ABSTRACT The objective of this work was to characterize reference bacteria strains, belonging to the genus Bacillus and species of correlated genera, by simplified morphological and biochemical methods. The morphological characterization is based on the aspects of the colonies, as well as cytomorphology of the species, by optical and scanning microscopy. For biochemical characterization, the sensitivity test to antimicrobials by disk-diffusion is performed. Moreover, the strains were characterized by extracting intracellular proteins. Characteristics such as shape, color, and consistency of the colonies, in addition to the type of spore and production of protein crystals were determinants for the morphological characterization of these species. The antibiogram revealed high resistance to β-lactam group antibiotics, in species of Bacillus cereus s.l group. In Bacillus subtilis s.l. group there was high susceptibility to antibiograms, mainly for species of B. subtilis. The protein profile provided specific protein patterns for some species, mainly bands of 130 e 65 kDa for B. thuringiensis, 140 e 130 kDa for Lysinibacillus sphaericus, and 115 kDa for Brevibacillus laterosporus. Our results showed that the morphological and biochemical characterizations, provided a simple identification, with easy interpretation, and low cost. genera methods colonies microscopy diskdiffusion disk diffusion performed Moreover proteins shape color βlactam β lactam antibiotics sl s l antibiograms B 13 6 thuringiensis 14 sphaericus 11 laterosporus characterizations identification interpretation cost 1

RESUMO A bactéria Bacillus thuringiensis tem demonstrado potencial no controle de diversas pragas agrícolas, dentre elas os nematoides. Objetivou-se padronizar e estabelecer uma metodologia de bioensaios de B. thuringiensis e Meloidogyne incognita com o uso de resorcinol, selecionar estirpes de B. thuringiensis tóxicas a M. incognita in vitro e identifcar molecularmente a presença do gene cry6 em estirpes de B. thuringiensis. Juvenis de segundo estágio foram submetidos a doses de resorcinol, verifcando-se que a concentração de 0,2 % não causou mortalidade e proporcionou a ingestão da toxina Cry6A. Após isso, 16 estirpes de B. thuringiensis foram testadas na presença ou não de resorcinol, resultando em mortalidades de 4-36 %. Dentre as estirpes de B. thuringiensis analisadas quanto à presença do gene cry6, detectou-se apenas uma (S1617).

ABSTRACT The Bacillus thuringiensis bacterium has demonstrated an effective potential in the control of several agricultural pests, among them nematodes. This study aimed to standardize and establish a methodology of bioassays of B. thuringiensis and Meloidogyne incognita with the use of resorcinol, select B. thuringiensis strains toxic to M. incognita in vitro and molecularly identify the presence of the cry6 gene in B. thuringiensis strains. Second-stage juveniles were subjected to resorcinol doses, verifying that the concentration of 0.2 % did not cause mortality and provided the Cry6A toxin ingestion. Thereafter, 16 B. thuringiensis strains were tested in the presence or absence of resorcinol, resulting in mortality rates of 4-36 %. Among the B. thuringiensis strains analyzed for the presence of the cry6 gene, only one was detected (S1617).

ABSTRACT Texas citrus mite, Eutetranychus banksi (McGregor) (Acari: Tetranychidae: Tetranychinae), considered a serious pest of the citrus crop in some countries, is reported for the first time on mahogany seedlings (Swietenia macrophylla King, Meliaceae) in Brazil, causing foliar tanning with chlorotic spots and premature fall of leaves.

