Se utilizó la técnica del inmunoblot para el diagnóstico de la cisticercosis porcina usando un antígeno total de cisticercos de Taenia crassiceps. Fueron analizados 13 sueros del cerdo con cisticercosis, 30 sueros controles negativos y ocho sueros del cerdo con hidatidosis, así como nueve del suino con macracantorincosis, 10 con ascaridiosis y ocho con pulmonía. El uso de este antígeno en el inmunoblot con suero de cerdos no se había publicado previamente. El inmunoblot fue padronizado por análisis de titulación en bloque mostrando 100.0% de sensibilidad y 96.7% de especificidad. Los péptidos específicos para la cisticercosis en orden de frecuencia fueron: 72-68 kD (100%), 16-15 kD (77%), 39-36 kD (62%), 18-17 kD (54%), 21 kD (31%), 14 kD (23%), 25-23 kD (8%), y 20-19 kD (8%). Reacción cruzada (72-68 y 18-17 kD) sólo se descubrió en una muestra (12.5%) de cerdo con hidatidosis. Debido a sus altas tasas de desempeño, el inmunoblot debe ser útil para confirmar el diagnóstico de cisticercosis porcina y es más eficaz que otras pruebas empleadas para este propósito, como examen de la lengua, examen anatomopatológico y ELISA

Foi padronizado o teste ELISA para o diagnóstico da cisticercose suína. Após confirmação por exame post-mortem, os soros dos respectivos animais foram empregados como controles positivos e negativos. Soros de suínos portadores de infecções heterólogas foram ensaiados para determinação de reações cruzadas. Os quatro antígenos testados na fase de padronização foram líquido vesicular (VF) e extrato total (T) de larvas de Taenia crassiceps (Tcra) e de extrato de escólex (S) e de cisticercos (T) de Taenia solium (Tso). A titulação em bloco das ótimas concentrações de antígenos e diluições de soros e de conjugado, bem como o emprego de Tween-20 e de leite desnatado nas soluções bloqueadora e de lavagem exerceram nítida influência no desempenho do teste ELISA. Todos os antígenos revelaram bom desempenho na diferenciação entre soros positivos e negativos para cisticercose. O antígeno VF-Tcra apresentou as mais altas taxas de desempenho, seguido do T-Tcra. As taxas de desempenho para o antígeno VF-Tcra foram, respectivamente, para pontos de corte com 2sd e 3sd, de 96,0% e 80,0% para sensibilidade e de 97,5% e 100,0% para especificidade. Foi detectada reação cruzada com soros de hidatidose e de ascaridiose. Considerando o bom desempenho observado, o teste padronizado pode ser recomendado em matadouros no diagnóstico de animais suspeitos e no levantamento da ocorrência da doença nos segmentos de criação, sobretudo nos clandestinos, dando suporte às medidas de controle da cisticercose, integradas em toda a cadeia de produção da carne suína, exercendo efetiva contribuição à Saúde Pública.

In the present study ELISA was standardized for the diagnosis of swine cysticercosis based on necropsy parameters and confirmed positive and negative control sera. Serum samples from pigs with other infections were also assayed to determine possible cross-reactions. Four antigens were assayed: from Taenia crassiceps vesicular fluid (VF-Tcra) and crude larvae extract (T-Tcra), and from Taenia solium extracts of scolex (S-Ts) and of larvae (T-Ts). A checkerboard evaluation of antigen, serum and conjugate dilutions, as well as the use of Tween-20 and skim cow milk in wash and blocking solution had a marked effect on improving ELISA performance. All the antigens showed a good performance, but VF-Tcra was the best, with 96.0% and 80.0% sensitivities for cut-offs respectively at 2sd and 3sd, and corresponding specificities of 97.5% and 100.0%. Cross-reactivity was observed only with hydatidosis and ascaridiosis. In view of the high performance observed, the ELISA test should be recommended for the diagnosis of cysticercosis in suspected swine in slaughterhouses and for the screening of cysticercosis in swine production. These results will support integrated measures of cysticercosis control throughout the chain of swine production, effectively contributing to public health.

