herpesvirus (BHV) and bovine viral diarrhea (BVDV) in 3 animals (2.4%) each, and 1 for the association of BVDV and BHV. In 77.4 % (96/124) of the samples it was not possible to detect any agent.

RESUMO O Clostridium perfringens, microrganismo anaeróbio, está presente no solo e no trato intestinal dos mamíferos. Provoca gangrena gasosa e intoxicação alimentar nos seres humanos e doenças enterotoxêmicas nos animais domésticos. O C. perfringens é classificado em 5 tipos (A, B, C, D e E) mediante a produção de quatro toxinas principais (alfa-α, beta-β, gama-γ, delta-δ e épsilon-ε). A identificação destas toxinas é realizada através da reação de soroneutralização em animais utilizando anti-soros específicos, os quais, além do alto custo, são de difícil obtenção em laboratórios de referência internacionais. Visando contribuir para a tipificação de amostras de C. perfringens, em nosso meio, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a reação em cadeia da polimerase (PCR) na detecção dos genes que codificam as toxinas alfa (cpa), beta (cpb) e épsilon (etx) em isolamentos provenientes de bovinos. A sensibilidade analítica da técnica de PCR padronizada a partir do DNA total bacteriano foi de 2,27 ng/?L para o gene cpa e 227 pg/?L para os genes cpb e etx. Das 35 amostras de C. perfringens isoladas e tipificadas por PCR, 16 (45,7%) foram do tipo A, 18 (51,4%) foram do tipo C e 1 (2,9%) foi do tipo B.

ABSTRACT The Clostridium perfringens, an aerobic microorganism, is present in soil and intestinal tracts of mammals. It causes gaseous gangrene and food intoxication in human beings and enterotoxemic diseases in domestic animals.C. perfringens is classified into 5 types (A,B,C,D and E) according to the production of four main toxins: (alfa-α, beta-β, gama-γ, delta-δ e épsilon-ε). The identification of these toxins is made through serum neutralization test in animals, using specific anti-sera, however these reagents are of high cost and difficult to be obtained from international reference laboratories. To aid in the typing of the C. perfringens strains in our environment, the present work aimed to assess the use of the polymerase chain reaction (PCR) for the detection of the genes coding the alpha (cpa), beta (cpb) and epsilon (etx) toxins in bovines isolates.The analytical sensitivity of the PCR technique, standardized from the total bacterial DNA, was 2.27 ng/?L for the cpa gene and 227 pg/?L for the cpb and etx genes. Among the 35 C. perfringens isolates typed by PCR, 16 (45.7%) were of type A, 18 (51.4%) of type C, and 1 (2.9%) belonged to type B.

RESUMO Inquéritos sorológicos indicaram a presença de infecção por Leptospira interrogans sorovar Bratislava em partes da Alemanha e em outros países do mundo. Duas porcas de uma criação de suínos da Alemanha que apresentaram títulos de 200 e 800 para L. interrogans sorovar Bratislava no teste da soroaglutinação micoscópica (SAM) foram monitoradas em condições experimentais com o emprego de métodos microbiológicos e moleculares (PCR) para a detecção de leptospira. Os cultivos de urina e órgãos foram negativos para leptospiras nos dois animais. A PCR também foi negativa em todas as amostras de uma das porcas, porém foi positiva em amostras de útero, oviduto e ovário do outro animal. As investigações histológicas dos rins desta porca apresentaram lesões de glomerulonefrite intersticial. Os resultados positivos da PCR demonstraram o tropismo das leptospiras para o trato genital. Este fato pode ser responsável por transtornos reprodutivos como abortamentos e infertilidades nos rebanhos.