RESUMO: O algodoeiro (Gossypium hirsutum) é acometido por várias doenças de importância econômica, dentre as quais a meloidoginose (Meloidogyne incognita raças 3 e 4). Entre os métodos de controle dessa doença, destacam-se as aplicações de nematicidas, a solarização, a aração profunda, a rotação de culturas e o uso de microrganismos antagonistas. Dentre as espécies do gênero Bacillus, existem estirpes que atuam como biorreguladores e antagonistas de vários patógenos. Os testes para identificação dessas estirpes são prejudicados pela dificuldade de se obter grandes populações do patógeno e pelo tempo de execução dos testes in vivo que devem ser conduzidos por cerca de 90 dias. Diante disso, o presente trabalho teve como objetivo comparar a toxicidade de estirpes de B. thuringiensis a dois nematoides, M. icognita e Caenorhabditis elegans, verificando a possibilidade de empregar C. elegans como indicador para a seleção de estirpes com potencial de biocontrole contra M. incognita. Para tanto, a toxicidade de nove estirpes de B. thuringiensis para C. elegans e M. incognita foi avaliada em laboratório e em casa de vegetação. A maioria das estirpes tóxicas ao C. elegans in vitro, também foi tóxica ao M. incognita, sendo que três delas (S906, S1192, S2036) reduziram significativamente as populações dos dois nematoides. O efeito tóxico apresentado pelas estirpes de B. thuringiensis contra C. elegans foram similares aos apresentados pelos mesmos isolados contra M. incognita in vivo. Esses resultados sugerem que é plausível o uso do C. elegans como indicador de toxicidade para seleção de estirpes de B. thuringiensis tóxicas a M. incognita.

ABSTRACT: The cotton plant (Gossypium hirsutum) is affected by several diseases of economic importance, among them root-knot nematode (Meloidogyne incognita races 3 and 4). Methods to control this disease include the application of nematicides, solarization, deep plowing, crop rotation and use of antagonistic microorganisms. Among species of Bacillus, there are strains that act as bioregulators and antagonists of several pathogens. Tests to identify these strains are hampered by the difficulty of obtaining large populations of the pathogen and by the time of execution of the in vivo tests that should be conducted for about 90 days. The objective of this research was to compare the toxicity of B. thuringiensis strains to two nematodes, M. incognita and Caenorhabditis elegans, evaluating the possibility of using C. elegans as an indicator for the selection of strains with biocontrol potential against M. incognita. Therefore, the toxicity of nine B. thuringiensis strains on C. elegans and M. incognita was evaluated under laboratory and greenhouse conditions. Most strains toxic to C. elegans in vitro were also toxic to M. incognita, and three of them (S906, S1192, S2036) significantly reduced the populations of the two nematodes. The toxic effect of B. thuringiensis strains on C. elegans was like that reported for the same bacterial isolates on M. incognita in vivo. These results suggested that it is plausible to use C. elegans as an indicator of toxicity for selection of B. thuringiensis strains toxic to M. incognita.

RESUMO Este trabalho teve como objetivo verificar a ocorrência de Hypsipyla grandella em árvores de cedro situadas em Brasília, Distrito Federal, bem como descrever os principais danos decorridos em frutos e sementes. Foram coletados 283 frutos caídos de árvores de cedro e cada fruto foi analisado individualmente quanto à presença da H. Grandella, visualização dos principais sintomas e sinais da lagarta, como a presença de orifícios, goma, teia e excrementos. Foram encontradas 128 lagartas e 41 pupários no interior dos frutos. A partir do presente estudo foi possível constatar a presença e permanência de H. grandella em árvores de cedro durante os meses de janeiro a abril, época de produção e maturação de frutos da espécie, os quais, assim, servem de inóculo para futuros plantios, tanto de produção comercial como para fins paisagístiscos, dessa Meliaceae na região do Distrito Federal, Brasil.

ABSTRACT This study aimed to report the occurrence of Hypsipyla grandella in cedar trees in Brasilia, Distrito Federal, and describe their main damage in fruits and seeds. 283 fallen fruit of cedar trees were collected and each fruit was individually analyzed for the presence of H. grandella and visualization of the main symptoms and signs of caterpillar, as the presence of holes, gum web and excrement. 128 caterpillars and 41 puparium were found inside the fruits. From the present study, were determined the presence and permanence of H. grandella in cedar trees during the months of January to April, harvest season and ripening of the species, serving as inoculum for future crops, both commercial productions and for landscaping purposes of Meliaceae on the region of the Distrito Federal, Brazil.

Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a variabilidade genética de populações de Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) coletadas nas culturas de milho e algodão do Brasil. As amostras foram analisadas por marcadores de DNA. O dendrograma produzido pelos 20 iniciadores de RAPD avaliados revelou correlação entre o perfil genético e o comportamento de alimentação. A análise do gene ND1 mitocondrial permitiu identificar populações do inseto em ambas as culturas, e, em milho, em várias regiões geográficas. A estratégia apresentada permite a identificação de populações de Spodoptera frugiperda associadas às culturas de milho e algodão.