Seropositivity for Chagas disease was evaluated in 834 children aged between 7 and 14 from the Municipal Teaching System in the district of Londrina, State of Paraná. A seroprevalence rate of 0.1% was found through the use of an indirect immunofluorescent test and an enzyme-linked immunosorbent assay. This low rate of seroprevalence provides evidence that the vectorial transmission of Chagas disease has been eliminated in Londrina. The main reason for the elimination of vectorial transmission of Trypanosoma cruzi infection, as evaluated by serological tests, may be a remarkable change in the economic structure of the northern region of Paraná in the 1960's. At that time coffee production was almost completely replaced by soy beans, wheat and grazing in the rural areas. This change deeply affected the rural ecology and caused an exodus of the population from rural to urban areas as well as a decrease in the total number of the population of that region. The measures introduced for controlling the disease through the Program of Chagas Disease Control established by the Fundação Nacional de Saúde of the Brazilian Ministry of Health, certainly, had a positive impact on the reduction of American trypanosomiasis prevalence in the area under study. However, it does not seem that this was the most relevant factor responsible for the elimination of vectorial transmission of Chagas disease in Londrina.

A detecção de IgE apresenta dificuldades técnicas pela reduzida concentração que se encontra no LCR e no soro. Utilizando método imunoenzimático com conjugado anti-IgE-fosfatase alcalina e substrato fluorigênico, foram estudadas 86 amostras de LCR de três grupos: A) 29 pacientes com NC, B) 36 pacientes com afecções neurológicas diversas (neurossífilis, neurotuberculose, meningites, tumores, hemorragias) e C) 21 indivíduos de pós-alta médica de meningites bacterianas. Os resultados obtidos foram: A) 0,05 a 3,00 Ul/ml (0,76±0,79), B) 0,00 a 1,50 Ul/ml (0,23±0,34) e C) 0,05 a 1,25 Ul/ml (0,34±0,34). Os resultados obtidos sugerem que a IgE parece ter papel na patogenia da NC e esforços devem ser feitos para padronização de teste para detecção de anticorpos IgE específicos.

The detection of IgE is technically difficult because of its reduced concentrations in serum, and even lower concentrations in cerebrospinal fluid (CSF). In the present investigation we studied 86 CSF samples using an immunoenzymatic method with an anti-IgE-alkaline phosphatase conjugate and a fluorigenic substrate. The samples were from three groups: A) 29 patients with neurocysticercosis (NC), B) 36 patients with different neurologic disorders (neurosyphilis, neurotuberculosis, meningitis, tumors, hemorrhage) and C) 21 discharged individuals who had been hospitalized for bacterial meningitis. The results obtained were: A) 0.05 to 3.00 IU/ml (0.76±0.79), B) 0.00 to 1.50 IU/ml (0.23±0.34) and C) 0.05 to 1.25 IU/ml (0.34±0.34). The present results suggest that IgE appears to play a role in the pathogeny of NC and that efforts should be made to standardize a test for the detection of specific IgE antibodies.

Foi desenvolvido o teste dot-ELISA para detecção de anticorpos em líquido cefalorraquiano (LCR) no diagnóstico imunológico da neurocisticercose humana, utilizando antígenos de membrana e escólex de Cysticercus cellulosae (M+E-Cc) e, alternativamente, membrana (M) e líquido vesicular (LV) de Cysticercus longicollis (Cl) covalentemente ligados a um novo suporte constituído de tecido de poliéster-resina de N-metilol-acrilamida (dot-TR). O teste foi realizado à temperatura ambiente, com tempos de incubação reduzidos e sem necessidade de cuidados na manipulação do suporte. A sensibilidade obtida foi de 95,1% para o antígeno Cc e 97,6% para o Cl. A especificidade foi de 90,6% quando o antígeno Cc foi usado, e 96,9% e 100% para M-Cl e LV-Cl, respectivamente. Não foi observada diferença significativa entre os antígenos homólogo e heterólogo. O baixo custo e a fácil execução do teste dot-TR empregando extratos antigênicos de Cysticercus longicollis indicam que pode ser empregado como alternativa no imunodiagnóstico da neurocisticercose humana.