ABSTRACT Reports based on serological data indicate Leptospira (L.) interrogans serovar Bratislava infection in pigs in parts of Germany and other countries. Two sows of a pig breeding herd located in Germany and which showed titres of 200 and 800 against L. interrogans serovar Bratislava in MAT were followed up under experimental conditions with microbiological and PCR methods for detection of leptospires. Cultures of urine and organs were negative for leptospires in both pigs. The PCR was also negative in all samples of one pig, but was positive in samples from uterus, oviduct and ovary of the other animal. The histological investigation of the kidneys from this pig showed an interstitial glomerulonephritis. The positive results of the PCR demonstrated the tropism of leptospires for the genital tract. This fact may be responsible for more unexpected abortion and infertility in pig breeding herds.

ABSTRACT Porcine parvovirus has been identified worldwide as an important agent of reproductive disease in pigs, being responsible for large economic losses. This survey aimed to study the herd prevalence of serical antibodies against Porcine Parvovirus in small farms of Uruará county in Pará state, Northern Brazil by using Hemaglutination Inhibition assay. Sera from all pigs (103 specimens) from 36 farms were sampled from a total of 2,200 farms. Considering positive sera specimens with titer equal to or greater than 8, the herd prevalence of serical antibodies against porcine parvovirus was estimated to be greater than 79.9%, with 99% confidence level. Considering positive sera specimens with titer greater than 80, the herd prevalence ranges from 60.9 to 89.1% with 95% confidence level. The prevalence in the sampled region, whatever the cut-off adopted, denotes a widespread presence of porcine parvovirus infection among the farms, focusing the possibility of the participation of this agent in reproductive disorders in pigs.

RESUMO O Parvovírus suíno (PVS) vem sendo identificado em todo o mundo como um importante agente causal de distúrbios reprodutivos em suínos, sendo responsável por expressivas perdas econômicas. Este trabalho objetivou estudar a soroprevalência de anticorpos anti-PVS em suínos do Município de Uruará, Estado do Pará, determinada pela técnica de inibição de hemaglutinação. Foram testadas todas as amostras de soros (103 espécimes) provenientes de 36 propriedades de um total de 2.200 propriedades. Uma propriedade foi considerada positiva se possuísse pelo menos uma amostra reagente. Considerando positivos soros com título igual ou superior a 8, a prevalência estimada para propriedades foi superior a 79,9%, com nível de confiança de 99%. Considerando positivos soros com título superior a 80, o valor da prevalência estimada para propriedades está compreendido entre 60,9 e 89,1%, com nível de confiança de 95%. Independentemente do ponto de corte adotado, os intervalos de prevalência estimados demonstram a ampla disseminação do agente nas propriedades e indicam a possibilidade da participação deste agente em distúrbios reprodutivos em suínos.

ABSTRACTS Bovine Herpesvirus type 1 (BHV-1) is the causal agent of Bovine Infectious Rinotracheitis (IBR), (IPV) and (IBP) and it is the main viral pathogen found in bovine semen. The gold standard for BHV-1 direct diagnosis in bovine semen samples is viral isolation, which has numerous disadvantages. The aim of this study was to evaluate a nested PCR (nPCR) assay for BHV1 detection in bovine semen. The primers targeting gB and the specify of the amplicons was confirmed with Fnu4HI and Sau96I restriction profile. The nPCR showed fast and with a high analytic sensibility (105 times higher than viral isolation). When the assay was applied to a collection of semen samples collected from a bull from an Artificial Insemination Center with a single semen sample positive at viral isolation, the nPCR was able to detect the BHV-1 DNA 27 days before and 3 days after the viral isolation.