Abstract: The objective of this work was to analyze the genetic variability of Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) populations collected from corn and cotton crops in Brazil. The samples were analyzed by DNA markers. The dendrogram produced by the 20 RAPD primers evaluated showed a correlation between genetic profile and feeding behavior. The analysis of the mitochondrial ND1 gene allowed identifying the insect populations in both crops, and, in corn, in several geographical regions. The presented strategy allows the identification of Spodoptera frugiperda populations associated with corn and cotton crops.

Resumo: O objetivo deste trabalho foi desenvolver marcadores "sequence-characterized amplified region" (Scar) para identificar os biótipos B, Q e nativo brasileiro da mosca-branca [Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae)]. Produtos de amplificação de DNA polimórfico amplificado ao acaso (RAPD), exclusivos aos biótipos B e nativo brasileiro, foram selecionados após análise de 12.000 amostras, para desenhar um conjunto de iniciadores específicos de Scar. Os marcadores Scar BT-B1 e BT-B3, usados para detectar o biótipo B, produziram fragmentos de PCR de 850 e 582 pb, respectivamente. O marcador Scar BT-BR1, utilizado para identificar o biótipo brasileiro, produziu um fragmento de PCR de 700 pb. Os marcadores Scar foram testados contra o biótipo Q, e um fluxograma foi proposto para indicar os passos para tomada de decisão sobre quando usar esses iniciadores, para discriminar corretamente os biótipos. Este procedimento permitiu identificar os biótipos que ocorrem em amostras de campo, como o biótipo B. O conjunto de iniciadores utilizados permitiu discriminar os biótipos B, Q e nativo brasileiro de B. tabaci. Esses iniciadores podem ser utilizados com sucesso para identificar o biótipo B de B. tabaci em amostras de campo, e mostram apenas um biótipo específico presente em todas as culturas.

Abstract: The objective of this work was to develop sequence-characterized amplified region (Scar) markers to identify the B, Q, and native Brazilian biotypes of the sweet potato whitefly [Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae)]. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) amplification products, exclusive to the B and Brazilian biotypes, were selected after the analysis of 12,000 samples, in order to design a specific Scar primer set. The BT-B1 and BT-B3 Scar markers, used to detect the B biotype, produced PCR fragments of 850 and 582 bp, respectively. The BT-BR1 Scar marker, used to identify the Brazilian biotype, produced a PCR fragment of 700 bp. The Scar markers were tested against the Q biotype, and a flowchart was proposed to indicate the decision steps to use these primers, in order to correctly discriminate the biotypes. This procedure allowed to identify the biotypes that occur in field samples, such as the B biotype. The used set of primers allowed to discriminate the B, Q, and native Brazilian biotypes of B. tabaci. These primers can be successfully used to identify the B biotype of B. tabaci from field samples, showing only one specific biotype present in all cultures.

Resumo:O objetivo deste trabalho foi selecionar e caracterizar molecularmente isolados de Bacillus thuringiensistóxicos a Spodoptera eridaniaeS. frugiperda. Trinta e quatro isolados foram submetidos ao bioensaio, dos quais três foram selecionados e usados para a estimativa da CL50. Os isolados selecionados não diferiram da linhagem padrão HD-1. Na caracterização molecular, identificou-se a presença dos genes cry1 e cry2, nos isolados BR37 e BR94, e dos genes cry4A, cry4B, cry10, cry11 e cyt1 no isolado BR58, o que confirmou o perfil proteico obtido de 130, 70 e 65 kDa. Foram identificados cristais bipiramidais e esféricos. O isolado BR58, apesar de não conter os genes relacionados à toxicidade a Lepidoptera, causa mortalidade em ambas as espécies

Abstract:The objective of this work was to select and molecularly characterize Bacillus thuringiensis isolates toxic to Spodoptera eridaniaand S. frugiperda. Thirty four isolates were subjected to the bioassay, of which three were selected and used to estimate the LC50. The selected isolates did not differ from the HD-1 standard line. In the molecular characterization, the presence of the cry1 and cry2 genes was identified in the BR37 and BR94 isolates, and of the cry4A, cry4B, cry10, cry11, and cyt1 genes in the BR58 isolate, which confirmed the obtained protein profile of 130, 70, and 65 kDa. Bipyramidal and spherical crystals were identified. The BR58 isolate, although not containing the genes related to toxicity to Lepidoptera, causes mortality in both species.