A dot-ELISA was developed for the detection of antibodies in CSF in the immunologic diagnosis of human neurocysticercosis, using antigen extracts of the membrane and scolex of Cysticercus cellulosae (M+S-Cc) and, alternately, membrane (M) and vesicular fluid (VF) of Cysticercus longicollis (Cl) covalently bound to a new solid phase consisting of polyester fabric treated with N-methylol-acrylamide resin (dot-RT). The test was performed at room temperature, with reduced incubation times and with no need for special care in the manipulation of the support. The sensitivity rates obtained were 95.1% for antigen Cc and 97.6% for antigen Cl. Specificity was 90.6% when Cc was used, and 96.9% and 100% when M-Cl and VF-Cl were used, respectively. No significant differences in titer were observed between tests carried out with homologous and heterologous antigens. The low cost and easy execution of the dot-RT test using antigen extracts of Cysticercus longicollis indicate the test for use in the immunodiagnosis of human neurocysticercosis.

A cepa ORF de Cysticercus longicollis (Cl) representa importante modelo para estudo de antígenos heterólogos no imunodiagnóstico da neurocisticercose (NC). Foi padronizada a técnica de imunoperoxidase (IP) empregando suspensão antigênica particulada. Amostras de líquido cefalorraquiano (LCR) foram incubadas sobre o antígeno fixado em lâminas de microscopia, o conjugado empregado foi anti-IgG-Peroxidase, a reação enzimática iniciou-se ao cobrirem-se as lâminas com solução cromógena (Diaminobenzidina/H2O2). Após lavagens em água destilada, a lâmina foi corada com verde malaquita a 2% em água. De 21 LCR de pacientes com NC, 19 (90,5%) foram reativos e 8 (100%) LCR do grupo controle foram não reativos. Os resultados do teste IP-Cl ensaiando 127 LCR dc pacientes com suspeita de NC mostrou 89,7% de concordância com o teste ELISA empregando extrato salino de Cysticercus cellulosae (Cc) e 94,2% de concordância com o teste IP-Cc.

The ORF strain of Cysticercus longicollis represents an important model for the study of heterologous antigens in the immunodiagnosis of neurocysticercosis (NC). The immunoperoxidase (IP) technique was standardized using a particulate antigen suspension of Cysticercus longicollis (Cl) and Cysticercus cellulosae (Cc). Cerebrospinal fluid (CSF) samples were incubated on the antigen fixed to microscopy slides; the conjugate employed was anti-IgG-peroxidase and the enzymatic reaction was started by covering the slides with chromogen solution (diaminobenzidine/H2O2). After washing with distilled water, the slide was stained with 2% malachite green in water. Of the CSF samples from 21 patients with NC, 19 (90.5%) were positive, whereas the 8 CSF samples from the control group (100%) were negative. The results of the IP-Cl test applied to 127 CSF samples from patients with suspected NC showed 28.3% reactivity as opposed to 29.1 % for the IP-Cc test. The agreement index for the IP test (Cl x Cc) was 94.2%, with no significant difference between the two antigens.