RESUMO O Herpesvírus Bovino tipo-1 (BHV-1) é o agente etiológico da Rinotraqueíte Infecciosa Bovina (IBR), Vulvovaginite Pustular Infecciosa (IPV) e Balanopostite Pustular Infecciosa (IBP) e o principal patógeno viral encontrado no sêmen bovino. A técnica padrão para o diagnóstico do vírus em amostra de sêmen é o isolamento viral, a qual apresenta uma série de desvantagens. O objetivo deste trabalho foi avaliar uma nested PCR (nPCR) para a detecção do BHV-1 em sêmen bovino. Os primers foram dirigidos para a região codificadora de gB e a especificidade do fragmento amplificado foi confirmada pelo perfil de restrição com as enzimas Fnu4HI e Sau96I. A nPCR avaliada revelou-se rápida e com alta sensibilidade analítica (105 vezes superior ao isolamento viral). Ao ser aplicada à série de amostras de sêmen colhidas de um touro proveniente de central de Inseminação Artificial, positivo ao isolamento viral em uma única das colheitas, a nPCR mostrou ser capaz de detectar a presença do BHV-1 27 dias antes e 3 dias após o isolamento viral.

ABSTRACT Rotavirus is a worldwide occurring viral agent of neonatal diarrheas of children and the young of many species, mainly calves and piglets. This survey aimed to evaluate the occurrence of antirotavirus antibodies in cattle raised in São Paulo State by the counterimmunoelectroosmophoresis (CIEOP) test. Two hundred serum samples were collected from 23 farms in 19 counties. The total positivity found was 77.5% and the mean farm-level positivity was 76.57 ± 21.73%. Since there are no regular anti-rotavirus vaccines currently available in Brazil, these results show a high occurrence of rotavirus natural infections in São Paulo State.

RESUMO Rotavírus é um agente viral de diarréias neonatais de crianças e de animais jovens de várias espécies, principalmente bezerros e leitões. Este estudo teve por objetivo avaliar a ocorrência de anticorpos anti-rotavírus pela técnica da contraimunoeletroosmoforese (CIEOF) em bovinos criados no Estado de São Paulo. Duzentas amostras de soro foram colhidas em 23 fazendas pertencentes a 19 municípios. A soropositividade total encontrada foi de 77,5% e a positividade média por fazenda foi de 76,57 ± 21,73%. Uma vez que não há vacinas anti-rotavírus de uso regular no Brasil, estes resultados demonstram elevada ocorrência de infecções naturais por rotavírus no Estado de São Paulo.

ABSTRACT From January to May 1999, 222 serum samples from water buffaloes from 11 farms in Vale do Ribeira region, state of São Paulo, Brazil, were collected to test the presence of Neospora caninum, Toxoplasma gondii, Brucella abortus, Leptospira spp. and bovine rinotracheitis virus (BHV-1) antibodies. The sera were submitted to indirect fluorescence antibody test (IFAT) for N. caninum, and T. gondii, tube aglutination test for B. abortus, microscopic aglutination test (MAT) for Leptospira spp. and indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to BHV-1. The MAT for leptospirosis was performed using a collection of 24 sorotipes belonging to 20 sorogroups antigens. The results showed: 63.9% positive to N.caninum (≥ 1:25), 3.2% to T. gondii (≥ 1:64), 8.6% to B. abortus (≥ 1:100), 50.9% to Leptospira spp. (≥ 1:100) and 77% to BHV-1.

RESUMO De janeiro a maio de 1999 foram colhidas 222 amostras de sangue de búfalas em idade reprodutiva (três a 16 anos), distribuídas em 11 propriedades destinadas à produção de carne e leite, do Vale do Ribeira, Estado de São Paulo, Brasil. Os soros foram submetidos à reação de imunofluorescência indireta (RIFI), à soroaglutinação lenta em tubos (SAL), à soroaglutinação microscópica (SAM) e ao ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto, respectivamente para pesquisa de anticorpos contra Neospora caninum e Toxoplasma gondii, Brucella abortus, Lepstospira spp. e vírus BHV-1 da rinotraqueíte bovina. A coleção de antígenos para leptospirose utilizada incluiu 24 sorotipos, pertencentes a 20 sorogrupos. Os resultados obtidos foram: 63,9% de reagentes para N.caninum (títulos ≥ 25), 3,2% (≥ 64) para Toxoplasma gondii, 8,6% (≥ 100) para Brucella abortus, 50,9% (≥ 100) para Leptospira spp. e 77% para vírus BHV-1.