O objetivo deste trabalho foi selecionar e caracterizar estirpes nativas de Bacillus thuringiensis tóxicas a Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Crambidae). Cento e seis estirpes pertencentes ao Banco de Bactérias de Invertebrados, da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, foram testadas quanto à toxicidade a D. saccharalis, e, as mais tóxicas, caracterizadas por métodos bioquímicos e moleculares. Das 106 estirpes testadas, 16 causaram 100% de mortalidade em 24 horas. As três estirpes mais tóxicas apresentaram concentração letal média entre 8 e 43 ng cm-2. O perfil proteico das 16 estirpes mostrou a presença de proteínas de 130 e 65 kDa, e a caracterização molecular mostrou a presença dos genes tipo cry1 e cry2: cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac e cry2Aa. A concentração letal média de esporos e cristais obtidos a partir de estirpes recombinantes, que expressavam individualmente os genes cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac e cry2Aa, variou entre 222 e 610 ng cm-2, valores muito superiores aos das estirpes nativas mais tóxicas, que apresentavam possibilidade de expressão simultânea desses genes. Este resultado é indicativo de que há sinergia entre as toxinas. Há interação entre as toxinas de B. thuringiensis e seus receptores na broca-do-colmo da cana-de-açúcar.

The objective of this work was to select and characterize native strains of Bacillus thuringiensis toxic to Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Crambidae). A hundred-and-six strains, belonging to the bank of invertebrate bacteria (Brazil), of Embrapa Genetic Resources and Biotechnology, were tested as to their toxicity to D. saccharalis, and the most toxic ones were characterized by biochemical and molecular methods. Out of the 106 tested strains, 16 caused 100% mortality within 24 hours. The three most toxic strains showed median lethal concentrations between 8 and 43 ng cm-2. The protein profile of the 16 strains showed the presence of 130 and 65 kDa proteins, and the molecular characterization showed the presence of cry1and cry2 type genes: cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, and cry2Aa. The median lethal concentration of spores and crystals obtained from recombinant strains, which individually expressed the genes cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, and cry2Aa, varied between 222 and 610 ng cm-2, values much higher than the ones of the most toxic native strains, which have the possibility of simultaneously expressing these genes. This result indicates a synergy between the toxins. There are interactions between B. thuringiensis toxins and their receptors in the sugarcane borer.

Diatraea saccharalis é o inseto-praga que provoca os maiores danos a cultura da cana-de-açúcar, e seu controle é limitado pela localização do ataque no interior do colmo das plantas. Como parte de um projeto a longo prazo com o objetivo de desenvolver uma alternativa eficiente para o controle da broca da cana utilizando as proteínas Cry de Bacillus thuringiensis, o presente trabalho descreve a seleção e caracterização de uma estirpe desta bactéria com atividade larvicida para D. saccharalis. A estirpe brasileira S76, foi selecionada pela alta atividade letal contra larvas da broca, dez vezes maior do que a estirpe comercial HD-1 de B. thuringiensis, com resultados da CL50 de 13.06 µg/L e 143.88 µg/L, respectivamente. Foram observados cristais bipiramidais e cuboides similares aos encontrados em outras estirpes de B. thuringiensis com atividade entomopatogenica para lepidópteros e dípteros. Adicionalmente, foram visualizadas pequenas inclusões cristalinas esféricas. O perfil plasmidial da estirpe S76 foi similar ao observado na estirpe HD-1. Amplificações por PCR confirmaram a presença dos genes cry1Aa,cry1Ab,cry1Ac,cry2Aa1 e cry2Ab2, porém não foram detectados os genes cry1Ad,cry2Ac e cry9 na estirpe S76. Não foi observada nenhuma diferença para explicar a maior atividade da estirpe S76 quando comparada a HD-1. Entretanto, os resultados indicam a estirpe S76 como fonte potencial de genes cry para controlar D. saccharalis, praga importante que afeta plantas de cana-de-açúcar, cultura esta que ocupa uma área plantada de 6 milhões ha no Brasil.