Reagente novo destinado ao teste de hemaglutinação indireta, THAI IAL, foi padronizado, utilizando hemácias de ganso, como suporte inerte, para o diagnóstico de campo da tripanosomíase americana. O objetivo foi o de substituir o reagente liofilizado ou congelado de THAI produzido rotineiramente, empregando hemácias humanas, no Instituto Adolfo Lutz (São Paulo, Brasil). O reagente padronizado apresentou longa estabilidade em suspensão líquida, e foi avaliado em 137 amostras de soros de pacientes chagásicos e não chagásicos, em THAL IAl. O desempenho diagnóstico deste teste foi semelhante ao de THAI utilizando hemácias humanas e ao de THAl de procedência comercial. A sensibilidade foi 1,00, especificidade 0,98, valores de preditivo positivo 0,96, e negativo 1,00. As diferentes partidas de reagente sucessivamente produzidas demonstraram ser reprodutíveis em método de controle de qualidade. O novo reagente é mais econômico que o anterior, de fácil preparo e aplicável aos estudos soroepidemiológicos.

A new reagent was designed to the indirect hemagglutination test (IHAT IAL), utilizing goose red blood cells as inert matrix and standardized for the field diagnosis of American trypanosomiasis. The objective was to substitute the tyophilized or frozen reagent of IHAT produced routinely using human erythrocytes in the Adolfo Lutz Institute (São Paulo/Brazil). The standardized reagent presented a long stability in liquid suspension, and was evaluated in 137 serum samples from patient with and without Chagas disease, by IHAT ILA. The diagnostic performance of this lest was similar to the IHAT utilizing human erythrocytes and to that of a commercial IHA Tkit. The sensitivity was 1.00, specificity 0.98, predictive value of positive 0.96 and of negative 1.00. Different batches of reagent successively produced proved to be reproducible in a quality control method. The new reagent is more economic than the former reagent, it can be produced easily and may be applicable to the seroepidemiologic studies.

Com a finalidade de melhorar o diagnóstico da leptospirose humana, padronizou-se o teste dot-ELISA para a pesquisa de anticorpos específicos da classe IgM na saliva. Empregaram-se amostras de saliva e soro coletadas simultaneamente de 20 pacientes com a forma ictero-hemorrágica da doença, de 10 pacientes com outras patologias e 5 controles negativos. Culturas de Leptos-pira em meio EMJH, dos sorovares: icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis e cynopteri, foram utilizadas como antígeno, na concentração proteica individual de 0,2 µg/µl, misturadas em volumes iguais. Na fase sólida do teste empregou-se tecido de po-liéster impregnado com resina de N-metilol-acrilamida. O volume do antígeno para cada teste foi de 1µl, o de saliva 8µl, o de conjugado anti-IgM humana marcada com peroxidase, de 30µl. A leitura foi visual, após revelação em solução cromógena de preparo recente. O suporte de tecido é de fácil obtenção e manuseio, diferente do clássico de membrana de nitrocelulose. A saliva pode ser coletada diretamente sobre o suporte, o que facilita o método e diminui gastos e riscos inerentes à coleta e processamento do sangue.

In order to improve the diagnosis of human leptospirosis, we standardized the dot-ELISA for the search of specific IgM antibodies in saliva. Saliva and serum samples were collected simultaneously from 20 patients with the icterohemorrhagic form of the disease, from 10 patients with other pathologies and from 5 negative controls. Leptospires of serovars icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis and cynopteri grown in EMJH medium and mixed together in equal volumes, were used as antigen at individual protein concentration of 0.2 µg/µl. In the solid phase of the test we used polyester fabric impregnated with N-methylolacrylamide resin. The antigen volume for each test was 1µl, the saliva volume was 8 µl, and the volume of peroxidase-labelled anti-human IgM conjugate was 30 µl. A visual reading was taken after development in freshly prepared chromogen solution. In contrast to the classic nitrocellulose membrane support, the fabric support is easy to obtain and to handle. Saliva can be collected directly onto the support, a fact that facilitates the method and reduces the expenses and risks related to blood processing.

