Resumo Neste estudo, três tratamentos contra a leishmaniose felina (FeL) e seus impactos na transmissão de Leishmania infantum ao vetor, Lutzomyia longipalpis, foram avaliados. Um gato com sinais clínicos de FeL foi examinado e L. infantum detectada. Submetido ao xenodiagnóstico, verificou-se a transmissão de L. infantum aos vetores. O gato foi então tratado com três medicamentos diferentes e a melhora clínica e transmissibilidade do parasito ao vetor foram avaliadas. Foram observadas leishmanias em 21/52 fêmeas de flebotomíneos (40,38%) no xenodiagnóstico antes dos tratamentos. Os sinais clínicos persistiram após o primeiro tratamento com marbofloxacina, e o gato permaneceu positivo em testes sorológicos, moleculares e parasitológicos. Na sequência, o gato foi tratado com miltefosina, mas continuou doente e com testes positivos. Um segundo xenodiagnóstico foi realizado um mês após o tratamento com miltefosina. Observaram-se promastigotas em 5/9 fêmeas (55,55%). Por fim, o gato foi tratado com alopurinol, o que o levou a uma boa melhora clínica, mas sem cura parasitológica, e um xenodiagnóstico final detectou promastigotas em 2/29 (6,89%) fêmeas. Os resultados mostraram que somente o tratamento com alopurinol produziu uma boa resposta clínica, mas nenhum dos tratamentos conseguiu eliminar a infecção por L. infantum ou impedir sua transmissão ao vetor.

Abstract In this study, an evaluation was made of three treatments against feline leishmaniosis (FeL) and their impacts on the transmission of Leishmania infantum to its vector, Lutzomyia longipalpis. A cat with clinical signs of FeL was examined and L. infantum diagnosed. Subsequently, the cat was subjected to xenodiagnosis and L. infantum detected in the vectors. The cat was then treated with three different drugs and the clinical improvement and parasite transmissibility to the vector were evaluated. Promastigotes were observed in 21/52 female sandflies (40.38%) in a xenodiagnosis prior to the treatments. Clinical signs persisted after the first treatment with marbofloxacin, and the cat remained positive in serological, molecular, and parasitological tests. Therefore, the cat was treated with miltefosine but remained sick and tested positive. A second xenodiagnosis was performed a month after treatment with miltefosine, and promastigotes were observed in 5/9 females (55.55%). Lastly, the cat was treated with allopurinol, which led to good clinical improvement, but it remained positive, and a final xenodiagnosis revealed Leishmania in 2/29 (6.89%) females. The results showed that only treatment with allopurinol produced a good clinical response, but none of the treatments succeeded in eliminating L. infantum infection or preventing transmission to the vector.

Amostras de sangue e soro de 170 equinos criados na microrregião de Jaboticabal, Estado de São Paulo, Brasil, foram coletadas e avaliadas pelo exame direto em esfregaço sanguíneo, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e nested reação em cadeia da polimerase (nPCR) para a detecção de infecções por Theileria equi. A concordância dos resultados entre os testes de diagnóstico foi verificada pelo teste de McNemar. Durante o exame dos esfregaços sanguíneos, parasitos foram detectados em seis (3,52%) equinos. Anticorpos anti-T. equi foram detectados em 100% das amostras de soros, com títulos variando entre 1:80 e 1:5120. O nPCR, baseado na sequência do gene do antígeno de merozoíto de T. equi (EMA-1), permitiu a visualização de produtos de amplificação espécie-específico em 108 (63,53%) equinos. Houve diferença altamente significativa (p < 0,0001) entre RIFI e nPCR; RIFI e esfregaço sanguíneo; e nPCR e esfregaço na detecção do parasito. O resultado do presente estudo indica que a infecção por T. equi está amplamente distribuída entre os equinos na microrregião de Jaboticabal, região Nordeste do Estado de São Paulo, Brasil.

Blood and serum samples from 170 horses raised in the Jaboticabal microregion, São Paulo State, Brazil, were collected and tested by microscopic examination of blood smears, indirect fluorescent antibody test (IFAT) and nested polymerase chain reaction (nPCR) for Theileria equi infections. The association among the test results was verified by the McNemar test. During the examination of thin blood smears, parasites were detected in six (3.52%) horses. Anti-T. equi antibodies were detected in 100% sera samples, with titers ranging between 1:80 and 1:5120. The nPCR based on the T. equi merozoite antigen gene (EMA-1) allowed the visualization of specie-specific amplified product in 108 (63.53%) horses. All six samples judged positive microscopically were also positive for nPCR. Statistical analysis indicated general disagreement (p < 0.0001) between IFAT and nPCR; IFAT and blood smear; and nPCR and blood smear on the detection of parasite carriers. The results of the present study indicate that T. equi is widely spread among horses in the Jaboticabal microregion, Northeast region of São Paulo State, Brazil.

O objetivo deste estudo foi aperfeiçoar um ensaio de PCR que amplificasse um fragmento de 843 pares de bases do gene p28 da Ehrlichia canis e compará-lo com outros dois métodos de PCR utilizados para amplificar partes do gene 16S rRNA e dsb do gênero Ehrlichia. Amostras sanguíneas foram colhidas de cães com diagnóstico clínico de erliquiose. A amplificação do gene p28 pela PCR produziu um fragmento de 843pb e esse ensaio permitiu a detecção do DNA de um parasita dentre 1 bilhão de células. Todas as amostras positivas detectadas pela PCR baseada no gene p28 foram também positivas pela nested PCR para detecção do gene 16S rRNA e também pela PCR dsb. Dentre as amostras negativas para a PCR p28, 55,3% foram co-negativas, mas 27,6% foram positivas pela PCR baseada nos genes 16S rRNA e dsb. A PCR p28 parece ser um teste útil para detecção molecular de E. canis, entretanto otimizações na sensibilidade nesta PCR são necessárias, para que esta técnica se torne uma importante alternativa no diagnóstico da erliquiose canina.

The aim of this study was to optimize a PCR assay that amplifies an 843 pb fragment from the p28 gene of Ehrlichia canis and compare it with two other PCR methods used to amplify portions of the 16S rRNA and dsb genes of Ehrlichia. Blood samples were collected from dogs suspected of having a positive diagnosis for canine ehrlichiosis. Amplification of the p28 gene by PCR produced an 843-bp fragment and this assay could detect DNA from one gene copy among 1 billion cells. All positive samples detected by the p28-based PCR were also positive by the 16S rRNA nested-PCR and also by the dsb-based PCR. Among the p28-based PCR negative samples, 55.3% were co-negatives, but 27.6% were positive in 16S rRNA and dsb based PCR assays. The p28-based PCR seems to be a useful test for the molecular detection of E. canis, however improvements in this PCR sensitivity are desired, so that it can become an important alternative in the diagnosis of canine ehrlichiosis.