The control of the major sugarcane pest, Diatraea saccharalis, is limited by the stem location of the caterpillar. As part of a long-term project towards the development of an alternative and efficient delivery system of Cry proteins to control the sugarcane borer, the current work describes the selection and characterization of a Brazilian B. thuringiensis strain with prominent activity towards D. saccharalis. Strain S76 was eleven-fold more active than the HD-1 Lepidoptera-standard strain, as estimated by the LC50 of 13.06 µg/L and 143.88 µg/L, respectively. We observed bipiramidal and cuboidal crystals similar to those found in other B. thuringiensis strains with entomopathogenic activity against Lepidoptera and Diptera. In addition, smaller and spherical crystalline inclusions were also observed. The plasmid profile of strain S76 is similar to that of HD-1. PCR amplifications of S76 DNA using cry specific primers confirmed the presence of cry1Aa,cry1Ab,cry1Ac,cry2Aa1, and cry2Ab2, but not cry1Ad, cry2Ac and cry9 type genes. No differences that could explain the superior activity of S76 when compared to HD-1, the Lepidoptera standard strain, were observed. Nevertheless, its higher entomopathogenic activity has pointed this strain S76 as a potential source of cry genes to control sugarcane borer, an important pest that affects sugarcane, a crop that occupies a planted area of about 6 million ha in Brazil.

O objetivo deste trabalho foi selecionar e caracterizar, no Banco de Germoplasma de Bacillus spp., da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, as estirpes de Bacillus thuringiensis mais tóxicas à Plutella xylostella, por métodos morfológicos, bioquímicos e moleculares. Das 203 estirpes testadas, sete causaram 100% de mortalidade e foram semelhantes à estirpe padrão utilizada, B. thuringiensis subsp. kurstaki. Elas apresentaram proteínas de 130 kDa e 65 kDa, presença de genes cry1 e cry2 e cristais bipiramidais, cubóides e redondos. As estirpes selecionadas oferecem novas perspectivas de controle de P. xylostella.

The aim of this work was to select and characterize the most toxic Bacillus thuringiensis strains, from the Germplasm Bank of Bacillus spp. of Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, against Plutella xylostella. Strains were characterized by morphological, biochemical and molecular methods. It was observed that seven out of the 203 strains tested showed high toxicity compared to the standard used B. thuringiensis subsp. kurstaki (HD-1), which showed 100% mortality. Selected strains showed features described for lepidoptera regarding the protein of 130 kDa and 65 kDa; profile and features were obtained through the PCR reactions, making possible to identify the presence of cry1 and cry2 genes. Moreover, the scanning electron microscopy showed the bipiramydal, cubed and round crystal forms. The selected strains offer new perspectives to control P. xylostella.

Neste trabalho foram realizados testes de patogenicidade com 210 estirpes de Bacillus thuringiensis contra larvas de Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus, a fim de se determinar as mais eficazes. Estas estirpes foram isoladas de diversas regiões do Brasil e estão armazenadas na coleção de Bacillus spp. da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. As estirpes selecionadas foram caracterizadas por métodos morfológicos (microscopia), bioquímicos (SDS-PAGE 10%) e moleculares (Reação em Cadeia da Polimerase). Foram selecionadas seis estirpes entomopatogênicas de Bacillus thuringiensis. Nenhuma das estirpes de Bacillus thuringiensis apresentou produtos de PCR esperados para a detecção dos genes cry4, cry11 e cyt1A. A patogenicidade das estirpes não está associada à presença das toxinas Cry4, Cry11 ou Cyt, assim, essas estirpes poderão ser utilizadas para a formatação de um bioinseticida alternativo contra mosquitos.

The objective of this work was to evaluate 210 Bacillus thuringiensis strains against Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus larvae to select the most effective. These strains were isolated from different regions of Brazil and are stored in a Bacillus spp. collection at Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, Brasília, Brazil. The selected strains were characterized by morphological (microscopy), biochemical (SDS-PAGE 10%) and molecular (PCR) methods. Six B. thuringiensis strains were identified as mosquito-toxic after the selective bioassays. None of the strains produced the expected PCR products for detection of cry4, cry11 and cyt1A genes. These results indicate that the activity of mosquitocidal Brazilian strains are not related with Cry4, Cry11 or Cyt proteins, so they could be used as an alternative bioinsecticide against mosquitoes.