Padronizou-se o teste imunoenzimático dot-ELISA, empregando-se os antígenos somático (S) e excretor-secretor (ES) de Toxocara canis, para pesquisa de anticorpos específicos em 22 soros de pacientes com idades entre 5 a 15 anos, com dados clínicos de toxocaríase. Como grupo controle, foram estudados 14 soros de indivíduos supostamente normais e 28 soros de pacientes com outras patologias. Todas as amostras em estudo foram empregadas antes e após absorção com extrato de Ascaris suum. Os resultados obtidos foram avaliados comparativamente com o teste ELISA evidenciando, nos dois testes estudados, comportamento semelhante quanto à sensibilidade e maior especificidade para o dot-ELISA, com qualquer dos dois antígenos estudados. O teste dot-ELISA mostrou-se eficiente para o diagnóstico da toxocaríase humana, apresentando vantagens quanto ao rendimento, estabilidade, tempo e facilidade de execução e baixo custo.

The dot-enzyme-linked immunosorbent assay (dot-ELISA) was standardized using somatic (S) and excretory-secretory (ES) antigens of Toxocara-canis for the detection of specific antibodies in 22 serum samples from children aged 1 to 15 years, with clinical signs of toxocariasis. Fourteen serum samples from apparently normal individuals and 28 sera from patients with other pathologies were used as controls. All samples were used before and after absorption with Ascaris suum extract. When the results were evaluated in comparison with ELISA, the two tests were found to have similar sensitivity, but dot-ELISA was found to be more specific in the presence of the two antigens studied. Dot-ELISA proved to be effective for the diagnosis of human toxocariasis, presenting advantages in terms of yield, stability, time and ease of execution and low cost.

Foi desenvolvido o teste DOT-ELISA em tecido de poliéster tratado com resina polimerizada (NMA) para o imunodiagnóstico da neurocisticercose (NC) humana pesquisando anticorpos específicos em líquido cefalorraquiano (LCR). O teste pode ser empregado em levantamentos epidemiológicos e em laboratórios de média e baixa complexidade, já que todas as etapas são realizadas a temperatura ambiente, o antígeno é covalentemente ligado ao suporte permitindo obter um reagente estável, e o suporte sensibilizado não requer cuidados especiais no seu manuseio. Foram ensaiadas 30 amostras de LCR; todas as 15 amostras do grupo controle foram negativas e 14 (93,3%) das 15 amostras de LCR do grupo de pacientes com NC foram positivas (títulos de 1 a 128). Os estudos de sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade, estabilidade e padronização do uso de soro como amostra estão em andamento.

A dot enzyme-linked immunosorbent assay (DOT-ELISA) was developed to detect specific antibodies in cerebrospinal fluid (CSF) for human neurocysticercosis immunodiagnosis, with Cysticercus cellulosae antigen dotted on a new solid-phase. This was represented by sheets of a synthetic polyester fabric impregnated with a polymerized resin (N-methylol-acrylamide). A very stable preparation was thus obtained, the antigen being covalently bound by cross-linking with free N-methylol groups on the resin. Since robust, no special care was necessary for handling the solid-phase. The test could be performed at room-temperature. From 30 CSF samples assayed, 14 were positive, from a group of 15 cases of neurocysticercosis, with titers from 1 to 128; 15 other samples, from normals or other neurological diseases, were all negative. Test characteristics seem to indicate it as adequate for epidemiological surveys. A more detailed study on sensitivity, specificity, reproducibility and the use in serum samples is being conducted.