ABSTRACT There was developed a polyclonal “double-sandwich” antibody ELISA method for detection of rotavirus from stool specimens. The NCDV strain of rotavirus group A was concentrated by ultra-centrifugation using a 45% (v/v) saccharose cushion and inoculated in rabbits and sheep. After that, the IgG of serum samples of the animals was purified by ion-exchange chromatography and absorbed with whole serum of both animal species using a glutaraldehyde polymer, in order to eliminate unspecific reactions. The presence of rotavirus was detected by the sheep’s IgG and revealed by the rabbit’s IgG, using an anti-rabbit IgG peroxidase conjugate developed in goats. When applied in population of 86 fecal samples from piglets with diarrhea, the results of the ELISA were: 100% of sensivity; 98.79% of specificity, with an agreement of 98.83%, using as standard the polyacrilamide gel electrophoresis (PAGE) test. The variances between 86 repetitions of the same sample were 0.001 (for one positive sample) and 0.0002 (for one negative sample). These results showed that this ELISA is a sensitive and specific alternative test for rotavirus diagnosis from fecal material.

RESUMO Um método de ELISA policlonal tipo “duplo-sanduíche” foi desenvolvido para a detecção de rotavírus a partir de material fecal. A amostra NCDV de rotavírus do sorogrupo A foi concentrada por ultracentrifugação utilizando-se um colchão de sacarose a 45% (v/v), e inoculada em coelhos e carneiros. Em seguida, a fração IgG oriunda dos soros dos animais foi purificada por cromatografia de troca iônica e absorvida, utilizando-se polímero de glutaraldeído, de modo a eliminar reações inespecíficas. A presença dos rotavírus foi detectada pela IgG de carneiro e revelada pela IgG de coelho, usando-se IgG de cabra anti-IgG de coelho conjugada à peroxidase. Aplicado a um painel constituído de 86 amostras fecais diarréicas de leitões obteve-se 100% de sensibilidade; 98,79% de especificidade, com uma concordância de 98,83%, tendo como prova padrão a eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). As variâncias entre 86 repetições da mesma amostra foram 0,001 (para a amostra positiva) e 0,0002 (para a amostra negativa). Estes resultados demonstram que este ELISA constitui-se numa alternativa sensível e específica para o diagnóstico de rotavírus a partir de material fecal.

RESUMO Com o intuito de adaptar um método para detecção e identificação rápida do Mycobacterium bovis utilizando a reação ein cadeiá da polimerase (PCR), foram comparados dois métodos de extração do material genético e testados três pares de primers, um para detecção de Mycobacterium spp. (fragmento de 383 bp do gene da HSP 65 kD), um para o Complexo M. tuberculosis (fragmento de 419 bp do gene para Pab 38 kD) e um específico para M. bovis. O método de extração baseado em lise alcalina apresentou maior rendimento que o de digestão enzimática (p<0,001 ), porém com maior degradação do DNA. Os primers, aplicados em culturas puras, apresentaram resultados coerentes tanto para amostras padrão quantopara os isolamentos de campo identificadas pelos métodos tradicionais.

ABSTRACT In arder to apply a method for detection and identification of Mycobacterium bovis using polymerase chain reaction (PCR), two methods of DNA extraction were compared and three primer pairs were evaluated, the first against a Mycobacterium spp. common gene (383 bp fragment included in HSP 65 kD codifying gene), another that amplifies a gene belonging to the M. tuberculosis Complex (419 bp fragment inside the Pab 38 kD gene) and, the last, a species-specific M. bovis 500 bp DNA fragment. The alkaline lysis method presented higherquantities of extracted DNA than proteinase-based protocol (p<0.001), nevertheless with more DNA degradation. The PCR carried out against pure culture of either reference strains or clinicai isolates identified by classical bacteriological methods classified ali tested mycobacteria samples as each of the primers was designed for.