O objetivo deste trabalho foi selecionar entre 300 estirpes de Bacillus thuringiensis as efetivas simultaneamente contra larvas de Spodoptera frugiperda J.E. Smith e Anticarsia gemmatalis Hübner (Lepidoptera: Noctuidae), Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), Aedes aegypti Linnaeus e Culex quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae). Foram selecionadas duas estirpes de B. thuringiensis, denominadas S234 e S997, que apresentaram atividade contra as três ordens de insetos. As estirpes foram caracterizadas por métodos morfológicos, bioquímicos e moleculares. As mesmas apresentaram duas proteínas principais de 130 e 65 kDa, produtos de reação em cadeia da polimerase de tamanho esperado para a detecção dos genes cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1B e cry2 e cristais bipiramidais, cubóides e esféricos.

The aim of this work was to select among 300 strains of Bacillus thuringiensis those which are simultaneously effective against larvae of Spodoptera frugiperda J.E. Smith and Anticarsia gemmatalis Hübner (Lepidoptera: Noctuidae), Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), Aedes aegypti Linnaeus and Culex quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae). Two strains of B. thuringiensis were selected, S234 and S997, which presented activity against those three insect orders. Both strains were characterized by morphological, biochemical and molecular methods. They have presented two main proteins with 130 and 65 kDa, polimerase chain reaction products with expected sizes for detection of the genes cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1B and cry2 and bipiramidal, cubical and spherical crystals.

O bicudo (Anthonomus grandis Boheman) provoca alto porcentual de abscisão de botões florais no algodoeiro causada pelos orifícios de alimentação e oviposição. Embora a abscisão ocorra em virtude principalmente da ação de enzimas presentes na saliva do inseto, o dano mecânico também poderia contribuir para a queda dos frutos. O objetivo desse trabalho foi avaliar danos morfológicos causados pelo inseto nos botões florais com auxílio da microscopia. O principal alvo de alimentação do bicudo são as anteras e os óvulos. Esse processo, preferencialmente iniciado nas sépalas e pétalas mais novas, inclui a perfuração dos tecidos e posterior mastigação dos estames e ovário levando a abscisão da estrutura floral.

The boll weevil (Anthonomus grandis Boheman) causes high levels of bud abscission in cotton plants due to feeding or oviposition punctures. It has been reported that abscission is mainly due to enzymes present in the insect's saliva, but mechanical damage could also contribute to square abscission. The objective of this paper was to undertake an analysis of the morphological damages caused by the insect in cotton squares using microscopy. Anthers and ovules are the main target of boll weevil feeding. The process initiates by perforation of young sepal and petal tissues and proceeds with subsequent alimentation on stamen and ovary leading to abscission of floral structures.

O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência da colesterol oxidase (Coase) na eclosão e viabilidade de larvas do bicudo-do-algodoeiro (Anthonomus grandis Boheman, 1843). Uma série de bioensaios foram conduzidos com ovos e larvas neonatas, os quais foram expostos a diferentes concentrações da enzima em dieta artificial. A sobrevivência das larvas foi afetada em todas as concentrações testadas, e a DL50, no sexto dia, foi de 53 mig/mL (IC 95%: 43-59). A Coase também interferiu na eclosão das larvas quando os ovos foram submersos por 15 min em solução de Coase, em diferentes concentrações. Observações feitas ao microscópio de luz e eletrônico no intestino médio das larvas alimentadas durante seis dias com dieta artificial contendo 53 mig/mL de Coase revelou regiões altamente vacuolizadas nas células epiteliais, bem como degradação parcial das membranas basal e microvilli.

The aim of this work was to evaluate the influence of the enzyme cholesterol oxidase (Coase) on emergence and viability of larvae of the cotton boll weevil (Anthonomus grandis Boheman, 1843). A series of bioassays was performed with eggs and neonate larvae exposed to different enzyme concentrations in artificial diet. Larval survival was affected at all enzyme concentrations tested, and the six-day LD50 was 53 mug/mL (CI 95%: 43-59). Coase also interfered with hatching of larvae after eggs were floated for 15 min in Coase solution at different concentrations. Observations at the light and electronic microscopic level of midguts from larvae fed on artificial diet containing 53 mug/mL of Coase and collected at six days revealed highly vacuolated regions in the epithelial cells as well as partial degradation of the basal membrane and microvilli.