Um método de reação antígeno-anticorpo denominado IMUNOENSAIO EM CAMADA DELGADA (ICD) foi padronizado e avaliado para o imunodiagnóstico da toxoplasmose aguda, através da detecção de anticorpos IgM, anti-Toxoplasma gondii (ICD-IgM). Um total de 300 amostras de soros, tendo ou não o perfil sorológico da toxoplasmose aguda, foi estudado pelo ICD-IgM e os resultados analisados quanto aos aspectos qualitativos e quantitativos em relação aos testes convencionais de imunofluorecência indireta para a detecção de IgM, (IFI-IgM) e de hemaglutinação pré e após tratamento com 2-mercaptoetanol (HA-2ME). Foram calculados os coeficientes de correlação entre os resultados fornecidos pelo ICD-IgM e as técnicas convencionais, de acordo com as concentrações do antígeno, assim como, foi verificada a influência dessas concentrações antigênicas nos índices relativos de sensibilidade e de especificidade. O estudo estatístico mostrou reprodutibilidades significativas dos resultados inter e intra testes, assim como no reaproveitamento do antígeno por 10 vezes. Os resultados de ICD-IgM mostraram que as concentrações antigênicas ideais foram de 70 a 100µg/ml, para o ensaio em questão, para se obter máximas sensibilidade e especificidade. Portanto, ICD-IgM, por fornecer resultados tão sensíveis e específicos quanto aqueles dos testes convencionais referidos, poderá ser empregado para fins diagnósticos.

A solid phase method, thin-layer immunoassay (IgM-TIA) was standardized and evaluated for the immunodiagnosis of acute toxoplasmosis, through the detection of IgM antibodies to Toxoplasma gondii. A total of 300 serum samples from serologically defined acute toxoplasmosis and, from non-related infections, was investigated by IgM-TIA. Statistical analysis were carried out in comparison with conventional tests, the immunofluorescence test for the detection of IgM antibodies (IgM-IFI) and hemagglutination test which uses 2-mercaptoetanol serum treatment (2ME-HA). Also the correlation coefficients were calculated for various Toxoplasma gondii antigen concentrations, as well as, the influence of the antigenic concentration on the relative indices of sensitivity and specificity were verified. The intra and inter test reproducibilities were demonstrated statistically, as well as, the reutilization of T. gondii antigen was proven to be possible for at least 10 times. The data indicated that antigenic concentrations, from 70 to 100 Çmg/ml, were able to provide maximum sensitivity and specificity. IgM-TIA displayed similar diagnostic efficiency to those two conventional tests here utilized, and may be employed to make diagnosis of acute toxoplasmosis, mainly if laboratory animals are avaiable.

Estudamos comparativamente quatro técnicas imunológicas para o diagnóstico da neurocisticercose (NC) utilizando líquido cefalorraquiano (LCR) como espécime clínico: as reações de fixação de complemento (RFC), hemaglutinação passiva (RHA), imunofluorescência indireta (RIF) e teste imunoenzimático ELISA Foram ensaiadas 125 amostras de LCR de pacientes com NC comprovada e 94 amostras de LCR do grupo controle (60 de pacientes com quadros clínicos neurológicos diversos e 34 de pacientes supostamente normais). Os índices de sensibilidade e especificidade obtidos para os testes foram, respectivamente, de 48,0% e 90,4% para a RFC; 88,8% e 96,8% para a RHA; 87,2 e 98,9% para a RIF e 97,6% e 98,9% para o teste ELISA. A diferença significativa (p < 0,05) observada entre os testes permite concluir que o melhor teste para o diagnóstico de NC foi o teste ELISA seguido das reações de HA e IF.

Four immunological techniques were evaluated for the detection of antibodies to Cysticercus cellulosae in cerebrospinal fluid (CSF): complement fixation test (CF), passive haem-magglutination test (PHA), indirect immunofluorescence test (IF) and the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). One-hundred twenty-five CSF from patients with confirmed neurocysticercosis and 94 CSF from a control group (60 from patients suffering from neurological disorders other than neurocysticercosis and 34 from presumably healthy individuals) were assayed. The sensitivity and specificity of the tests were determined, which were, 48.0% and 90.4% for CF; 88 8% and 96.8% for FHA; 87.2% and 98.9% for IF, and 97.6% and 98.9% for ELISA, respectively. There were significative differences among the tests and these allowed to conclude that the best immunodiagnostic test for neurocysticercosis was ELISA, followed by PHA and IF tests.